СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИНФИЦИРОВАНИЯ ПОЧЕЧНОГО ТРАНСПЛАНТАТА

Изобретение относится к медицине, а именно к способам прогнозирования инфекционных осложнений после трансплантации почки.

Известен патент США №6605602, в котором, в частности, описан способ выявления риска поражения почки ВК (полиомавирус человека 1) вирусом методом полимеразной цепной реакции гена ВК вируса в моче пациента после трансплантации почки.

После трансплантации почки инфекционные осложнения у пациентов являются одним из серьезных осложнений. Среди инфекционных осложнений преимущественно герпесвирусная инфекция, которая является причиной инфицирования и удаления трансплантата.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, - разработка действенного и простого способа выявления инфицирования почечного трансплантата герпесвирусами, более точного и безопасного для пациента.

Поставленная задача решается путем применения способа выявления инфицирования почечного трансплантата герпесвирусами, определением концентрации вирусной ДНК в моче пациента методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При концентрации ДНК герпесвируса менее 2500 коп/мл в моче констатируют наличие латентного вирусного фактора, который не сопровождается клиникой вирусной инфекции и нарушением функции трансплантата. При концентрации ДНК герпесвируса более 2500 коп/мл в моче констатируют наличие активной вирусной инфекции, что требует назначение противовирусной терапии.

Представленный способ выявления инфицирования почечного трансплантата подтвержден следующими исследованиями.

Исследовано 32 пациента (мужчин - 21, женщин - 11) с хронической болезнью почек в терминальной стадии (ХБПС5). Медиана возраста составила 43 года.

Методом ПЦР в режиме реального времени определяли концентрацию ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) и вируса герпеса человека 6 типа (ВГЧ 6) в периферической крови и моче реципиента через 1, 2, 4, 6 месяцев и через 1 год после трансплантации почки (ТАП). Наименьшей концентрацией вирусной ДНК в периферической крови и моче считалась менее 500 коп. Концентрация вирусной ДНК более 2500 коп считалась высокой.

На фоне иммуносупрессивной терапии у реципиентов почечного трансплантата преимущественно первый два месяца после ТАП выявлялись маркеры герпесвирусной инфекции, последующие 4 и 6 месяцев, через 1 год значительно реже. Однако нарушение функции трансплантата наблюдалась не во всех выявленных случаях.

При концентрация ДНК менее 500 коп/10⁵ клеток в крови и менее 500 коп/мл в моче ЦМВ у 8 реципиентов, ВЭБ у 10 и ВГЧ у 13 не отмечалось нарушение функции трансплантата (таблица 1).

У 9 реципиентов почечного трансплантата с ЦМВ, у 6 - с ВЭБ, у 2 - с ВГЧ 6 выявлена высокая концентрация вирусной ДНК в моче более 2500 коп/мл, что сопровождалась нарушением функции трансплантата и указывала на инфицирование трансплантата (таблица 2). При этом в крови у этих пациентов вирусная ДНК либо вообще не была выявлена, либо ее концентрация находилась в пределах минимальных значений - менее 500 коп/10⁵ клеток.

Таким образом, при инфицирование почечного трансплантата прежде всего повышается концентрация герпесвирусов в моче при этом в крови их количество может оставаться на низком уровне. Выявлена корреляция между уровнем концентрации ДНК герпесвирусов (ЦМВ, ВЭБ, ВГЧ 6) в моче и нарушением функции трансплантата. При низкой вирусной нагрузке не отмечается нарушений функции трансплантата, а при высокой вирусной нагрузке более 2500 коп/мл в моче наблюдается дисфункция трансплантата.

Таким образом, как видно из представленных выше данных, разработан способ выявления инфицирования почечного трансплантата герпесвирусами путем определения концентрации вирусной ДНК методом полимеразной цепной реакции в моче пациента, более точный по сравнению с существующим методом полимеразной цепной реакции в плазме крови пациента.

В известном патентном документе США №6605602 описан способ определения ВК вируса, который является представителем полиомавирусов и не относится к герпесвирусам. Так же в нем не раскрыта концентрация ДНК вируса, определяющая тип и стадии инфицирования трансплантата. Вышеперечисленное позволяет оценивать представленный способ, как соответствующий критерию патентоспособности «новизна».

ВК-вирус локализируется в эпителии канальцев почек. При инфицировании ВК вирусом наблюдается поражение собирательных трубочек, дистальных канальцев и петли Генле, что делает естественным выявление ДНК ВК - вируса методом ГЩР в моче реципиента почечного трансплантата. ВК - вирус практически не поражает эндотелиальные, гладкомышечные и интерстициальные клетки, что служить критерием дифференциальной диагностики с герпесвирусной инфекцией. ЦМВ поражает эндотелиальные клетки, ВЭБ преимущественно локализируется в CD21-позитивных лимфоцитах, а ВГЧ 6 преимущественно в Т-лимфоцитах. При герпесвирусной инфекции поражается интерстиций (межканальцевая ткань и клубочки почки) почки. Поэтому повышение концентрации маркеров ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ 6 первоначально в моче у реципиента почечного трансплантата не очевидны для специалистов, что позволяет судить о соответствии заявляемого способа критерию патентоспособности «изобретательский уровень».