Этил 4-(5-бензоил-6-(4-(диэтиламино)фенил)-4-гидрокси-2-тиоксогексагидропиримидин-4-карбоксамино)бензоат, проявляющий анальгетическое и противовоспалительное действие

Изобретение относится к области органической химии, производным пиримидина, а именно, новому биологически активному этил 4-(5-бензоил-6-(4-(диэтиламино)фенил)-4-гидрокси-2-тиоксогексагидропиримидин-4-карбоксамино)бензоату (1) формулы:

обладающему анальгетическим и противовоспалительным действием, что позволяет предположить его использование в медицинской практике в качестве анальгетического и противовоспалительного средства.

Ближайшим структурным аналогом к заявляемому соединению является соединение (2), проявляющее анальгетическое действие [Пат. 2653511 4-Метил-N-2,4-диметилфенил-6-(3-фторфенил)-2-тиоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-5-карбоксамид, проявляющий анальгетическое действие / В.Л. Гейн [и др.]; Перм. гос. фармацевт, акад. - №2015131650; заявл. 29.07.15; опубл. 10.05.18; приор. 29.07.15 (Россия)].

Целью предлагаемого изобретения является поиск среди производных пиримидина соединений, обладающих анальгетической и противовоспалительной активностью.

Поставленная цель достигается получением этил 4-(5-бензоил-6-(4-(диэтиламино)фенил)-4-гидрокси-2-тиоксогексагидропиримидин-4-карбоксамино)бензоата (1), который синтезируют трехкомпонентной реакцией (Z)-N-этил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4-фенилбут-2-енамидо)бензоата, 4-N,N-диэтиламинобензальдегида, тиомочевины по следующей схеме.

Методика получения этил 4-(5-бензоил-6-(4-(диэтиламино)фенил)-4-гидрокси-2-тиоксогексагидропиримидин-4-карбоксамино)бензоата.

Смесь 3,4 г (0.01 моль) (Z)-N-этил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4-фенилбут-2-енамидо)бензоата, 1,77 г (0.01 моль) 4-N,N-диэтиламинобензальдегида и 0,76 г (0.01 моль) тиомочевины в 30 мл ледяной уксусной кислоты в присутствии 0,82 г безводного ацетата натрия (катализатор) кипятили в течение 40 минут. После охлаждения, образовавшийся осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали из этилового спирта. Выход соединения (1) составляет 4,13 г (72%).

Заявляемое соединение представляет собой аморфное вещество розового цвета, растворимое в ДМФА, при нагревании - в уксусной кислоте, этиловом спирте, устойчивое при хранении. Т_пл 188-190°С.

ИК-спектр (KBr) ν, см^-1: 3336 (ОН); 3272, 3192, 2976 (NH); 1715 (СООС₂Н₅), 1696 (CON), 1650 (СО), 1612 (С=С).

Спектр ЯМР ¹Н, δ м.д.: 0.99 (т, J=7.2 Гц, 6Н, N(CH₂CH₃)₂), 1-30 (т, J=8 Гц, 3Н, СООСН₂СН₃), 3.21 (т, J=7.2 Гц, 4Н, N(CH₂CH₃)₂) 4.28 (кв, J=8 Гц, 2Н, СООСН₂СН₃), 4.60 (д, J=11.7 Гц, 1H, Н-5), 4.95 (д, J=11.7 Гц, 1Н, Н-6), 6.54 (д, J=8.7 Гц, 2Н, ArH), 7.12 (с, 1Н, ОН), 7.16 (т, J=8.7 Гц, 2Н, ArH), 7.29 (т, J=8.7 Гц, 1Н, ArH), 7.42 (д, J=8.7 Гц, 2Н, ArH), 7.59 (д, J=8.4 Гц, 2Н, ArH), 7.76 (д, J=8.4 Гц, 2Н, ArH), 7.85 (д, J=8.7 Гц, 1Н, ArH), 7.97 (д, J=8.7 Гц, 1H, ArH), 8.16 (с, 1H, 1-Н), 8.93 (с, 1Н, 3-Н), 9.89 (с, 1Н, NH); C₃₁H₃₄N₄O₅S. Вычислено, %: С, 64.79; Н, 5.96; N, 9.75%. Найдено, %: С, 64.91; Н, 6.04; N, 9.62.%.

ИК-спектр соединения записан на спектрофотометре Specord М-80 в таблетках KBr. Спектр ЯМР ¹Н регистрировали на спектрометре Bruker 500 (рабочая частота 500.13 МГц) в ДМСО-d₆, внутренний стандарт - ТМС. Элементный анализ проведен на приборе Perkin Elmer 2400. Температуру плавления определяли на приборе М-565.

Все исследовательские работы с лабораторными животными выполняли в соответствии с общепринятыми этическими нормами обращения с животными, с соблюдением Правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований, действующих на территории РФ [Приказ Министерства здравоохранения Российской федерации от 1 апреля 2016 г №199н. Зарегистрировано в Министерстве юстиций Российской Федерации 15 августа 2016 г. Регистрационный №43232].

Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/кг) соединения (1) определяли на белых нелинейных мышах обоего пола массой 20-25 г. при внутрибрюшинном введении. Для определения средней летальной дозы использован метод Прозоровского В.Б. [Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т. 41. - №4. - С. 497-502]. Исследуемое соединение вводили внутрибрюшинно в виде взвеси в 1% крахмальной слизи в возрастающих дозах.

Рассчитывали ЛД₅₀ с учетом количества погибших животных в каждой экспериментальной группе. Результаты исследования острой токсичности представлены в таблице 1.

Установлено, что ЛД₅₀ соединения (1) составляет 5150 (4500÷6900) мг/кг. В соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 соединение (1) относятся к малотоксичным веществам [ГОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности»].

Анальгетическую активность соединения (1) определяли на нелинейных мышах массой 20-30 г (группа включала 6 животных) по методике «уксусных корчей» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / ред. А.Н. Миронов и др. - М.: Гриф и К, 2013. - 944 с.].

Исследуемое соединение вводили внутрибрюшинно в виде взвеси в 1% крахмальном растворе в дозе 50 мг/кг за 30 мин до введения уксусной кислоты. Уксусную кислоту вводили в виде 0,75%-ного раствора внутрибрюшинно в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела. Подсчет «корчей» (характерные движения животных, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины) начинали сразу и производили в течение 15 мин.

Контрольной группе животных вводили эквивалентный объем 1% крахмальной слизи.

Анальгетический эффект оценивали по уменьшению количества «корчей» по сравнению с контрольными животными. Препаратом сравнения служил метамизол натрия (анальгин) в дозе 50 мг/кг при внутрибрюшинном введении.

Результаты статистически обработаны с вычислением критерия Фишера-Стьюдента. Эффект считали достоверным при Р<0,05. [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд., Медгиз, Ленинград - 1963. - С. 81-106].

Результаты исследования анальгетической активности соединения (1) методом «уксусных корчей» представлены в таблице 2.

*- различие достоверно по сравнению с метамизолом натрия (р<0,01)

Определение противовоспалительной активности соединения (1) было основано на оценке прироста объема воспаленной, путем введения флогогенного агента, лапы крыс.

Исследование проводилось на крысах массой 180-250 г., обоего пола (группа включала 6 животных) на модели острого воспалительного отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапу крысы 0,1 мл 1% водного раствора каррагенина (сульфатированный полисахарид из ирландского морского мха). Выраженность воспалительной реакции оценивали через 3 часа после индукции воспаления по изменению объема лапы (онкометрически) [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / под ред. Миронова А.Н. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. Исследуемое вещество вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в 1% крахмальной слизи за 30 мин до введения флогогенного агента. Контролем служили животные, не получавшие препарат. Статистическую обработку проводили по методу Фишера-Стьюдента. На основе полученных результатов определяли эффект торможения воспаления в процентах к контрольному уровню. О наличии противовоспалительного действия судили по выраженности торможения воспалительной реакции. Если этот показатель был больше 30%, результат учитывался как положительный. В качестве препарата сравнения использовали нимесулид.

Результаты исследования противовоспалительной активности соединения (1) представлены в таблице 3.

*- результат, имеющий статистически достоверное отличие в сравнении с нимесулидом (р<0,002)

Как видно из таблиц 2 и 3, заявляемое соединение (1) обладает выраженной анальгетической активностью в дозе 50 мг/кг и превосходят активность метамизола-натрия примерно в 2 раза в этой же дозе по методике «уксусных корчей», кроме того оказывает противовоспалительное действие превышающее действие нимесулида при 5150 (4500÷6900) острой токсичности.

Таким образом, заявляемое соединение (1) может найти применение в медицине в качестве лекарственного средства с анальгетическим и противовоспалительным действием.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Пат. 2653511 4-Метил-N-2,4-диметилфенил-6-(3-фторфенил)-2-тиоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-5-карбоксамид, проявляющий анальгетическое действие / В.Л. Гейн [и др.]; Перм. гос. фармацевт. акад. - №2015131650; заявл. 29.07.15; опубл. 10.05.18; приор. 29.07.15 (Россия).

2. Приказ Министерства здравоохранения Российской федерации от 1 апреля 2016 г №199н. Зарегистрировано в Министерстве юстиций Российской Федерации 15 августа 2016 г. Регистрационный №43232.

3. Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т. 41. - №4. - С. 497-502.

4. ГОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

5. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / ред. А.Н. Миронов и др. - М.: Гриф и К, 2013. - 944 с.

6. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд., Медгиз, Ленинград - 1963. - С. 81-106.