×
10.06.2015
216.013.5535

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ИЗ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биохимии. Способ предусматривает извлечение клеток костного мозга, их суспендирование, фильтрацию суспензии и центрифугирование фильтрата. Осадки вместе с надосадочными жидкостями подвергают гомогенизации. Затем содержимое центрифужных пробирок фильтруют через капроновые фильтры. Белки раствора высаливают с помощью сульфата аммония при нагревании до 60°С, отстаивают 12 ч при температуре 4°C и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин. К надосадочной жидкости добавляют 1% раствор трихлоруксусной кислоты, затем также осадок от раствора отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 мин. Полученные осадки смывают спиртом и эфиром и высушивают на часовом стекле. К полученному порошку добавляют 0,9% раствора хлорида натрия, тщательно перемешивают, затем раствор белка подвергают диализу проточной водой в течение 1-2 сут и дистиллированной водой в течение 1 ч. Раствор центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин, полученные осадки смывают спиртом и эфиром, высушивают на часовом стекле. Изобретение обеспечивает упрощение способа выделения общего белка, повышение чистоты целевого продукта, сокращение времени экстракции белка, использование новых технологий, доступность, поскольку клетки костного мозга берут у сельскохозяйственных и диких животных. 3 пр.
Основные результаты: Способ выделения белков из костного мозга, предусматривающий извлечение клеток костного мозга, их суспендирование, фильтрацию суспензии, центрифугирование фильтрата, осадки вместе с надосадочными жидкостями подвергают гомогенизации, затем содержимое центрифужных пробирок фильтруют через капроновые фильтры, белки раствора высаливают с помощью сульфата аммония при нагревании до 60°С, отстаивают 12 ч при температуре 4°C и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин, к надосадочной жидкости добавляют 1% раствор трихлоруксусной кислоты, затем также осадок от раствора отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 мин, полученные осадки смывают спиртом и эфиром, затем высушивают на часовом стекле, к полученному порошку добавляют 0,9% раствора хлорида натрия, тщательно перемешивают, затем раствор белка подвергают диализу проточной водой в течение 1-2 сут и дистиллированной водой в течение 1 ч, центрифугирование раствора при 2000 об/мин в течение 5 мин, полученные осадки смывают спиртом и эфиром, затем высушивают на часовом стекле.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к биохимии, а именно, к выделению белков из клеток костного мозга трубчатых костей животных.

Описан способ получения белка, RU 2041716 C1, A61K 35/28, 20.08.1995, известного как миелопид, путем выделения клеток из костного мозга свиньи, их культивирования в питательной среде, отделения супернатанта центрифугированием, концентрирования и выделения целевого продукта гельхроматографией на колонке, заполненной сефадексом G-50. Фракции, элюированные в области выхода цитохрома G с молекулярной массой около 13000 Da, концентрируют лиофилизацией.

Известен также способ получения белка, RU 2298939 C2, A61K 35/28, 20.05.2007, путем выделения клеток их костного мозга лисиц, их суспендирование, фильтрацию, центрифугирование фильтрата, после которого осадки вместе с надосадочными жидкостями в центрифужных пробирках подвергают трехкратному замораживанию-оттаиванию в холодильной камере, фильтрации через капроновые фильтры и осаждению 10% раствором трихлоруксусной кислоты и последующему диализу проточной водой.

Недостатки данных способов заключаются в трудоемкости, длительности во времени и соблюдении особых условий белкового синтеза. Кроме того, конечный продукт получается недостаточно чистым.

Упрощение способа выделения общего белка из трубчатых костей костного мозга и повышение чистоты целевого продукта достигаются тем, что клетки костного мозга берут у сельскохозяйственных и диких животных. Трубчатые кости отделяют от плоти. Клетки костного мозга из бедренной или плечевой кости суспендируют путем вымывания через созданные отверстия с помощью шприца средой Игла М в колбу. Содержимое колбы тщательно перемешивают до однородного состава пипетированием. Полученные клетки суспензии пропускают через капроновые фильтры для тщательной очистки от желтого костного мозга и отмывают 3 раза охлажденной средой Игла М. Фильтрат подвергают центрифугированию в течение 5-7 мин при 3 тыс. об/мин, затем пипеткой с надосадочной жидкости снимают остатки желтого костного мозга. Далее осадки с надосадочными жидкостями подвергают гомогенизации, в результате которого достигается разрушение клеточных стенок осадка из костного мозга (который затем отбрасывают) и происходит дополнительное высвобождение белковых молекул в надосадочную жидкость, что влияет на выход конечного продукта. Для выделения белка и освобождения от обломков клеток содержимое центрифужных пробирок фильтруют через капроновые фильтры. Из осадка делают мазки, окрашивают по общепринятым методикам и просматривают под микроскопом - клетки в них не обнаруживаются (гомогенная масса), следовательно, все биологически активные вещества переходят в раствор.

Выделение общего белка проводят следующим образом.

В пробирки для центрифугирования с раствором белков добавляют раствор сульфата аммония из расчета 6 частей раствора белка 3 части раствора соли. Для лучшего осаждения белков содержимое стаканов нагревают до температуры 40-60°C (в том случае если белки осаждаются плохо). Экстракты для полного осаждения оставляют на 12 часов в холодильнике при температуре +4°C. К надосадочной жидкости добавляют 1% раствор трихлоруксусной кислоты, вследствие чего происходит дополнительное осаждение белка и увеличивается вес общего белка, выделенного из костного мозга. Осадок белков отделяют от раствора центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 минут - все перечисленные приемы, их экспозиции и режимы установлены экспериментально, благодаря которым осуществляется наиболее полноценно данный способ и конечный результат, т.е. более полное осаждение и отделение белка костного мозга от раствора. Осадки смывают небольшим количеством спирта, затем эфира и переносят на часовое стекло для высушивания. Полученные таким образом белки для дальнейшей очистки подвергают диализу с целью полного удаления растворов сульфата аммония и трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодийной пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1-2 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1-2 часов. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором.

Пример 1.

Бедренные кости от 6 коз отделяют от плоти, затем проводят распил кости с двух сторон в центре и вымывают костное содержимое средой Игла М в колбу. Клеточные суспензии фильтруют через капроновые фильтры, которые предварительно стерилизуют. Фильтрат центрифугируют в течение 7-10 минут при 3 тыс. об/мин. Осадок и надосадочную жидкость подвергают гомогенизации с помощью гомогенизатора типа Mini Mix 100VW в течение 12-15 минут. Впоследствии проводят подсчет клеток суспендированного осадка средой Игла М в разведении 1:10 в камере Горяева, в осадке обнаруживается гомогенная масса. Содержимое центрифужных пробирок вновь фильтруют через капроновые фильтры. Белки осаждают из раствора путем высаливания раствором сульфата аммония из расчета на 6 частей раствора белка 3 части сульфата аммония, оставляют отстаиваться на 12 часов. Осадок от раствора отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 минут. К надосадочной жидкости добавляют 1% раствор трихлоруксусной кислоты, затем также осадок от раствора отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 минут. Осадки смывают спиртом и эфиром, высушивают на часовом стекле, взвешивают.

Вес общего белка, выделенного из костного мозга коз, составляет 206±0,34 мг. Белок представляет собой сухой аморфный порошок светло-коричневого цвета.

Пример 2.

Трубчатые кости от 4 сибирских косуль отделяют от плоти. Подготовку костного содержимого к выделению белка проводят, как описано в предыдущем примере. Белки из раствора осаждают путем высаливания сульфатом аммония из расчета на 6 частей раствора белка 3 части сульфата аммония.

Содержимое колбы нагревают до температуры 40-60°C, оставляют на 12 часов в холодильнике при температуре +4°C. В колбе наблюдаются обильные хлопья осажденного белка. К надосадочной жидкости добавляют 1% раствор трихлоруксусной кислоты, затем также осадок от раствора отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 минут. Осадок обрабатывают и высушивают, как описано выше. Вес общего белка из мозгового вещества сибиркой косули, выделенных данным способом, составляет 208±0,28 мг. Белок представляет собой аморфный порошок красно-коричневого цвета.

(В примерах 1 и 2, так же как и в примере 3, технические операции по получению белков костного мозга одинаковы и процесс диализа в них также осуществляется для дополнительной очистки при их дальнейшем использовании, однако как проводится диализ описано только в третьем примере, чтобы не повторяться и разнообразить пример).

Пример 3.

Трубчатые кости от трех лосей отделяют от плоти. Вымывание клеточных популяций, избавление от жировых прослоек и выделение белка проводят, как описано в предыдущих примерах. Вес общего белка из костного мозга лося составляет 219±0,53 мг. Сухой кристаллический белок костного мозга лося переводят в раствор. Для этого берут 0,05 г белка и добавляют 0,45 мл 0,9% раствора хлорида натрия, тщательно перемешивают. Раствор белка подвергают диализу, поместив в емкость с коллодийной пленкой. Данную емкость ставят в чашу с проточной водой, которая подается непрерывно через шланг. Диализ в проточной воде протекает сутки (pH 8,0-8,5). Затем в дистиллированной воде диализ протекает в течение двух часов (нейтральная реакция индикатора). Содержание общего белка определяют с помощью биохимического анализатора типа Chem-7.

Отличительным преимуществом предлагаемого способа выделения белков из трубчатых костей костного мозга является доступность, сокращение времени экстракции белка, использование новых технологий, увеличение веса целевого продукта.

Способ выделения белков из костного мозга, предусматривающий извлечение клеток костного мозга, их суспендирование, фильтрацию суспензии, центрифугирование фильтрата, осадки вместе с надосадочными жидкостями подвергают гомогенизации, затем содержимое центрифужных пробирок фильтруют через капроновые фильтры, белки раствора высаливают с помощью сульфата аммония при нагревании до 60°С, отстаивают 12 ч при температуре 4°C и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин, к надосадочной жидкости добавляют 1% раствор трихлоруксусной кислоты, затем также осадок от раствора отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 мин, полученные осадки смывают спиртом и эфиром, затем высушивают на часовом стекле, к полученному порошку добавляют 0,9% раствора хлорида натрия, тщательно перемешивают, затем раствор белка подвергают диализу проточной водой в течение 1-2 сут и дистиллированной водой в течение 1 ч, центрифугирование раствора при 2000 об/мин в течение 5 мин, полученные осадки смывают спиртом и эфиром, затем высушивают на часовом стекле.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 61 items.
10.03.2013
№216.012.2cff

Способ получения ферментированного взбитого десерта на молочно-соевой основе

Изобретение относится к молочной промышленности. Способ включает приготовление смеси из соево-молочной дисперсии и обезжиренного молока в соотношении 85:15, фильтрование, гомогенизацию, пастеризацию при температуре t=90±2°C с выдержкой 5-10 минут, охлаждение до температуры сквашивания 38±2°С,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477050
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.07.2014
№216.012.dc5e

Мост ведущий уборочной гусеничной машины

Изобретение относится к мостам ведущим уборочных гусеничных машин, например самоходных рисозерноуборочных и кормоуборочных комбайнов. Мост включает балку моста, с закрепленными на ней бортовыми редукторами с ведущими звездочками и тормозными устройствами, коробку диапазонов, бортовые фрикционы,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522192
Дата охранного документа: 10.07.2014
20.07.2014
№216.012.dd95

Прополочная фреза

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению. Прополочная фреза состоит из вала с жестко прикрепленными к нему дисками и ножей. Ножи выполнены из тонкой, прочной и износостойкой стали и прикреплены к дискам так, что образуют углы α с линией движения прополочной фрезы и углы β с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522511
Дата охранного документа: 20.07.2014
20.07.2014
№216.012.e170

Способ приготовления кормовых смесей

Способ приготовления кормовых смесей относится к кормопроизводству и, в частности, к приготовлению кормовых смесей на основе углеводистых и стебельных кормов. Способ включает послойное горизонтальное размещение углеводистых и стебельных компонентов в дозирующем устройстве рядами по его длине и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523498
Дата охранного документа: 20.07.2014
20.08.2014
№216.012.ea3a

Аппарат режущий жатвенной машины

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению и может быть использовано в режущем аппарате жатвенной машины на уборке бобовых культур, преимущественно сои. Режущий аппарат содержит пальцы открытого типа с прижимами и нож с сегментами. В нижней части каждого пальца закреплены...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525770
Дата охранного документа: 20.08.2014
27.09.2014
№216.012.f8fb

Устройство для автоматического копирования рельефа поля жаткой

Устройство для автоматического копирования рельефа поля жаткой содержит копирующий элемент, пружинно-рычажный механизм уравновешивания жатки, силовые гидроцилиндры управления положением жатки, гидрозолотник с корпусом, штоком и шаровым пальцем, которые объединены в один контур автономной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529576
Дата охранного документа: 27.09.2014
10.10.2014
№216.012.fc93

Устройство копирующее режущего аппарата жатки для уборки сои

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения, а именно к устройствам копирующим режущего аппарата жатки для уборки сои. Устройство содержит режущий аппарат (1), закрепленный на гибком пальцевом брусе (2). Пальцевой брус (2) с помощью эластичной ленты (3) и продольных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002530505
Дата охранного документа: 10.10.2014
27.10.2014
№216.013.018e

Тележка гусеничная уборочно-транспортной машины

Изобретение относится к транспортному машиностроению, в частности к тележкам гусеничных уборочно-транспортных машин с гусеничным движителем. Тележка гусеничная уборочно-транспортной машины содержит сварную раму, левый и правый гусеничные движители. Движители включают направляющее колесо с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002531796
Дата охранного документа: 27.10.2014
10.11.2014
№216.013.037e

Тележка гусеничная транспортного средства

Изобретение относится к транспортному машиностроению и может быть использовано в тележках гусеничных транспортных средств. Тележка содержит сварную раму, состоящую из лонжеронов, соединенных между собой трубами, направляющее колесо с механизмом натяжения, поддерживающие ролики, ведущую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532292
Дата охранного документа: 10.11.2014
10.11.2014
№216.013.0381

Шнекоход поисково-спасательного комплекса

Изобретение относится к средствам транспортным вездеходным, оснащенным шнековыми движителями и предназначенным для передвижения в условиях бездорожья. Шнекоход содержит корпус, в передней части которого размещена рубка экипажа и лежачие места для космонавтов, а в кормовой части - моторная...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532295
Дата охранного документа: 10.11.2014
Showing 1-10 of 103 items.
27.04.2013
№216.012.39be

Устройство - цилиндроприжимной механизм для распределения собственной нагрузки с передней оси колесного трактора на дополнительно установленный движитель

Изобретение относится к сельскохозяйственному транспорту. Цилиндроприжимной механизм предназначен для распределения собственной нагрузки с передней оси колесного трактора на дополнительно установленный движитель. Цилиндроприжимной механизм установлен на раме трактора при помощи сварных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480343
Дата охранного документа: 27.04.2013
10.05.2013
№216.012.3d0a

Пресс для брикетирования

Изобретение относится к обработке материалов давлением и может быть использовано для изготовления брикетов из угольной мелочи, торфяной крошки, опилок, их смеси. Пресс содержит кожух, в котором эксцентрично установлен вал с формующим колесом. Колесо расположено между верхним и нижним фланцами....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002481193
Дата охранного документа: 10.05.2013
27.05.2013
№216.012.43f5

Автоматический корректор сцепного веса для увеличения проходимости и повышения производительности колесных тракторов при их агрегатировании с прицепами

Изобретение относится к сельскохозяйственному транспорту. Автоматический корректор сцепного веса колесных тракторов при их агрегатировании с прицепами содержит жесткую силовую связь, датчики буксования и распределения усилий и дополнительный гидроцилиндр. Жесткая связь соединяет дышло прицепа...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482974
Дата охранного документа: 27.05.2013
10.06.2013
№216.012.463f

Способ производства мороженого функционального назначения

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ предусматривает приготовление смеси исходных компонентов, фильтрацию, пастеризацию и гомогенизацию, охлаждение, созревание смеси, фризерование, фасование и закаливание. В качестве исходных компонентов используют молоко коровье цельное,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483563
Дата охранного документа: 10.06.2013
10.06.2013
№216.012.4644

Способ приготовления белково-витаминных кормовых продуктов

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способам приготовления кормов на основе соевого компонента. Способ приготовления белково-витаминных кормовых продуктов включает смешивание соевого белкового компонента с углеводистыми, их формование и термообработку. В качестве соевого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483568
Дата охранного документа: 10.06.2013
10.06.2013
№216.012.47ce

Увеличитель сцепного веса колесных транспортных средств при их агрегатировании с прицепами

Изобретение относится к транспорту, а именно к дополнительно устанавливаемым вспомогательным устройствам для увеличения проходимости и повышения производительности колесных транспортных средств. Увеличитель сцепного веса содержит жесткую силовую связь, соединяющую дышло прицепа со сцепным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483962
Дата охранного документа: 10.06.2013
20.06.2013
№216.012.4bc3

Устройство для повышения проходимости колесного трактора

Устройство относится к устанавливаемым на движители транспортных средств вспомогательным устройствам в целях повышения их проходимости при агрегатировании с навесным оборудованием, движении по скользкой дороге, в условиях бездорожья, наличии подстилающего мерзлотного слоя и малой несущей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484977
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4bc5

Тросовый увеличитель сцепного веса колесных транспортных средств при их агрегатировании с прицепами

Изобретение относится к транспорту, а именно к дополнительно устанавливаемым вспомогательным устройствам для увеличения проходимости и повышения производительности колесных транспортных средств. Тросовый увеличитель сцепного веса содержит жесткую силовую связь, соединяющую дышло прицепа со...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484979
Дата охранного документа: 20.06.2013
10.07.2013
№216.012.52a4

Способ приготовления белково-минерального кормового продукта

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способам приготовления кормов на основе соевого компонента. Способ приготовления белково-минерального кормового продукта включает измельчение мясокостного сырья в виде субпродуктов птицы и его смешивание с белковым компонентом в виде...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486759
Дата охранного документа: 10.07.2013
10.07.2013
№216.012.52a6

Способ приготовления кормового продукта

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к кормопроизводству. Способ приготовления кормового продукта включает дозированную подачу комбикормов с высокобелковым компонентом, углеводно-минеральным компонентом и витаминным компонентом в виде травяной муки. В качестве...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486761
Дата охранного документа: 10.07.2013
+ добавить свой РИД