15-АРОИЛ-2-ГИДРОКСИ-5,5-ДИМЕТИЛ-2,3,5,6-ТЕТРАГИДРО-1Н-2,7В-МЕТАНОБЕНЗО[5,6][1,4]ДИАЗЕПИНО[1,7-А]ХИНОКСАЛИН-1,7,8(4Н,9Н)ТРИОНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса замещенных метанобензо[5,6][1,4]диазепино[1,7-а]хиноксалин-1,7,8(4H,9H)трионов общей формулы:

где Ar=4-ClC₆H₄, R=H(Ia); Ar=C₆H₅, R=CH₂C₆H₅(Iб); Ar=C₆H₅, R=2,4-диFC₆H₄ (Iв).

обладающим противовоспалительной активностью. Указанное свойство предполагает возможность использования данного ряда соединений в медицине в качестве лекарственных средств (табл. 1, 2).

Аналогом по структуре заявляемым соединениям являются 20-ароил-12-гидрокси-17,17-диметил-3-фенил-3,10,13-триазопентацикло[10.7.1.0.^1,100.^4,90.^14,19]эйкоза-4,6,7,14 (19)-тетраен-2,11,15-трионы [Машевская И.В., Дувалов А.В., Боздырева К.С., Клинчина М.Н., Дыренков P.O., Масливец А.Н. 20-Ароил-12-гидрокси-17,17-диметил-3-фенил-3,10,13-триазопентацикло[10.7.1.0.^1,100.^4,90.^14,19]эйкоза-4,6,7,14 (19)-тетраен-2,11,15-трионы и способы их получения. Патент РФ №2257386, МПК: C07D 487/08, опубл. 27.07.2005] формулы:

где R=Н, Bz и Ar=Ph, 4-СН₃ОС₆Н₅

В медицинской практике известен противовоспалительный препарат диклофенак натрия, который взят заявителем в качестве эталона для сравнения противовоспалительной активности заявленных соединений.

Задачей создания изобретения является синтез новых производных метанобензо[5,6][1,4]диазепино[1,7-а]хиноксалин-1,7,8(4H,9H)трионов, обладающих противовоспалительной активностью, т.е. расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Схема синтеза заявляемых соединений:

где Ar=4-ClC₆H₄, R=H(Ia); Ar=C₆H₅, R=CH₂C₆H₅(Iб); Ar=C₆H₅, R=2,4-диFC₆H₄ (Iв).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 15-(4-Хлорбензоил)-2-гидрокси-5,5-диметил-2,3,5,6-тетрагидро-1H-2,7b-метанобензо[5,6][1,4]диазепино[1,7-а]хиноксалин-1,7,8(4H,9H)трион (Ia).

Раствор 3.71 г (1.0 ммоль) 3-(4-хлорфенил)пирролохиноксалинтриона и 1, 39 г (1.0 ммоль) имина димедона в 50 мл абсолютного ацетонитрила кипятили 3 мин (до исчезновения темно-фиолетовой окраски исходного соединения), охлаждали, образовавшийся осадок соединения Ia отфильтровывали. Выход 79%, т.пл. 215-7°С (из ацетонитрила). ИК спектр (вазелиновое масло, ν/см^-1): 3366 (ОН), 3262 (NHCO), 1713 ш (С¹=O, С⁷=O), 1664 (С⁸=O), 1649 (C₆P₅CO). Спектр ЯМР¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆) δ, м.д.: 0.69 с (3Н, Me), 0.89 с (3Н, Me), 1.85, 1.93 т (2Н, С⁴Н₂, J 16.0 Гц), 2.00, 2.13 дд (2Н, С⁶Н₂, J 16.0 Гц), 4.53 с (1Н, СН), 7.00-8.07 гр. с (9Н, 2С₆Н₄+ОН), 10.68 с (1Н, NH), 10.96 (NHCO). Найдено, %: С 65.79; Н 3.78; N 7.19. C₃₂H₂₂ClN₃O₅. Вычислено, %: С 65.80; Н 3.80; N 7.20.

Пример 2. 15-Бензоил-3-бензил-2-гидрокси-5,5-диметил-2,3,5,6-тетрагидро-1Н-2,7b-метанобензо[5,6][1,4]диазепино[1,7-а]хиноксалин-1,7,8(4Н,9Н)-трион (Iб).

Раствор 3.19 г (1.0 ммоль) 3-бензоилпирролохиноксалинтриона и 2, 29 г (1.0 ммоль) имина димедона в 50 мл абсолютного ацетонитрила перемешивали при комнатной температуре 15 мин (до исчезновения темно-фиолетовой окраски исходного соединения), охлаждали, образовавшийся осадок соединения Iб отфильтровывали. Выход 81%, т.пл. 244-6°С (из ацетонитрила). ИК спектр (вазелиновое масло, ν/см): 3360 (ОН), 3250 (NHCO), 1715 ш (С¹=O, С⁷=O), 1666 (C⁸=O), 1650 (С₆Н₅СО). Спектр ЯМР¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆) δ, м.д.: 0.69 с (3Н, Me), 0.89 с (3Н, Me), 1.85, 1.93 т (2Н, С⁴Н₂, J 16.0 Гц), 2.29, 2.38 дд (2Н, С⁶Н₂, J 16.0 Гц), 4.76 с (1Н, СН), 4.86 (s, 2Н), 6.98-8.37 гр. с (9Н, 2С₆Н₄+ОН), 10.65 с (1H, NH), 10.96 (NHCO). Найдено, %: С 72.50; Н 5.30; N 7.39 C₃₃H₂₉N₃O₅. Вычислено, %: С, 72.38; Н, 5.34; N, 7.67.

Пример 3. 15-Бензоил-3-(2,4-дифторфенил)-2-гидрокси-5,5-диметил-2,3,5,6-тетрагидро-1Н-2,7b-метанобензо[5,6][1,4]диазепино[1,7-а]хиноксалин-1,7,8(4Н,9Н)-трион (Iв).

Раствор 3.19 г (1.0 ммоль) 3-бензоилпирролохиноксалинтриона и 2,51 г(1.0 ммоль) имина димедона в 50 мл абсолютного ацетонитрила перемешивали при комнатной температуре 15 мин (до исчезновения темно-фиолетовой окраски исходного соединения), охлаждали, образовавшийся осадок соединения Iб отфильтровывали. Выход 71%, т.пл. 200-2°С (из ацетонитрила). ИК спектр (вазелиновое масло, ν/см): 3360 (ОН), 3250 (NHCO), 1711 ш (С¹=O, С⁷=O), 1664 (С⁸=O), 1647 (С₆Н₅СО). Спектр ЯМР¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆) δ, м.д.: 0.78 с (3Н, Me), 0.93 с (3Н, Me), 2,07 дд (2Н, С⁶Н₂, J 6.0 Гц), 4.78 с (1Н, СН), 4.98 (s, 2Н), 7.00-8.19 гр. с (9Н, 2С₆Н₄+ОН), 10.79 (NHCO). Найдено, %: С 65.79; Н 3.78; N 7.19. C₃₂H₂₅F₂N₃O₅. Вычислено, %: С, 65.48; Н, 3.70; N, 7.38.

Соединения Ia-в представляют собой бесцветные кристаллические вещества с высокими температурами плавления, легкорастворимые в ДМФА и ДМСО, труднорастворимые в хлороформе, этилацетате, дихлорэтане, нерастворимые в алканах и воде.

Пример 4. Фармакологическое исследование 15-ароил-2-гидрокси-5,5-диметил-2,3,5,6-тетрагидро-1H-2,7b-метанобензо[5,6][1,4]диазепино[1,7-а]хиноксалин-1,7,8(4H,9H)трионов на наличие противовоспалительной активности.

Противовоспалительную активность изучали на белых лабораторных аутбредных крысах самцах стока линии Wistar и белых лабораторных аутбредных мышах стока линии BALB/c. на модели каррагенинового отека лапы. Подготовка животных включала отбор по полу, возрасту и состоянию здоровья. В рамках выделенной субпопуляции был выполнен рандомизированный отбор с использованием генератора случайных чисел в экспериментальные группы по 3 животных (в скрининговых экспериментах для крыс), и по 6 животных в подтверждающем эксперименте на мышах.

Дизайн скрининговых экспериментов:

• 4 экспериментальные группы, 1 контрольная

• 5 экспериментальных групп, 1 контрольная [1].

Дизайн подтверждающего эксперимента:

• 3 экспериментальные группы, 1 контрольная группа, 1 группа препарата сравнения.

Животные в группах маркировались методом нанесения сквозных индивидуальных меток. Проверка качества рандомизации выполнялась на основе тестирования значимости сдвигов масс и гомогенности дисперсий - до эксперимента.

Исследуемые вещества индивидуально суспендировали в крахмальной слизи, и вводили животным внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг (внутрилабораторный стандарт скрининговой дозы) за 40 минут до введения 1% раствора каррагенина. В качестве препарата сравнения использовали таблетки диклофенака 0,05 г, покрытые кишечнорастворимой оболочкой производства ООО «Озон» г. Жигулевск. В качестве эквистрессового воздействия животным в контрольной группе вводилась дистиллированная вода. Индуктором отека являлся 1% раствор гамма-каррагенана (поставщик - ФГБОУ ВО ПГФА Минздрава России, кафедра физиологии).

Модель экссудативного воспаления - каррагенинового отека лапы, воспроизводилась согласно руководящим документам в области доклинических исследований [2, 3]. Замер лапы выполнялся онкометрическим фотометрическим методом. Для обработки данных экспериментов использовались непараметрические статистические методы во всех случаях, когда не выполнялись требования параметричности данных [4]. Основными методами обработки данных являлись различные реализации одномерного и многомерного дисперсионного анализа, в том числе устойчивые к выбросам [5]. В данном случае использовался непараметрический метод Вилкоксона [6]; поправки на множественные сравнения не выполнялись. Исключение выбросов выполнялось по правилу «1.5 IQR» [7, 8].

Все исследуемые соединения обладают достоверным противовоспалительным действием, сравнимым с действием диклофенака натрия (табл. 1, 2).

Список литературы

1. Anglemyer A., Horvath Н.Т., Bero L. Healthcare outcomes assessed with observational study designs compared with those assessed in randomized trials // Cochrane Database of Systematic Reviews. - 2014. - №. 4.

2. Миронов A.H. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева - 2 изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство Медицина», 2005 - 832 с: ил. ISBN 5-225-04219-8.

4. Hollander М., Wolfe D.A., Chicken Е. Nonparametric statistical methods. - John Wiley & Sons, 2013. - T. 751.

5. Anderson M.J. A new method for non - parametric multivariate analysis of variance // Austral ecology. - 2001. - T. 26. - №. 1. - C. 32-46.

6. Гланц С. и др. Медико-биологическая статистика // М.: практика. - 1999. - Т. 459. - С. 1.

7. Tukey, J.W. Exploratory data analysis. 1977. Massachusetts: Addison-Wesley. ГОСТ: Статистические методы. Статистическое представление данных. Часть 4. Выделение и обработка выбросов. ГОСТ Р ИСО 16269-4-2017.