Способ диагностики острого эндометрита

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики эндометрита у женщин на основе дискриминантного анализа клеточного иммунитета на системном уровне.

Известен способ оценки микробного спектра эндометрия для этиологическойдиагностикихроническогоэндометрита (Патент РФ №2599479 Способ оценки микробного спектра эндометрия для этиологическойдиагностикихроническогоэндометрита. Гомболевская Н. А., Марченко Л.А., Муравьёва В.В., Припутневич Т.В. и др. Подача заявки 19.08.2015 Публикация 10.10.2016.). Способ заключается в том, что производят забор фрагмента слизистой оболочки полости матки, далее методом ПЦР в реальном времени количественно оценивают значение контроля взятия материала, при снижении данного показателя ниже 104 ГЭ/образец - результат считают недостоверным, общей бактериальной массы, положительный результат при значении более 103 ГЭ/образец, определяют количество геном-эквивалентов микроорганизмов и сравнивают его с пороговым значением (ПЗ), применяя диагностическую панель, включающую Lactobacillusspp., абсолютно- или условно-патогенные микроорганизмы, такие как Eubacteriumspp., Enterobacteriaceae, Escherichiacoli, Streptococcusspp., Streptococcusagalactiae, Staphylococcusspp., Staphylococcusaureus, Enterococcusspp., Peptostreptococcusspp., Prevotellabivia/Porphyromonasspp., Gardnerellavaginalis, Atopobiumvaginae, Mycoplasmahominis, Ureaplasmaspp., Candidaspp., Trichomonasvaginalis, Chlamydiatrachomatis, Neisseriagonorrhoeae, Mycoplasmagenitalium, Herpessimplex 1 и 2 типов, Cytomegalovirus; при выявлении абсолютно- или условно-патогенных микроорганизмов в количестве, превышающем пороговое значение, делают заключение о потенциальном значении данного микроорганизма в этиологической диагностике хронического эндометрита.

Недостатком данного способа является длительное время (около 2 суток), ориентирован только на исследование микроорганизмов на местном уровне – в слизистой оболочке полости матки и не возможность использовать для диагностики эндометрита системные патологические изменения и, в частности, показатели клеточного иммунитета. Кроме того, этот способ диагностики не позволяет установить степень тяжести эндометрита и неприменим при диагностике указанного заболевания в период беременности.

Известен способ ранней диагностики послеродового эндометрита (Патент РФ № 2477861 Способ ранней диагностики послеродового эндометрита. Лебедева О.П., Пахомов СП., Чурносов М.И., Попов В.Н. и др. Подача заявки 18.11.2011. Публикация 20.03.2013 Бюл. № 8). Изобретение относится к области медицины. Предложен способ ранней диагностики послеродового эндометрита, включающий выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала у женщин на поздних сроках беременности или на 3-4 сутки после родов, проведение обратной транскрипции с получением кДНК и определение экспрессии мРНК TLR5 с помощью количественной полимеразной цепной реакции. Снижение экспрессии мРНК TLR5 ниже 0,01202 у женщин на поздних сроках беременности и ниже 0,16938 на 3-4 сутки после родов свидетельствует о развитии послеродового эндометрита.

Недостатком данного способа ранней диагностики послеродового эндометрита является то, что он не может применяться при послеабортном эндометрите, требует инвазивного вмешательства в цервикальном канале для взятия эпителиальных клеток и не учитывает иммунных нарушений, играющих первостепенную роль как в развитии, так и диагностике эндометрита.

В качестве ближайшего аналога принят способ диагностики и прогнозирования развития хронического эндометрита у женщин (Патент РФ №2587325 Способ диагностики и прогнозирования развития хронического эндометрита у женщин репродуктивного возраста по экспрессии toll-like рецепторов в эндометрии Коган Е.А., Гомболевская Н.А., Демура Т. А. и др. Подача заявки 11.06.2015. Публикация 20.06.2016). У женщин репродуктивного возраста с помощью иммуногистохимического окрашивания срезов эндометриальной ткани, по проценту позитивно окрашенных клеток эндометрия в баллах, определяют показатели локального врожденного иммунитета TLR2, TLR4, TLR9. Полученная иммуногистохимическая характеристика экспрессии TLR2, TLR4, TLR9 совместно с морфологической картиной эндометрия позволяет диагностировать либо отсутствие ХЭ, либо наличие факторов риска и предрасположенности к развитию ХЭ, либо наличие и прогрессирование ХЭ, либо наличие ХЭ в стадии ремиссии, либо наличие длительно существующего ХЭ, течение которого характеризуется развитием склеротических изменений сосудов и фиброзом стромы эндометрия различной степени выраженности.

Известный способ диагностики хронического эндометрита не позволяет выявлять острые формы эндометрита. Кроме того, этот способ не учитывает иммунологические изменения на системном уровне, интенсивно развивающиеся у больных острым и хроническим эндометритом. Недостатком данного способа диагностики хронического эндометрита является то, что он проводится без оценки информативности иммунологических параметров, что делает его финансово затратным. Отбор показателей локального иммунитета для диагностики хронического эндометрита осуществляется субъективно без использования адекватных математических методов.

Технической задачей изобретения является разработка способа диагностики острого эндометрита на основе дискриминантного анализа, который обеспечит улучшение диагностики острого эндометрита по наиболее информативным показателям клеточного и гуморального иммунитета за счет сокращения числа определяемых показателей системного клеточного и гуморального иммунитета.

Техническая задача решается посредством выполнения диагностического процесса по наиболее информативным показателям системного клеточного иммунитета, а именно по содержанию в периферической крови натуральных киллеров, Т-хелперов, и гуморального иммунитета по содержанию иммуноглобулинов Ig G, Ig M и ЦИК. Для поддержки принятия решений предлагается использовать дискриминантные функции, построенные по наиболее информативным показателям системного клеточного и гуморального иммунитета.

Способ диагностики острого эндометрита по определению высокоинформативных показателей клеточного и гуморального иммунитета на системном уровне, отличающийся построением дискриминантных классификационных функций на основе дискриминантного метода для больных острым эндометритом по наиболее информативным показателям клеточного иммунитета по формуле у = 206,149х₁+108,559х₂+20,239х₃-359,274, где

х₁ – абсолютное число натуральных киллеров, х10⁹/л

х₂ – абсолютное число Т-хелперов, х10⁹/л

х₃ – относительное число Т-хелперов, %

и гуморального иммунитета по формуле у= - 34,77х₄ - 6,91х₅ + 67,03х₆, где

х₄ – иммуноглобулины G, г/л

х₅ – иммуноглобулины М, г/л

х₆ – циркулирующие иммунные комплексы периферической крови, у.е.,

и при значениях дискриминантного уравнения клеточного иммунитета, равного 63172289647,364÷72832909647,445, и значениях дискриминантного уравнения гуморального иммунитета, равного 2238,60÷2578,74, диагносцируют острый эндометрит.

Определение уровня натуральных киллеров, Т-хелперов в периферической крови проводили иммунофлюоресцентным методом с набором моноклональных антител у 132 больных острым эндометритом и 117 здоровых женщин. Забор периферической крови осуществлялся из локтевой вены шприцем 10 см3. Далее кровь переносили в стерильные пробирки, содержащие гепарин из расчета 20 ЕД/мл крови. В специальные кюветы вносили по 0,5 мл гепаринизированной крови, в каждую из которых добавляли набор сывороток Ig G, Ig M, Ig A. Исследования проводили на фотометре Multiskar Ascent (Финляндия) в диагнозе измерений 0,0-4,2 мг/мл с чувствительностью 0,021 мг/мл. Содержание в периферической крови Ig G, Ig M и ЦИК определяли методом радиальной иммунодиффузии посредством набора ОООНЦП «Медицинская иммунология» (г. Москва). При классификации больных и здоровых женщин использовался дискриминантный анализ и программа «Statistica 6.0»

Содержание цитокинов в цельной крови и вагинально-цервикальном секрете определяли с помощью набора реагентов (ООО «Цитокин», г. Санкт-Питербург) методом твердофазного иммуноферментного анализа. Забор крови проводился аналогично описанному выше. Вагинальный секрет получали помощью стерильного шприц-тюбика. Исследуемый биоматериал помещали в стерильные пробирки, в каждую из которых добавляли соответствующие реагенты к определенным цитокинам. После этого исследования проводились на автоматическом анализаторе «Personallab» (Италия) в диапазоне 0,0-500 пг/мг с чувствительностью 1 пг/мл. Уровень цитокинов в крови и в вагинально цервикальном секрете исследовали методом радиальной иммунодиффузии посредством набора ОООНЦП «Медицинская иммунология» (г. Москва). Секреторный иммуноглобулин А (sIgA) во влагалищном отделяемом определяли методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «sIgA-ИТА-БЕСТ-СТРИП» ЗАО «Вектор-Бест».

Для ведущих параметров клеточного иммунитета, отражающих патологические изменения на системном уровне при остром эндометрите, дискриминантным методом получены следующие величины коэффициентов классификационных функций (табл. 1). С учетом параметров классификационныхфункций и констант синтезированы математические модели для второго класса (больные острым эндометритом) у2 = 206,149х1+108,559х2+20,239х3-359,274 и для первого класса (здоровые) у1 = 302,321х1+157,409х2+27,785х3-684,452.

Таблица 1

Величины коэффициентов классификационных функций для показателей клеточного иммунитета в периферической крови

Классифицируемые параметры

клеточного иммунитета Коэффициенты функций

Пример 1. Пациент А. поступил 11.09.2015г. в клинику. Содержание в периферической крови натуральных киллеров составило 0,08*109/л, абсолютное число Т-хелперов – 0,43*10⁹/л, относительное число Т-хелперов – 32,8%. У здоровой женщины содержание этих показателей соответственно составило 0,32*10⁹/л, 0,81*10⁹/л, 44,5%. Подставляя значения больной А. в дискриминантную модель у₈(больные) получим у₂=206,149*0,08*10⁹/л+108,559*0,43*10⁹/л +20,239*32,8%-359,274 = 63172289647,364. Аналогично рассчитываем величину у₁(здоровые):у₇= 302,321*0,32*10⁹/л + 17,409*0,81*10⁹/л + +27,785*44,5% - 684,452=224244009627,912

Пример 2. Пациент Б. поступил 15.09.2015г. в клинику. Содержание в периферической крови натуральных киллеров составило 0,07*10⁹/л, абсолютное число Т-хелперов – 0,48*10⁹/л, относительное число Т-хелперов – 31,5%. У здоровой женщины содержание этих показателей соответственно составило 0,30*10⁹/л, 0,76*10⁹/л, 42,8%. Подставляя значения больной Б. в дискриминантную модель у₈(больные) получим у₂=206,149*0,07*10⁹/л + 108,559*0,48*10⁹/л +20,239*31,5%-359,274 =66538749647,101. Аналогично рассчитываем величину у₇(здоровые): у₁=302,321*0,30*10⁹/л + 17,409*0,76*10⁹/л +27,785*42,8% - 684,452=210327139327,440

Пример 3. Пациент В. поступил 16.09.2015г. в клинику. Содержание в периферической крови натуральных киллеров составило 0,09*109/л, абсолютное число Т-хелперов – 0,50*10⁹/л, относительное число Т-хелперов – 33,2%. У здоровой женщины содержание этих показателей соответственно составило 0,27*10⁹/л, 0,82*10⁹/л, 41,7%. Подставляя значения больной В. в дискриминантную модель у₈(больные) получим у₂=206,149*0,09*10⁹/л+108,559*0,50*10⁹/л +20,239*33,2%-359,274 =72832909647,445. Аналогично рассчитываем величину у₁(здоровые): у₇= 302,321*0,27*10⁹/л + 17,409*0,82*10⁹/л + 27,785*42,7%-684,452 =210702049327,134.

В соответствии с полученными величинами дискриминантных функций показателей клеточного иммунитета на системном уровне для класса больных острым эндометритом (у₂) и здоровых женщин (у₁) диагноз острого эндометрита ставится при значениях у₂=63172289647,364÷72832909647,445, а диагноз здоров – при значениях у₁=210327139327,440.

Диагностически значимые показатели гуморального иммунитетана системном уровне, отражающие проявления острого воспалительного процесса в эндометрии, в результате обработки дискриминантным методом, в отличие от показателей клеточного иммунитета, имеют преимущественно отрицательные значения классификационных функций (табл.2).

Применяя обозначения показателей гуморального звена иммунитета в крови в соответствии с табл.2 и результаты дискриминантного анализа, получаем математическую модель у₄ = - 34,77х₄ - 6,91х₅ + 67,03х₆ - 2402,78 для пациенток с острым эндометритом и у₃ =- 44,95х₄ - 5,77х₅ + 58,59х₆ - 1611,06 для первого класса.

Таблица 2

Коэффициенты классификационных функций параметров гуморального иммунитета в основной группе и контроле на системном уровне

Пример 1. Пациент А. поступил 11.09.2016г. в клинику. Содержание в периферической крови IgG составило 25,6 г/л, IgM – 3,6 г/л, ЦИК – 86,3 у.е. У здоровой женщины эти показатели соответственно составили 10,2 г/л, 1,0 г/л, 60,4 у.е. Подставляя значения больной А. в дискриминантную модель у₁(больные) получим у₄=-34,77*25,6-6,91*3,6+67,03*86,3-2402,78=+2466,92. Аналогично рассчитываем величину у₃(здоровые): у₃=-44,95*10,2-5,77*1,0+58,59*60,4-1611,06=+1463,52

Пример 2. Пациент Б. поступил 15.09.2016г. в клинику. Содержание в периферической крови IgG составило 26,2 г/л, IgM – 3,8 г/л, ЦИК – 88,3 у.е. У здоровой женщины эти показатели соответственно составили 8,5 г/л, 0,9 г/л, 61,2 у.е. Подставляя значения больной Б. в дискриминантную модель у₁(больные) получим у₄=-34,77*26,2-6,91*3,8+67,03*88,3-2402,78=+2578,74. Аналогично рассчитываем величину у₃(здоровые): у₃=-44,95*8,5-5,77*0,9+58,59*61,2-1611,06=+1587,38

Пример 3. Пациент В. поступил 16.09.2016г. в клинику. Содержание в периферической крови IgG составило 22,7 г/л, IgM – 3,7 г/л, ЦИК – 81,4 у.е. У здоровой женщины эти показатели соответственно составили 9,5 г/л, 1,4 г/л, 62,7 у.е. Подставляя значения больной В. в дискриминантную модель у₁(больные) получим у₄=-34,77*22,7-6,91*3,7+67,03*81,4-2402,78=+2238,60. Аналогично рассчитываем величину у₃(здоровые): у₃=-44,95*9,5-5,77*1,4+58,59*62,7-1611,06=+1627,42

В соответствии с полученными величинами дискриминантных функций показателей гуморального иммунитета на системном уровне для класса больных острым эндометритом (у₄) и здоровых женщин (у₃) диагноз острого эндометрита ставится при значении у₄=2238,60÷2578,74, а диагноз здоров – при у₃=1463,52÷1627,42.

В Российской Федерации за последние десять лет заболеваемость, обусловленная воспалительными процессами в эндометрии, неуклонно растет. Выявление эндометрита представляет значительные трудности вследствие полиморфизма клинической симптоматики. Сложность диагностики данной патологии обусловлена также неспецифичностью и широким диапазоном колебаний показателей лабораторных исследований, имеющих различную диагностическую значимость. Отсутствуют данные по количественной оценке информативности интермодальных изменений параметров иммунной и других систем, биохимического и общего анализа крови у больных острым эндометритом, что снижает результативность диагностического процесса и приводит к увеличению числа выполняемых лабораторных и инструментальных исследований. Это указывает на необходимость разработки новых методов диагностики эндометрита, учитывающих дискриминантные функции иммунологических показателей, позволяющих повысить качество диагностики эндометрита.