Композиция для повышения содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы

Изобретение относится к медицине, конкретно - к поиску и разработке средств для повышения дифференцировки опухолевых клеток рака молочной железы и их реверсии в нормальный фенотип, необходимых в дифференцировочной терапии рака молочной железы для снижения степени злокачественности опухоли.

Изобретение может также быть использовано при изучении процессов и механизмов дифференцировки опухолевых клеток и их реверсии к нормальному фенотипу при раке молочной железы.

Дифференцировочная терапия, основанная на инициации дифференцировки опухолевых клеток, уже достаточно давно известна в онкологии (Kawamata Н., Tachibana М., Fujimori Т., Imai Y. Differentiation-inducing therapy for solid tumors // Curr. Pharm. Des. - 2006. - Vol. 12. - №3. - P. 379-385). Однако среди известных препаратов с противоопухолевой активностью в настоящее время найдены пока только две группы препаратов, обладающие способностью эффективно повышать дифференцировку некоторых клеток неоплазменного генеза. К ним относятся вещества из группы ретиноидов (витамин А и его аналоги), а также вещества, влияющие на процесс метилирования генов трансформированных клеток (Massard С., Deutsch Е., Soria J.C. Tumor stem cell-targeted treatment: elimination or differentiation // Annals of Oncology.-2006. - Vol.17. - №11. - P. 1620-1624; Sell S. Stem cell origin of cancer and differentiation therapy // Crit. Rev. Oncol. Hematol. - 2004. - Vol. 51. - P. 1-28.). При этом в клинической практике пока применяются только ретиноиды (Hansen L., Sigman С, Andreola F., Ross S., Kelloff G., De Luca L. Retinoids in chemoprevention and differentiation therapy // Carcinogenesis. - 2000. - Vol. 21. - №7. - P. 1271-1279; Tang X.H., Gudas L.J. Retinoids, Retinoic Acid Receptors, and Cancer // Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease.- 2011. - Vol. 6. - P. 345-364.).

В настоящее время имеются убедительные результаты, свидетельствующие об эффективности использования ретиноидов в дифференцировочной терапии и лечении только острого промиелоцитарного лейкоза (Larson R.S., Brown D.C., Sklar L.A. Retinoic acid induces aggregation of the acute promyelocytic leukemia cell line NB-4 by utilization of LFA-1 and ICAM-2 // Blood. - 1997. - Vol.90. - N. 7. - P. 2747-2756; Ohno R., Asou N., Ohnishi K. Treatment of acute promyelocytic leukemia: strategy toward further increase of curerate // Leukemia. - 2003. - Vol.17. - P. 1454-1463.).

Предпринимались попытки включения ретиноидов в схемы лечения нейробластом, рака молочной железы и предстательной железы (Xu W.P., Zhang X., Xie W.F. Differentiation therapy for solid tumors // J. Dig. Dis.- 2014.-Vol.15. - №4. - P. 159-165.). Однако применение ретиноидов при лечении солидных опухолей не дало ожидаемого лечебного эффекта. Так, например, при введении ретиноевой кислоты пациентам с раком молочной железы в комплексную противоопухолевую терапию только у некоторых пациентов (менее 30%), получающих ретиноевую кислоту, было отмечено улучшение некоторых показателей эффективности лечения - снижение частоты послеоперационных рецидивов (Garattini Е., Bolis М., Garattini S.K., Fratelli М., Centritto F., Paroni G., Gianni M., Zanetti A., Pagani A., Fisher J.N., Zambelli A., Terao M. Retinoids and breast cancer: from basic studies to the clinic and back again // Cancer Treat. Rev. - 2014. - Vol. 40. - №6. - P. 739-749; Fettig L.M., McGinn O., Finlay-Schultz J., LaBarbera D.V., Nordeen S.K., Sartorius C.A. Cross talk between progesterone receptors and retinoic acid receptors in regulation of cytokeratin 5-positive breast cancer cells // Oncogene. - 2017. - Vol. 36. - №44. - P. 6074-6084).

Известны вещества, в отношении которых была показана их способность повышать степень дифференцировки опухолевых клеток молочной железы и приводить к частичной реверсии их злокачественного фенотипа в относительно нормальный фенотип в следующих экспериментах.

1) Культивирование клеток опухоли молочной железы (линии клеток опухоли молочной железы MCF7, Hs578T и MDA-MB-231) в среде, содержащей ингибитор β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированную протеинкиназу MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K (LY294002) (Fei Wang F. et al. Phenotypic Reversion or Death of Cancer Cells by Altering Signaling Pathways in Three-Dimensional Contexts // J. Natl. Cancer Inst. - 2002. - 94(19). - P. 1494-1503) повышало содержание опухолевых клеток с признаками реверсии некоторых цитофизиологических показателей к показателям нормального фенотипа.

Степень реверсии опухолевых клеток из низкодифференцированных клеток в более дифференцированный фенотип была количественно оценена по показателю инвазии в тесте Бойдена (Boyden) и по формированию колоний (%) in vitro. В сравнительном тесте по показателю инвазии и способности образовывать большие агрегаты из опухолевых клеток, а также способности метастазировать in vivo, к наиболее злокачественной линии была отнесена линия клеток MDA-MB-231.

Линия клеток MDA-MB-231 показала частичную реверсию в высокодифференцированный фенотип при обработке одним из следующих веществ: ингибитором β1-интегрина, MAPK или ингибитором PI3K.

Культивирование клеток опухоли молочной железы MDA-MB-231 в среде, содержавшей одновременно ингибитор β1-интегрин (AIIB2) и фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K, привело к наиболее выраженной реверсии опухолевых клеток в нормальный фенотип и, соответственно, к увеличению количества клеток с более высокой степенью дифференцировки, чем в контроле, не содержавшем AIIB2 и PI3K.

При культивировании клеток MDA-MB-231 в среде, содержавшей ингибитор β1-интегрина (AIIB2) или митоген-активированную протеинкиназу MAPK (PD98059), или фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K (LY294002) показатель инвазии в тесте Бойдена (Boyden) снизился на 30-40%, а формирование колоний на 15-20%. При культивировании клеток MDA-MB-231 в среде, содержавшей ингибитор β1-интегрина (AIIB2) и фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K (LY294002), через 10 суток культивирования показатель инвазии в тесте Бойдена (Boyden) снизился более чем на 70%, а формирование колоний уменьшилось более чем на 30%.

Полученные данные представляют определенный научный интерес, поскольку указывают на возможность увеличения в популяции низкодифференцированных опухолевых клеток содержания клеток с более высокой степенью дифференцировки после воздействия на них ингибитора β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированной протеинкиназы MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназы PI3K.

Однако, хорошо известно, что опухоли гетерогенны и включают в свой клеточный состав субпопуляции клеток с различной степенью злокачественности, с различным метастатическим потенциалам, с различными особенностями злокачественного фенотипа и, соответственно, с различной способностью реагировать на те или иные вещества химического или биологического происхождения. Более того, клетки ткани опухоли защищены фиброзной капсулой и находятся среди клеток микроокружения (эндотелиоцитов, фибробластов, макрофагов, дендритных клеток и др.), способных понизить или полностью ингибировать эффект стимуляции дифференцировки опухолевых клеток.

Несмотря на эти известные факты оценка влияния ингибитора β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированной протеинкиназы MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназы PI3K на дифференцировку клеток опухоли молочной железы была проведена in vitro на достаточно однородных по своим свойствам опухолевых клетках культуральных линий, что является существенным недостатком такой экспериментальной модели опухолевого процесса.

К более адекватной биологической модели и методу для изучения влияния каких-либо веществ на гистогенетические процессы, происходящие в солидной опухоли, в том числе на процессы дифференцировки, относится культивирование in vitro фрагментов ткани опухоли. Однако ингибитор β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированная протеинкиназа MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназа PI3K не были апробированы на такой модели.

Все это не позволяет сделать даже приблизительно вероятную оценку эффективности влияния композиции, содержащей ингибитор β1-интегрина, митоген-активированную протеинкиназу MAPK и фосфатидилинозитол-3-киназу на изменение содержание высокодифференцированных опухолевых клеток в молочной железе при их использовании in vivo.

2) Наиболее близким аналогом к предлагаемому изобретению (по скорости развития эффекта стимуляции дифференцировки опухолевых клеток и относительному повышению содержания в популяции клеток с признаками фенотипически нормальных клеток) является вносимая в среду для культивирования клеток опухоли молочной железы (линии AU-565 and MCF-7) композиция, содержащая микофенольную кислоту (MPA), форбол 12-миристат 13-ацетат (РМА) и ретиноевую кислоту (RA) (Bacus S.S. et al. Differentiation of cultured human breast cancer cells (AU-565 and MCF-7) associated with loss of cell surface HER-2/neu antigen // Mol. Carcinog. - 1990.-3. - P. 350-362).

Воздействие указанной композиции на опухолевые клетки приводило через 4 дня культивирования к увеличению процента клеток линии AU-565 (до 48% и более), имеющих более зрелый фенотип, т.е. более дифференцированных.

Воздействие смеси МРА, РМА и ретиноевой кислоты RA на опухолевые клетки MCF-7 приводило через 4 дня к менее значительному увеличению процента клеток, имеющих более зрелый фенотип, чем при культивировании линии AU-565.

Однако, композиция аналога, как и предыдущие, не была апробирована на тканях опухолей молочной железы, что в значительной степени снижает практическую значимость работы.

Все вышесказанное обусловливает актуальность поиска веществ или композиций (из химических веществ и продуктов биологического происхождения), способных стимулировать процесс дифференцировки клеток злокачественных опухолей и, как следствие, увеличивать в опухоли содержание высокодифференцированных клеток.

В описываемой ниже предлагаемой композиции используют фитогемагглютинин Р, фитогемагглютинин М, конканавалин А, липополисахарид из Escherichia coli. Из уровня техники о них известно, в частности, следующее.

Фитогемагглютинин Р (РНА-Р) - лектин, выделенный из красной фасоли Phaseolus vulgaris, используется в иммунологических исследованиях в качестве митогена лимфоцитов. Показано, что фитогемагглютинин Р индуцирует митотическую и пролиферативную активность преимущественно Т-лимфоцитов и в меньшей степени - В-лимфоцитов (Movafagh A., Ghanati К., Amani D., Mahdavi S.M., Hashemi М., Abdolahi D.Z., Darvish H., Gholami M., HaghNejad L., Mosammami S., Safari S., Darehgazani R., Rahimi M., Naini N.S., M.G. Motlagh, Zamani M. The structure Biology and Application of Phytohemagglutinin (PHA) in Phytomedicine: With special up-to-date references to lectins // Journal of Paramedical Sciences (JPS). - 2013.- Vol. 4. - Suppl. 2008-4978.). Показано, что фитогемагглютинин P стимулирует in vitro продукцию лимфоцитами цитокинов IL-4, IL-6, IL-8, G-CSF, IFN-γ и TNF-α (Закиров Р.Ш., Акулова C.C., Филянская Е.Г., Семикина Е.Л., Маянский Н.А. Синтез цитокинов лимфоцитами in vitro у детей в ремиссии ювенильного идиопатического артрита на фоне терапии генно-инженерными биологическими препаратами Клиническая медицина.-2016. - Т. 8. - №2.- С. 46-52).

Каких-либо данных о влиянии фитогемагглютинина Р на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы нет.

Фитогемагглютинин М (РНА-М) - мукопротеиновая очищенная форма фитогемагглютинина, выделенного из красной фасоли Phaseolus vulgaris при помощи хроматографической технологии. РНА-Р состоит из двух тесно связанных белков. Один из них, называемый ФГА-L (PHA-L), способен агрегировать лейкоциты крови, другой - ФГА-Е (РНА-Е) - способен агрегировать эритроциты крови. Каждый из белков содержит пять изолектинов, которые являются полимерами из четырех мономеров, удерживающихся нековалентными связями. Показано, что фитогемагглютинин М индуцирует митотическую и пролиферативную активность лимфоцитов (Sharon N., Lis Н. History of lectins: from hemagglutinins to biological recognition molecules. - Glycobiology. - 2004. - Vol. 14. - P. 53-62; Movafagh A.1, Heydary H., Mortazavi-Tabatabaei S.A., Azargashb E. The significance application of indigenous Phytohemagglutinin (PHA) mitogen on metaphase and cell culture procedure // Iran J. Pharm. Res. - 2011. - Vol. - 10. - N. 4. - P. 895-903.).

Какие-либо данные о влиянии фитогемагглютинин М на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы отсутствуют.

Конканавалин А (ConA) - лектин, выделяемый из канавалии мечевидной Canavalia ensiformis. При рН >7 ConA представляет собой тетрамер, каждая из субъединиц которого имеет мол. массу 25,5 кДа и который, согласно кристаллографическим данным, состоит из двух β-структурных слоев, ориентированных перпендикулярно друг к другу (Liener I., Sharon N., Goldstein I. The Lectins: Properties, Functions, and Applications in Biology and Medicine. - Academic Press, London. - 1986. - 600 p.). В растворе тетрамерный ConA (в концентрации около 1 мкг/мл, но не выше 10 мкг/мл) обладает митогенной активностью по отношению к Т-лимфоцитам, а если молекулы ConA предварительно сшить друг с другом (с помощью антител к ConA или за счет присоединения к грануле сефарозы), то ConA начинает также стимулировать и В-клетки. На моделях in vitro показано, что ConA способен индуцировать аутофагию и апоптоз опухолевых клеток (Chang С.Р., Yang М.С., Liu H.S., Lin Y.S., Lei H.Y. Concanavalin A induces autophagy in hepatoma cells and has a therapeutic effect in a murine in situ hepatoma model // Hepatology. - 2007. - Vol. 45. - №2. - P. 286-296; Shi Z., Chen J., Li C.Y., An N., Wang Z.J., Yang S.L., Huang K.F., Bao J.K. Antitumor effects of concanavalin A and Sophora flavescens lectin in vitro and in vivo // Acta Pharmacol. Sin.- 2014. - Vol. - №. - P. - 248-256).

Какие-либо данные о влиянии ConA на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы не известны.

Липополисахариды (LPS) являются характерными компонентами клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Липополисахарид, полученный из Escherichia coli, используют для стимуляции клеток иммунной системы, чаще всего для стимуляции клеток макрофагальной системы - моноцитов и макрофагов (Fang Н., Pengal R., Cao X., Ganesan L., Wewers М., Marsh С, Tridandapani S. Lipopolysaccharide-induced macrophage inflammatory response is regulated by SHIP // J. Immunol. - 2004. - Vol. 173. - №1. - P. 360-366.). На моделях in vitro и экспериментальных животных показано, что LPS способны индуцировать некробиоз и апоптоз опухолевых клеток (Fried S., Tosun S., Troost G., Keil S., Zaenker K., Dittmar T. Lipopolysaccharide (LPS) promotes apoptosis in human breast epithelial breast cancer hybrids, but not in parental cells // PLOS ONE. - 2016. - DOI: 10.1371).

Какие-либо сведения о влиянии LPS из Escherichia coli на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы не найдены.

Показано, что смесь ФГА (РНА-Р и РНА-М), конканавалина А (ConA) и липополисахарида (LPS) из Escherichia coli обладает свойством поликлонального активатора и способна стимулировать in vitro продукцию различных цитокинов (IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1β, IL-1Ra, TNF-α, IFN-γ, G-CSF, GM-CSF, VEGF-A) иммунокомпетентными клетками крови, а также клетками культуры ткани опухоли молочной железы. Однако точная идентификации клеток-продуцентов тех или иных цитокинов (клетками опухоли или ее микроокружения, в том числе иммунокомпетентными клетками, инфильтрирующими ткань опухоли) не была проведена (Архипов С.А., Михайлова Е.С., Кунц Т.А., Карпухина К.В., Могильная Е.Д., Соловьев К.А., Вараксин Н.А., Аутеншлюс А.И. Цитокинпродуцирующий резерв иммунокомпетентных клеток крови и инвазивного протокового рака молочной железы, его взаимосвязь с патогистологическими и иммуногистохимическими параметрами злокачественного новообразования // Медицинская иммунология.- 2016. -Т.18. - №5. - С. 459-468; Кунц Т.А., Карпухина К.В., Михайлова Е.С., Маринкин И.О., Вараксин Н.А., Аутеншлюс А.И., Ляхович В.В. Влияние поликлональных активаторов на продукцию цитокинов клетками крови и злокачественных новообразований молочной железы // Доклады Академии наук. - 2016. - Т. 466. - №1. - С. 117-119.).

Исследование влияния смеси ФГА (РНА-Р и РНА-М), конканавалина А (ConA) и LPS (любого происхождения) на дифференцировку клеток солидных опухолей не проводилось. Поэтому способность данной смеси стимулировать дифференцировку опухолевых клеток молочной железы и повышать в ней количество высокодифференцированных клеток не известна из уровня техники и для специалиста явным образом из него не следует.

Раскрытие изобретения

Задачей заявляемого изобретения является создание композиции (средства) для повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток в аденокарциноме молочной железы.

Заявляемая композиция для повышения содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы содержит: фитогемагглютинин Р (РНА-Р), фитогемагглютинин М (РНА-М), конканавалин А (ConA), липополисахарид (LPS, Lipopolysaccharide from Escherichia coli) в эффективной концентрации в соотношении (мас. ч.) 1/1/2/1 соответственно.

В качестве эффективной концентрации может быть использована, в частности, следующая: фитогемагглютинин Р - 1,6-2,4 мкг/мл, фитогемагглютинин М - 1,6-2,4 мкг/мл, конканавалин А - 3,2-4,8 мкг/мл, липополисахарид (Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 1,6-2,4 мкг/мл.

Технические результаты изобретения заключаются в следующем:

- реализации назначения;

- более вероятной эффективности in vivo предлагаемой композиции по сравнению с описанными выше аналогами. В аналогах показано действие композиций на культуру опухолевых клеток. В описываемых ниже экспериментах с предлагаемой композиций показано ее действие на биоптат опухоли молочной железы, где клетки ткани опухоли более гетерогенны, защищены фиброзной капсулой и находятся среди клеток микроокружения, способных понизить или почти полностью ингибировать все эффекты стимуляции дифференцировки опухолевых клеток, выявляемые в культурах опухолевых клеток молочной железы. При этом в наших экспериментах в тех биоптатах аденокарциномы молочной железы, где количество высокодифференцированных опухолевых клеток возрастает, оно в среднем возрастает на 75,0%;

- более высоких показателях эффективности предлагаемой композиции по сравнению с наиболее близким аналогом. Если содержание высокодифференцированных клеток в аналоге возросло до 48% и более для линии клеток AU-565 через 96 часов культивирования, то предлагаемая композиция повышала содержание высокодифференцированных опухолевых клеток в среднем на 75% через 72 часа культивирования.

Воздействие смеси МРА, РМА и ретиноевой кислоты RA на другую линию опухолевых клеток (MCF-7) приводило через 4 дня к менее значительному увеличению процента клеток, имеющих более зрелый фенотип, чем при культивировании линии AU-565.

Это означает, что показатель эффективности смеси МРА, РМА и ретиноевой кислоты RA по результатам анализа ее влияния на дифференцировку опухолевых клеток линии MCF-7 и линии AU-565 в среднем был значительно меньше полученного в наших экспериментах величины (75%).

Доказательная база

В качестве объекта для оценки влияния заявляемой композиции на повышение содержания высокодифференцированных опухолевых клеток в аденокарциноме молочной железы служили биоптаты опухолей молочной железы 32-х женщин в возрасте от 43 до 75 лет с инвазивным протоковым раком, являющимся по гистологическому типу аденокарциномой II и III степени злокачественности.

Биоптаты аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм³, полученные методом витальной трепанобиопсии, помещали в два стеклянных флакона.

Флакон №1 (тест-контроль) содержал: 1 мл стерильной питательной среды DMEM/F12, Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл), L-глютамин (0,6 мг/мл) и биоптат аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм³.

Флакон №2 (тест на стимуляцию дифференцировки опухолевых клеток предлагаемой композицией) содержал: 1 мл стерильной питательной среды DMEM/F12, Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл), L-глютамин (0,6 мг/мл) и биоптат аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм³ а также заявляемую композицию: фитогемагглютинин Р (РНА-Р) - 1,6-2,4 мкг/мл (0,16-0,24 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы), фитогемагглютинин М (РНА-М) - 1,6-2,4 мкг/мл (0,16-0,24 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы), конканавалин А (ConA) - 3,2-4,8 мкг/мл (0,32-0,48 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы), липополисахарид (LPS, Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 1,6-2,4 мкг/мл (0,16-0,24 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы).

После инкубирования при 37°С в течение 72 ч биоптаты аденокарцином молочной железы извлекали из флаконов и фиксировали в растворе 10% нейтрального формалина для дальнейшего патогистологического исследования.

Патогистологическое исследование проводилось на препаратах аденокарциномы молочной железы, окрашенных по стандартной методике гематоксилином и эозином.

В опухолевой ткани подсчитывали относительное содержание (%) клеток различной степени дифференцировки: высокодифференцированных (ВД), умереннодифференцированных (УД) и низкодифференцированных (НД). Для этого с помощью морфометрической сетки с 121 рабочими точками-узлами, вставленной в окуляр микроскопа, при увеличении 20×1,5×10=300х определяли количество точек, попавших на высоко-, умеренно- и низкодифференцированные опухолевые клетки. В каждом препарате подсчитывали клетки в 10 полях зрения и для каждой категории клеток подсчитывали среднее арифметическое значение, выраженное в процентах (Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия - М.: Медицина, 1990. - 381 с.).

При оценке принадлежности опухолевых клеток к ВД, УД или НД элементам учитывали степень выраженности клеточного полиморфизма, ядерно-цитоплазматичсское соотношение, наличие митозов, в том числе патологических, способность к структурообразованию (формированию желез), сохранение функций клеток (слизеобразование). ВД клетки характеризовались приближенной к нормальным клеткам формой, преобладанием цитоплазмы над ядром, способностью строить железы и продуцировать слизь. НД клетки характеризовались неправильной формой, выраженным полиморфизмом, преобладанием ядра над цитоплазмой, отсутствием способности к формированию структур, диффузным ростом, наличием большого количества митозов, в том числе и патологических. УД клетки занимали промежуточное положение между ВД и НД клетками по выраженности вышеуказанных признаков.

Индекс повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптатах молочной железы для каждого пациента вычисляли по формуле: ИПВД=(ВД:НД)_С/(ВД:НД)_БС, где (ВД:НД)_С - отношение среднего значения (по 10 полям зрения) доли высокодифференцированных клеток (%) к среднему значению доли низкодифференцированных клеток (%) в биоптате аденокарциномы молочной железы после стимуляции заявленной композицией, (ВД:НД)_БС - отношение среднего значения доли высокодифференцированных клеток (%) к среднему значению доли низкодифференцированных клеток (%) в биоптате аденокарциномы молочной железы без стимуляции заявленной композицией.

Определение ИПВД в биоптатах аденокарцином молочной железы показало, что ИПВД, равный 1,1 и более (вариабельность 1,1-5,0) отмечался у 18 человек из 32, что составляет 56,25%. В среднем количество высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах аденокарциномы молочной железы у данных больных после инкубации в среде, содержащей композицию, возрастает на 75%.

В группе пациентов с показателем ИПВД 1,1 и более различия между количеством высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах, не подвергавшихся воздействию предлагаемой композицией, и количеством высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах, подвергшихся воздействию предлагаемой композицией, оказались статистически значимыми (р=0,0009) при оценке с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.

Сущность изобретения поясняется примерами.

1. Больная Ш-ва, 75 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы. ИПВД=5,00. После инкубации биоптата аденокарциномы молочной железы в течение 3 сут в среде, содержащей композицию, содержание высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы возросло в 5 раз.

2. Больная К-на, 58 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы. ИПВД=1,27. После инкубации биоптата аденокарциномы молочной железы в течение 3 сут в среде, содержащей композицию, содержание высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы возросло в 1,27 раза.

3. Больная Б-ва, 72 года, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы. ИПВД=2,08. После инкубации биоптата аденокарциномы молочной железы в течение 3 сут в среде, содержащей композицию, содержание высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы возросло в 2,08 раза.