09.05.2019
219.017.50b3

ЖИДКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ ВЫСОКОАКТИВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ ШТАММОМ BACILLUS PUMILUS "ПАШКОВ", ОБЛАДАЮЩИХ ИНГИБИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ, ГРИБОВ И ВИРУСОВ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения высокоактивных метаболитов, обладающих бактерицидным действием в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий, фунгистатическим действием в отношении дрожжевых грибов и противовирусным действием в отношении энтеровирусов. Питательная среда содержит железо (II) сернокислое 7-водное, магний сернокислый 7-водный, хлористый марганец, кальций хлористый, калий фосфорно-кислый однозамещенный 3-водный, цитрат аммония, триптон, дрожжевой экстракт, лактозу, глицерин и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет культивировать штамм Bacillus pumilus "Пашков" продуцент высокоактивных метаболитов, обладающих бактерицидным действием в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий, фунгистатическим действием в отношении дрожжевых грибов и противовирусным действием в отношении энтеровирусов. 5 табл., 4 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области микробиологии, в частности к питательным средам для получения высокоактивных метаболитов, обладающих бактерицидным действием в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий, фунгистатическим действием в отношении дрожжевых грибов и противовирусным действием в отношении энтеровирусов.

Известна синтетическая питательная среда №9, используемая в производстве споровых пробиотиков, содержащая железо (II) сернокислое 7-водное; магний сернокислый 7-водный; хлористый марганец; кальций хлористый; пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 5,0; глюкоза - 10,0; дрожжевой экстракт - 3,0 (ФСП 4205042435-05).

К недостаткам данной питательной среды следует отнести недостаточное влияние на выработку БАВ В.pumilus «Пашков», обладающих ингибирующими свойствами в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий.

Известна синтетическая питательная среда №5, так же применяемая при производстве споровых пробиотиков, содержащая калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный; аммоний сернокислый двузамещенный; натрий лимоннокислый 5,5-водный; медь сернокислая 5-водная - 0,005; цинк сернокислый 7-водный; железо (II) сернокислое 7-водное; кальций хлористый; марганец (II) сернокислый 5-водный; магний сернокислый 7-водный; пептон сухой ферментативный для бактериологических целей (ФСП 4205042435-05).

К недостаткам данной питательной среды следует отнести слабое влияние на выработку БАВ В.pumilus «Пашков», обладающих ингибирующими свойствами в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является разработка новой жидкой питательной среды для культивирования штамма Bacillus pumilus «Пашков» с целью получения высокоактивных метаболитов, обладающих бактерицидным действием, а также ингибирующих другие микробы.

Для решения указанной задачи разработана питательная среда для выращивания штамма Bacillus pumilus «Пашков», содержащая при рН 7,3±0,2 железо (II) сернокислое 7-водное, магний сернокислый 7-водный, хлористый марганец, кальций хлористый, калий фосфорно-кислый однозамещенный 3-водный (K2HPO4·3H2O), цитрат аммония (NH4OOCC(OH)(CH2COOH)2), триптон, дрожжевой экстракт, лактозу и глицерин при следующем содержании указанных компонентов на 1 литр дистиллированной воды:

железо (II) сернокислое 7-водное - 0,01 г

магний сернокислый 7-водный - 0,1 г

хлористый марганец - 0,01 г

кальций хлористый - 0,08 г

калий фосфорно-кислый однозамещенный 3-водный - 0,3 г

цитрат аммония - 2,0 г

триптон - 5 г

дрожжевой экстракт - 7,0 г

лактоза - 10 г

глицерин - 40 мл.

Питательную среду готовят следующим образом.

Пример 1. Для приготовления заявленной жидкой питательной среды берут 1 литр дистиллированной воды. Последовательно вносят соли: железо (II) сернокислое 7-водное - 0,01 г; магний сернокислый 7-водный - 0,1 г; хлористый марганец - 0,01 г; кальций хлористый - 0,08 г; калий фосфорнокислый однозамещенный 3-водный (K2HPO4·3H2O) - 0,3 г; цитрат аммония (NH4OOCC(OH)(CH2COOH)2) - 2,0 г/л. Каждую соль размешивают до полного растворения. Затем добавляют триптон - 5 г/л, лактозу 10 г/л, дрожжевой экстракт - 7 г/л и глицерин - 40 мл. Доводят рН среды до 7,3±0,2. После приготовления среду стерилизуют при 1 атм (121°С) 20 мин.

Готовая жидкая среда темно-желтого цвета, не содержит посторонних включений, рН среды до 7,3±0,2.

Пример 2. Влияние новой жидкой питательной среды на выработку БАВ, обладающих ингибирующими свойствами в отношении бактерий и дрожжевых грибов.

Штамм В.pumilus «Пашков» выращивали методом периодического культивирования в течение 72 часов. О наличии биологически-активных веществ (БАВ) в культуральной жидкости В.pumilus «Пашков» судили по их влиянию на кинетику роста тест-культур с помощью микробиологического анализатора с планшетным фотометром «BIOSCREEN/iEMS-reader MF» (фирма «LabMetod», Финляндия). Задержка вступления тест-штаммов или дрожжевых грибов в стадию экспоненциального роста свидетельствовала о бактериостатическом (фунгистатическом) эффекте БАВ, а отсутствие роста более 18 часов оценивалось как бактерицидный (фунгицидный) эффект (табл.1, 2, 3).

Таблица 1
Показатели ингибирующего эффекта БАВ, синтезируемых при культивировании В.pumilus «Пашков» в отношении тест-штаммов условно-патогенных и патогенных бактерий
Тест-штаммы Бактериостатический эффект (%)
S.aureus «Никифоров» 100
S.aureus «Филиппов» 100
S.xylosus 25 100
S.flexneri 337 100
S.sonnei 170 100
E.coli O157:H55 100
P.aeruginosa 9022 100
P.mirabilis 24a 100
P.vulgaris 177 100
* - задержка роста более 18 часов (бактерицидныйэффект).

Таблица 2
Характеристика ингибирующего эффекта БАВ, синтезируемых при культивировании В. pumilus «Пашков» в отношении бактерий Pseudomonas aeruginosa
Название штамма БСЭ (%) Название штамма БСЭ (%)
1 170001 100* 22 170022 100*
2 170002 100* 23 170023 100*
3 170003 100* 24 170025 (Habs1) 100*
4 170004 100* 25 170026 (Habs2) 100*
5 170005 100* 26 170027 (Habs3) 100*
6 170006 100* 27 170028 (Habs4) 100*
7 170007 100* 28 170029 (Habs5) 100*
8 170008 100* 29 170030 (Habs6) 100*
9 170009 100* 30 170031 (Habs7) 100*
10 170010 100* 31 170032 (Habs8) 100*
11 170011 100* 32 170033 (Habs9) 100*
12 170012 100* 33 170034 (Habs10) 100*
13 170013 100* 34 170035 (Habs1) 100*
14 170014 100* 35 170036 (Habs12) 100*
15 170015 100* 36 170041 (Fisher1) 100*
16 170016 100* 37 170042 (Fisher2) 100*
17 170017 100* 38 170043 (Fisher3) 100*
18 170018 100* 39 170044 (Fisher4) 100*
19 170019 100* 40 170045 (Fisher5) 100*
20 170020 100* 41 170046 (Fisher6) 100*
21 170021 100* 42 170047 (Fisher7) 100*
* - задержка роста более 18 часов (бактерицидный эффект)

Таблица 3
Показатели активности БАВ, выделяемых при культивировании штамма В. pumilus «Пашков» в отношении клинических штаммов дрожжевых грибов
Название штамма дрожжевых грибов Задержка роста грибов (фунгистатический эффект %)
C.albicans (№1) 94,6±8,4
C.albicans (№2) 92,2±7,4
C.haemuloni 91,7±6,6
C.tropicalis 89,5±8,1
Rhodotomla spp. 88,4±9,2
Debaryomyces hansenii 92,6±8,6

Таблицы 1, 2, 3 показывают, что БАВ, выделяемые при культивировании штамма В.pumilus «Пашков» на разработанной питательной среде, обладают бактерицидным действием в отношении 9 тест-штаммов бактерий, 42 клинических штаммов Р.aeruginosa и выраженным фунгистатическим эффектом в отношении 6 клинических штаммов дрожжевых грибов.

Пример 3. Влияние новой жидкой питательной среды на выработку БАВ, обладающих ингибирующими свойствами в отношении энтеровирусов.

Противовирусную активность культуральной жидкости определяли по лечебной и профилактической схемам воздействия в отношении вирусов полиомиелита I типа, ECHO 3, ECHO 6 и Коксаки В.

Лечебная схема.

На монослой клеток, выращенных в 24-луночных планшетах, после удаления ростовой среды и однократного промывания ФСБ вносили различные дозы энтеровирусов - от 100 ТЦД50/0,5 мл до 12,5 ТЦД50/0,5 мл с последующей инкубацией в термостате с 5% СO2 при 37°С в течение часа. После удаления неадсорбировавшегося вируса монослой клеток дважды промывали ФСБ и вносили различные разведения КЖ В.pumilus «Пашков» от неразведенной до 1:640 в поддерживающей среде. Учет результатов проводили через 48 и 72 часа инкубации.

Профилактическая схема.

На монослой клеток, выращенных в 24-луночных планшетах, после удаления ростовой среды и однократного промывания ФСБ вносили различные разведения КЖ В.pumilus «Пашков» от неразведенной до 1:640 в поддерживающей среде с последующей инкубацией в термостате с 5% СO2 при 37°С в течение 24 часов. Затем КЖ удаляли, вносили различные дозы вируса от 100 ТЦД50/0,5 мл до 12,5 ТЦД50/0,5 мл и помещали в инкубатор на 1 ч при 37°С. Затем клетки дважды промывали ФСБ, вносили поддерживающую среду и продолжали инкубировать в течение 72 часов.

Противовирусную активность в обеих схемах оценивали по цитопатогенному действию вируса (ЦПД). Разведение КЖ, вызывающее ингибирование вирусного ЦПД на 50% по отношению к контролю, принимали за ингибирующую дозу (ИД50) (табл.4, 5).

Таблица 4
Эффективность лечебного действия КЖ штамма B. pumilus «Пашков» в отношении энтеровирусов в зависимости от разведения препарата и дозы вирусов в опытах in vitro
Вирусы Время наблюдения (час) Разведение препарата, обеспечивающее 100% защитный эффект
Доза вируса в log ТЦД50/0,5 мл
100 50 25 12,5
Polio-1 48 1:80 1:160 1:640 1:640
72 1:80 1:80 1:640 1:640
ЕСНО 3 48 1:40 1:40 1:640 1:640
72 1:40 1:40 1:160 1:320
ECHO 6 48 1:40 1:640 1:640 1:640
72 1:40 1:160 1:160 1:640
Сох В (1-6) 48 1:80 1:80 1:40 1:40
72 1:80 1:80 1:40 1:40

Из результатов, представленных в табл.4, следует, что лечебный эффект КЖ B.pumilus «Пашков» в отношении вируса полиомиелита типа I четко зависит от дозы вируса. При дозах вируса 12,5-25,0 lg ТЦД50/0,5 мл 100% защита инфицированных клеток после обработки КЖ проявлялась при максимально исследованном разведении 1:640 и сохранялась в течение 72 ч. При заражении культуры клеток высокими дозами вируса 50-100 ТЦД50/0,5 мл полная защита клеток наступала при обработке КЖ в разведениях 1:160-1:80 соответственно, а частичная защита сохранялась при разведениях препарата 1:320-1:160 соответственно в течение 48 часов наблюдения.

Полученные результаты свидетельствуют, что наиболее эффективное лечебное действие КЖ проявлялось в отношении вируса полиомиелита I типа и ECHO 6 и менее в отношении вируса Коксаки В (1-6).

Таблица 5
Эффективность профилактического действия КЖ в отношении энтеровирусов в зависимости от разведения препарата и дозы вирусов в опытах in vitro
Вирусы Время учета (час) Разведение препарата, обеспечивающее 100% профилактический эффект
Доза вируса в log ТЦД50/0,5 мл
100 50 25 12,5
Polio-1 48 1:40 1:160 1:160 1:640
72 1:40 1:160 1:160 1:640
ЕСНО 3 48 0 1:160 1:640 1:640
72 0 1:160 1:640 1:640
ECHO 6 48 0 1:20 1:640 1:640
72 0 1:20 1:640 1:640
Сох В (1-6) 48 0 1:20 1:640 1:640
72 0 1:20 1:320 1:640

Результаты, представленные в табл.5, показывают профилактический эффект КЖ В.pumilus «Пашков», зависящий от дозы вируса, концентрации препарата, вида вируса и наиболее выраженный в отношении вируса полиомиелита I типа.

Пример 4. Исходные данные состава среды (г/л) рН 7,3±0,2: железо (II) сернокислое 7-водное - 0,01 г/л; магний сернокислый 7-водный - 0,1 г/л; хлористый марганец - 0,01 г/л; кальций хлористый - 0,08 г/л; калий фосфорно-кислый однозамещенный 3-водный (K2HPO4·3H2O) - 0,3 г/л; цитрат аммония (NH4OOCC(OH)(CH2COOH)2) - 2,0 г/л; триптон - 5 г/л; дрожжевой экстракт - 7,0 г/л; лактоза - 10 г/л; глицерин - 40 мл/л.

Питательная среда для выращивания штамма Bacillus pumilus «Пашков», содержащая при рН 7,3±0,2 железо (II) сернокислое 7-водное, магний сернокислый 7-водный, хлористый марганец, кальций хлористый, калий фосфорнокислый однозамещенный 3-водный, цитрат аммония, триптон, дрожжевой экстракт, лактозу и глицерин при следующем содержании указанных компонентов на 1 литр дистиллированной воды:
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-3 из 3.
27.12.2014
№216.013.15ce

Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprfi, кодирующая гибридный рекомбинантный белок f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprfi-продуцент гибридного рекомбинантного белка f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa и способ получения гибридного рекомбинантного белка f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pPA-OPRFI, кодирующей гибридный рекомбинантный белок F-I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, штамма бактерий E.coli PA-OPRFI, продуцента такого гибридного белка и способа получения указанного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537006
Дата охранного документа: 27.12.2014
09.05.2019
№219.017.5026

Способ выявления кишечных вирусов в воде

Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии, и может быть использовано для выявления кишечных вирусов из воды. Для этого концентрирование кишечных вирусов осуществляют путем внесения в исследуемый образец воды сорбента на основе магнитных микрочастиц, покрытых полимером...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002444011
Дата охранного документа: 27.02.2012
18.05.2019
№219.017.5a2b

Свежевыделенный штамм бактерий bordetella pertussis - продуцент коклюшного токсина

Сущность изобретения: получен новый свежевыделенный от больного штамм бактерий Bordetella pertussis №162-01, который депонирован в ФГУН ГНИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под номером №287. Штамм адаптирован к синтетической среде...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002407788
Дата охранного документа: 27.12.2010
Показаны записи 1-10 из 12.
20.09.2013
№216.012.6bd6

Способ получения адъюванта

Изобретение относится к области микробиологии. Способ предусматривает культивирование гриба вида Fusarium sambucinum на питательной среде, содержащей источник углерода 3-4%, азота 0,2-0,3%, фосфора 0,2-0,3% и микроэлементы 0,07-0,08%, в стерильных условиях при температуре 26-30°С с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493257
Дата охранного документа: 20.09.2013
27.05.2014
№216.012.c8f2

Способ определения к-антигена streptococcus pneumoniae для серологической диагностики циркулирующих штаммов пневмококков на территории российской федерации

Изобретение относится к медицине и касается способа определения К-антигена Streptococcus pneumoniae для серологической диагностики циркулирующих штаммов пневмококков путем постановки реакции агглютинации на стекле с использованием определенного набора диагностических агглютинирующих...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517208
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.08.2014
№216.012.e9cd

Способ получения высокотитражной антимикробной сыворотки для оценки антигенной активности противостафилококковых вакцин

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения высокотитражной антимикробной сыворотки. Способ включает использование штамма S.aureus №1991, характеризующийся иммуногенностью ED=(50-100)×10 микробных клеток, слабой вирулентностью LD=(0,5-2,0)×10 микробных клеток. Его...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525661
Дата охранного документа: 20.08.2014
27.09.2014
№216.012.f822

Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprf-eta, кодирующая синтез рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprf-eta - продуцент рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa и способ получения рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa

Группа изобретений относится к биотехнологии. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPA-OPRF-ETA размером 8007 пар оснований кодирует синтез рекомбинантного белка OprF-ETA Pseudomonas aeruginosa. Плазмида содержит следующие фрагменты: Xba I-Hind III фрагмент ДНК размером 177 пар оснований; Hind...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529359
Дата охранного документа: 27.09.2014
27.12.2014
№216.013.15ce

Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprfi, кодирующая гибридный рекомбинантный белок f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprfi-продуцент гибридного рекомбинантного белка f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa и способ получения гибридного рекомбинантного белка f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pPA-OPRFI, кодирующей гибридный рекомбинантный белок F-I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, штамма бактерий E.coli PA-OPRFI, продуцента такого гибридного белка и способа получения указанного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537006
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.02.2015
№216.013.2e4f

Иммуноферментная тест-система для количественного определения микополисахаридов и их производных в пыли окружающей среды

Изобретение относится к области биотехнологии и экологии, в частности к тест-системам для определения содержания микополисахаридов и их производных, имеющих в своем составе участки, аналогичные синтетическому линейному нона-β-(1→3)-D-глюкозиду в окружающей среде, в том числе в пыли помещений,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002543323
Дата охранного документа: 27.02.2015
13.01.2017
№217.015.7f1f

Штаммы вида streptococcus pneumoniae (варианты) и способ получения из них протективной белоксодержащей фракции, обладающей внутривидовой иммуногенной активностью

Заявленная группа изобретений относится к области иммунологии. Штаммы вида Streptococcus pneumoniae депонированы в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России под...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601158
Дата охранного документа: 27.10.2016
22.01.2019
№219.016.b26d

Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprf-atox-opri, кодирующая синтез гибридного рекомбинантного белка, включающего аминокислотные последовательности белков f и i наружной мембраны и атоксического варианта экзотоксина a pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprf-atox-opri - продуцент гибридного рекомбинантного белка и способ получения указанного белка

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pPA-OPRF-ATOX-OPRI, которая содержит слитые гены, кодирующие белки F и I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, а также атоксический вариант экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa. Их экспрессия находится...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677790
Дата охранного документа: 21.01.2019
27.04.2019
№219.017.3d8f

Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии и предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови. Способ определения общей противомикробной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002686337
Дата охранного документа: 25.04.2019
09.06.2019
№219.017.7e68

Штамм бактерий bacillus pumilus "пашков" - продуцент биологически активных веществ, обладающих антагонистической активностью в отношении условно-патогенных, патогенных бактерий, дрожжевых грибов и вирусов

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения пробиотического препарата, оказывающего антагонистическое влияние на условно-патогенные и патогенные бактерии и дрожжевые грибы, а также выраженную противовирусную активность в отношении энтеровирусов. Штамм бактерий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002405821
Дата охранного документа: 10.12.2010

Похожие РИД в системе