×
18.05.2019
219.017.5a2b

СВЕЖЕВЫДЕЛЕННЫЙ ШТАММ БАКТЕРИЙ BORDETELLA PERTUSSIS - ПРОДУЦЕНТ КОКЛЮШНОГО ТОКСИНА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Сущность изобретения: получен новый свежевыделенный от больного штамм бактерий Bordetella pertussis №162-01, который депонирован в ФГУН ГНИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под номером №287. Штамм адаптирован к синтетической среде культивирования вакцинных штаммов. Изучены его культурально-морфологические свойства, молекулярно-генетическая характеристика и продуцирующая способность. Испытания показали, что штамм по изобретению обладает высокопродуктивными качествами и может быть использован для производства коклюшных вакцин и диагностических препаратов. 1 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области медицины, а именно - медицинской микробиологии и может быть использовано для получения коклюшных вакцин и диагностических коклюшных препаратов.

Известен штамм бактерий B.pertussis ГИСК №203 - продуцент коклюшного токсина, используемый в производстве коклюшных вакцин для получения очищенных антигенных комплексов и коклюшного токсина (SU 1761795 А1, C12N 1/20, А61К 39/10, 1992 г.).

Недостатком известного штамма является невысокая токсигенная активность.

Проблема получения высокоэффективных коклюшных вакцин остается актуальной, поскольку широкая иммунизация населения против коклюшной инфекции привела к адаптации коклюшных микробов к новым условиям и к изменениям в генетическом аппарате у циркулирующих среди населения штаммов B.pertussis. Эти изменения повлияли на эффективность вакцинных препаратов, применяемых для профилактики коклюша.

Задачей изобретения является получение нового высокопродуктивного свежевыделенного токсигенного штамма Bordetella pertussis, который может быть использован для производства коклюшных вакцин и диагностических препаратов.

Для решения указанной задачи предлагается свежевыделенный штамм бактерий Bordetella pertussis ГИСК им. Л.А.Тарасевича №287 - продуцент коклюшного токсина.

Сущность изобретения состоит в том, что для получения коклюшного токсина, применяемого для производства коклюшной вакцины и диагностических препаратов, используют новый свежевыделенный штамм Bordetella pertussis, депонированный в ФГУН ГНИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под номером №287 - продуцент коклюшного токсина. Штамм культивируют в жидкой синтетической питательной среде с добавлением анионообменной смолы в статических условиях в течение 72-120 часов при температуре (36±1)°С. Концентрация бактерий в конце культивирования составляет 50±5 МОЕ/мл, лейкоцитозстимулирующая активность супернатанта - 15,0±2,0 лейкоцитозстимулирующих единиц (ЛСЕд) в 0,1 мл, количество коклюшного токсина, определенного иммуноферментным методом, составляло - 68,4±12,2 нг/МОЕ.

Молекулярно-генетические исследования вакцинных и свежевыделенных штаммов B.pertussis показали, что ген субъединицы А коклюшного токсина, ptxA, вакцинных штаммов характеризуется аллельным вариантом ptxA2 (AJ245367) - штаммы 267, 305, или вариантом ptxA4 (AJ245368) - штаммы 475 и 203, в то время как свежевыделенные штаммы несут аллель ptxA1 (AJ245366).

Все это свидетельствует о необходимости использования свежевыделенных штаммов для изготовления коклюшных профилактических и диагностических препаратов.

Получение новых свежевыделенных штаммов B.pertussis, обладающих повышенной токсигенной активностью, для производства коклюшной вакцины, является одним из важных условий совершенствования этих препаратов.

Свежевыделенный токсигенный штамм B.pertussis, полученный от больного ребенка в г.Москве в 2001 г., был адаптирован к синтетической среде культивирования вакцинных штаммов.

Штамм имеет следующие характеристики.

Морфологические и культуральные свойства. Грамотрицательные коккобактерии - типичные, овоидной формы мелкие палочки, в мазках располагаются отдельно или парами; на среде Борде-Жангу с добавлением 20-25% дефибринированной крови человека колонии мелкие, диаметром 0,5-1,0 мм, выпуклые, круглые, края ровные, блестящие (с характерным «жемчужным» блеском), полупрозрачные, сероватого цвета, в тонком (1,5-2 мм) слое среды окружены нерезко ограниченной зоной гемолиза. Культура агглютинируется адсорбированными типоспецифическими сыворотками к агглютиногенам 1 и 3 до 1:1600 и 1:800 соответственно.

Молекулярно-генетическая характеристика штамма. Ген субъединицы А коклюшного токсина характеризуется как аллельный вариант ptxA1 (AJ 245366).

Пример. Для культивирования Bordetella pertussis используют жидкую синтетическую среду, содержащую аминокислоты (цистеин, глутаминовая кислота, пролин), соли (K2HPO4, KH2PO4, KCl, MgSO4, CaCl2, NaCl) и витамины (аскорбиновая и никотиновая кислоты).

Лиофилизированный штамм №287 восстанавливают из сухого состояния на чашках Петри со средой Борде-Жангу с 20-25% крови человека. Чашки инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 48-72 часов. Проверяют морфологию и чистоту культуры путем микроскопирования мазков, окрашенных по Граму. Затем с чашки делают пересев 10-15 типичных колоний на пробирки со средой Борде-Жангу или с казеиново-угольным агаром и инкубируют в течение 48-72 часов. После 2-3 пассажей на плотных средах смывы культуры используют в качестве посевного материала для выращивания штамма в жидкой синтетической среде. Первый пассаж в жидкой среде проводят в колбах Эрленмейера (100 мл среды + анионообменная смола) на шуттель-аппарате при температуре (36±1)°С в течение 16-18 часов. После проверки морфологических свойств культуру B.pertussis из колб пересевают в матрацы с жидкой синтетической средой, в которую добавлена анионообменная смола. Выращивание ведут в статических условиях в течение 72-120 часов при температуре (36±1)°С.

В конце культивирования концентрация бактерий составляет 50±5 Международных оптических единиц (МОЕ), лейкоцитозстимулирующая активность супернатанта - (15,0±2,0) ЛСЕд. в 0,1 мл, количество коклюшного токсина при определении иммуноферментным методом - (68,4±12,2) нг/МОЕ.

При сравнительном изучении токсигенных свойств предлагаемого и известного штаммов B.pertussis было показано, что предлагаемый штамм обладал более высокой токсигенной активностью (табл.1), чем известный штамм.

Результаты показали, что лейкоцитозстимулирующая активность штамма двукратно превышала таковую известного штамма, а количество коклюшного токсина, продуцируемого заявляемым штаммом, пятикратно превышало таковой известного штамма. Различия статистически достоверны. Это свидетельствует о высокой продуктивности свежевыделенного токсигенного штамма B.pertussis в сравнении с известным вакцинным штаммом.

Из заявленного штамма была получена коклюшная вакцина, обладающая выраженной протективной активностью: в 1 мл (20 МОЕ/мл) содержалось 10,8 международных защитных единиц (МЗЕ).

Таким образом, получен новый свежевыделенный токсигенный штамм Bordetella pertussis, депонированный в ФГУН ГНИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под номером №287, обладающий высокопродуктивными качествами, который может быть использован для производства коклюшных вакцин и диагностических препаратов.

Табл. 1
Токсигенная активность штаммов B.pertussis
№№ штаммов Лейкоцитозстимулирующая активность (ЛСЕд/0,1 мл) Кол-во коклюшного токсина нг/МОЕ
Кол-во опытов М±m Достоверность Кол-во опытов М±m Достоверность
203 10 7,6±2,3 (Р<0,001) 10 14,6±3,1 (Р<0,001)
287 18 15,0±2,0 18 68,4±12,2

Свежевыделенный штамм бактерий Bordetella pertussis ГИСК им. Л.А.Тарасевича №287 - продуцент коклюшного токсина.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-3 из 3.
27.12.2014
№216.013.15ce

Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprfi, кодирующая гибридный рекомбинантный белок f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprfi-продуцент гибридного рекомбинантного белка f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa и способ получения гибридного рекомбинантного белка f-i наружной мембраны pseudomonas aeruginosa

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pPA-OPRFI, кодирующей гибридный рекомбинантный белок F-I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, штамма бактерий E.coli PA-OPRFI, продуцента такого гибридного белка и способа получения указанного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537006
Дата охранного документа: 27.12.2014
09.05.2019
№219.017.5026

Способ выявления кишечных вирусов в воде

Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии, и может быть использовано для выявления кишечных вирусов из воды. Для этого концентрирование кишечных вирусов осуществляют путем внесения в исследуемый образец воды сорбента на основе магнитных микрочастиц, покрытых полимером...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002444011
Дата охранного документа: 27.02.2012
09.05.2019
№219.017.50b3

Жидкая питательная среда для накопления высокоактивных метаболитов штаммом bacillus pumilus "пашков", обладающих ингибирующим действием в отношении бактерий, грибов и вирусов

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения высокоактивных метаболитов, обладающих бактерицидным действием в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий, фунгистатическим действием в отношении дрожжевых грибов и противовирусным действием в отношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002460773
Дата охранного документа: 10.09.2012
Показаны записи 1-10 из 19.
10.10.2013
№216.012.7323

Способ молекулярно-генетического типирования штаммов bordetella pertussis

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу молекулярно-генетического типирования штаммов Bordetella pertussis. Способ включает выделение ДНК из штаммов B.pertussis, проведение полимеразной цепной реакции с одновременным введением специфических праймеров PF-PR...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495132
Дата охранного документа: 10.10.2013
27.04.2014
№216.012.bc90

Способ серологической оценки токсичности анатоксина bordetella pertussis

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для серологической оценки токсичности анатоксина Bordetella pertussis. Сущность способа заключается в том, что в лунки 96-луночных полистироловых планшетов с иммобилизированной гамма-глобулиновой фракцией кроличьих антисывороток к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002514011
Дата охранного документа: 27.04.2014
10.02.2015
№216.013.21f3

Способ получения анатоксина bordetella pertussis

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения бесклеточной коклюшной вакцины. Способ включает культивирование коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделение супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002540144
Дата охранного документа: 10.02.2015
20.02.2015
№216.013.2abb

Способ и набор для ускоренной лабораторной диагностики коклюшной инфекции

Группа изобретений относится к области медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике возбудителей инфекционных заболеваний. Заявлен унифицированный, ускоренный, высокочувствительный, высокоспецифичный, малотрудоемкий способ для ускоренной лабораторной диагностики коклюшной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542396
Дата охранного документа: 20.02.2015
25.08.2017
№217.015.bd9b

Способ экспресс-диагностики инфекции кровотока

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования, экспресс-методу диагностики инфекционного заболевания, сопровождающегося наличием микроорганизмов в крови. Способ экспресс-метода диагностики инфекции кровотока включает выявление микроорганизмов в крови методом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616249
Дата охранного документа: 13.04.2017
26.08.2017
№217.015.d5fa

Способ и набор для диагностики дифтерии с верификацией токсигенных штаммов возбудителя

Группа изобретений относится к медицине и касается способа диагностики дифтерии, предусматривающего забор клинического материала от больного, выделение из него ДНК, смешивание выделенной ДНК и смеси №1, содержащей ПЦР буфер, смесь нуклеотидов (dNTP), MgCl, раствор Betaine, праймеры, нагревание,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002623149
Дата охранного документа: 22.06.2017
10.05.2018
№218.016.40fd

Способ ведения беременных с инфекционной патологией урогенитального тракта

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для ведения беременных с инфекционной патологией урогенитального тракта. Для этого исследуют экспрессию генов рецепторов врожденного иммунитета - TLR. При установлении уровней экспрессии генов TLR-2...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002649127
Дата охранного документа: 29.03.2018
10.05.2018
№218.016.479f

Сердечно-мозговая питательная среда для диагностики инфекции в кровотоке и способ ее получения

Группа изобретений относится к биотехнологии и клинической микробиологии. Предложены сердечно-мозговая питательная среда для диагностики инфекции в кровотоке и способ ее получения. Способ предусматривает растворение ферментативного гидролизата казеина, дрожжевого экстракта, хлорида натрия,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650863
Дата охранного документа: 17.04.2018
10.05.2018
№218.016.4b56

Способ оценки течения урогенитальных инфекций у беременных

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, микроэкологии, инфекционной патологии и иммунологии, может быть использовано при ведении беременности. Способ оценки течения урогенитальных инфекций у беременных характеризуется тем, что исследуют экспрессию гена рецепторов...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002651707
Дата охранного документа: 23.04.2018
10.07.2018
№218.016.6edb

Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и раскрывает способ получения питательной среды. Способ включает следующие стадии. Готовят сердечный и мозговой экстракты. Далее готовят смесь №1, растворяя в дистиллированной воде 100 мг L-глютамина, 1 мг аденина, 200 мг парааминобензойной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002660708
Дата охранного документа: 09.07.2018
+ добавить свой РИД