×
29.03.2019
219.016.f342

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОЧИСТКИ ЭРЕМОМИЦИНА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к технологии очистки гликопептидов. Осветленную жидкость, содержащую эремомицин, компактируют с сульфированным стирол-дивинилбензольным катионитом, проводят элюирование и нанесение нейтрализованного элюата на колонку с гидрофобным стирол-дивинилбензольным сорбентом. После промывки колонки водой производят вытеснение эремомицина раствором изопропилового спирта с добавкой уксусной кислоты и производят кристаллизацию целевого продукта. Способ позволяет получить чистый продукт с высоким выходом при высокой производительности процесса. 5 з.п. ф-лы.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области хроматографического разделения и очистки и может быть использовано для получения высокоочищенных полициклических гликопептидов, в частности антибактериального антибиотика эремомицина.

Известен способ очистки гликопептидного антибиотика ванкомицина, включающий последовательную очистку осветленного после ферментера раствора на колонке с сорбентом DOWEX 50 WX2, а затем на колонке AMBERLITE XAD-16 и кристаллизацию при рН от 9 до 9,5. Чистота продукта не превышает 92% (US 5574135, 12.11.1996).

Известен способ очистки ванкомицина, включающий его сорбцию на сильнокислотном катионите, элюирование раствором NH4OH, доведение рН до 3-5, сорбцию на слабоосновном анионите, а затем на оксиде алюминия, элюирование водой, нанесение элюата на гидрофобный адсорбент, элюирование раствором спирта, добавление к элюату соляной кислоты и водорастворимого органического растворителя и кристаллизацию (US 7018814, 28.03.2006). Ванкомицин получают с чистотой 95%.

Известен способ доочистки эремомицина на различных карбоксильных катионитах. Найдены оптимальные условия сорбции эремомицина на этих катионитах (I.V.Polyakova et all "Mass transfer effect in preparative chromatography of eremomycin on polymeric sorbents". Journal of Cromatography A, 1006, 2003, p.251-260). Однако в упомянутой работе не предложена конкретная схема очистки осветленного после ферментера раствора до получения товарного продукта.

Наиболее близким к предлагаемому является способ очистки эремомицина, включающий сорбцию осветленного после ферментера раствора на карбоксильном катионите (КБ-2) при рН 6,5, десорбцию эремомицина 0,5 н. раствором аммиака, обессоливание раствора на сульфокатионите КУ-2-20 и анионите ЭВЭ-10П с последующим нанесением элюата при рН 5±0,5 на сорбент на основе гидрофобизированного макропористого стекла (ПТФЭ), элюирование дистиллированной водой, концентрирование упариванием в вакууме до содержания эремомицина 120-140 г/л с последующей кристаллизацией 20%-ным этиловым спиртом. Выход очищенного продукта составляет 60-65%, чистота по ВЭЖХ 97% (Патент РФ 21105578, 1998).

Недостатки известного способа следующие.

Недостаточное гидрофобное связывание ПТФЭ сорбентом эремомицина приводит к необходимости вводить две дополнительные стадии обеззоливания (обессоливания) с использованием катионита КУ-2-20 и анионита ЭВЭ-10П. Это снижает производительность процесса и приводит к дополнительным потерям продукта.

Невозможность достаточного концентрирования на стадии гидрофобной очистки на ПТФЭ сорбенте приводит к низкой концентрации эремомицина, что требует стадии упаривания перед кристаллизацией и приводит к дополнительным энергетическим и временным затратам.

Задачей настоящего изобретения является упрощение способа очистки с достижением высокого выхода и чистоты целевого продукта.

Поставленная задача решается описываемым хроматографическим способом очистки эремомицина, который включает сорбцию эремомицина из осветленной культуральной жидкости на катионите, элюирование раствором, содержащим ионы аммония, нейтрализацию элюата, нанесение нейтрализованного элюата на колонку, заполненную гидрофобным сорбентом, промывку колонки водой, вытеснение с колонки эремомицина и его кристаллизацию. В качестве катионита используют сульфированный стирол-дивинилбензол в протонированной форме, в качестве гидрофобного сорбента используют стирол-дивинилбензольный сорбент, вытеснение эремомицина осуществляют водным раствором изопропилового спирта с добавкой уксусной кислоты, кристаллизацию осуществляют из раствора, содержащего изопропиловый спирт.

Дополнительно после кристаллизации продукт промывают этанолом и высушивают под вакуумом.

Предпочтительно элюирование с катионита проводят раствором, содержащим хлорид и сульфат аммония, имеющим рН 9-10.

Нейтрализацию элюата проводят до рН 6,0-7,5.

Вытеснение эремомицина со стирол-дивинилбензольного гидрофобного сорбента проводят 3%-ным раствором изопропилового спирта в воде, содержащим 0,1 моль/л уксусной кислоты.

Кристаллизацию эремомицина осуществляют из 60-70%-ного раствора изопропилового спирта.

Технический результат, заключающийся в упрощении способа, повышении производительности процесса при высоком выходе чистого продукта, достигается в объеме вышеизложенной совокупности признаков.

Использование на первой стадии сорбции сульфокатионита на основе стирол-дивинилбензола позволяет избежать влияния солевого состава воды и увеличить производительность в 3 раза за счет большей скорости пропускания раствора (2,6-3,25 мл/см2/мин).

Применение на стадии гидрофобной хроматографии стирол-дивинилбензольного сорбента обеспечивает более эффективное связывание эремомицина. Элюирование осуществляется водой с добавкой изопропилового спирта и уксусной кислоты, а не дистиллированной водой, что позволяет удалить растворенные соли промывкой колонны с сорбированным эремомицином водой и избежать двух стадий обессоливания на катионите и анионите перед гидрофобной хроматографией. Это значительно повышает общую производительность процесса и снижает потери целевого продукта.

Более эффективное связывание эремомицина стирол-дивинилбензольным сорбентом обеспечивает возможность его элюирования с колонки в концентрированном виде и не требует дополнительного упаривания, что повышает производительность и снижает энергозатраты процесса.

Очистку эремомицина осуществляют следующим образом.

Пример 1. Осветленный после ферментера раствор в объеме 1100 л, содержащий 500 г эремомицина, доведенный до значения рН 7,5, наносят на колонку размером 140×1000 мм, содержащую 7 л сульфокатионита (сульфированный стирол-дивинилбензол, Е=3,5 мЕ/г) со скоростью 500 мл/мин. Колонку промывают деионизованной водой (4 объема колонки). Элюирование эремомицина проводят 18 литрами 0,3 М раствора хлористого аммония, содержащего 0,03 М сульфата аммония, доведенного до рН 9,5 аммиаком. Содержание эремомицина в элюате составляет 25 мг/мл.

Нейтрализованный раствором серной кислоты до рН 6,6 раствор эремомицина наносят на колонну 140×1000 мм, содержащую 10 литров гидрофобного полимерного стирол-дивинилбензольного сорбента (сополимер дивинилбензола и этилстирола, диаметр пор 9 нм, объем пор 1,9 мл/г, размер частиц 150-300 мкм) со скоростью 125 мл/мин. Колонну промывают 2,5 литрами дистиллированной воды, затем элюируют 3%-ным раствором изопропилового спирта, содержащего 0,1 М уксусной кислоты. Получают 8 литров раствора с содержанием эремомицина 50 мг/мл. Осаждение и кристаллизацию эремомицина осуществляют, добавляя в раствор изопропиловый спирт до содержания 60% при рН 6,6 и температуре 4°С в течение 30 часов. Осадок отфильтровывают и промывают 2 литрами этанола. Продукт высушивают под вакуумом при температуре 30°С. Получают 412 г очищенного продукта. Выход 82%, чистота по ВЭЖХ более 98%.

Пример 2. 100 л осветленной культуральной жидкости, содержащей 60 г эремомицина, доведенной до рН 7,0, пропускают через колонку 50×500 мм с сульфокатионитом в Н+ форме со скоростью 60 мл/мин. Колонку промывают 3 литрами дистиллированной воды. Элюирование проводят буферным раствором с рН 10,0, содержащим 0.3М хлористого аммония, 0,03М сульфата аммония. Элюат объемом 900 мл нейтрализуют соляной кислотой до рН 6,0 и пропускают через колонку 50×500 мм, заполненную стиролдивинилбензольным сорбентом со скоростью 30 мл/мин. Колонку промывают 250 мл дистиллированной воды и элюируют эремомицин 600 мл раствора, содержащего 3% изопропилового спирта и 0,1М уксусной кислоты. К 600 мл элюата добавляют 1400 мл изопропилового спирта (до 70%-ного его содержания), перемешивают 2,5 часа и помещают в холодильник на 24 часа. Осадок эремомицина переносят на стеклянный фильтр Шота №4 и промывают спиртом этиловым под вакуумом. Образовавшийся подсушенный осадок помещают на стеклянный лоток, сушат в течение суток на воздухе (под вытяжным шкафом). Окончательную сушку проводят в вакуум-сушильном шкафу при 30°C. Получают 45 г эремомицина. Выход 75%, чистота по ВЭЖХ более 98%.

Пример 3. 100 л осветленной культуральной жидкости, содержащей 65 г эремомицина, доведенной до рН 6,3, пропускают через колонку 50×500 мм с сульфокатионитом в Н+ форме со скоростью 60 мл/мин. Элюирование осуществляют 0.3М раствором хлористого аммония, содержащего 0,03М сульфата аммония с рН 9,0. Элюат объемом 850 мл нейтрализуют соляной кислотой до рН 7,5. Сорбцию и элюирование на стирол-дивинилбензольном сорбенте осуществляют по примеру 2. К элюату объемом 700 мл добавляют 1630 мл изопропилового спирта при перемешивании и через 3 часа емкость помещают в холодильник. Через 24 часа осадок эремомицина переносят на стеклянный фильтр Шотта и сушат, как описано в примере 2. Получают 49 г эремомицина. Выход 75%, чистота по ВЭЖХ более 98%.

Как видно из приведенных примеров, поставленная задача решена. Целевой продукт получен по упрощенной технологии с обеспечением высокого выхода и чистоты.

1.Хроматографическийспособочисткиэремомицина,включающийсорбциюэремомицинаизосветленнойкультуральнойжидкостинакатионите,элюированиераствором,содержащимионыаммония,нейтрализациюэлюата,нанесениенейтрализованногоэлюатанаколонку,заполненнуюгидрофобнымсорбентом,промывкуколонкиводой,вытеснениесколонкиэремомицинаиегокристаллизацию,отличающийсятем,чтовкачествекатионитаиспользуютсульфированныйстирол-дивинилбензольныйсорбент,вкачествегидрофобногосорбентаиспользуютстирол-дивинилбензольныйсорбент,вытеснениеэремомицинаосуществляютводнымрастворомизопропиловогоспиртасдобавкойуксуснойкислотыикристаллизациюосуществляютизраствора,содержащегоизопропиловыйспирт.12.Способпоп.1,отличающийсятем,чтопослекристаллизациипродуктдополнительнопромываютэтаноломивысушиваютподвакуумом.23.Способпоп.1,отличающийсятем,чтоэлюированиескатионитапроводятраствором,содержащим0,3Мхлоридааммонияи0,03Мсульфатааммония,имеющимрН9-10.34.Способпоп.1,отличающийсятем,чтонейтрализациюэлюатапроводятдорН6,0-7,5.45.Способпоп.1,отличающийсятем,чтовытеснениеэремомицинасостирол-дивинилбензольногосорбентапроводят3%-нымрастворомизопропиловогоспиртавводе,содержащем0,1моль/луксуснойкислоты.56.Способпоп.1,отличающийсятем,чтокристаллизациюэремомицинаосуществляютиз60-70%-ногораствораизопропиловогоспирта.6
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 39.
10.05.2018
№218.016.3aa0

Установка для переработки кератинсодержащих отходов животноводства

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в технологии получения белкового продукта из отходов животноводства. Установка содержит последовательно связанные между собой и снабженные шнеками секции подачи сырья, реакционную гидролизную секцию и секцию выгрузки...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002647502
Дата охранного документа: 16.03.2018
08.03.2019
№219.016.d475

Крем "брамизил" противогрибкового действия

Изобретение может быть использовано в медицине и касается получения лекарственного средства противогрибкого действия. Предложен крем, содержащий следующее соотношение компонентов, мас.%: тербинафина гидрохлорид 0,9-1,25 и вспомогательные вещества: бензиловый спирт 0,8-1,25, нипагин 0,1-0,3,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02207124
Дата охранного документа: 27.06.2003
08.03.2019
№219.016.d478

Антигистаминный препарат "субрестин"

Изобретение относится к области медицины, в частности к получению препарата противогистаминного действия. Предложен антигистаминный препарат, выполненный в таблетированной форме и содержащий в качестве действующего вещества хлоропирамина гидрохлорид в количестве 10-15% от массы таблетки, а...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02203663
Дата охранного документа: 10.05.2003
08.03.2019
№219.016.d47b

Гепатопротекторное средство "карсилин"

Изобретение относится к медицине и касается средства, обладающего гепатозащитным действием. Предложено гепатопротекторное средство, выполненное в виде таблеток, содержащих ядро, покрытое многослойной оболочкой. Ядро таблеток, помимо действующего вещества силимарина, в количестве 10-20% от массы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02205637
Дата охранного документа: 10.06.2003
08.03.2019
№219.016.d496

Противомикробное и противопротозойное средство "трихоброл"

Изобретение относится к медицине. Средство характеризуется формой в виде таблетки, включающей метранидазол в качестве активного вещества и вспомогательных веществ - поливинилпирролидон, стеариновая кислота, крахмал картофельный, взятых в определенных соотношениях. Изобретение обеспечивает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02220711
Дата охранного документа: 10.01.2004
08.03.2019
№219.016.d49a

Противогрибковое средство "брамизил"

Изобретение относится к медицине и касается средства на основе тербинафина, которое обладает противогрибковым действием. Предложено противогрибковое средство, выполненное в форме таблетки и содержащее в качестве активного вещества тербинафина гидрохлорид в количестве 60-80% от массы таблетки и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02214237
Дата охранного документа: 20.10.2003
15.03.2019
№219.016.e03c

Средство, обладающее нейролептическим действием

Изобретение относится к области медицины и касается средства нейролептического действия на основе галоперидола. Средство содержит галоперидол, крахмал картофельный, желатин пищевой, тальк, магний стеариново-кислый и сахар молочный при определенном соотношении компонентов. Средство выполнено в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02207129
Дата охранного документа: 27.06.2003
15.03.2019
№219.016.e041

Ноотропное средство "ноотобрил" в форме капсул

Изобретение относится к медицине и касается средств на основе пирацетама, оказывающих действие на центральную нервную систему. Предложено ноотропное средство, выполненное в форме капсул и содержащее активное вещество пирацетам и вспомогательные вещества - кальция стеарат и магния карбонат...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02203660
Дата охранного документа: 10.05.2003
15.03.2019
№219.016.e046

Антигистаминное средство "бравегил"

Изобретение относится к области медицины и касается антигистаминного лекарственного средства. Антигистаминное средство "Бравегил" выполнено в форме раствора для инъекций и содержит действующее вещество клемастина фумарат и вспомогательные вещества - сорбитол, этанол 94, натрия цитрата дигидрат...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02205638
Дата охранного документа: 10.06.2003
15.03.2019
№219.016.e047

Противогрибковое средство "бризорал"

Изобретение относится к области медицины и касается противогрибкового лекарственного средства "Бризорал". Средство содержит действующее вещество кетоконазол и вспомогательные вещества - крахмал кукурузный, лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпиролидон, аэросил и магния стеарат -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 02205008
Дата охранного документа: 27.05.2003
Показаны записи 1-10 из 17.
27.03.2015
№216.013.3607

Способ получения хиральной планарной пластины для тонкослойной хроматографии оптических изомеров

Изобретение относится к способу получения хиральной планарной пластины для тонкослойной хроматографии и может быть использовано для анализа оптически активных соединений. Сущность изобретения состоит в том, что разработан новый тип кремнеземных планарных пластин со связующим для разделения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545315
Дата охранного документа: 27.03.2015
10.01.2016
№216.013.9f00

Антибиотик ина 5812, штамм-продуцент streptomyces roseoflavus ина-ас-5812 и способ получения антибиотика

Изобретение относится к области биохимии, в частности к биологически активным соединениям, проявляющим антибактериальную активность. Заявлен природный гликопептидный антибиотик ИНА 5812, который может быть применен в качестве лекарственного препарата в медицинской практике. Также изобретение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002572341
Дата охранного документа: 10.01.2016
13.01.2017
№217.015.6a30

Сорбент для разделения оптических изомеров веществ и их анализа в биологических жидкостях методом вэжх и способ его получения

Изобретение относится к сорбентам для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), в частности к получению химически модифицированных сорбентов. Предложен сорбент на основе силикагеля с привитым через спейсер гибридным хиральным селектором. Сорбент получен путем модифицирования силикагеля...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002592893
Дата охранного документа: 27.07.2016
20.01.2018
№218.016.0fbc

Штамм amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика диметилванкомицина и способ получения антибиотика

Заявлена группа изобретений, которая может быть использована при производстве антибактериального антибиотика диметилванкомицина сульфата, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми и анаэробами. Предлагается штамм...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633511
Дата охранного документа: 12.10.2017
10.05.2018
№218.016.3aa0

Установка для переработки кератинсодержащих отходов животноводства

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в технологии получения белкового продукта из отходов животноводства. Установка содержит последовательно связанные между собой и снабженные шнеками секции подачи сырья, реакционную гидролизную секцию и секцию выгрузки...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002647502
Дата охранного документа: 16.03.2018
08.03.2019
№219.016.d4ac

Штамм streptomyces roseolus вкпм s-1082 - продуцент линкомицина и способ получения линкомицина

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве антибактериального антибиотика линкомицина гидрохлорида, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми, и некоторыми...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002391396
Дата охранного документа: 10.06.2010
08.03.2019
№219.016.d4e4

Штамм nonomuraea roseoviolacea subsp. carminata (actinomadura carminata) - продуцент антибиотика карминомицина и способ получения карминомицина

Штамм Nonomuraea roseoviolacea subsp carminata (Actinomadura carminata) BKIIM-S1081 получен в результате многоступенчатого мутагенного воздействия нитрозометилбиуретка, метилнитрозогуанидина и гамма-лучей Co на исходный штамм № ВКПМ S-806 с последующим отбором мутантов на средах, содержащих...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002355757
Дата охранного документа: 20.05.2009
08.03.2019
№219.016.d4e6

Штамм streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini вкпм-s887 - продуцент блеомицина a и способ получения антибиотика блеомицина a

Изобретение относится к новому штамму - продуценту антибиотика блеомицина и его использованию в биосинтезе противоопухолевого антибиотика блеомицина А, эффективного при лечении плоскоклеточного рака и ряда других типов опухолей. Штамм-продуцент Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002355758
Дата охранного документа: 20.05.2009
08.03.2019
№219.016.d4ea

Штамм streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini вкпм-s1086 - продуцент блеомицетина и способ получения антибиотика блеомицетина

Изобретение относится к новому штамму-продуценту антибиотика блеомицетина и его использованию в биосинтезе противоопухолевого антибиотика блеомицетина гидрохлорида, используемого при лечении плоскоклеточного рака. Штамм-продуцент Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S1086 получен в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002358008
Дата охранного документа: 10.06.2009
15.03.2019
№219.016.e075

Штамм amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini - продуцент антибиотика ристомицина

Штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini 8765 получен в результате мутантного преобразования свойств штамма Proactinomyces fructiferi var. ristomycini 5339 в результате последовательного трехступенчатого воздействия метилнитрозогуанидина, ультрафиолетовых и гамма-лучей Со на исходный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002392325
Дата охранного документа: 20.06.2010
+ добавить свой РИД