СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАНКРЕАТИТА У СОБАК

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для диагностики хронического панкреатита у собак.

Известны следующие методы диагностики хронического панкреатита:

- Лабораторная диагностика: относят определение трипсина и эластазы, глюкозы, липидов, определение липаза-ингибирующей системы крови, с-реактивного белка, панкреатической эластазы-1, альфа-1-антитрипсина, оценку экскреторной функции поджелудочной железы [1, 2].

- Функциональные тесты: Лундт-тест, Секретин-панкреозиминовый тест, ПАБК-тест, оценка инкреторной функции поджелудочной железы.

- Визуализирующие методы: рентгенография, эндоскопия, У3-томография, ЭРГГХГ, МРТ [3, 4, 5, 6, 7].

Однако все эти методики практически не применяются в ветеринарной медицине, поскольку являются очень трудоемкими и дорогостоящими.

В механизмах воспаления ни в одном органе протеолитическая агрессия не играет такой роли, как в поджелудочной железе с ее насыщенностью протеазами. По существующему мнению именно с их активации начинается воспалительный процесс в железе при развитии острого и хронического панкреатита. Отсюда важность оценки состояния ингибиторов протеаз, блокирующих протеолиз в начале активации и сдерживающих его в процессе воспаления.

Начальная фаза обострения хронического панкреатита заключается в активации трипсина из трипсиногена с последующим участием в воспалении, выделяющихся из нейтрофилов лизосомальных ферментов и высвобождающихся из поврежденных ацинарных структур протеаз. В очаге воспаления основную тормозящую функцию против протеолитических ферментов выполняет генетически детерминированный ингибитор альфа-1-антитрипсин [8, 9, 10, 11].

Известна методика исследования активности антипротеазной буферной системы крови в медицине, предложенная К. James в модификации Веремеенко, по которой сыворотку крови, смешанную с трипсином в различных концентрациях, наносят на расчерченную рентгеновскую пленку с соответствующим маркером концентрации. Инкубируют при 20°C в течение 20 мин, промывают и оценивают результат. Чем выше концентрация ингибиторов протеаз в крови, тем большее количество трипсина они сумеют связать и, тем самым, остановить гидролиз поверхности рентгеновской пленки.

Содержание ингибиторов трипсина в сыворотке крови выражают среднеарифметическим значением концентрации раствора трипсина отрицательного результата (отсутствие зоны лизиса пленки) и первого положительного результата (наличие зоны просветления), умноженной на разбавление сыворотки [12].

Недостатком является то, что данная методика не применялась в ветеринарной медицине для диагностики хронического панкреатита.

Технический результат заключается в создании быстрого, простого и недорогого способа диагностики хронического панкреатита у собак. При помощи предлагаемого метода можно в течение 40 мин поставить диагноз, что позволит вовремя назначить адекватное медикаментозное лечение и диетотерапию.

Технический результат достигается проведением мониторингового анализа при двукратном исследовании сыворотки крови по методике Веремеенко до и после введения в организм животного диагностического препарата для стимуляции экскреторной функции поджелудочной железы.

Так как наиболее доступный путь влияния на секреторный процесс пролегает через гуморальную регуляцию, для стимуляции экскреторной функции поджелудочной железы предложен диагностический препарат в виде вытяжки с участка слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки шестимесячной свиньи, основными действующими компонентами которого являются гормоны секретин и холецистокинин.

Вытяжку готовят следующим образом: с участка двенадцатиперстной кишки шестимесячного поросенка длиной 20 см снимают слизистую оболочку и помещают в раствор 0,1 н. HCl в соотношении 1:10, оставляют на 24 ч в холодильнике при температуре +4°C. Полученную жидкость центрифугируют в течение 12 мин при 2,5 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду. Препарат, предварительно разведенный в физиологическом растворе в соотношении 1:5, вводят внутривенно или внутрибрюшинно.

Известно, что 200 см кишечника содержит 80 мг секретина, следовательно, 20 см - содержат 8 мг на 100 мл раствора, 1 мл содержит 0,08 мг секретина, что, в свою очередь, является 1 собачьей единицей для собаки весом 12-15 кг [13].

В основной части работы подошли к дозированию по типу собачьих единиц, но основой их отсчета является способность определенного объема вызывать изменения в концентрации альфа-1-антитрипсина на одну ступень способности ингибировать трипсин по сравнению с нестимулированным гормональным препаратом организмом. Таким образом, рекомендована дозировка диагностического препарата для разных весовых категорий собак: 5-10 кг - 0,33 мл (0,027 мг секретина); 10-12 кг - 0,5 мл (0,04 мг секретина); 12-15 кг - 1,0 мл (0,08 мг секретина); 15-20 кг - 1,5 мл (0,12 мг секретина); 20-30 кг - 2,0 мл (0,16 мг секретина); 30-40 кг - 2,5 мл (0,20 мг секретина); 40-50 кг - 3,0 мл (0,24 мг секретина); 50-60 - 3,5 мл (0,28 мг секретина); более 60 кг - 4-4,5 мл (0,32-0,36 мг секретина).

Способ диагностики осуществляется следующим образом: сначала получают от животных сыворотку крови, затем вводят внутривенно или внутрибрюшинно диагностический препарат в дозе 0,33-4,5 мл в зависимости от веса животного, предварительно разведенного в физиологическом растворе в соотношении 1:5, и через 20 мин повторно получают сыворотку крови. Далее поводят сравнительное исследование обоих отобранных образцов сыворотки крови в соответствии с методикой K. James в модификации Веремеенко.

Сыворотку крови, разбавленную в 4 раза 0,005 М трис-буферным раствором с добавлением 10% CaCl₂ (рН 8,1), смешивают с трипсином кристаллическим в разных концентрациях (0,875; 0,725; 0,5; 0,25; 0,125; 0,063 мг/мл) и вносят на рентгеновскую пленку (засвеченную и проявленную), имеющую расчерченную решетку, соответствующую различным концентрациям трипсина. Гемолизированная и хилезная сыворотка не пригодна, так как при этом результаты исследования занижены. Далее пленку инкубируют при 20°С в течение 20 мин, промывают и оценивают результат.

Положительным результатом на хронический панкреатит является заметное падение устойчивости антитрипсиновой буферной системы крови при стимулированном состоянии поджелудочной железы. Это связанно с недостатком в крови ингибиторов протеаз, в частности альфа-1-антитрипсина, все ресурсы которых уходят на связывание «ускользающих» в кровяное русло ферментов при хроническом воспалительном процессе в поджелудочной железе.

У больных хроническим панкреатитом животных снижение уровня ингибиторов протеаз в крови после введения препарата составит более 1 мг/мл альфа-1-антитрипсина, что на рентгеновской пленке выразится появлением зон лизиса при гораздо более низких концентрациях трипсина, чем до введения диагностического препарата (более чем одну).

Пример 1. В условиях клиники было отобрано 2 группы по 5 животных средней массой 12-15 кг. В первой группе находились здоровые животные, а во второй группе на основании анамнеза, клинического и лабораторного исследования, а также УЗИ был установлен панкреатит.

Полученный из слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки шестимесячной свиньи диагностический препарат гормонов секретина и холецистокинина вводили в дозе 1 мл (предварительно разведенного в физиологическом растворе в соотношении 1:5) после предварительного получения сыворотки крови, затем отбор повторили через 20 мин после введения препарата. В дальнейшем провели сравнительные исследования сыворотки крови по методике K. James в модификации Веремеенко.

У всех животных больных панкреатитом было заметно резкое падение антипротеаз в крови после введения диагностического препарата, что отобразилось на рентгеновской пленке появлением зон лизиса при гораздо более низких концентрациях трипсина, чем до его введения. Это свидетельствует о напряженном состоянии антипротеазной системы крови, основные силы которой уходят на связывание протеаз, попадающих в кровь при хроническом воспалительном процессе в поджелудочной железе. В свою очередь, у здоровых животных также наблюдалось снижение уровня ингибиторов протеаз крови, однако это снижение было незначительным - до 1 мг/мл альфа-1-антитрипсина, при этом на рентгеновской пленке смещение было на допустимую одну зону (данные приведены в таблице 1).

Литература:

1. Губергриц Н.Б. Биохимическая диагностика хронического рецидивирующего панкреатита. / Н.Б. Губергриц // Клин. лаб. диагностика. - 1999. - №8. - С. 3-10.

2. Черноярова О.Д., Астафьева О.В., Винокурова Л.В., Кондашова З.Д. Ингибиторная способность крови по отношению к липазе у больных хроническим панкреатитом. // Российский гастроэнтерологический журнал. – 1998. - №2. - С. 103.

3. Минушкин О.Н. Хронический панкреатит: некоторые аспекты патогенеза, диагностики и лечения / О.Н. Минушкин // Consiliummedicum. - 2002. - №1. - С. 23-26.

4. Портной Л.М. Магнитно-резонансная холангио-панкреатография: ее место в диагностике болезней гепатопанкреатодуоденальной области / Л.М. Портной // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 2002. - №5. - С. 41-50.

5. Тодуа Ф.И. Компьютерная томография органов брюшной полости. Атлас. - М.: Медицина. - 1991. - 445 с.

6. Банифатов П.В. Ультразвуковая диагностика хронических панкреатитов / П.В. Банифатов // Consillimrimedicum. - 2002. - №1 - С. 26-29.

7. Богер М.М. Методы исследования поджелудочной железы. - Новосибирск: Наука. - 1988 - С. 278.

8. Логинов А.С. Ингибиторы протеолитических ферментов поджелудочной железы. / А.С. Логинов // Вестник академии мед. наук СССР. – 1989. - №1. - С. 53-61.

9. Веремеенко К.Н. Ферменты протеолиза и их ингибиторы в медицинской практике. - Киев, 1971.

10. Пузырев В.П. Клинико-генетические аспекты недостаточности α-1-антитрипсина / В.П. Пузырев // Мед. генетика. - 2002. - №5. - С. 202-209.

11. Шевченко О.П. Белки острой фазы воспаления // Лаборатория. 1996. №1. С. 3-6.

12. К.Н. Веремеенко; Л.И. Волохонская; С.И. Ханюченко; В.Н. Пилипчук; О.А. Романенко. «Экспресс метод определения ингибиторов трипсина в сыворотке крови человека» Киевский НИИ отоларингологии им. А.И. Коломийченко, УССР.

13. И.Т. Курцин. Гормоны пищеварительной системы // Государственное издательство медицинской литературы / Ленинград / 1962 г. - с. 102-106.