Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ОСТЕОПЕНИЧЕСКОГО СИНДРОМА В ПОСЛЕРОДОВОМ ПЕРИОДЕ

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, лабораторной диагностике и может быть использовано для прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде.

Известен способ прогнозирования остеопенического синдрома по результатам двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (ДЭРА) [Остеопороз / под ред. О.М. Лесняк, Л.И. Беневоленской. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - С. 272]. Однако применение рентгенологических исследований при беременности противопоказано. Кроме того, известные исследования не дают четких представлений о прогнозе остеопении в послеродовом периоде, приведенные в них данные противоречивы [A detailed assessment of alterations in bone turnover, calcium homeostasis, and bone density in normal pregnancy / Black A.J. (et al.) // J. Bone Miner Res. - 2000. - Vol.15. - P. 557-563; A longitudinal study of calcium homeostasis during human pregnancy and lactation and after resumptions of menses / Ritchie L.D. (et al.) // Am.J. Clin. Nutr. - 1998. - Vol. 67. - P. - 693-701].

Известен способ прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде с применением биохимических маркеров остеопороза - костного изофермента щелочной фосфатазы и остеокалыдина, концентрация которых оценивается на 22-24 неделях беременности (Патент на изобретение №2456599, Судаков Д.С., Зазерская И.Е., Галкина О.В., Богданова Е.О.).

Недостатком способа является возможность прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде только при наступлении беременности (на 22-24 неделях).

Известно генетическое исследование, в котором аллель f полиморфизма Fok-I гена VDR ассоциациирован со снижением минеральной плотности костной ткани (МПК), причем по результатам исследования у родильниц с генотипом Ff и ff остеопения встречалась с одинаковой частотой - 70%, а при наличии генотипа FF остеопения встречалась почти в 2 раза реже - 40% (Бибкова О.С. и др. Роль полиморфизма гена VDR в развитии остеопении у беременных женщин. Материалы V Регионального научного форума «Мать и дитя». Геленджик, 2011; стр. 32-33). Это исследование является ближайшим аналогом изобретения.

Недостатком ближайшего аналога является ограничение исследования только генотипами Ff, ff и FF для полиморфизма Fok-I гена VDR, что снижает эффективность способа, так как такое исследование сужает группы риска. При обнаружении неблагоприятных генотипов Ff и ff прогнозируют остеопению, а при обнаружении генотипа FF считают прогноз благоприятным.

Техническим результатом изобретения является возможность прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде еще до наступления беременности или на любом сроке беременности с расширением групп риска, что повышает эффективность прогнозирования.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде, включающем исследование генетического полиморфизма Fok-I гена VDR и прогнозирование остеопенического синдрома при выявлении генотипов Ff или ff, согласно изобретению, при выявлении генотипа FF полиморфизма Fok-I гена VDR дополнительно исследуют полиморфизмы ApaI, BsmI и TaqI гена VDR и при выявлении по меньшей мере, одного из генотипов AA, Aa для полиморфизма ApaI, BB, Bb для полиморфизма BsmI и Tt, tt для полиморфизма TaqI прогнозируют развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде.

В исследование по предлагаемому способу были включены 100 женщин, родившихся в Санкт-Петербурге или Ленинградской области. Для сравнительного анализа были выделены две группы исследования. В первую группу (основную) вошли практически здоровые беременные женщины - 61 человек, во вторую группу (контрольную) вошли практически здоровые небеременные женщины - 39 человек. Средний возраст обследованных в основной группе составил 26,53±0,61 лет, средний индекс массы тела (ИМТ) составил 24,6±0,8 кг/м². Средний возраст в контрольной группе составил 26,4±0,6 лет, средний ИМТ составил 20,76±0,5 кг/м². Все пациентки в анамнезе имели своевременное менархе и регулярный менструальный цикл. Из исследования исключали женщин с клиническими проявлениями недостаточности функции яичников в анамнезе, наличием заболеваний, являющихся причиной вторичного остеопороза, принимающих препараты, влияющие на ремоделирование костной ткани.

Определение генотипов однонуклеотидных полиморфизмов ApaI, BsmI, TaqI проводилось в обеих группах. Процессы костного ремоделирования оценивались на основании концентрации маркеров остеосинтеза - остеокальцина (ОК), костного изофермента щелочной фосфатазы (КЩФ), и остеорезорбции - С-терминального телопептида коллагена I типа (СТТК) и значений МПК.

Измерение МПК произведено всем пациенткам методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (ДЭРА) с помощью рентгеновского денситометра кости Lunar фирмы GE Medical Systems LUNAR (США). В группе беременных женщин измерение МПК проводили на 4-6 сутки послеродового периода. Для оценки степени снижения МПК применяли Z-критерий (Соколова М.Ю. Дефицит кальция при беременности // Гинекология - 2004.- Т. 6. №5. - С. 268-270).

По рекомендациям Международного Общества по Клинической Денситометрии «остеопения» у молодых женщин соответствует значениям Z-критерия от -1 до -2,4 SD.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Statistica 6.1. Критический уровень значимости различия показателей принимали равным 0,05.

Частота встречаемости остеопении в обследуемых отделах скелета у родильниц (основная группа) на 4-6 сутки послеродового периода и у небеременных женщин (контрольная группа) подтвердила необходимость прогнозирования остеопенического синдрома. В основной группе остеопения встречалась в 2,3 раза чаще в поясничном отделе позвоночника и в 1,5 раза чаще в дистальном отделе предплечья, по сравнению с контрольной группой (p<0,05). Частоты распределения генотипов в обеих группах исследования достоверно не различались.

Исследования показали, что наличие остеопении в послеродовом периоде не всегда ассоциировалось с выявлением генотипов Ff или ff. Даже при выявлении генотипа FF повышался риск развития остеопении. В связи с этим были дополнительно исследованы полиморфизмы ApaI, BsmI и TaqI гена VDR.

При исследовании однонуклеотидного полиморфизма ApaI, корреляционный анализ позволил выявить умеренную достоверную связь генотипов и МПК в шейке бедра (r=0,029, p=0,011), поясничном отделе позвоночника (r=0,27, p=0,019). Генотипы AA и Aa полиморфизма ApaI были ассоциированы с более низкими значениями МПК, по сравнению с генотипом aa.

Было показано, что в основной группе средние значения МПК в поясничном отделе позвоночника оказались достоверно ниже при наличии генотипов BB и Bb полиморфизма BsmI, по сравнению с генотипом bb (p<0,05). Корреляционный анализ позволил выявить достоверную связь генотипов BsmI и значений МПК в поясничном отделе позвоночника (r=0,30, p=0,04). Таким образом, генотипы BB и Bb полиморфизма BsmI ассоциированы с неблагоприятным прогнозом относительно значений МПК в поясничном отделе позвоночника.

При исследовании однонуклеотидного полиморфизма TaqI было показано, что в обеих группах исследования аллель «t» достоверно чаще встречалась при остеопении, а аллель «T» - при нормальных значениях МПК (χ2=0,011). В основной группе корреляционный анализ выявил достоверную связь генотипов TaqI и МПК в дистальном отделе предплечья (r=0,37, p=0,026), шейке бедра (r=0,35, p=0,035). В контрольной группе была выявлена достоверная связь генотипов TaqI и МПК в поясничном отделе позвоночника (r=0,5, p=0,004). В обеих группах генотипы tt и Tt были ассоциированы с более низкими значениями МПК, по сравнению с генотипом TT.

Таким образом, если считать положительным результатом теста при выявлении остеопении в послеродовом периоде наличие одного из «неблагоприятных» генотипов: AA, Aa для ApaI, BB, Bb для BsmI, Tt, tt для TaqI, то получим следующие результаты:

1. Чувствительность метода для аллельного полиморфизма Bsm-I составила 77%, специфичность метода - 55%;

2. Чувствительность метода для аллельного полиморфизма Taq-I составила 76%, специфичность метода - 55%;

3. Чувствительность метода для аллельного полиморфизма Apa-I составила 74%, специфичность метода - 55%.

Создание дополнительной лабораторной панели, включающей несколько молекулярных маркеров: ApaI, BsmI, TagI, позволяет расширить группы риска по развитию остеопенического синдрома в послеродовом периоде и повысить эффективность прогнозирования.

Прогнозирование остеопенического синдрома в послеродовом периоде по предлагаемому способу можно проводить на любом сроке беременности или до наступления беременности с целью своевременного проведения профилактических мер.

Способ осуществляют следующим образом.

На любом сроке беременности или до наступления беременности проводят генетическое исследование гена VDR. Исследование проводят методом полимеразной цепной реакции с детекцией полиморфизмов длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ). Исследуют генетический полиморфизм Fok-I гена VDR. При выявлении генотипов Ff или ff прогнозируют остеопенический синдрома в послеродовом периоде. А при выявлении генотипа FF полиморфизма Fok-I дополнительно исследуют полиморфизмы ApaI, BsmI и TaqI гена VDR и при выявлении по меньшей мере, одного из генотипов АА, Аа для полиморфизма ApaI, ВВ, ВЬ для полиморфизма BsmI и Tt, tt для полиморфизма TaqI прогнозируют развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде.

Достижение технического результата подтверждается следующими клиническими примерами.

Всем пациенткам до наступления беременности проводили измерение МПК: в дистальном отделе предплечья, в проксимальном отделе бедра, в поясничном отделе позвоночника. Все показатели были в норме. Затем проводили исследование по предлагаемому способу после родов.

Пример 1. Пациентка С. 1. Выявлен генотип FFaabbTt. Несмотря на благоприятный генотип FF, наличие генотипа Tt позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. При проведении ДЭРА после родов МПК поясничного отдела позвоночника 1,083 г/см², Z критерий: -1,6 SD, что подтверждает прогноз.

Пример 2. Пациентка М.: Выявлен генотип FFaabbtt, Несмотря на благоприятный генотип FF, наличие генотипа tt позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. При проведении ДЭРА после родов МПК дистального отдела предплечья 0,792 г/см², Z критерий = -1,1 SD.

Пример 3. Пациентка К. Выявлен генотип FFAAbbTT. Несмотря на благоприятный генотип FF, наличие генотипа АА позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. При проведении ДЭРА после родов МПК дистального отдела предплечья 0,778 г/см², Z критерий: -1,2 SD.

Пример 4. Пациентка С. 2. Выявлен генотип FFAabbTT. Несмотря на благоприятный генотип FF, наличие генотипа Аа позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. При проведении ДЭРА после родов МПК дистального отдела предплечья 0,737 г/см², Z критерий: -1,7 SD.

Пример 5. Пациентка Ч. Выявлен генотип FFaaBBTT. Несмотря на благоприятный генотип FF, наличие генотипа ВВ позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. При проведении ДЭРА после родов МПК дистального отдела предплечья 0,778 г/см², Z критерий: = -1,2 SD.

Пример 6. Пациентка П. Выявлен генотип FFaaBbTT. Несмотря на благоприятный генотип FF, наличие генотипа Bb позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. При проведении ДЭРА после родов МПК поясничного отдела позвоночника 1,113 г/см², Z критерий: -1,2 SD.

Пример 7. Пациентка М. Выявлен генотип FFaaBbTt. Благоприятный генотип FF не исключает наличия генотипов Bb, Tt, что позволило прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. После родов МПК в дистальном отделе предплечья составляет 0.758 г/см² (SD=-1,5), что подтверждает прогноз.

Пример 8. Пациентка А. Выявлен генотип FFAABbtt. При благоприятном генотипе FF у пациентки выявлены неблагоприятные генотипы AABbtt. После родов МПК в поясничном отделе позвоночника составляет 0,953 г/см² (SD=-2,1), что подтверждает прогноз.

Пример 9. Пациентка К. Выявлен генотип FFAABbTt. Наличие генотипов AABbTt позволяет прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. После родов МПК в поясничном отделе позвоночника составляет 1,003 г/см² (SD=-1,4), что подтверждает прогноз.

Пример 10. Пациентка Н. Выявлен генотип FFAaBbTt. Наличие генотипов AaBbTt позволяет прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде. После родов МПК в поясничном отделе позвоночника составляет 1,010 г/см² (SD=-1,2), что подтверждает прогноз.

Предлагаемый способ позволяет расширить группы риска и прогнозировать развитие остеопенического синдрома в послеродовом периоде еще до наступления беременности или на любом сроке беременности.