СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ИММУНОБИОХИМИЧЕСКОГО СТАТУСА У КОРОВ В ПРЕДРОДОВОМ И ПОСЛЕРОДОВОМ ПЕРИОДАХ

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа коррекции иммунобиохимического статуса у коров в предродовом и послеродовом периодах и может быть использовано для лечебно-профилактической защиты коров от массовых болезней репродуктивных органов и получения физиологически здорового приплода.

Беременность, следующие за ней роды и послеродовой период у всех млекопитающих сопровождаются существенными изменениями в обмене веществ, которые могут проявляться клиническими и субклиническими нарушениями метаболизма. При этом наиболее яркая картина напряженности метаболических процессов складывается на заключительном этапе беременности и в раннем послеродовом периоде. Наряду с этим отмечено, что в основе развития акушерской патологии у животных лежит расстройство синтеза и метаболизма гормонов, витаминов, белков, углеводов, липидов, минеральных и других биологически активных веществ. Высокая физиологическая роль микроэлементов в организме животных характеризуется тем, что они тесно связаны с активацией гормонов, ферментов, витаминов и других биологически активных веществ (БАВ), поддерживающих гомеостаз. Микроэлементы активно соединяются с белками, в результате чего образуются новые вещества, которые обладают высокой активностью в организме. Если в организме не хватает микроэлементов, то образование гормонов, витаминов и ферментов значительно уменьшается и, соответственно, снижается общий обмен веществ. Значительное количество ферментов тесно связано с микроэлементами. Так, марганец является активной составляющей фермента аргиназы, с помощью которого расщепляются белки. Микроэлементы активизируют синтез и деятельность различных витаминов, а в отдельные из них они входят как компоненты. Например, витамин В₁₂ содержит в себе кобальт. Влияние микроэлементов на организм осуществляется в основном через ферменты, витамины и гормоны. Увеличивая их активность, микроэлементы значительно повышают общий метаболизм белков, углеводов, липидов и пр., способствуют усилению дыхания, лучшему кроветворению, синтезу белков, а также лучшему усвоению питательных веществ корма, благодаря чему усиливается рост и развитие животных, повышается их продуктивность и репродуктивная способность. Витамины и микроэлементы играют важную роль в поддержании гомеостаза организма коров. Так, цинк участвует в метаболизме нуклеиновых кислот, углеводов, белков и жиров, имеет большое значение в работе иммунной системы и входит в состав гормонов. Железо участвует в окислительно-восстановительных процессах. Оно входит в состав гемоглобина и ряда ферментов (оксидаз, пероксидаз, каталаз), в том числе цитохромных, участвующих в биологическом окислении. Марганец принимает участие в образовании соединительной ткани и хрящей, обеспечении функционирования репродуктивной функции, необходим для липидного и холестеринового обмена, противодействует жировой дегенерации печени. Медь - жизненно важный микроэлемент, участвующий в обмене веществ и тканевом дыхании, кроветворении, входит в состав гормонов и ферментов, обладает противовоспалительным действием. Кобальт входит в состав цианокобаламина, способствует выделению воды почками, блокированию и выведению токсичных элементов из организма. Селен защищает организм от вредных веществ и токсинов, стимулирует обмен веществ и иммунную защиту организма. Йод регулирует скорость химических реакций, входит в состав гормонов щитовидной железы. Витамин A играет важную роль в росте и размножении клеток, обеспечивает нормальное состояние слизистых оболочек (барьерная функция), поддерживает функции сетчатки и процесс светоощущения. Витамин D участвует в регуляции кальциево-фосфорного метаболизма. Витамин E нормализует функции органов размножения (способствует оплодотворению и развитию эмбрионов), оказывает влияние на деятельность гипофиза и щитовидной железы, разрушает наиболее реактивные формы кислорода и соответственно предохраняет от разрушения полиненасыщенные жирные кислоты [1].

Нарушения минерального обмена часто приводят к ослаблению деятельности иммунной системы, нарушению репродуктивной функции и плодовитости [2]. При скрытой недостаточности макро- и микроэлементов, при нарушении соотношения минеральных веществ в организме болезнь протекает без видимых клинических признаков.

Не последняя роль отводится в связи с возникновением различных патологических состояний перекисному окислению липидов. В настоящее время доказано, что процессы пероксидации липидов не только играют важную роль в нормальной физиологии и биохимии клетки, но и выступают как универсальное неспецифическое звено механизмов развития различных патологий, причем в зависимости от уровня их активности могут превращаться и в ведущее звено патогенеза заболеваний.

Значение состояния иммунобиохимического статуса в качестве патогенного фактора акушерской патологии коров подтверждается низкой эффективностью способов профилактики с применением лекарственных средств без учета иммунобиохимических процессов.

Известен способ коррекции патологий обмена веществ, лечения и профилактики их последствий, включающий использование универсального комплексного препарата, содержащего селенит натрия, витамин E, янтарную кислоту, сульфат цинка и фармазин, который вводят внутримышечно за 45, 30, 15 дней до родов и в день родов [3].

Еще известны средства повышения воспроизводительной способности сельскохозяйственных и домашних животных на основе различных БАВ, положительно влияющих на репродуктивную функцию, улучшающих кровообращение, на основе микро- и макроэлементов и витаминов [4]. В результате коррекции обменных процессов происходит метаболическая переориентация организма, оказывающая существенное влияние на уровень естественной резистентности.

Известны также средства, обеспечивающие антиоксидантную защиту организма, способствующие нормализации обмена веществ и повышающие резистентность вследствие снижения и предотвращения накопления токсичных продуктов перекисного окисления липидов, например препарат, содержащий янтарную и аскорбиновую кислоты [5].

В качестве предпочтительного аналога рассматривается способ нормализации иммунобиохимического статуса коров в предродовом и послеродовом периодах, включающий однократное внутримышечное введение 0,5% раствора селенита натрия за 20-25 дней до родов, двукратное введение до и двукратное после родов с интервалом 10 дней тетравита, содержащего витамины A, Д₃, E и C. При этом вводят внутрь в течение 20-25 дней до и после родов янтарную кислоту [6].

Однако известные способы не обеспечивают нормализацию иммунобиохимического статуса в полном объеме, воздействуя на его отдельные показатели без учета механизмов нарушения метаболизма в зависимости от физиологического состояния животного.

Техническим решением задачи является повышение иммунореактивности животных в предродовом и послеродовом периодах, улучшение внутриутробного развития плодов и сохранности комплексным воздействием БАВ на максимальное количество защитных приспособлений организма, включая систему антиоксидантной защиты.

Поставленная задача решается тем, что в способе коррекции иммунобиохимического статуса у коров в предродовом и послеродовом периодах, заключающемся в назначении глубокостельным коровам органических кислот, витаминного и минерального комплексов, органические кислоты применяют в виде композиционного средства, получившего название «Био-ФАЯЛ», содержащего фумаровую, аскорбиновую, янтарную и лимонную кислоты, в качестве витаминного комплекса - препарат тетрагидровит, в качестве минерального комплекса - комплексжелеза.

Способ осуществляется следующим образом.

Коровам в течение 10-12 дней до и 10-12 дней после родов перорально применяют композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее фумаровую, аскорбиновую, янтарную и лимонную кислоты из расчета на дозу, мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 3,0-5,0; аскорбиновая кислота - 4,5-7,5; янтарная кислота - 6,0-10,0; лимонная кислота - 1,5-2,5, в сочетании с двукратной внутримышечной инъекцией тетрагидровита за 30 дней до и в день родов в дозе 10 мл/гол. и трехкратной внутримышечной инъекцией комплексжелеза за 30, 15 дней до и в день родов в дозе 0,2 мл/10 кг живой массы.

Композиционное средство на основе органических кислот, получившее название «Био-ФАЯЛ», содержит вещества (фумаровую аскорбиновую, янтарную и лимонную кислоты), обладающие мембранопротекторными и повышающими иммунитет свойствами. Янтарная и лимонная кислоты являются важными факторами регуляции физиологического состояния и повышения общей резистентности организма животных и птиц, активизируют работу нервной системы, деятельность почек и кишечника, оказывают антистрессовое действие. Янтарная и лимонная кислоты обладают свойствами антидотов, очищая организм от тяжелых металлов, радионуклидов, солей азотной и азотистой кислот. Кроме того, янтарная кислота обладает лактопротекторным и противовирусным действиями. Лимонная кислота стимулирует образование в кишечнике хелатных форм кальция, цинка, железа и др., которые значительно легче усваиваются организмом. Достоверно известно, что лимонная кислота является синергистом янтарной, усиливая биологическое воздействие последней. Аскорбиновая кислота (витамин C) играет важную роль в окислительно-восстановительных процессах, реакциях углеводного и белкового обменов, снижает уровень холестерина и кальция в крови, уменьшает отложение липидов и кальция в органах, активизирует ферменты желудка, кишечника, обладает антигеморрагическим действием, препятствует развитию инфекционного начала в организме, стимулирует внешнесекреторную функцию поджелудочной железы, эритропоэз и систему мононуклеарных фагоцитов, обеспечивает противовоспалительное влияние ионизированного кальция, активизирует фагоцитоз. Фумаровая кислота является естественным метаболитом живых организмов, обеспечивает экстренный синтез АТФ, тем самым противодействуя стрессам на клеточном уровне. Она обладает устойчивостью к окислению, температурным колебаниям и совместимостью с другими БАВ. Ускоренное образование АТФ с участием фумаровой кислоты способствует сохранению глюкозы для синтеза гликогена в печени и аскорбиновой кислоты в организме. Накопление в печени запасных питательных веществ и аскорбиновой кислоты продлевает период ее активного функционирования и обеспечивает очищение печени от продуктов метаболизма.

Тетрагидровит - комплекс 4 витаминов с содержанием в 1 мл раствора: витамина A - 25000 ME; витамина D₃ - 5000 ME, витамина E - 25 мг, витамина C - 50 мг, восполняет недостаточность витаминов в организме животных [7].

Комплексжелеза - лекарственное средство в форме раствора для инъекций, предназначенное для профилактики и лечения железодефицитной анемии, недостатка микроэлементов, нормализации обмена веществ, повышения продуктивности и сохранности поголовья у крупного рогатого скота, в состав которого входит комплекс этилендиаминдиянтарной кислоты и лизина с железом, марганцем, медью, цинком, кобальтом, селеном, йодом и вода для инъекций. В 1 мл раствора содержится в качестве действующих веществ, мг: железа - 10,0; марганца - 7,0; меди - 1,0; цинка - 9,0; кобальта - 0,12; селена - 0,11; йода - 0,26 в форме хелатов и вода для инъекций [8].

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Для изучения влияния композиционного средства «Био-ФАЯЛ» на иммунобиохимический статус по принципу пар-аналогов подбирали четыре группы глубокостельных коров за 15-20 дней до предполагаемых родов: 3 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Все животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания.

Коровам первой опытной группы (n=9) скармливали в смеси с комбикормом композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее из расчета на дозу, мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 4,0; аскорбиновая кислота 6,0; янтарная кислота - 8,0; лимонная кислота - 2,0; коровам второй опытной группы (n=8) - композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее из расчета на дозу, мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 5,0; аскорбиновая кислота - 7,5; янтарная кислота - 10,0; лимонная кислота - 2,5; коровам третьей опытной группы (n=10) - композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее из расчета на дозу, мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 7,0; аскорбиновая кислота - 10,5; янтарная кислота - 14,0; лимонная кислота - 3,5; в течение 10-12 дней перед и в течение 10-12 дней после родов. Животные четвертой группы (n=10) препаратов не получали и служили контролем.

Для оценки иммунобиохимического статуса подопытных животных проводились лабораторные исследования крови перед началом опыта - за 15-20 дней до родов и через 10-12 дней после родов. Иммунобиохимический статус оценивали по морфобиохимическим показателям (таблица 1), показателям естественной резистентности (таблица 2) и иммунного статуса (таблица 3).

За животными вели наблюдения, отмечали характер течения предродового, родового и послеродового периодов, проводили клинико-гинекологические обследования коров, учитывали сроки инволюции репродуктивных органов и осеменения. Результаты представлены в таблице 4.

При анализе результатов иммунобиохимических исследований крови (таблицы 1, 2, 3) установлено, что композиционное средство «Био-ФАЯЛ» не оказывало отрицательного влияния на исследуемые показатели. Наиболее физиологичная динамика иммунобиохимических показателей наблюдалась у коров первой и второй опытных групп. Как видно из таблицы 4, у всех коров контрольной группы отмечалась патология родов и послеродового периода. Применение композиционного средства «Био-ФАЯЛ» опытным животным способствовало снижению заболеваемости репродуктивных органов у коров в родовом и послеродовом периодах на 20,0-37,5% в сравнении с контролем, достоверному сокращению сроков инволюции половых органов после родов у коров первой и второй опытной групп на 7,0 и 10,3 дня соответственно в сравнении с контрольной группой, достоверному снижению количества дней бесплодия и продолжительности сервис-периода на 12,6 дня и индекса оплодотворения на 26,6% у коров второй опытной группы. Оплодотворяемость коров в опытных группах по сравнению с контролем была выше на 10,0-18,9%. Проведенные исследования подтвердили обоснованность заявленных доз композиционного средства «Био-ФАЯЛ».

Пример 2. Для обоснования промышленной применимости заявленного способа по принципу пар-аналогов подбирали четыре группы глубокостельных коров за 30 дней до предполагаемого отела: 3 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Коровам опытных групп назначали: первая группа - композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее из расчета на дозу мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 5,0; аскорбиновая кислота - 7,5; янтарная кислота - 10,0; лимонная кислота - 2,5, в течение 12 дней до и 12 дней после родов (перорально), комплексжелеза в дозе 0,2 мл/кг живой массы за 30 и 15 дней до и в день родов (внутримышечно), тетрагидровит в дозе 10 мл/гол. за 30 дней до и в день родов; вторая группа - комплексжелеза в дозе 0,2 мл/кг живой массы за 30 и 15 дней до и в день родов (внутримышечно), тетрагидровит в дозе 10 мл/гол. за 30 дней до и в день родов (внутримышечно); третья группа - композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее из расчета на дозу мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 5,0; аскорбиновая кислота - 7,5; янтарная кислота - 10,0; лимонная кислота - 2,5, в течение 12 дней до и 12 дней после родов (перорально). Коровам контрольной группы препаратов не назначали. Отбор проб крови проводили перед началом опыта - за 30-35 дней до родов и через 10-14 дней после родов. Учет результатов проводили, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 5, 6, 7, 8. Родившихся телят взвешивали в первые сутки после рождения и на 30 день жизни и оценивали их состояние по основным клиническим показателям. Результаты представлены в таблицах 9, 10, 11.

Проведенные исследования показали, что заявленный способ обеспечивал поддержание на оптимальном уровне после родов общих липидов, витамина A (таблица 5) и бактерицидной активности сыворотки крови, повышение лизоцимной активности сыворотки крови - на 17,7% (таблица 6), Ig G - на 25,7%, Ig A - на 40,0%, Ig M - на 52,2% (таблица 7).

Как видно из таблицы 8, заболеваемость коров в первой, второй и третьей опытных группах была ниже, чем в контроле на 55,6; 7,8 и 48,8% соответственно. Более физиологичное течение родового и послеродового периода у животных первой опытной группы обусловливало сокращение сроков инволюции половых органов на 18,7 дней (p≤0,001) по сравнению с 4 днями во второй и 14,6 днями (p≤0,001) в третьей опытных группах, снижение продолжительности бесплодия на 16,6 дня (p≤0,001) по сравнению с 8,5 во второй и 13,7 днями (p≤0,01) в третьей опытных группах и индекса оплодотворения на 25,6% (p≤0,05) по сравнению с 8,4% во второй и 20,0% в третьей опытных группах соответственно по сравнению с контролем. Оплодотворяемость у животных опытных групп находилась на уровне 80,0-88,9%, что на 3,3-22,2% выше, чем в контроле. В первой и третьей опытных группах не было зарегистрировано случаев задержания последа, тогда как во второй опытной и контрольной группах с задержанием последа было 20,0 и 20,2% коров соответственно. Кроме того, у двух коров контрольной группы зафиксировано мертворождение.

Как видно из таблицы 9, на 3-7 день после рождения содержание гемоглобина у телят, полученных от коров первой, второй и третьей опытных групп, превышало показатель контрольной группы на 45,3 (p≤0,001), 44,9 (p≤0,001) и 60,6% (p≤0,001) соответственно. Уровень гемоглобина у телят контрольной группы составил 75,9±1,6 г/л, что значительно ниже физиологической нормы и указывало на состояние гипоксии. Количество эритроцитов у всех подопытных телят соответствовало физиологической норме, при этом у животных первой опытной группы показатель был достоверно выше в сравнении со второй группой на 15,8 (p≤0,05). Уровень глюкозы у всех подопытных телят характеризовался высокими показателями, что соответствовало физиологической норме в ранний постнатальный период (4,0-5,8 ммоль/л), при этом у опытных телят показатели глюкозы превышали таковые контрольных телят. Содержание меди в сыворотке крови телят первой и второй опытных групп превышало значения соответствующего показателя третьей опытной и контрольной групп на 11,4 (p≤0,05) и 8,3% (p≤0,05) и на 14,7 (p≤0,01) и 11,5% (p≤0,05) соответственно. Концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) у всех животных за исключением телят второй опытной группы находилась на уровне 15,7-16,1 ед. У молодняка второй опытной группы исследуемый показатель составил 18,3±0,2 ед., что на 13,7-17,3% (p≤0,001) выше, чем у телят других групп. Наиболее оптимальные показатели ВНСММ отмечены в первой и третьей опытных группах - 15,7±0,2 и 15,6±0,3 ед., что свидетельствовало о снижении уровня эндогенной интоксикации как у коров, так и у полученного от них приплода. Как видно из таблицы 10, бактерицидная активность сыворотки крови у всех подопытных телят была на сравнительно высоком уровне, однако в опытных группах ее показатели были выше контрольной на 3,5-11,2%. Фагоцитарный индекс у телят первой опытной группы превышал значение соответствующего показателя контрольной группы на 22,2% (p≤0,05), а содержание ретинола было выше, чем в контрольной на 28,7% (p≤0,05).

Как видно из таблицы 11, существенной разницы в живой массе новорожденных телят по группам не было, за исключением второй опытной группы, в которой живая масса телят при рождении была выше на 8,8% (p≤0,05) в сравнении с контролем. Через месяц после рождения живая масса телят первой и третьей опытных групп была выше, чем у контрольных животных, на 11,0 (p≤0,01) и 8,0% (p≤0,05) соответственно. Абсолютный среднесуточный прирост живой массы у телят первой и третьей опытных групп составил 413,3 и 400,0 г, что на 26,5 и 22,4% выше, чем в контроле.

Как видно из таблицы 12, заболеваемость телят в первой опытной группе составила 22,2% по сравнению с 50,0% во второй, 30,0% в третьей опытных группах и 71,4% в контроле. У телят первой опытной группы первые признаки желудочно-кишечных заболеваний наблюдались на 7-8 день жизни, а у телят контрольной группы - на 2-3 день после рождения. Заболевание у телят контрольной группы характеризовалось более тяжелым течением. Телята опытных групп (первой и третьей) переболевали преимущественно в легкой форме, лечение осуществляли назначением диеты и выпойкой регидратационных растворов и вяжущих средств. Сохранность в этих группах составила 100%.

Полученные результаты подтвердили, что сочетанное применение композиционного средства «Био-ФАЯЛ», комплексжелеза и тетрагидровита по заявленной схеме способствовало коррекции иммунобиохимического гомеостаза на уровне, обеспечивающем физиологичное течение родов и послеродового периода и получение жизнеспособного приплода с большей энергией роста.

Пример 3. Для определения сравнительной эффективности заявленного и известных способов по принципу пар-аналогов подбирали четыре группы глубокостельных коров за 30 дней до предполагаемых родов: 3 группы опытные, 1 группа контрольная. Коровам опытных групп назначали: первая группа - композиционное средство «Био-ФАЯЛ», содержащее из расчета на дозу мг/кг живой массы: фумаровая кислота - 5,0; аскорбиновая кислота - 7,5; янтарная кислота - 10,0; лимонная кислота - 2,5, в течение 12 дней до и 12 дней после родов (перорально), комплексжелеза в дозе 0,2 мл/кг живой массы за 30 и 15 дней до и в день родов (внутримышечно), тетрагидровит в дозе 10 мл/гол. за 30 дней до и в день родов (заявленный способ); вторая группа - 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл/гол. за 20 дней до родов (внутримышечно), тетравит в дозе 10 мл/гол. двукратно с интервалом 10 дней до и после родов, янтарную кислоту в дозе 1,0 г/гол. и в течение 20 дней до и после родов (перорально) (аналог); третья группа - 0,5% раствора селенита натрия в дозе 10 мл за 20 дней до родов (внутримышечно), тетравит в дозе 10 мл двукратно с интервалом 10 дней до и после родов (внутримышечно) (базовый способ). Коровам контрольной группы препаратов не назначали. Учет результатов, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 13 и 14.

Как видно из таблицы 13, заявленный способ обеспечивал более эффективную коррекцию иммунобиохимического статуса: по всем исследованным показателям отмечено повышение за исключением содержания гемоглобина и уровня фагоцитарной активности нейтрофилов, в то же время эти показатели находились в пределах физиологических норм. Оптимизация обменных процессов, повышение общей естественной резистентности и иммунного статуса у коров способствовали снижению уровня акушерских патологий на 47,8% по сравнению с контролем, на 17,8% по сравнению с базовым способом и на 7,8% по сравнению со способом-аналогом, сокращению сроков бесплодия на 16,6 дня по сравнению с контролем, на 8,1 дня по сравнению с базовым способом и на 2,4 дня по сравнению со способом-аналогом, повышению оплодотворяемости на 28,9% по сравнению с контролем, на 18,9% по сравнению с базовым и со способом-аналогом (таблица 14).

Высокая эффективность способа связана с комбинированным действием и оптимальным подбором дозировок и схем применения композиционного средства «Био-ФАЯЛ» на основе органических кислот, комплекса витаминов в виде препарата тетрагидровит и минерального комплекса в виде комплексжелеза, каждый из которых обладает широким спектром фармакологической активности.

Источники информации, принятые во внимание

1. Березов, Т.Т. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1998. - 704 с.

2. Зинченко Л.И., Погорелова И.Е. Минерально-витаминное питание коров. - Л.: Колос, 1980, 77 с.

3. Патент РФ №2268033 С2, 2006.

4. Патент РФ №2392824 C1, 2010.

5. Патент РФ №2289402 C2, 2006.

6. Патент РФ №2252767 C1, 2005.

7. www/vettorg.net/pharmacy

8. www/vetlek.ru/reestr/item.php