СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТОВ У ТЕЛЯТ

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа коррекции вторичных иммунодефицитов у молодняка сельскохозяйственных животных, преимущественно телят, проявляющихся желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями.

Проблема возникновения, развития и коррекции состояний, сопровождающихся нарушением функционирования иммунной системы организма, является одной из важнейших проблем современности. Интенсивные исследования в области теоретической и клинической иммунологии способствовали выявлению широкого круга заболеваний, обусловленных дисфункцией различных звеньев иммунитета и требующих иммунокорригирующей терапии.

Термином «иммунодефицит» или «иммунодефицитные состояния» обозначают нарушения нормального иммунного статуса, которые обусловлены дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа.

Различают врожденные (первичные) и приобретенные (вторичные) иммунодефициты. Под первичными иммунодефицитами следует понимать врожденную неспособность организма осуществлять ту или иную защитную функцию в общем иммунном процессе. В отличие от первичных иммунодефицитов вторичная иммунная недостаточность не связана с генетическим блоком какого-либо звена иммунитета, а развивается под воздействием самых разнообразных повреждающих факторов. Как показали многочисленные научные исследования, восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием успеха комплексной терапии самых различных патологических состояний. При этом наибольшую эффективность иммунотерапии можно ожидать именно при вторичных или приобретенных иммунодефицитах. С целью коррекции иммунодефицитных состояний создан довольно большой набор лекарственных средств как синтетического, так и природного происхождения, действующих на основные компоненты иммунной системы.

Из биологически активных веществ, разнообразных по своему происхождению, физико-химическим, физиологическим свойствам и влиянию на организм животных, в частности на состояние обмена веществ и на факторы неспецифической резистентности, широкое применение нашли препараты синтетических аминокислот (лизин, метионин, триптофан), жирорастворимые витамины (каротин, A, D, Е, K), водорастворимые витамины (группы B, B₁₂, С, Н, F, U), соли дефицитных микроэлементов /1/. Повышение общей сопротивляемости организма наблюдается под влиянием препаратов на основе растительного сырья: группы адаптогенов (женьшень, элеутерококк, родиола розовая, эхинацея пурпурная, заманиха и др.); группы фитонцидов (лук, чеснок, хрен, почки сосны и др.); группы лекарственных растений, содержащих витамин С (дягиль лекарственный, календула лекарственная, крапива двудомная, мать-и-мачеха, мята перечная, одуванчик лекарственный и др.) /2/. Препараты из растительного сырья являются более предпочтительными, поскольку биохимические процессы, происходящие в растительном и животном организмах, сходны, сходны промежуточные и конечные продукты обмена. Однако большая часть этих препаратов избирательно действует на отдельные показатели иммунитета. Этот недостаток частично устраняется комплексными лекарственными препаратами на основе лекарственных растений, например препаратом растительного происхождения тетраиммунофитом - фито - экстракционным препаратом из травы зверобоя, листа сены, плодов шиповника и корнеплодов свеклы, обладающим иммуностимулирующим действием на гуморальный иммунный ответ /3/, препаратом «Реглидис» (лекарственным сбором, содержащим плоды шиповника, корень и корневище солодки и траву копеечника) /4/ и средством, обладающим иммуностимулирующим действием, представляющим собой водный экстракт из трав зверобоя продырявленного, тимьяна ползучего, мяты перечной и мать-и-мачехи, взятых в равных количествах /5/.

В качестве предпочтительного аналога нами рассматриваются препараты на основе эхинацеи пурпурной /6/.

Эхинацея пурпурная содержит большое количество полисахаридов и фитостеринов, оказывающих стимулирующее действие на иммунную систему. Активными компонентами наземной части растения являются кофейная и феруловая кислоты и их производные (пикориевая кислота, эхинакозид). Полисахарид эхинацин обладает антимикробной, противогрибковой и кортизоноподобной активностью, способствуя повышению резистентности (иммунной защиты) к вирусным и бактериальным агентам и подавлению воспаления. Сесквитерпеновые эфиры обладают иммуностимулирующим действием. Инулин, входящий в состав эхинацеи, повышает активность системы комплемента. Корни и наземная часть растения содержат: бетаин, рутин, фитостерин, флавоноидные гликозиды, насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты. Во всех частях растения содержатся макро- и микроэлементы: железо, цинк, селен, калий, кальций, молибден, серебро, кобальт, никель, барий, берилий, ванадий, марганец.

Изобретение направлено на решение задачи создания простого, легкого, дешевого, физиологичного способа коррекции вторичных иммунодефицитов, обеспечивающего профилактику массовых заболеваний молодняка крупного рогатого скота.

Получение указанного результата достигается использованием в способе коррекции вторичных иммунодефицитов у телят в качестве профилактического фитопрепарата на основе спиртовой настойки, полученной из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5.

Химический состав предлагаемого фитопрепарата представлен комплексом биологически активных веществ, обеспечивающим его высокий фармакотерапевтический эффект /7/.

Доминирующими биологически активными веществами являются: полисахариды, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, тритерпеновые сапонины, витамины, микроэлементы.

Полисахариды оказывают иммунокорригирующее, противовоспалительное и противовирусное действие. Они стимулируют неспецифический иммунитет и фагоцитоз, деятельность макрофагов и нейтрофилов, а также бактерицидную функцию клеток. Кроме того, включают специфическую иммунную защиту, повышая количество Т-лимфоцитов, продукцию цитокинов, а также снижают активность гиалуронидазы, которую вырабатывают бактерии и вирусы. В результате чего сохраняется гиалуроновая кислота - субстанция, которая формируется в тканях между клетками и служит барьером против инфекций /8/.

Флавоноидам присущи гепатопротективные свойства, которые включают холеретические, холатостимулирующие, противовоспалительные и капилляроукрепляющие компоненты, флавоны и халконы обладают бактериостатическим свойством, а также тормозят образование продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, основания Шиффа), обладают способностью нормализовать липидный обмен в печени, в частности его фосфолипидную фракцию 191. Препятствуя накоплению мезофосфатидилхолина, проявляют антифосфолипидную активность. Кроме того, флавоноиды обладают противомикробными, гиполипидемическими, мембраностабилизирующими и антиоксидантными свойствами. Входящий в сбор флавоноид кверцетин обладает свойством блокировать Na+, K+ и митохондриальную (Са2+)- АТФазы и секрецию гистамина тучными клетками. Полагают, что в механизме действия флавоноидов на тучную клетку большое значение имеет их сродство к определенным фосфолипидным компонентам клеточных мембран /10/.

Дубильные вещества (гармала обыкновенная - до 18%, солодка голая - до 9,46%, девясил высокий - 9,3%, эхинацея пурпурная - 9,0%, почки сосны обыкновенной - до 5%), в составе которых преобладают полифенолы, обладают противовоспалительными, противомикробными свойствами, а также оказывают антиоксидантный и антитоксический эффект /9/.

Противовоспалительные и противоаллергические свойства обусловлены наличием тритерпеновых сапонинов: глицирризиновой (ГК) и глицирретиновой кислот. ГК по структуре своего агликона и метаболита - глицирретиновой кислоты имеет сходство со структурой глюкокортикоидных гормонов. Действие последних зависит от наличия группировки и неопределенного кетона, кислородной функции у C₁₁ и - кетольной группы в боковой цепи. Два первых элемента структуры кортикоидных гормонов имеются и у глицирретиновой кислоты /10/.

Высокое содержание аскорбиновой кислоты (эхинацея пурпурная - до 4,0%, солодка голая - 3,0%, почки сосны обыкновенной - 0,3%) стимулирует функцию надпочечников, повышая секрецию кортизола, вызывая противовоспалительный и противоаллергический эффект.

Ионы марганца (содержание марганца, мкг/г: солодка голая - 0,08; гармала обыкновенная - 0,13, почки сосны обыкновенной - 88,0) входят в состав различных ферментных систем, влияют на процессы кроветворения, функцию печеночной клетки, тонус стенок сосудов, желчных ходов, способны предупреждать образование внутрисосудистых тромбов. Органические соли йода (содержание йода, мкг/г: солодка голая - 0,09; почки сосны обыкновенной - 0,15) улучшают ассимиляцию белка, усвоение фосфора, кальция и железа. Микроэлемент цинк (содержание цинка, мкг/г: почки сосны обыкновенной - 31,10, гармала обыкновенная - 0,78, солодка голая - 0,33) участвует в организме в иммунных процессах, селен (содержание селена, мкг/г: солодка голая - 17,1, гармала обыкновенная - 1,0, почки сосны обыкновенной - 0,20) является мощным антиоксидантом, железо (содержание железа, мг/г: эхинацея пурпурная - 0,48, гармала обыкновенная - 0,14, девясил высокий - 0,9, солодка голая - 0,7, почки сосны обыкновенной - 0,04) является основным структурным компонентом гемоглобина крови и гемсодержащих ферментов, его соли нормализуют в организме липидный обмен и оказывают стимулирующее действие на эритропоэз. а также в комплексе с кобальтом (содержание кобальта, мкг/г: солодка голая - 0,03, гармала обыкновенная - 0,4) оказывает стимулирующее влияние на иммуногенез при вирусных инфекциях, медь (содержание меди, мкг/г: почки сосны обыкновенной - 6,08, девясил высокий - 1,1, солодка голая - 0,2, гармала обыкновенная - 0,37) повышает функциональную активность лейкоцитов, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.

Пример получения профилактического средства.

0,45 кг воздушно-сухого сбора измельчают до частиц размером 3 мм. Затем измельченный сбор при помощи сита с диаметром отверстий 0,25 мм освобождают от пыли (частиц менее 0,25 мм) и получают 0,45 кг готового сырья (расходный коэффициент равен 1,03), который помещают в сосуд темного стекла, заливают 4500 мл 70% этилового спирта, выдерживают в темном месте при температуре 18-20°С в течение 7 дней и фильтруют через холст, отжимая сырье. Фитопрепарат применяют в виде 7-8% водного раствора.

По нашим данным, в условиях хозяйств, неблагополучных по болезням телят, у клинически здорового молодняка 3-5-дневного возраста выявляются иммунодефицитные состояния, характеризующиеся снижением относительного содержания В-лимфоцитов на 56%, уровней иммуноглобулинов G и М на 13 и 64% соответственно, функциональной активности нейтрофилов крови (в спонтанном тесте - на 22%, в индуцированном тесте - на 39%), лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови на 28 и 33% соответственно, а у клинически здорового молодняка 20-дневного возраста - иммунодефицитные состояния, характеризующиеся снижением относительного содержания В-лимфоцитов на 69%, популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов на 46% с нарушением их соотношения, уровня иммуноглобулинов G и М на 46 и 44% соответственно, функциональной активности нейтрофилов крови (в спонтанном тесте - на 56%, в индуцированном тесте на 110%), бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 32 и 49% соответственно.

Способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят с применением фитопрепарата на основе спиртовой настойки из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmald), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5, осуществляется следующим образом.

Клинически здоровым телятам применяют внутрь фитопрепарат в дозе 2,0-2,5 мл/кг живой массы в течение 10-15 дней с интервалом в 24 часа.

Клиническую проверку способа коррекции вторичных иммунодефицитов у телят проводили в условиях хозяйства, стационарно неблагополучного по болезням молодняка. Естественную резистентность оценивали по показателям бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой, 1966), лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по методу В.Г.Дорофейчук, 1968) и функциональной активности нейтрофилов крови (определяли в реакции восстановления нитросинего тетразолия по А.Н.Маянскому и др., 1979), иммунный статус - по количеству Т- и В-лимфоцитов (определяли по методу Пирса, 1962) и по содержанию основных классов иммуноглобулинов IgG, IgM (определяли по методу Манчини и др., 1965).

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Изменение иммунобиологических показателей в зависимости от параметров предлагаемого способа (доза фитопрепарата) определяли в эксперименте на клинически здоровых телятах 5-7-дневного возраста. Отобранных методом аналогов телят распределяли на пять групп: четыре группы - опытные, 1 группа - контрольная. Телятам опытных групп применяли внутрь фитопрепарат на основе спиртовой настойки из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5, в виде водного раствора 7% концентрации в течение 15 дней с интервалом в 24 часа в дозах 1,0,1,5, 2,5 и 3,0 мл/кг живой массы. Телята контрольной группы препаратов не получали. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 Влияние фитопрепарата на иммунобиологические показатели и показатели общей неспецифической резистентности в зависимости от дозы   Опыт Контроль n=10   1-я - n=10 2-я - n=10 3-я - n=10 4-я - n=10 Показатели Доза профилактического средства, мл/кг живой массы животного Препаратов не применяли 1,5 2,0 2,5 3,0 Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Функциональная активность нейтрофилов крови, %   - спонтанный тест - индуцированный тест Иммуноглобулины, мг/мл   G М Лизоцимная активность сыворотки крови, % Бактерицидная активность сыворотки крови, %

Примечание: в числителе - показатели до начала опыта, в знаменателе - показатели через 5 дней после окончания опыта

Иммунобиологические показатели свидетельствуют о выраженном иммуностимулирующем влиянии, направленном на коррекцию вторичных иммунодефицитов у телят. Наилучшие показатели получены в группах 2 и 3, что подтверждает обоснованность предложенной дозы. За время эксперимента телята 2,3 и 4 групп были здоровы, в 1-й группе у одного теленка на 4 сутки отмечали клинические признаки расстройства пищеварения, характеризовавшиеся как диспепсия (диарея, feces разжижен, желтоватого цвета, имел кислый запах, содержал пузырьки газа). В контрольной группе желудочно-кишечные болезни выявлены у 4 телят (симптомы: понижение аппетита, угнетение общего состояния, малоподвижность; фекалии при этом водянистые с желтыми комочками, кислого запаха; температура тела в пределах физиологической нормы). На 2 и 3 день болезни - фекалии грязно-желтого цвета, с примесью крови; западение глаз и общая дегидратация организма; диагноз: микстинфекция, обусловленная ассоциацией ротавируса и Е.coli. Заболевание протекало тяжело.

Пример 2. Изменение иммунобиологических показателей в зависимости от параметров предлагаемого способа (длительность применения фитопрепарата) определяли в эксперименте на клинически здоровых телятах 20-30-дневного возраста. Отобранных методом аналогов телят распределяли на пять групп: четыре группы - опытные, 1 группа - контрольная. Телятам опытных групп применяли внутрь фитопрепарат на основе спиртовой настойки из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5, в виде водного раствора 8% концентрации в дозе 2,5 мл/кг живой массы в течение 5,10,15, 20 дней с интервалом в 24 часа. Телята контрольной группы препаратов не получали. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 Влияние фитопрепарата на иммунобиологические показатели и показатели общей неспецифической резистентности в зависимости от длительности его применения   Опыт Контроль n-10 1-я - n=10 2-я - n=10 3-я - n=10 4-я - n-10 Показатели Длительность применения профилактического препарата, дней Препаратов не применяли 5 10 15 20 Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Функциональная активность нейтрофилов крови, %   - спонтанный тест - индуцированный тест Иммуноглобулины, мг/мл   G М Лизоцимная активность сыворотки крови, % Бактерицидная активность сыворотки крови, %

Примечание: в числителе - показатели до начала опыта, в знаменателе - показатели через 5 дней после окончания опыта

Установлено, что телята 2, 3 и 4 групп имели более высокие иммунологические показатели по сравнению с первой и контрольной группами. За время эксперимента телята этих групп оставались здоровыми. В первой группе заболел один теленок, в контрольной - 2 (симптомы: повышение температуры, учащение дыхания, пульса, гиперемия слизистых, серозно-слизистые истечения из носовых отверстий и глаз; диагноз: респираторная патология вирусно-бактериальной этиологии). Продолжительность профилактического курса 10-15 дней достаточна для коррекции иммунодефицитов до уровня физиологической нормы с целью недопущения респираторных патологий.

Пример 3. Динамику изменения иммунобиологических показателей изучали на 2 группах (опытной и контрольной) клинически здоровых телят 3-дневного возраста хозяйства, длительно неблагополучного по болезням молодняка. Телятам опытной группы применяли внутрь профилактический препарат на основе спиртовой настойки из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L.), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala) в виде водного раствора 7% концентрации в дозе 2,5 мл/кг живой массы в течение 15 дней с интервалом в 24 часа. Телята контрольной группы препаратов не получали. Результаты представлены в таблице 3.

При анализе иммунобиологических показателей (таблица 3) подопытных и контрольных телят установили, что в возрасте 3 суток различия практически отсутствовали или были незначительными. У животных опытной группы к 10-дневному возрасту происходило повышение основных показателей клеточного и гуморального иммунитета, которое продолжилось до 30-дневного возраста. Важное практическое значение имело увеличение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови подопытных телят, что свидетельствовало о лучшей усвояемости новорожденными молозивных и более раннем начале синтеза собственных иммуноглобулинов.

Таблица 3 Возрастная динамика изменения иммунобиологических показателей у клинически здоровых телят Показатели Возраст, сут 3 10 20 30 Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Бактерицидная активность, % Лизоцимная активность, % Иммуноглобулины, мг/мл   G М

Примечание: в числителе - показатели подопытных животных, в знаменателе - контрольных

Пример 4. Динамику изменения иммунобиологических показателей изучали на 2 группах (опытной и контрольной) клинически здоровых телят 20-дненого возраста хозяйства, длительно неблагополучного по болезням молодняка. Телятам опытной группы применяли внутрь фитопрепарат на основе спиртовой настойки из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L.), почек сосны обыкновенной (Pínus sylvéstris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5, в виде водного раствора 8% концентрации в течение 15 дней с интервалом в 24 часа в дозе 2,5 мл/кг живой массы. Телята контрольной группы препаратов не получали. Результаты представлены в таблице 4.

Таблица 4 Возрастная динамика изменения иммунобиологических показателей у клинически здоровых телят Показатели Возраст, сут 20 30 35 40 Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Функциональная активность нейтрофилов крови, %   спонтанный тест индуцированный тест Бактерицидная активность, % Лизоцимная активность, % Иммуноглобулины, %   IgG IgM

Примечание: в числителе - показатели опытных, в знаменателе - показатели контрольных животных

Как видно из таблицы 4, у животных опытной группы к 30-дневному возрасту происходило повышение основных показателей клеточного и гуморального иммунитета, которое продолжилось до 35-дневного возраста. Важное практическое значение имело увеличение относительно фоновых показателей количества Т- и В-лимфоцитов крови на 36 и 49% соответственно и иммуноглобулинов в сыворотке крови IgG- на 25 и IgM на 13% соответственно, лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови на 35 и 23% соответственно. У телят контрольной группы изменения этих показателей были недостоверными.

Проведенные исследования подтвердили, что применение фитопрепарата на основе спиртовой настойки из травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L), почек сосны обыкновенной (Pinus sylvestris), корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium), корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и травы гармалы обыкновенной (Peganum harmala), взятых в соотношении 1:1:1:1:0,5, в экспериментально обоснованной дозе при экспериментально обоснованной кратности и длительности оказывало благоприятное воздействие на все органы и системы организма животных, обеспечивая коррекцию вторичных иммунодефицитов до уровня физиологической нормы. Основные свойства препарата: естественное происхождение, способность легко метаболизироваться и выводиться из организма, высокая совместимость с другими лекарственными средствами, отсутствие сенсибилизации и индуцирования иммунопатологических реакций.

Источники информации

1. Субботин В.М., Субботина С.Г., Александров И.Д. Современные лекарственные средства в ветеринарии. Ростов-на-Дону: Феникс, 2001. 600 с.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Вильнюс, 1994. - 2 т.

3. Л.А.Маладзе // Ветеринария. - 1999 - №3.

4. RU 2029557 C1, 1995.

5. RU 22501101 C1, 2005.

6. Bauer R., Wagner H. Echinacea species as potential immunostimulator drugs. In: Wagner H., Famsworth N.R. (eds.), economic and Medicinal Plant Research. Vol.5 New York: Akademic Press, 1991, p.253-351).

7. Бакуридзе А.Д., Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы растительного происхождения (обзор) // Хим.-фармацевт. журнал. - М., 1993. - 8. - С.43-47.

8. Самородов В.H., Поспелов С.В., Моисеева Г.Ф. и др. Фитохимический состав представителей рода эхинацея (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Хим.-фармацевт. журнал. - М., 1996. - 4. - С.32-37.

9. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. - М., 1990. - 464 с.

10. Оболенцева Г.В., Литвиненко В.И., Аммосов А.С. и др. Фармакологические и терапевтические свойства препаратов солодки (обзор) // Хим.-фармацевт. журнал. - М., 1999. - 8. - С.24-28.