СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 3-МЕТОКСИГИДРОКСИБЕНЗОЛА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии, а именно к способам определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораторий. Способ относится к числу массовых.

Известен способ определения фенольных соединений, в том числе 3-метоксигидроксибензола, в биологическом материале (сухом растительном сырье), состоящий в том, что биологический объект измельчают, неоднократно (четырежды), каждый раз в течение получаса, обрабатывают 70%-ным этанолом в условиях нагревания при 60-70°C с обратным холодильником, отдельные извлечения отделяют, объединяют, фильтруют, растворитель из фильтрата испаряют при температуре 50°C до получения сухого остатка, остаток растворяют в 70%-ном этаноле, образующийся раствор фильтруют и проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом с применением капиллярной колонки длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм с неподвижной фазой (5%-фенил)-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 1 мл/мин, и масс-селективный детектор, начальная температура термостата колонки составляет 50°C, данная температура выдерживается в течение 1 минуты, в дальнейшем температура программируется от 50°C до 280°C со скоростью 5°C в минуту, температура испарителя составляет 250°C [Грибок Н.А., Спиридович Е.В., Решетников В.Н, Власова Т.М., Сенькевич Г.Г., Курченко В.П. Содержание вторичных метаболитов у Colchicum autumnale L. в условиях Беларуси // Труды Белорусского государственного университета. - 2010. - Т.4.- Вып.2. - С.1-9].

Способ характеризуется недостаточно высокой чувствительностью.

Известен способ определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале (тканях печени и почек), который заключается в том, что биологический объект двукратно по 45 минут обрабатывают этилацетатом при массовом соотношении этилацетата и биоматериала при каждом настаивании 2:1, этилацетатные извлечения объединяют, растворитель из объединенного этилацетатного извлечения испаряют, остаток растворяют в ацетоне, полученный раствор наносят на хроматографическую пластину типа «Сорбфил» с люминесцентным индикатором, хроматографируют в присутствии вещества-свидетеля, используя подвижную фазу бензол-дихлорэтан в соотношении 8:2 по объему, хроматограммы проявляют в УФ-свете, анализируемое вещество элюируют из сорбента этанолом и измеряют оптическую плотность этанольного элюата при длине волны 277,7 нм на фоне раствора, полученного в контрольном опыте [Асташкина А.П., Шорманов В.К., Гришечко О.И. Определение 3-метоксигидроксибензола в биологических объектах методом электронной спектрофотометрии // Биомедицинская инженерия и биотехнология: Сборник материалов V Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Курск, 2012. - С.61-63].

Способ характеризуется относительно низкой чувствительностью.

Наиболее близким является способ определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале, заключающийся в том, что биологический объект неоднократно (дважды) по 45 минут обрабатывают алкилацетатом, в качестве которого используется этилацетат, отдельные извлечения объединяют, растворитель из объединенного алкилацетатного извлечения испаряют, остаток растворяют в смеси растворителей гексан-диоксан-пропанол-2, взятых в соотношении 20:5:1 по объему, хроматографируют в макроколонке силикагеля L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 18-22°C, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в дихлорметане и проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом с применением капиллярной колонки длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой (5%-фенил)-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, температура инжектора составляет 250°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество 3-метоксигидроксибензола исходя из площади хроматографического пика, полученного регистрацией сигнала по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z (Асташкина А.П., Шорманов В.К., Останин М.А., Гришечко О.И., Елизарова М.К. Распределение метоксипроизводных гидроксибензола в организме теплокровных животных // Фармация. - 2013. - Т.62, №5. - С.5-8).

Способ характеризуется недостаточно высокой чувствительностью определения.

Техническим результатом настоящего изобретения является повышение чувствительности определения.

Технический результат достигается тем, что биологический объект неоднократно (трижды) по 45 минут обрабатывают алкилацетатом, в качестве которого используется метилацетат, отдельные извлечения объединяют, растворитель из объединенного алкилацетатного извлечения испаряют, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, ацетоновые извлечения объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°C, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в эфире, полученный раствор разбавляют гексаном в соотношении 1:1 по объему, экстрагируют буферным раствором с pH 12-13, водно-щелочное извлечение отделяют, подкисляют до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия, экстрагируют диэтиловым эфиром, эфирное извлечение отделяют, обезвоживают, упаривают в токе воздуха при 18-22°C, а затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в смеси растворителей гексан-диоксан-пропанол-2, взятых в соотношении 20:5:1 по объему, хроматографируют в макроколонке силикагеля L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 18-22°С, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в дихлорметане и проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом с применением капиллярной колонки длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой (5%-фенил)-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, температура инжектора составляет 250°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество 3-метоксигидроксибензола исходя из площади хроматографического пика, полученного регистрацией сигнала по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z.

Способ осуществляется следующим образом: биологический материал, содержащий 3-метоксигидроксибензол, неоднократно (трижды) по 45 минут обрабатывают алкилацетатом, в качестве которого используется метилацетат, отдельные извлечения объединяют, растворитель из объединенного алкилацетатного извлечения испаряют, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, ацетоновые извлечения объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°C, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в эфире, полученный раствор разбавляют гексаном в соотношении 1:1 по объему, экстрагируют буферным раствором с pH 12-13, водно-щелочное извлечение отделяют, подкисляют до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия, экстрагируют диэтиловым эфиром, эфирное извлечение отделяют, обезвоживают, упаривают в токе воздуха при 18-22°C, а затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в смеси растворителей гексан-диоксан-пропанол-2, взятых в соотношении 20:5:1 по объему, хроматографируют в макроколонке силикагеля L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 18-22°C, затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в дихлорметане и проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом с применением капиллярной колонки длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой (5%-фенил)-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, температура инжектора составляет 250°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество 3-метоксигидроксибензола исходя из площади хроматографического пика, полученного регистрацией сигнала по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

Определение 3-метоксигидроксибензола в ткани печени

К 10 г ткани печени прибавляют 10 мг 3-метоксигидроксибензола, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на 1,5 часа при температуре 18-22°C.

По истечении указанного времени биологический объект неоднократно (трижды) по 45 минут при перемешивании обрабатывают алкилацетатом, в качестве которого используется метилацетат, порциями по 20 мл каждая.

Отдельные алкилацетатные извлечения отделяют от твердых частиц биологического материала, объединяют, растворитель из объединенного алкилацетатного извлечения испаряют в токе воздуха при 18-22°C, остаток неоднократно (трижды) по 3 минуты обрабатывают порциями ацетона по 15 мл каждая при энергичном перемешивании, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, встряхивают с 7 г безводного сульфата натрия, фильтруют через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, сульфат натрия и фильтр дополнительно промывают 20 мл ацетона, фильтрат и промывную жидкость объединяют, упаривают в токе воздуха при 18-22°C до объема 0,5-1,0 мл, а затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл диэтилового эфира, полученный раствор разбавляют гексаном в соотношении 1:1 по объему, прибавляя 10 мл данного растворителя, экстрагируют дважды порциями буферного раствора с pH 12-13 по 20 мл каждая. Отдельные водно-щелочные извлечения отделяют, объединяют, объединенное водно-щелочное извлечение подкисляют 24%-ным раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия и экстрагируют дважды порциями диэтилового эфира по 50 мл каждая. Эфирные извлечения отделяют, объединяют, обезвоживают, пропуская через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, фильтр дополнительно промывают 20 мл диэтилового эфира. Отдельные фильтраты объединяют, упаривают в токе воздуха при 18-22°C до объема 0,5-1,0 мл, а затем в токе азота до полного удаления растворителя. Остаток растворяют в 2-3 мл смеси растворителей гексан-диоксан-пропанол-2, взятых в соотношении 20:5:1 по объему, и вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×11 мм, заполненную 10 г силикагеля L 40/100 мкм. Хроматографируют, используя подвижную фазу гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему.

Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая. Фракции элюата с 7 по 16 включительно, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют при 18-22°C в токе воздуха до объема 0,5-1 мл, а затем - в токе азота до полного удаления растворителя. Остаток растворяют в 10 мл дихлорметана (раствор А). 2,0 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят дихлорметаном до метки (раствор Б).

4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой толщиной 0,33 мкм, представляющей собой (5%-фенил)-метилполисилоксан.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 10 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя - 150°C, температура источника ионов - 230°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

В масс-спектре данного соединения, снятому по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 40, 53, 63, 66, 69, 81, 94, 124. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 124, интенсивность которой принимается за 100%.

Регистрируя сигнал по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z, получают хроматограмму анализируемого вещества. Пик на хроматограмме с временем удерживания 8,69 минут соответствует 3-метоксигидроксибензолу. 3-метоксигидроксибензол идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре. Количество 3-метоксигидроксибензола вычисляют по площади хроматографического пика, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

В ряд мерных колб вместимостью 25 мл вносят 0,25, 0,5, 1,0, 2,0, 5,0 10,0 и 20,0 мл 0,05% раствора 3-метоксигидроксибензола в дихлорметане и доводят объем содержимого каждой колбы до метки дихлорметаном.

4 мкл каждого из полученных растворов вводят в испаритель газожидкостного хроматографа.

Проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой толщиной 0,33 мкм, представляющей собой (5%-фенил)-метилполисилоксан.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 10 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя - 150°C, температура источника ионов - 230°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

Регистрируя сигнал по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z, получают хроматограмму анализируемого вещества и вычисляют площадь хроматографического пика, соответствующего 3-метоксигидроксибензолу. По результатам измерений на хромато-масс-спектрометре строят график зависимости площади пика от концентрации определяемого вещества. График линеен в интервале концентраций 1·10^-8 г.

Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение градуировочного графика, которое в данном случае имеет вид:

S=22229·С-1204,

где S - площадь хроматографического пика; С - концентрация определяемого вещества в хроматографируемой пробе, нг.

Результаты количественного определения 3-метоксигидроксибензола в ткани печени представлены в таблице 1.

Пример 2

Определение 3-метоксигидроксибензола в ткани легких

К 10 г ткани легких прибавляют 10 мг 3-метоксигидроксибензола, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на 1,5 часа при температуре 18-22°C.

По истечении указанного времени биологический объект неоднократно (трижды) по 45 минут при перемешивании обрабатывают алкилацетатом, в качестве которого используется метилацетат, порциями по 20 мл каждая.

Отдельные алкилацетатные извлечения отделяют от твердых частиц биологического материала, объединяют, растворитель из объединенного алкилацетатного извлечения испаряют в токе воздуха при 18-22°C, остаток неоднократно (трижды) по 3 минуты обрабатывают порциями ацетона по 15 мл каждая при энергичном перемешивании, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, встряхивают с 7 г безводного сульфата натрия, фильтруют через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, сульфат натрия и фильтр дополнительно промывают 20 мл ацетона, фильтрат и промывную жидкость объединяют, упаривают в токе воздуха при 18-22°C до объема 0,5-1,0 мл, а затем в токе азота до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл диэтилового эфира, полученный раствор разбавляют гексаном в соотношении 1:1 по объему, прибавляя 10 мл данного растворителя, экстрагируют дважды порциями буферного раствора с pH 12-13 по 20 мл каждая. Отдельные водно-щелочные извлечения отделяют, объединяют, объединенное водно-щелочное извлечение подкисляют 24%-ным раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия и экстрагируют дважды порциями диэтилового эфира по 50 мл каждая. Эфирные извлечения отделяют, объединяют, обезвоживают, пропуская через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, фильтр дополнительно промывают 20 мл диэтилового эфира. Отдельные фильтраты объединяют, упаривают в токе воздуха при 18-22°C до объема 0,5-1,0 мл, а затем в токе азота до полного удаления растворителя. Остаток растворяют в 2-3 мл смеси растворителей гексан-диоксан-пропанол-2, взятых в соотношении 20:5:1 по объему, и вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×1 мм, заполненную 10 г силикагеля L 40/100 мкм. Хроматографируют, используя подвижную фазу гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему.

Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая. Фракции элюата с 7 по 16 включительно, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют при 18-22°C в токе воздуха до объема 0,5-1 мл, а затем - в токе азота до полного удаления растворителя. Остаток растворяют в 10 мл дихлорметана (раствор А). 2,0 мл раствора A вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят дихлорметаном до метки (раствор Б).

4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой толщиной 0,33 мкм, представляющей собой (5%-фенил)-метилполисилоксан.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 10 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя - 150°C, температура источника ионов - 230°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

В масс-спектре данного соединения, снятому по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 40, 53, 63, 66, 69, 81, 94, 124. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 124, интенсивность которой принимается за 100%.

Регистрируя сигнал по характеристическому молекулярному иону 124 m/Z, получают хроматограмму анализируемого вещества. Пик на хроматограмме с временем удерживания 8,69 минут соответствует 3-метоксигидроксибензолу. 3-метоксигидроксибензол идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре. Количество 3-метоксигидроксибензола вычисляют по площади хроматографического пика, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

Построение градуировочного графика и его уравнение приводятся в примере 1.

Результаты количественного определения 3-метоксигидроксибензола в ткани легких представлены в таблице 2.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом в 2 раза повышает чувствительность определения в биологическом материале и увеличивает степень извлечения приблизительно на 7%.

Сравнительные характеристики предлагаемого и известного способов представлены в таблице 3.

Таблица 1 Результаты определения 3-метоксигидроксибензола в ткани печени (n=5; Р=0,95) № Внесено3-метоксигидроксибензола, мг в 10 г ткани печени Найдено Метрологические характеристики, % площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески 1 10,0 3137531 1,4120·10-4 8,825 88,25 2 10,0 3017272 1,3579·10-4 8,487 84,87 S=4,24 3 10,0 3238228 1,4573·10-4 9,108 91,08 4 10,0 3326700 1,4971·10-4 93,57 93,57 5 10,0 3400278 1,5302·10-4 9,564 95,64 ε=5,85 Таблица 2 Результаты определения 3-метоксигидроксибензола в ткани легких (n=5; P=0,95) № Внесено 3-метоксигидроксибензола, мг в 10 г ткани легких Найдено Метрологические характеристики, % площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески 1 10,0 3251343 1,4632·10-4 9,145 91,45 2 10,0 3138865 1,4126·10-4 8,829 88,29 S=3,96 3 10,0 3420951 1,5395·10-4 9,622 96,22 4 10,0 3353819 1,5093·10-4 9,433 94,33 5 10,0 3085293 1,3885·10-4 8,678 86,78 ε=5,39