×
20.02.2014
216.012.a34c

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α и при выявлении генотипов -308 АА или -308 GA TNFα прогнозируют риск позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. 2 ил., 1 табл., 1 пр.
Основные результаты: Способ прогнозирования течения острого панкреатита, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, отличающийся тем, что проводят анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α и прогнозируют риск позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита в случае выявления генотипов -308 АА или -308 GA TNFα.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита.

Проблема острого панкреатита является одной из актуальнейших в экстренной хирургии. Это связано не только с тем, что заболевание очень распространено, но и с тем, что оно сложно в прогнозе и в диагностике. Острый деструктивный панкреатит - первично асептический некроз поджелудочной железы с последующей воспалительной реакцией на очаги сформировавшегося некроза. Данное заболевание имеет фазовое течение: I фаза - ферментативная; II фаза - реактивная; III фаза - секвестрации и расплавления омертвевших участков. Важным прогностическим фактором течения острого панкреатита является продолжительность ферментативной фазы и соответственно срок наступления реактивной фазы. Во время первой фазы реализуется основная патологическая «программа» - формирование панкреонекроза и развитие эндотоксикоза, полиорганной недостаточности и эндотоксинового шока.

Считается, что при длительном течении ферментативной фазы и более позднем наступлении реактивной фазы происходит гиперпродукция провоспалительных цитокинов, истощение функциональных резервов организма, что обусловливает нарастание полиорганной недостаточности, развитие выраженного иммунодефицита и в последующем более тяжелое течение острого панкреатита.

Известен патент №2310848 (С1) по заявке РФ 2006112086/15, 20.11.2007 «Способ прогнозирования риска возникновения, клинического течения и исхода острого идиопатического панкреатита» (ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"), предложен способ прогнозирования риска возникновения, клинического течения и исхода острого идиопатического панкреатита путем выделения ДНК из периферической венозной крови больного, типирования полиморфизма ДНК лимфоцитов для дальнейшего исследования мутаций генов SPINK1, GSTM1, GSTT1, PRSS1 и CFTR. При обнаружении гетерозиготных мутаций в генах SPINK1, PRSS1 и CFTR прогнозируют развитие деструктивной формы идиопатического панкреатита, при обнаружении сочетания не менее чем двух мутировавших генов из SPINK1, GSTM1, GSTT1, PRSS1 и CFTR у гетерозиготных носителей или гомозиготных носителей по мутации N348 гена SPINK1 в сочетании с гетерозиготной мутацией R122H гена PRSS1 прогнозируют формирование панкреонекроза тяжелой степени. Преимущество изобретения в том, что оно позволяет выделить группу больных с высоким риском развития деструктивных осложнений и обоснованно рекомендовать им проведение полномасштабной специализированной интенсивной терапии на ранних сроках, тем самым снизить или полностью исключить летальность у больных.

Недостаток прототипа заключается в том, что данный метод не позволяет прогнозировать сроки наступления реактивной фазы при остром панкреатите.

Известно, что значимое влияние на течение 1 и 2 фаз острого деструктивного панкреатита оказывает фактор некроза опухоли α - TNFα, который обладает провоспалительным эффектом и усиливает TNF-зависимый апоптоз [2, 3].

Фактор некроза опухоли α-гликопротеин с молекулярной массой 17 кДа является продуктом моноцитов/макрофагов, эндотелиальных, тучных и миелоидных клеток, клеток нейроглии, в особых случаях - активированных Т-лимфоцитов. Ген TNFα расположен на шестой хромосоме человека (6р21.3) в локусе, кодирующем молекулы главного комплекса гистосовместимости первого (HLA-A, В, С) и второго классов (HLA-DP, DQ, DR), между генами Ltα и Ltβ [4].

Существует три основных направления действия TNFα: цитотоксическое, направленное на клетки опухоли; иммуномодулирующее и провоспалительное, вызываемое активацией макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов и эндотелиальных клеток; влияние на метаболизм. TNFα активно участвует в процессе быстрого увеличения размеров клетки и инициации апоптоза. Помимо прямого провоспалительного действия TNFα обладает широким спектром иммунорегуляторных эффектов и участвует в регуляции обменных процессов [5].

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов прогнозирования течения острого панкреатита по данным о генетическом полиморфизме - 308 G/A TNFα.

Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования течения острого панкреатита, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови; анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α; прогнозирование позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита в случае выявления генотипов -308 АА или -308 GA.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита по данным полиморфизма - 308 G/A TNFα.

Способ осуществляют следующим образом:

ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови больных острым панкреатитом в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (рН 7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН 8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С.

Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров (таблица 1).

Изучение полиморфного локуса фактора некроза опухоли α проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на амплификаторе IQ5 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов (табл.1) с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей.

Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (рН 8,8), 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы.

После денатурации (5 мин при 95°С) выполняли 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров - 1 мин при 52°С; денатурация - 15 сек при 95°С.

Таблица 1
Структура праймеров и зондов, используемых для генотипирования исследуемого ДНК-маркера
Ген Полиморфизм и его локализация в гене Структура праймеров Литература
F: 5--GAAATGGAGGCAATAGGTTTTGAG-3'
TNFα -308G/A (промотор) R: 5'-GGCCACTGACTGATTTGTGTGTAG-3' (Т.Kim, 2003)
5'-FAM-CCGTCCTCATGCC-RTQ1-3'
5'-ROX-CCGTCCCCATGCC-RTQ1-3'

Изобретение характеризуется следующими графическими материалами:

На Фиг.1 представлена дискриминация аллелей по локусу - 308 G/A TNFα, где • - гомозиготы -308АА, ■ - гомозиготы -308GG, ▲ - гетерозиготы -308GA. Дискриминация аллелей осуществляется методом Tag Man зондов по данным величин RFU, где RFU - это уровень относительной флуоресценции (УОФ) каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю G, зонд с красителем FAM - аллелю А.

На Фиг.2 представлены сроки наступления реактивной фазы острого панкреатита в зависимости от генотипов локуса -308 G/A TNFα.

На фиг.1 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием УОФ для одного флуорофора на оси х относительно УОФ для другого флуорофора на оси у на диаграмме дискриминации аллелей.

Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (GA). Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю G (УОФ аллеля G отложены по оси у). Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю А (УОФ аллеля А отложены по оси х). Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно (в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль).

Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0». Ассоциации аллелей и генотипов изученного ДНК-маркера со сроками наступления реактивной фазы острого панкреатита оценивали с помощью непараметрического метода - критерия Манна-Уитни. Для описания рассматриваемых количественных показателей применяли медиану (Me) и интерквартильный размах (Q25-Q75) [7].

Возможность использования предложенного способа для прогнозирования течения острого панкреатита подтверждает анализ результатов наблюдений 195 больных острым панкреатитом. Пациенты включались в соответствующую группу больных только после установления диагноза заболевания, подтвержденного с помощью клинических и лабораторно-инструментальных методов обследования.

В исследуемую группу включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой.

Получено, что у индивидуумов, имеющих генотипы -308 АА и -308 GA TNFα, реактивная фаза острого панкреатита наступала через 6 дней (нижний квартиль 5 дней; верхний квартиль 7 дней), а у пациентов с генотипом -308 GG TNFα этот показатель составил 5 дней (интерквартильный размах 4,00-6,00 дней, р=0,03) (фиг.2).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о важной патогенетической роли молекулярно-генетического маркера -308 G/A фактора некроза опухоли α в развитии острого панкреатита. Маркерами более позднего наступления 2 фазы острого панкреатита являются генотипы -308 АА и -308 GA TNFα.

Больным с острым панкреатитом при выявлении генетических факторов более позднего наступления реактивной фазы, которыми являются -308 АА или -308 GA TNFα, следует в полном объеме проводить комплекс лечебных мероприятий (медикаментозных, элементов «малой» хирургии, экстракорпоральной детоксикации), направленных на сокращение сроков ферментативной фазы, что может улучшить результаты лечения острого панкреатита.

Литература

1. Кузнецов, Н.А., Родоман, Г.В., Бронтвейн, А.Г. Лечение больных панкреонекрозом // Хирургия. 2004. №12. С.22-27.

2. Глотов О.С., Баранов B.C. Генетический полиморфизм, мультифакториальные болезни и долголетие // Медицинская генетика-2007. - т.6, №4(58) - С.17-29.

3. Сотниченко, Б.А., Салиенко, С.В., Маркелова, Е.В. Деструктивный панкреатит: профилактика и лечение гнойно-септических осложнений // Анналы хирургической гепатологии. 2006. Т.11 №1. С.67-71.

4. Царегородцева Т.М. Цитокины при гастроэнтерологической патологии // Медицинская газета. - 2005. - №63. - С.17-24.

5. Баранов B.C. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину) / B.C.Баранов, Е.В.Баранова, Т.Е.Иващенко // СПБ: «Интермедика», 2000 - 272 с.

6. Polymorphisms of tumor necrosis factor (TNF) α and β genes in Korean patients with psoriasis / T.Kim [et al.] // Arch. Dermatol. Res. - 2003. - V.295. - P.8-13.

7. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA [Текст] / О.Ю.Реброва. - М.: Медиасфера, 2006. - 305 с.

Способ прогнозирования течения острого панкреатита, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, отличающийся тем, что проводят анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α и прогнозируют риск позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита в случае выявления генотипов -308 АА или -308 GA TNFα.
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 54.
20.01.2013
№216.012.1daa

Способ оценки эффективности терапии у больных хроническим гломерулонефритом

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и молекулярной диагностике, и касается способа оценки эффективности терапии циклофосфамидом у больных хроническим гломерулонефритом. Отбирают венозную кровь, выделяют ДНК и выявляют носительство аллелей локуса +1931 А/Т MIP-1β. В случае...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002473088
Дата охранного документа: 20.01.2013
27.01.2013
№216.012.20db

Способ прогнозирования уровня артериального давления у беременных в зависимости от генетического полиморфизма эндотелина 1

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования уровня артериального давления у беременных, включающий выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови и анализ полиморфизма K198N гена эндотелина 1 (ЕТ-1) методом полимеразной цепной реакции. В случае...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002473912
Дата охранного документа: 27.01.2013
20.03.2013
№216.012.3026

Способ ранней диагностики послеродового эндометрита

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ ранней диагностики послеродового эндометрита, включающий выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала у женщин на поздних сроках беременности или на 3-4 сутки после родов, проведение обратной транскрипции с получением кДНК...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477861
Дата охранного документа: 20.03.2013
27.04.2013
№216.012.3b62

Способ прогнозирования риска развития доброкачественной дисплазии молочной железы у женщин с генитальным эндометриозом

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям, и описывает способ прогнозирования риска развития доброкачественной дисплазии молочной железы у женщин с генитальным эндометриозом, включающий выделение ДНК из периферической венозной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480763
Дата охранного документа: 27.04.2013
10.11.2013
№216.012.7f80

Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизма -590С/Т гена интерлейкина 4, -174G/C гена интерлейкина 6 и выявление наличия...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002498313
Дата охранного документа: 10.11.2013
20.02.2014
№216.012.a34d

Способ прогнозирования риска развития диабетической ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2 типа

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма -308G/A гена фактора некроза опухоли α и при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002507520
Дата охранного документа: 20.02.2014
27.02.2014
№216.012.a74c

Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течении хронического лимфолейкоза

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течение хронического лимфолейкоза. Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течение хронического лимфолейкоза включает выделение ДНК из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508543
Дата охранного документа: 27.02.2014
27.02.2014
№216.012.a752

Способ прогнозирования сроков формирования абсцесса при остром панкреатите

Изобретение относится к области медицинской диагностики и может быть использовано для прогнозирования сроков формирования абсцесса в фазу секвестрации острого панкреатита и, как следствие, неблагоприятного течения заболевания. Способ прогнозирования сроков формирования абсцесса в фазу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508549
Дата охранного документа: 27.02.2014
27.06.2014
№216.012.d880

Способ прогнозирования риска развития сахарного диабета второго типа у больных гипертонической болезнью

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития сахарного диабета второго типа у уроженцев Центрального Черноземья, больных гипертонической болезнью. Осуществляют выделение ДНК и проводят анализ полиморфного варианта гена лимфотоксина α (+250G/A Ltα)....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002521202
Дата охранного документа: 27.06.2014
20.11.2014
№216.013.075d

Способ прогнозирования течения и эффективности терапии сахарного диабета 2 типа

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования течения и эффективности терапии сахарного диабета 2-го типа у индивидуумов русской национальности. После выделения ДНК из периферической венозной крови проводят анализ полиморфного варианта +250A/G гена лимфотоксина α...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002533286
Дата охранного документа: 20.11.2014
Показаны записи 1-10 из 46.
20.01.2013
№216.012.1b22

Способ определения плотности биологических тканей

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии. Проводят стандартную процедуру компьютерной томографии. Определяют минимальное и максимальное значение плотности биологической ткани в единицах Хауисфилда. Принимают решение о возможности проведения операции по установке имплантатов при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002472440
Дата охранного документа: 20.01.2013
20.01.2013
№216.012.1daa

Способ оценки эффективности терапии у больных хроническим гломерулонефритом

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и молекулярной диагностике, и касается способа оценки эффективности терапии циклофосфамидом у больных хроническим гломерулонефритом. Отбирают венозную кровь, выделяют ДНК и выявляют носительство аллелей локуса +1931 А/Т MIP-1β. В случае...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002473088
Дата охранного документа: 20.01.2013
20.03.2013
№216.012.3026

Способ ранней диагностики послеродового эндометрита

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ ранней диагностики послеродового эндометрита, включающий выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала у женщин на поздних сроках беременности или на 3-4 сутки после родов, проведение обратной транскрипции с получением кДНК...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477861
Дата охранного документа: 20.03.2013
27.04.2013
№216.012.3b62

Способ прогнозирования риска развития доброкачественной дисплазии молочной железы у женщин с генитальным эндометриозом

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям, и описывает способ прогнозирования риска развития доброкачественной дисплазии молочной железы у женщин с генитальным эндометриозом, включающий выделение ДНК из периферической венозной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480763
Дата охранного документа: 27.04.2013
20.05.2013
№216.012.40f3

Способ деформационно-термической обработки аустенитных нержавеющих сталей

Изобретение относится к области металлургии, преимущественно к области деформационно-термической обработки аустенитных нержавеющих сталей. Для получения нанокристаллической и субмикрокристаллической структуры аустенитной стали и повышения ее прочностных свойств при комнатной температуре...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482197
Дата охранного документа: 20.05.2013
27.07.2013
№216.012.59e8

Способ получения заготовок сталей аустенитного класса с нанокристаллической структурой

Изобретение относится к области металлургии, преимущественно к обработке металлов давлением, а именно к технологии получения заготовок сталей аустенитного класса с нанокристаллической структурой, и может быть применено при изготовлении сосудов высокого давления для теплоэнергетики и химической...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488637
Дата охранного документа: 27.07.2013
27.08.2013
№216.012.6410

Способ изготовления заготовок керамических изделий

Изобретение относится к области получения материалов на основе диоксида циркония, стабилизированного оксидом иттрия, и может быть использовано для изготовления композиционных керамических изделий, применяемых в электротехнике, машиностроении, химической, металлургической и других отраслях...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491253
Дата охранного документа: 27.08.2013
27.10.2013
№216.012.781b

Способ формирования многомерного образа состояния сердечно-сосудистой системы и его визуализации

Изобретение относится к медицине. При осуществлении способа измеряют и фиксируют текущие значения каждого из показателей клинических данных, характеризующих текущее состояние сердечно-сосудистой системы. Преобразовывают результаты оценки значений показателей клинических данных. Фиксируют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496409
Дата охранного документа: 27.10.2013
27.10.2013
№216.012.783d

Способ и устройство для определения влияния герметиков на адгезионную прочность в соединении стоматологических материалов с тканями зуба

Группа изобретений относится к медицине, а именно к стоматологии, и предназначено для определения силы адгезии стоматологических материалов к твердым тканям зуба. Осуществляют подготовку образца зуба путем просверливания в корне зуба сквозного отверстия, через которое протягивают...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496443
Дата охранного документа: 27.10.2013
10.11.2013
№216.012.7f80

Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизма -590С/Т гена интерлейкина 4, -174G/C гена интерлейкина 6 и выявление наличия...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002498313
Дата охранного документа: 10.11.2013
+ добавить свой РИД