Результат интеллектуальной деятельности: Способ морфометрической оценки прогноза течения диффузной В-крупноклеточной лимфомы по содержанию STAT3+ клеток в опухолевой ткани

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Предложенный способ позволяет прогнозировать течение диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДВККЛ) после биопсии мягко-тканного образования путем проведения иммуногистохимического окрашивания злокачественных клеток в гистологических срезах опухолевой ткани и морфометрической оценки содержания STAT3 позитивных клеток.

ДВККЛ является самым частым вариантом злокачественных лимфом у взрослых. Она составляет 25-30% всех неходжкинских лимфом в европейских странах и встречается с еще большей частотой - в восточных (Sehn L.H. Diffuse large B-cell lymphoma: optimizing outcome in the context of clinical and biologic heterogeneity / Sehn L.H., Randy D. Gascone // Blood. - 2015. - Vol. 125 (1).- p. 22-32; World Health Organization, Diffuse large B-cell lymphoma, not otherwise specified. - 2008). Современная классификация 2017 года отражает большое разнообразие нозологических форм, присущее этой патологии. Вследствие высокой гетерогенности заболевания, результаты лечения больных разные. По данным литературы 5-летняя общая выживаемость при ДВККЛ колеблется от 30 до 50% (Hui Liu. Clinical significance and prognostic value of STAT3 expression in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with rituximab-CHOP therapy / Hui Liu, Li Zhu [et al.] // Int J Clin Exp Med. - 2016. - Vol. 9 (6). - p. 9356-9364). В связи с этим крайне важен прогноз на ранних стадиях заболевания для стратификации таких пациентов в группы риска. Существующие на сегодняшний день прогностические модели не потеряли своей значимости, но не всегда позволяют оценить выживаемость и индивидуальный риск неудач терапии.

В настоящее время проводятся исследования биомаркеров, играющих ключевую роль в патогенезе ДВККЛ. По мнению ряда авторов одним из потенциальных предикторов может стать протеин STAT3 (Chi Young Ok. Clinical implications of Phosphorylated STAT3 Expression in De Novo Diffuse Large B-cell Lymphoma / Chi Young Ok, Jiayu Chen [et al.] // Clinical Cancer Rec. - 2014. - Vol. 20 (19). - p. 5113-5123; Song Lin. Expression and significance of leptin receptor, p-STAT3 and p-AKT in diffuse large B-cell lymphoma / Song Lin, Li Yujun, Xing Xiaoming [et al.] // Acta Histochemica. - 2014. - Vol. 116. - p. 126-130; B. Belinda Ding. Constitutively activated STAT3 promotes cell proliferation and survival in the activated B-cell subtype of diffuse large B-cell lymphomas / B. Belinda Ding, J. Jessica Yu [et al.] // Blood. - 2008. - Vol. 111. - №3. - p. 1515-1523). Данный белок активно участвует в регуляции клеточного цикла и является важным компонент JAK-STAT сигнального пути, имеет существенное значение в патогенезе лимфомы. Тем не менее, роль экспрессии STAT3+ клеток в патогенезе заболевания изучена недостаточно. Практически отсутствуют сведения о связи уровня STAT3+ опухолевых клеток с характером течения патологического процесса.

Целью изобретения является разработка способа морфометрического прогнозирования течения ДВККЛ по относительному содержанию STAT3+ неопластических клеток в опухолевой ткани.

Близким техническим решением к предполагаемому изобретению является оценка концентрации активной формы транскрипционного фактора STAT3, позволяющая изучить функциональное состояние мононуклеаров при бронхиальной астме (Минеев В.Н., / Характеристика экспрессии транскрипционного фактора pSTAT3 при бронхиальной астме / В.Н Минеев, Т.М. Лалаева // Терапевтический архив. - 2017; 89 (3). - С.48-53). Данный метод дает возможность сделать количественную оценку STAT3+ клеток в венозной крови при бронхиальной астме. Основными отличиями используемого метода являются, во-первых то, что подсчет проводился не в опухолевых клетках, а в мононуклеарных клетках венозной крови; во-вторых, вычисления основывались не на морфометрическом анализе гистологического материала, а на цитологической и иммунофенотипической оценке клеток суспензии крови. Следовательно, данный метод не позволяет количественно точно оценить состояние опухоли.

Способа морфометрической оценки прогноза течения ДВККЛ по содержанию STAT3+ злокачественных клеток в гистологических срезах опухолевой ткани не существует.

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предполагаемого изобретения. Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в соответствии с планом научно-исследовательской работы.

Способ осуществляется следующим образом

После биопсии мягко-тканного образования у больных ДВККЛ выполняли гистологическую проводку послеоперационного материала на гистологических срезах, приготовленных из парафиновых блоков опухоли, толщиной 2-3 мкм по общепринятому способу. Для идентификации и визуализации STAT3+ опухолевых клеток в исследуемом материале использовали иммуногистохимический метод окрашивания. Иммунореактивность первичных антител («Dako») выявляли с помощью вторичных антител коньюгированных с пероксидазой, входящей в набор реактивов EnVISION+ («Dako»). Постановку ИГХ реакции осуществляли по стандартной методике в соответствии с протоколом систем визуализаций «Dako». Морфометрическую оценку относительного содержания STAT3+ опухолевых клеток выполняли на световом микроскопе «AxioScope.Al» фирмы «Carl Zeiss М icroscopy GmbH» со встроенной фото- и видеокамерой с помощью программного обеспечения анализа изображений, с окуляром ×10, при объективе ×100. Исследования проводили в 5 полях зрения для каждого образца. Исходя из полученных результатов, вычисляли среднее относительное содержание STAT3+ опухолевых клеток по формуле:

S=D/n×100%,

где:

S - среднее относительное содержание STAT3 позитивных клеток в одном опухолевом образце, %

D - количество STAT3+ опухолевых клеток в 5 полях зрения

n - общее количество клеток в 5 полях зрения

Исследования выполнены на гистологических срезах опухолевой ткани от 44 пациентов с ДВККЛ в возрасте от 24 до 79 лет (20 - мужского пола и 24 женского). При оценке относительного содержания STAT3+ клеток благоприятное течение заболевания установлено у 14 пациентов. У остальных 30 больных определен неблагоприятный прогноз.

Результаты исследований представлены в примерах, подтверждающих возможность заявляемого способа прогнозировать течение ДВККЛ после биопсии мягко-тканного образования по относительному содержанию STAT3+ опухолевых клеток в гистологических срезах.

Пример 1.

Больной В., 42 г., поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 16.09.2016 г. Диагноз при поступлении: ДВККЛ, 3 стадия (подтип заболевания «нетерминальный»). Клиническая характеристика: слабость, потливость. При компьютерной томографии выявлено опухолеподобное образование в проекции поясничного отдела позвоночника. Выполнена операция: биопсия мягко-тканного образования (опухоль в проекции позвоночника), без осложнений. Проведено ИГХ окрашивание неопластических клеток в гистологических срезах опухоли по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования определено относительное содержание STAT3+ опухолевых клеток - 90% (S). Установленная величина S получена в ходе следующего расчета: S=291/323×100%. Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа определено, что у больного ДВККЛ неблагоприятный прогноз течения заболевания. В ходе динамического наблюдения за пациентом выявленные данные были подтверждены проведенной оценкой результатов лечения. Так, после биопсии опухоли проведен курс химиотерапии по стандартному протоколу «RCHOP». Однако менее чем через 12 месяцев после окончания терапии 1 линии установлен ранний рецидив. Заболевание имело агрессивное течение, клинико-гематологического улучшения не наступило. Проведены повторные курсы химиотерапии. Спустя 11 месяцев после операции пациент умер.

Пример 2.

Больной 3., 74 года., поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 21.01.2016 г. Диагноз при поступлении: ДВККЛ, 3 стадия (подтип заболевания «герминальный»). Клиническая характеристика: слабость, потливость. Ранее при осмотре оториноларингологом 18.01.2016 г. выявлена опухоль в области корня языка. Выполнена операция: резекция мягко-тканного образования (опухоль языка), без осложнений. Проведено ИГХ окрашивание неопластических клеток в гистологических срезах опухоли по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования определено относительное содержание STAT3+ опухолевых клеток - 40% (S). Установленная величина S получена в ходе следующего расчета: S=160/398×100%. Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа отмечено, что у больного ДВККЛ благоприятный прогноз течения заболевания. При динамическом наблюдении за больным прогноз был подтвержден. Так, после биопсии опухоли проведен курс химиотерапии по стандартному протоколу «RCHOP». Наблюдался полный ответ терапию 1 линии, ремиссия более 2 лет. По настоящее время пациент жив, находится в ремиссии, состояние удовлетворительное, в поддерживающей терапии не нуждается.

Пример 3.

Больной М., 69 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 15.05.2017 г. Диагноз при поступлении: ДВККЛ, 4 стадия (подтип заболевания «нетерминальный»). Клиническая характеристика: потливость по ночам. При осмотре онкологом 05.05.2017 г. в проекции височной области выявлена мягко-тканное подкожное образование (опухоль?). Выполнена операция: биопсия мягко-тканного образования (опухоль височной области), без осложнений. Проведено ИГХ окрашивание неопластических клеток в гистологических срезах опухоли по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования определено относительное содержание STAT3+ опухолевых клеток - 77% (S). Установленная величина S получена в ходе следующего расчета: S=351/454×100%. Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа установлено, что у больного ДВККЛ благоприятный прогноз течения заболевания. В ходе динамического наблюдения за пациентом выявленные данные были подтверждены проведенной оценкой результатов лечения. Так, после биопсии опухоли проведен курс химиотерапии по стандартному протоколу «RCHOP». Наблюдался частичный ответ на терапию 1 линии, ремиссия менее 12 месяцев. Заболевание имело агрессивное течение, клинико-гематологического улучшения не наступило. Проведены повторные курсы химиотерапии. Спустя 11 месяцев после операции пациент умер.

Заявляемое изобретение дает при использовании положительный результат, заключающийся в возможности по относительному содержанию STAT3+ опухолевых клеток в гистологическом образце прогнозировать течение ДВККЛ после биопсии мягко-тканного образования. При величинах STAT3+ положительных клеток <66% констатируют благоприятное течение ДВККЛ, а при ≥66% устанавливают неблагоприятное течение заболевания.

Предлагаемый способ информативен, может быть использован в гематологических отделениях, патолого-анатомических и патоморфологических лабораториях в качестве дополнительного критерия при прогнозировании течения ДВККЛ после резекции опухоли.