×
11.03.2019
219.016.d602

Способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностики грибовидного микоза. Для этого проводят анализ взятого у пациента биологического материала из очага поражения и проведение иммуногистохимического исследования биоптатов. Определяют относительную площадь экспрессии CD83+- и Langerin (CD207)+-дендритных клеток. При определении относительной площади экспрессии Langerin-позитивных дендритных клеток ≥0,9% и относительной площади экспрессии CD83-позитивных дендритных клеток ≥0,5% диагностируют грибовидный микоз. При значениях ниже указанных устанавливают диагноз хронического доброкачественного заболевания. Изобретение обеспечивает проведение дифференциальной диагностики грибовидного микоза и хронического доброкачественного заболевания. Повышает достоверность и эффективность данной диагностики. 1 табл., 2 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может найти свое применение в медицинских целях для дифференциальной диагностики грибовидного микоза (Т-клеточная лимфома кожи) и хронических доброкачественных заболеваний кожи.

Известен способ диагностики грибовидного микоза с применением гистологического исследования, когда путем компьютерной морфометрии ядер лимфоцитов дермы в гистологическом срезе кожи из очага поражения проводят определение планиметрических характеристик ядер лимфоцитов. Дополнительно определяют удельную плотность ядер лимфоцитов на единицу площади имиджа среза, периметр и усредненный диаметр ядра, фактор формы (Патент на изобретение РФ №2466398, G01N 33/48, опубл. 10.11.2012).

Недостатком метода является то, что изменения характеристик лимфоцитов происходит при прогрессировании заболевания и не позволяет диагностировать болезнь на ее начальном этапе. Кроме того, рекомендуемые для анализа программы не являются рутинными, что не обеспечивает повсеместное их применение для анализа гистологических срезов. Также стоит учесть, что гистологическая картина может быть весьма вариабельной в зависимости от клинических проявлений и стадии заболевании, и диагностическое значение приведенных выше критериев не одинаково, не всегда является достоверным.

Известен способ диагностики грибовидного микоза с применением гистологического исследования путем проведения морфометрии базальных кератиноцитов, измеряя их площадь и ядерно-цитоплазматическое соотношение. При увеличении площади базальных кератиноцитов в 1,5 и более раза по сравнению с нормальной кожей, ядерно-цитоплазматического соотношения базальных кератиноцитов в 2 и более раза по сравнению с нормальной кожей диагностируют лимфомы кожи, а при неизмененных морфометрических показателях базальных кератиноцитов - псевдолимфомы кожи (Патент на изобретение РФ №2476879, G01N 33/48, G01N 33/53, G01N 33/483, опубл. 27.02.2013).

Недостатком методов является их низкая чувствительность, невозможность дифференциальной диагностики начальной стадии заболевания, когда наиболее важно установить диагноз, а также трудности диагностики при развитии различных (неклассических) форм болезни. Также не уточнено, сколько базальных кератиноцитов необходимо обследовать для установления значимости данного диагностического фактора.

В основу изобретения положена задача создания способа дифференциальной диагностики грибовидного микоза с целью установления значимых дифференциально-диагностических маркеров, на основании детекции которых удастся производить оперативную диагностику наиболее часто встречающегося вида лимфомы кожи - грибовидного микоза. Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе дифференциальной диагностики грибовидного микоза, включающем анализ взятого у больного биологического материала из очага поражения и проведения иммуногистохимического исследования биоптатов, определяют относительную площадь экспрессии CD83+- и Langerin (CD207)+-дендритных клеток, при этом при определении относительной площади экспрессии Langerin-позитивных дендритных клеток ≥0,9% и относительной площади экспрессии CD83-позитивных дендритных клеток ≥0,5% диагностируют грибовидный микоз, а при значениях ниже указанных устанавливают диагноз хронического доброкачественного заболевания.

Технический результат заключается в повышении достоверности, эффективности, экономичности и воспроизводимости.

Анализ микроокружения малигнизированных лимфоцитов проводят путем детекции CD83+- и Langerin (CD207)+-дендритных клеток в ходе иммуногистохимического исследования у больных грибовидным микозом и пациентов с хроническим доброкачественным заболеванием кожи на примере мелкобляшечного парапсориаза.

Изобретение осуществляется следующим образом.

1. Предварительно подготавливают образцы кожи, которые вырезают так, чтобы в микроскопическом срезе сохранялись топографические соотношения, характерные для исследуемого материала. Блоки для проводки вырезают после фиксации.

2. Биоптат кожи помещают в емкость с фиксатором, объем фиксирующей жидкости превышал в 10-20 раз объем фиксируемого объекта. Если объект был разрезан на фрагменты толщиной более 5-6 мм, его оставляли в фиксаторе на 2-3 часа для уплотнения, после чего ткань рассекают на пластины толщиной 2-3 мм и помещают в свежий раствор фиксатора. Общее время фиксации при комнатной температуре (около 20°С) составляет от 18 до 24 часов. В повседневной работе в качестве фиксирующей жидкости использовали 10% раствор формалина или цинк-формалин, который обеспечивает сохранение антигенных детерминант для проведения иммуногистохимических исследований.

3. Обезвоживание и пропитывание парафином биоптатов кожи проводят вручную по восходящим спиртам (70%, 80%, 90% и 100%) в аппарате гистологической проводки тканей «Leica Peloris» («Leica Microsystems», Германия), заливают в парафин.

4. Срезы приготовливают толщиной 3-4 мкм. Используют микротом ротационный Accu-Cut®SRM™200.

5. После этого приступают непрямому иммуногистохимическому исследованию. Для этого срезы наклеивали на стекла, обработанные полилизином, распарафинивают, блокируют эндогенную пероксидазу раствором перекиси водорода в метаноле и выполняют демаскировку антигенов путем нагревания в трис-ЭДТА или цитратном буфере в течение 30 мин при температуре 95°С на водяной бане. Для иммуногистохимической детекции субпопуляций лимфоцитов, дендритных клеток и пролиферативной активности клеток используют первичные мышиные и кроличьи моноклональные античеловеческие антитела (Таблица 1). Время инкубации с первичными антителами составляет 18-20 часов при t°=+40°С.

Для детекции клеток используют полимерную систему визуализации Envision (Dako, Дания), где в качестве хромогена применяют диаминобензидин (ДАБ) (Dako, Швеция). Инкубацию проводят с системой визуализации - 30 мин. при температуре +20°С. для проявления результата реакции ДАБ наносият на срезы на 5 мин.

Выполняют определение количества окрашенных цветовой меткой (позитивных) клеток при 200-кратном увеличении светового микроскопа в трех полях зрения (размерами 7204530 мкм), выбранных с учетом наибольшего количества меченых клеток, программное обеспечение «Морфология 5.2» (ВидеоТесТ, Россия). Определяют относительную площадь экспрессии, которую рассчитывают как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками к общей площади клеток в поле зрения, и выражают в процентах.

При выявлении относительной площади экспрессии Langerin-позитивных дендритных клеток ≥0,9%, и CD83-позитивных дендритных клеток ≥0,5% определяется высокая диагностическая информативность данных маркеров при установлении диагноза грибовидного микоза (SE 0,87, SP 0,90) и (SE 0,71, SE 0,71) соответственно, что может успешно использоваться в дифференциальной диагностике с хроническими доброкачественными заболеваниями кожи.

Изобретение иллюстрируется следующими конкретными примерами.

Пример 1.

Больной Иванов И.И., 69 лет, поступила в клинику для уточнения диагноза. Болен в течение 5 лет, когда появились зудящие пятна на коже верхних конечностей и на коже живота. На основании клинической картины врач заподозрил грибовидный микоз. Результаты проведенного гистологического исследования не позволяют исключить начинающуюся лимфому кожи. Проведено иммуногистохимическое исследование с определением относительной площади экспрессии Langerin+- и CD83+-дендритных клеток пораженной кожи.

Результаты: Относительная площадь экспрессии Langerin+-дендритных клеток 2.5%, CD83+-дендритных клеток 1.5%. На основании результатов ИГХ установлен диагноз: пятнистая стадия ГМ (Ib). Начата специфическая терапия. Диагноз подтвердился гистологически при повторной биопсии.

Пример 2.

Больная Петрова А.А., 45 лет, поступила в клинику для уточнения диагноза. Больна в течение 2-месяцев, когда впервые стала отмечать появление отечных зудящих пятен на коже лица, верхних конечностей, туловища. Лечилась самостоятельно топическими ГКС с нестойким эффектом. На основании клиническое картины дерматолог на приеме заподозрил проявления грибовидного микоза. Результаты гистологического исследования не позволяют однозначно отвергнуть диагноз начинающейся лимфомы кожи. Проведено иммуногистохимическое исследование с определением относительной площади экспрессии Langerin+- и CD83+-дендритных клеток пораженной кожи.

Результаты: Относительная площадь экспрессии Langerin+-дендритных клеток 0.5%, CD83+-дендритных клеток 0.2%. На основании полученных сведений установлен диагноз Микробная экзема, торпидное течение. Назначена системная десенсибилизирующая терапия, топические ГКС, антигистаминные средства, проведена санация очагов хронических инфекций. Клинические проявления полностью нивелировались.

Из анализа научно-технической и патентной литературы не обнаружено сведений о возможности проведения дифференциальной диагностики на основании определения и сопоставления относительной площади экспрессии CD83+- и Langerin (CD207)+-дендритных клеток в ходе анализа пораженной кожи у больных грибовидным микозом и хроническими доброкачественными дерматозами путем автоматического анализа в программном обеспечении, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза, включающий анализ взятого у больного биологического материала из очага поражения и проведения иммуногистохимического исследования биоптатов, отличающийся тем, что определяют относительную площадь экспрессии CD83+- и Langerin (СО207)+-дендритных клеток, при этом при определении относительной площади экспрессии Langerin-позитивных дендритных клеток ≥0,9% и относительной площади экспрессии CD83-позитивных дендритных клеток ≥0,5% диагностируют грибовидный микоз, а при значениях ниже указанных устанавливают диагноз хронического доброкачественного заболевания.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 25 items.
23.08.2018
№218.016.7e8d

Способ реконструкции сосудистого русла при удалении местно-распространенных опухолей малого таза с инвазией в магистральные подвздошные сосуды

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, в частности к онкологической хирургии органов малого таза. Выполняют мобилизацию подвздошных сосудов проксимальнее и дистальнее зоны опухолевой инфильтрации. Накладывают на них зажимы и пересекают, отступив от видимых границ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002664629
Дата охранного документа: 21.08.2018
04.11.2018
№218.016.9a5d

Способ лечения кольцевидной гранулемы

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии, и может быть использовано для лечения больных кольцевидной гранулемой. На кожу направляют лазерный луч, который делят на пучок микролучей около 80 на кв. см, диаметром 0,1-0,2 мм. Используют лазер с длиной волны 2940 нм, плотностью...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002671516
Дата охранного документа: 01.11.2018
17.11.2018
№218.016.9e8c

Способ профилактики инфекционных осложнений при остром деструктивном панкреатите

Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и может быть использовано для профилактики инфекционных осложнений при остром деструктивном панкреатите. Для этого пациентам на 8-е сутки заболевания выполняют модифицированную тонкоигольную пункционную перипанкреатическую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002672592
Дата охранного документа: 16.11.2018
12.12.2018
№218.016.a56a

Спрей для наружного применения спиртовой

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой спрей для наружного применения для заживления ран, ожогов и язв, содержащий в качестве активных веществ лидокаин, лак бакелитовый, поливинилбутираль и канифоль, а в качестве вспомогательных веществ -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002674445
Дата охранного документа: 10.12.2018
26.12.2018
№218.016.aa96

Способ комбинированного лечения крупных многокамерных пиогенных абсцессов печени

Изобретение относится к медицине и может быть применимо для комбинированного лечения крупных многокамерных пиогенных абсцессов печени. Производят чрескожную чреспеченочную пункцию и дренирование абсцесса печени под ультразвуковой и рентгентелевизионной навигацией по наиболее короткому...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002675778
Дата охранного документа: 24.12.2018
16.01.2019
№219.016.b009

Способ эндовидеохирургического лечения стриктур пиелоуретерального сегмента

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии. Выполняют эндовидеохирургическое лечение стриктур пиелоуретерального сегмента, включающее продольное рассечение его стенозированной части с продлением разреза на здоровые ткани не менее чем на 0,5 см в каждую сторону. Замещают...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677051
Дата охранного документа: 15.01.2019
23.02.2019
№219.016.c5fe

Способ иммобилизации нативной амниотической мембраны для транспортировки, консервации и применения ее в качестве носителя культивированных клеток

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ иммобилизации нативной амниотической мембраны для транспортировки, консервации и применения ее в качестве носителя культивированных клеток, где нативную амниотическую мембрану механически фиксируют в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680471
Дата охранного документа: 21.02.2019
21.03.2019
№219.016.ebbf

Способ прогнозирования развития повторного инфаркта миокарда у мужчин моложе 60 лет

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования развития повторного инфаркта миокарда (ИМ) у мужчин моложе 60 лет. Выявляют и оценивают в баллах параметры в соответствии с таблицей 1 в описании. Рассчитывают вероятности (р) этого события...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682488
Дата охранного документа: 19.03.2019
21.03.2019
№219.016.ebe7

Способ пластики кист спинного мозга с помощью аутотрансплантата на ножке из внутреннего листка твердой мозговой оболочки

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии и ортопедии, и может быть использовано для проведения реконструктивных операций при повреждении позвоночника и спинного мозга. Осуществляют вскрытие кисты в продольном направлении. Заполняют полость кисты аутотрансплантатом. В качестве...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682491
Дата охранного документа: 19.03.2019
29.03.2019
№219.016.ee0d

Способ удаления новообразований задне-медиального отдела глазницы с интра- и экстраконусной локализацией

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии. Для удаления новообразования задне-медиального отдела глазницы с интра- и экстраконусной локализацией проводят удаление крючковидного отростка, частичную резекцию средней носовой раковины, расширение соустья верхнечелюстной пазухи,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002683159
Дата охранного документа: 26.03.2019
Showing 1-2 of 2 items.
18.10.2019
№219.017.d756

Способ дифференциальной диагностики бляшечного псориаза с другими хроническими заболеваниями кожи

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики бляшечного псориаза с другими хроническими заболеваниями кожи. Способ включает проведение иммуногистохимического исследования биоптата пораженного участка кожи, определяя...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002703314
Дата охранного документа: 16.10.2019
09.05.2023
№223.018.52da

Способ и система защиты информации при организации информационного обмена с космическими аппаратами

Изобретение относится к области защиты информации в системах информационного обмена с космическими аппаратами (КА). Техническим результатом является обеспечение защиты информации при организации информационного обмена с космическими аппаратами. В способе организуются виртуальные локальные...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002795117
Дата охранного документа: 28.04.2023
+ добавить свой РИД