Способ оценки повреждающего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание общего холестерола в периферической крови беременных, перенесших в третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции

1. Цель исследования - оценить характер влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание общего холестерола в периферической крови, приводящей к нарушению синтеза эстрадиола.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа определения снижения содержания общего холестерола, способствующего нарушению синтеза эстрадиола в периферической крови беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, приводящего к угрозе формирования плацентарной недостаточности.

3. Раскрытие изобретения

Уровень общего холестерола оказывает достаточно большое влияние как на материнское здоровье, так и на здоровье ребенка [9, 14]. Данный стероид выполняет две основные функции - структурную и метаболическую. Он участвует в построении клеточных мембран. Служит исходным соединением для синтеза всех стероидов, функционирующих в организме. Кроме того, холестерол является одним из основных компонентов плазматической мембраны, в которой определяет ее состояние и функцию, регулируя текучесть и проницаемость [2, 3, 8].

Достаточный уровень гормонов необходим для гестации. Эстрадиол обеспечивает рост и развитие матки на протяжении всего срока гестации, регулирует состояние сосудов матки и обеспечивает нормальное в них кровообращение. Осложнению беременности и развитию патологий у плода способствуют нарушения, происходящие с синтезом гормонов. При изменении концентрации гормонов у беременных нарушается характер маточно-плацентарного кровообращения, происходят морфофункциональные изменения плаценты, ведущие к развитию плацентарной недостаточности и патологии плода [1, 10-13].

Как известно, основные гормоны гестации (эстрагены, прогестерон) синтезируются из холестерола. Уровень холестерола в плаценте определяет интенсивность формирования гормонов, крайне необходим для обеспечения нормального течения беременности. Недостаток холестерола свидетельствует о развитии гормональной дисфункции фетоплацентарного барьера [5, 11].

4. Новая техническая задача

Определение изменения содержания общего холестерола в периферической крови, свидетельствующее о нарушении синтеза эстрадиола при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременных на третьем триместре гестации с целью оценки угрозы формирования плацентарной недостаточности.

5. Прототипом исследования явились работы авторов, которые разработали способы прогнозирования плацентарной недостаточности по параметрам иммунного статуса [4, 6], выявления маркеров активации эндотелия [6], по показателям газотранспортной функции эритроцитов [7], ультразвукового исследования, доплерометрии кровотока в сосудах фетоплацентарного комплекса, морфологической диагностики плаценты [11].

В отличие от вышеописанных прототипов в данном исследовании имеются существенные различия: 1) объектом исследования явилась периферическая кровь беременной на третьем триместре гестации, 2) изучалось содержание общего холестерола и концентрация эстрадиола в периферической крови, 3) исследование проводилось у беременных женщин с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции (титр антител иммуноглобулина класса G к цитомегаловирусу 1:1600) в III триместре гестации, 4) по показателям общего холестерола и эстрадиола составляется дискриминантное уравнение. При D, равном или меньше граничного значения, прогнозируют развитие плацентарной недостаточности у женщин в третьем триместре беременности, а при D, большем граничного значения, прогнозируют нормальное течение третьего триместра гестации.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследованы 25 пациенток 18-25 лет с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, контрольную группу составили 20 беременных женщин с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии. У беременных женщин симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение хронической цитомегаловирусной инфекции) устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса, IgМ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводили с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г., №226.

6.2. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Stat-Fах-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК ЦМВ методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.3. Содержание общего холестерола в периферической крови у беременной на третьем триместре гестации определяли спектрофотометрическим методом с использованием стандартных наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) на приборе «Stat-Fax 1900+» (USA).

6.4. Определение уровня эстрадиола в периферической крови беременной третьего триместра проводилось иммуноферментным методом с помощью реагентов ЗАО «НВО Иммунотех» (Москва).

6.5. Статистический анализ и обработка данных проводились с использованием пакета прикладных программ «Statistika 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений М±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном интервале 95% и числе степеней свободы F=n₁+n₂-2. Для определения достоверности различий использовался непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимались во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовских распределений применяли непараметрические критерии Колмагорова-Смирнова и Манна-Уитни.

6.6. Оценка достоверности проводимого исследования может быть реализована с помощью статистической обработки исходных выборок, формируемых в рамках сбора специфических лабораторных данных. При этом для подобных медицинских задач обычно используются типовые методики дискриминатного анализа. Для анализа выбранных оценочных критериев определялась дискриминатная функция (D), обладающая вероятностью различий не менее 95%, после чего выводилось дискриминатное уравнение, которое для данного исследования имеет вид:

D=(-379×общий холестерол)+(-0,072×эстрадиол) (1)

При D, равном или меньше граничного значения, прогнозируют развитие плацентарной недостаточности у женщин в третьем триместре беременности, а при D, большем граничного значения, прогнозируют нормальное течение третьего триместра гестации.

7. Полученные данные

В процессе исследования получены следующие данные. У беременных, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, при регистрации титра антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600 отмечается снижение содержания общего холестерола в периферической крови до 5,70±0,005 ммоль/л (контроль - 7,40±0,008 ммоль/л) и уменьшается концентрация эстрадиола до 14892,3±503,0 пмоль/л (контроль - 31531,2±147,0 пмоль/л). Дискриминантная функция для данного исследования имеет вид:

D=(-379×общий холестерол)+(-0,072×эстрадиол) (1)

D=(-379×5,70)+(-0,072×14892,3)=-3336,52 (1)

Вычисленной путем статистического анализа дискриминантной функции (-336,52) (1) соответствует граничное значение (-2673,59) (2). Поскольку дискриминатная функция (1) меньше граничного значения (2), то у женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре на фоне снижения содержания концентрации общего холестерола и эстрадиола в периферической крови прогнозируется развитие плацентарной недостаточности.

Пример. Больная А. Возраст 23 года. Во время гестации (32 недели) перенесла обострение хронической цитомегаловирусной инфекции с титром антител иммуноглобулина класса G к цитомегаловирусу 1:1600. Содержание общего холестерола в периферической крови составило 5,42 ммоль/л; эстрадиола - 14328,2 пмоль/л. Диагностика развития плацентарной недостаточности, проводимая с помощью выявленного дискриминантного уравнения (1) дает следующий результат:

D=(-379×5,42)+(-0,072×14328,2)=-3085,81 (3).

Сравнивая значения (3) с граничным (2), можно констатировать, что больная А., находится в группе риска по развитию плацентарной недостаточности.

Литература

1. Андриевская И.А. Гормональные и микробицидные изменения у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюл. физиол. и патол. дыхания. 2003. Вып. 15. С 41-44.

2. Березов Т.Т., Коровин Б.Ф. Биологическая химия. Учебник. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1998. 704 с.

3. Березов Т.Т., Коровин Б.Ф. Биосинтез холестерина. URL: http://www.хumik/ru/biologin/html (дата обращения 06.06.2016).

4. Пат. 2336527 РФ. Способ доклинического прогнозирования плацентарной недостаточности во втором триместре беременности при гриппе А(Н3N2), перенесенном в первом триместре гестации / И.Н. Гориков, В.П. Колосов, Л.Г. Нахамчен; опубл. 20.10.2008.

5. Довжикова И.В. Обмен холестерина в плаценте и его влияние на синтез гормонов при обострении герпес-вирусной инфекции во время беременности // Сиб. мед. журнал (Томск). 2011. Т. 26, №4 (1). С. 108-112.

6. Долгушина Н.В. Патогенез и профилактика плацентарной недостаточности и синдрома потери плода у беременных с вирусными инфекциями: автореф дис.… д-ра мед. наук. Москва, 2009. 50 с.

7. Квиткина И.Г. Профилактика и ранняя диагностика плацентарной недостаточности у беременных с герпес-вирусной инфекцией: автореф дис.… канд. мед. наук. Челябинск, 2009. 20 с.

8. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. Спб.: Питер Ком, 1995. 512 с.

9. Особенности липидного обмена сыворотки крови матери, новорожденного и плаценты при физиологическом течении беременности и родов / К.А. Курышева [и др.] // Акуш. и гин. 1983. №3. С. 6-10.

10. Фетоплацентарная система при герпесной инфекции /М.Т. Луценко, И.В. Довжикова, И.А. Андриевская, А.С.Соловьева, Н.А. Ишутина. Благовещенск, 2003. 200 с.

11. Луценко М.Т., Довжикова И.В. Способ выявления синтеза холестерина в плаценте беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2015. №3. С. 201-204.

12. Мельникова В.Ф., Аксенов О.А. Инфекционные плацентиты, особенности плаценты как иммунного барьера // Архив патологии. 1993. Т. 55, №5. С. 78-81.

13. Синельникова В.М. Гормональный аспект невынашивания // Русский мед. журнал. 2001. Т. 9, №. 19. С. 78-91.

14. Тигранян Э.Р., Смирнова Л.И., Каширина Т.Н. Динамика показателей липидного и углеводного обмена при неосложненном течении беременности // Акуш. и гин. 1989. №8. С. 60-61.