×
20.11.2014
216.013.072c

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТИДИНА В ЭРИТРОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ, ПОЗВОЛЯЮЩИЙ ОПРЕДЕЛЯТЬ СТЕПЕНЬ ОКСИГЕНАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение касается способа выявления гистидина в эритроцитах периферической крови. Способ осуществляют путем приготовления инкубационного раствора №1, состоящего из раствора 500 мг сульфаниловой кислоты в 50 мл 1 М HCl, и раствора №2, состоящего из 125 мг NaNO в 2,5 мл дистиллированной воды. Растворы смешивают по 1 мл каждого в пробирке и вносят в смесь 200 мкл цельной крови с коагулятом. Реакция протекает в течение 10 мин при комнатной температуре, после чего из капли взвеси изготовляют монослойный мазок на предметном стекле, подсушивают и изучают с помощью компьютерной цитофотометрии. 2 ил.
Основные результаты: Способ определения гистидина в эритроцитах периферической крови, включающий выполнение гистохимической реакции в инкубационном растворе, состоящем из смеси растворов по 1 мл каждого: раствор №1 - 500 мг сульфаниловой кислотой растворяют в 50 мл 1M HCl и раствор №2 - 125 мг NaNO растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды, в который вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и после 10 мин прохождения реакции при комнатной температуре из капли взвеси изготовляется мазок, на котором изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание гистидина в эритроцитах.
Реферат Свернуть Развернуть

Гистидин относится к одной из 20 протеиногенных аминокислот. Его роль в организме многогранна. Он принимает активное участие в биосинтезе гистамина [1, 3], способствует росту и восстановлению тканей и в большом количестве содержится в гемоглобине эритроцитов периферической крови, принимая участие в его оксигенации [7-11].

Присоединяя кислород, гемоглобин превращается в оксигемоглобин. Валентность железа (Fe2++) при этом не изменяется, поэтому эту реакцию называют оксигенацией, а не окислением. Связь гемоглобина с гистидином влияет на присоединение кислорода к Fe2++ гема [12]. Гистидин как сильный донатор фиксирует гем в глобине, повышая основность Fe2++, и тем самым способствует образованию связи с акцептором, которым является молекула кислорода с практически сохраненным эффектом H. Бора [2, 6].

Цель работы найти способ, позволяющий выявлять содержание гистидина в эритроцитах периферической крови и по измерению реакции на содержание гистидина прогнозировать содержание оксигемоглобина.

Прототипом выявления гистидина в клеточных элементах мы взяли реакции, предложенные в пятидесятые годы XX столетия [5]. Однако от предложенных методов наши исследования существенно отличаются.

1. Реакцию в те годы проводили только на гистологических срезах. В отличие от этого мы разработали гистохимическим методом выявлять гистидин в отдельно взятых эритроцитах периферической крови.

2. Предложенный ранее метод основан на обязательной обработке тканевых срезов 33% раствором азотной кислоты, что не приемлемо для применения к взвеси эритроцитов, поскольку это приводит к немедленному их гемолизу.

3. Обработанные слабым раствором соляной кислоты эритроциты помещались в инкубационный раствор для определения гистидина, после чего из капли прореагированной на гистидин взвеси изготовляли монослойный мазок.

4. Предложенный способ выявления гистидина в эритроцитах чувствителен и стоек, что позволяет мазки крови длительно сохранять для исследования.

5. До настоящего времени способа выявления гистидина в эритроцитах в литературе не описано, как и не предложено микрофотографий эритроцитов, содержащих продукты реакции на гистидин.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследование проводилось на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Обследовано 25 здоровых беременных в возрасте 18-25 лет. Контролем служили 10 беременных с признаками анемии при обострении цитомегаловирусной инфекции.

2. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства здравоохранения РФ №266 от 19.06.2003 г.

3. Верификация цитомегаловирусной инфекции выполнялась путем определения типоспецифических антител и индекса авидности методом ИФА на спектрофотометре Stat-Fax-2100 (USA) с использование наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск).

4. Гистидин в эритроцитах периферической крови определяли гистохимическим методом путем помещения в инкубационный раствор эритроцитов, взятых у здоровых лиц. Контролем служили беременные с признаками анемии.

Приготовление инкубационного раствора проводилось следующим образом.

Раствор 1: 500 мг сульфаниловой кислоты растворяют в 50 мл 1 М HCl (2,218 мл до 50 мл дистиллированной воды).

Раствор 2: 125 мг NaNO2 растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды.

В пробирку вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и добавляют равные объемы (по 1 мл) растворов 1 и 2. При комнатной температуре инкубационный раствор выдерживают 10 мин. После чего каплю инкубационного раствора наносят на предметное стекло и изготовляют с помощью центрифуги Diff Spin Slide Spinner M 700-22 (USA) монослойный мазок, который подсушивают и изучают под цифровым фотомикроскопом МТ (Япония).

5. Компьютерным цитофотометрическим методом определяют содержание гистидина, приходящегося на 1 эритроцит в условных единицах, денситометрируя 100 эритроцитов у каждого пациента. Содержание HbO2 у этих же пациентов определяли по методу Эвелина и Мэллой [4].

Проведенные исследования показали, что составление инкубационной смеси из следующих растворов: 1. - 500 мг сульфаниловой кислоты в 50 мл 1 М HCl и 2. - 125 мг NaNO2 в 2,5 мл дистиллированной воды после смешения каждого из них по 1 мл и введения в смесь 200 мкл цельной крови с коагулянтом позволяет выполнять реакцию на выявление гистидина в эритроцитах в течение 10 мин при комнатной температуре.

Из капли взвеси после проведения реакции изготовляется монослойный мазок и после его подсушивания изучают содержание гистидина в эритроцитах компьютерным цитофотометрическим методом. В эритроцитах четко выделяются гранулы реакции на гистидин. У здоровых беременных цитофотометрические исследования позволяют установить, что на 1 эритроцит приходится 62,17±2,5 усл. ед. гистидина (фигура 1). При обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:800, если количество гистидина на 1 эритроцит снижается до 34,3±1,85 усл. ед. (фигура 2), уменьшается оксигенация гемоглобина до 94,5±1,9%, что создает угрозу формирования гипоксии в организме.

ЛИТЕРАТУРА

1. Коржуев П.А. Гемоглобин: сравнительная физиология и биохимия. 1964. М: «Наука».

2. Коробов В.Н., Федорович И.П., Климишин Н.И. Физико-химические и функциональные свойства гемоглобина мышей, зараженных карциномой Эрлиха // Бюлл. экс. биол. и мед. 1992. т.113, №6. с.640-642.

3. Луценко М.Т. Влияние активности аргининдегидрогеназы на уровень гистамина в периферической крови беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюлл. физиол. и патол. дых. СО РАМН. 2012. Вып.44. С.62-66.

4. Покровский А.А. Биохимические методы исследования: Справочник. М.: «Медицина». 1969. 337 с.

5. Роскин Г.И. Микроскопическая техника. М.: «Советская наука», 1954. 441 с.

6. Федорова Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция. 1976. М.: «Медицина». 541 с.

7. Christian J.E., Unno М., et. al. Spectroscopic effects of polarity and hydration in the distal heme pocket of deoxymyoglobin // Biochemistry. 1997. 36 (37). P.11198-11204.

8. Ferguson R.A., Sehdev N., Bagatto B. In vitro interactions between oxygen and carbon dioxide transport in the blood of the sea lamprey // J. Exp. Biol'. 11992. №2. P.10-15.

9. Jkeda-Saito M., Hon H., Anderson L.A. Coordination structure of the ferric hemme iron in engineered distal hisdine myoglobin mutants // J. Biol. Chem. 1992. 267 (32). P.22843-22852.

10. Kopec W., Jamroz D., Wiliczkiewicz A. Antioxidation status and histidine dipeptides content in broiler blood and muscules depending on protein sources in feed // J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. (Berl). 2012. 10. 1111/j. P.1439-0396.

11. Nikinmaa M., Airaksinen S., Vikki L. Hemoglobin function in intact lamprey erythrocytes: interactions with membrane function in the regulation of gas transport and acid-base balance // J. Exp. Biol. 1995. №3. P.12-16.

12. Perutz M.F., Mazzarella L. A preliminary x-ray analysis of haemoglobin H. «Nature». 1963. V.4. P.2.

Способ определения гистидина в эритроцитах периферической крови, включающий выполнение гистохимической реакции в инкубационном растворе, состоящем из смеси растворов по 1 мл каждого: раствор №1 - 500 мг сульфаниловой кислотой растворяют в 50 мл 1M HCl и раствор №2 - 125 мг NaNO растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды, в который вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и после 10 мин прохождения реакции при комнатной температуре из капли взвеси изготовляется мазок, на котором изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание гистидина в эритроцитах.
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТИДИНА В ЭРИТРОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ, ПОЗВОЛЯЮЩИЙ ОПРЕДЕЛЯТЬ СТЕПЕНЬ ОКСИГЕНАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТИДИНА В ЭРИТРОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ, ПОЗВОЛЯЮЩИЙ ОПРЕДЕЛЯТЬ СТЕПЕНЬ ОКСИГЕНАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 85 items.
10.01.2013
№216.012.1a09

Способ прогнозирования течения беременности, учитывая интенсивность формирования плацентарных гормонов эстриола и прогестерона, изменяющийся в связи с обострением герпес-вирусной инфекции во время гестации

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогностическим методам, и может быть использовано для прогнозирования течения беременности при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: при обострении в третьем триместре герпес-вирусной инфекции (титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002472157
Дата охранного документа: 10.01.2013
20.04.2013
№216.012.37d2

Способ выявления влияния герпес-вирусной инфекции на активность сквалендегидрогеназы на гистологических срезах плаценты при введении в инкубационный раствор содержимого герпесных пузырьков беременной

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выявления влияния герпес-вирусной инфекции на активность сквалендегидрогеназы у беременных. Сущность способа: на гистологических срезах плаценты при введении в инкубационный раствор содержимого герпесных пузырьков проводят...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479843
Дата охранного документа: 20.04.2013
20.05.2013
№216.012.4217

Способ диагностики повреждающего действия nk(cd)-лимфоцитов на плаценту беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию, увеличивающего число ядер синцитиотрофобласта в состоянии апоптоза

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения наличия повреждений синцитиотрофобласта плаценты у беременных с герпес-вирусной инфекцией. Для этого в периферической крови беременных определяют количество NK(СD)-лимфоцитов, при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482489
Дата охранного документа: 20.05.2013
20.06.2013
№216.012.4dd3

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: в периферической крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485505
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de2

Способ определения подавления переноса липидов с помощью липидпереносящих белков h-fabp через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию

Изобретение относится к области медицины и применяется для определения подавления переноса липидов через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию. Сущность способа: в гомогенате плаценты определяют липидпереносящие белки H-FABP. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485520
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de3

Способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции беременной на проникновение повышенного количества арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного

Настоящее изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции на проникновение арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации, характеризующийся тем, что в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485521
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.07.2013
№216.012.57e8

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки устойчивости мембран эритроцитов новорожденного на фоне обострения у беременной герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности. Способ осуществляется следующим образом: в периферической крови новорожденного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488112
Дата охранного документа: 20.07.2013
10.09.2013
№216.012.68cf

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом а(h3n2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, и касается способа прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом А(Н3N2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме. Сущность изобретения состоит в том, что определяют содержание...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492478
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68d9

Способ прогнозирования летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано при прогнозировании летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени. Сущность способа: в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата исследуют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492488
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68da

Способ доклинической диагностики степени тяжести респираторного дистресс-синдрома при внутриутробном гриппе a(н3n2) у недоношенных новорожденных

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано для доклинической диагностики респираторного дистресс-синдрома различной степени тяжести у недоношенных новорожденных при внутриутробном гриппе A(H3N2). Сущность способа: исследуют концентрацию...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492489
Дата охранного документа: 10.09.2013
Showing 1-10 of 94 items.
20.06.2013
№216.012.4dd3

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: в периферической крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485505
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de2

Способ определения подавления переноса липидов с помощью липидпереносящих белков h-fabp через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию

Изобретение относится к области медицины и применяется для определения подавления переноса липидов через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию. Сущность способа: в гомогенате плаценты определяют липидпереносящие белки H-FABP. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485520
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de3

Способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции беременной на проникновение повышенного количества арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного

Настоящее изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции на проникновение арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации, характеризующийся тем, что в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485521
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.07.2013
№216.012.57e8

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки устойчивости мембран эритроцитов новорожденного на фоне обострения у беременной герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности. Способ осуществляется следующим образом: в периферической крови новорожденного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488112
Дата охранного документа: 20.07.2013
10.09.2013
№216.012.68cf

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом а(h3n2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, и касается способа прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом А(Н3N2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме. Сущность изобретения состоит в том, что определяют содержание...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492478
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68d9

Способ прогнозирования летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано при прогнозировании летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени. Сущность способа: в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата исследуют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492488
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68da

Способ доклинической диагностики степени тяжести респираторного дистресс-синдрома при внутриутробном гриппе a(н3n2) у недоношенных новорожденных

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано для доклинической диагностики респираторного дистресс-синдрома различной степени тяжести у недоношенных новорожденных при внутриутробном гриппе A(H3N2). Сущность способа: исследуют концентрацию...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492489
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.10.2013
№216.012.7444

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на характер течения беременности в первом триместре гестации на фоне снижения в периферической крови плацентарного лактогена

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на характер течения беременности в первом триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных определяют титр антител к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495421
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.10.2013
№216.012.744c

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе а(н3n2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании развития внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности. Сущность способа: во втором триместре гестации при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495429
Дата охранного документа: 10.10.2013
20.11.2013
№216.012.8330

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002499260
Дата охранного документа: 20.11.2013
+ добавить свой РИД