Результат интеллектуальной деятельности: СРЕДСТВО С ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АТЕРОСКЛЕРОЗА

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве профилактического средства, обладающего иммуномодулирующими и антиатеросклеротическими свойствами.

В медицинской практике используется большой ассортимент лекарственных препаратов для лечения и профилактики атеросклероза и других сердечно-сосудистых заболеваний, но в последнее время медицинские работники все чаще обращаются к препаратам природного происхождения.

Наиболее близким к изобретению является антиатеросклеротическое средство, изготовленное на основе чеснока порошкообразного сублимационной сушки, стеариновой кислоты, поливинилпирролидона низкомолекулярного медицинского и вспомогательных веществ для получения таблеток - аэросила, метилцеллюлозы водорастворимой (Орехов А.Н., Добротворский АЕ. Средство для профилактики атеросклероза. Патент Российской Федерации №2082427 от 27 июня 1997 г.). Недостатком препарата является недостаточное проявление иммуномоделирующих свойств ввиду использования одного активного компонента (порошкообразного чеснока), что снижает эффективность профилактики и лечения атеросклероза.

Получение комбинированных препаратов на основе фитонутриентов открывает дополнительные возможности в их использовании в клинической практике.

Техническим результатом, которого можно достичь при осуществлении изобретения, является создание эффективного фармакологического средства натурального происхождения, обладающего выраженными иммуномодулирующими свойствами для антисклеротической терапии, которые обеспечиваются действием трех активных компонентов: порошка (гранулята) высушенного чеснока (Allium sativum L.), порошка высушеной левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides L.) и порошка высушенного листа зеленого чая (Camellia sinensis L.). Препарат обладает одновременно иммуномодулирующим действием, проявляющимся в деполяризации макрофагов, гиполипидемическим действием, антиоксидантной активностью, тромболитическими свойствами.

Технический результат достигается за счет того, что в состав иммуномодулирующего средства для терапии атеросклеротических заболеваний входят: сернистые соединения чеснока Allium sativum L. (аллинин и аллицин) не менее 0,5% от массы препарата, сумма экдистероидов левзеи сафлоровидной Rhaponticum carthamoides L. (20-гидроксиэкдизон и инокостерон) - не менее 1% от массы препарата, сумма галлокатехинов зеленого чая Camellia sinensis L. (эпикатех, эпигаллокатехин, эпикатехин галлат, эпигаллокатехин галлат) - не менее 10% от массы препарата. Сочетание перечисленных веществ приводит к выраженному синергетическому эффекту.

В проанализированных патентных источниках информации не обнаружено сведений об использовании фармакологических средств, обладающих иммуномоделирующими и антиатеросклеротическими свойствами, которые изготовлены на основе порошка высушенного чеснока, порошка высушенной левзеи сафлоровидной и порошка высушенного листа зеленого чая, что позволяет сделать вывод о соответствии данного технического решения критериям его охраноспособности.

В состав средства с иммуномодулирующими свойствами для профилактики атеросклероза входят порошок (гранулят) высушенного чеснока, порошок высушеной левзеи сафлоровидной, порошок высушенного листа зеленого чая, сахар молочный (лактоза), стеариновая кислота, поливинилпирролидон низкомолекулярный медицинский при следующем соотношении компонентов, мас. %:

порошок высушенного чеснока - 21,0;

порошок высушеной левзеи сафлоровидной - 21,0;

порошок высушенного листа зеленого чая - 21,0;

сахар молочный (лактоза) - 24,0;

стеариновая кислота - 7,8;

поливинилпирролидон низкомолекулярный медицинский - 5,2.

Препарат изготавливают в виде таблеток следующим образом.

Пример. Берут 210 г порошка высушенного чеснока, 210 г порошка высушенной левзеи сафлоровидной, 210 г порошка высушенного листа зеленого чая и смешивают с остальными компонентами для получения таблетируемой массы, при этом сахара молочного (лактозы) (ГОСТ Р 54664-2011) берут 240 г, кислоты стеариновой (ГОСТ 9419-78) - 78 г, поливинилпирролидона низкомолекулярного медицинского (ФС 42-1194-78) - 52 г.

Массу таблетируют обычным способом и упаковывают по 10-20 таблеток в контурную ячейковую упаковку из пленки поливинилхлоридной по ГОСТ 25250-82 и фольги алюминиевой печатной лакированной по ГОСТ 745-79.

Цвет таблеток - кремовый с зеленоватым оттенком, запах и вкус - специфические.

Срок хранения - не более 24 месяцев в сухом помещении при температуре не выше +30°С в герметично закрытой упаковке.

Одна таблетка массой 1,2 г содержит 250 мг порошка высушенного чеснока, 250 мг порошка высушенной левзеи сафлоровидной, 250 мг порошка высушенного листа зеленого чая.

Для эффективной профилактики атеросклероза и проявления иммуномодулирующих свойств препарат следует принимать по 1 таблетке 2 раза в сутки утром и вечером, с интервалом между приемами не более 12 часов, идеально во время приема пищи. Таблетки следует проглатывать, не разжевывая, запивая достаточным количеством жидкости.

Препарат противопоказан при желчекаменной болезни, индивидуальной непереносимости чеснока и левзеи.

Биологические свойства препарата заключаются в снижении содержания холестерина и триглицеридов в крови при гиперлипидемии, рассасывании острых тромбов, предотвращении развития атеросклероза, укреплении стенок сосудов, уменьшении атеросклеротических бляшек, риска возникновения инфаркта и инсульта, массовой и индивидуальной профилактике острых респираторно-вирусных инфекций, включая грипп, повышении защитной системы организма, нормализации показателей иммунитета.

Описание экспериментальных данных

Авторами патента разработан уникальный подход к созданию антиатеросклеротических средств. Этот подход основан на применении в качестве тест-системы культуры клеток, выделенных из аорты или крови человека (макрофагов). В первичную культуру таких клеток добавляются различные вещества. Об антиатеросклеротической активности этих веществ судят по подавлению основных проявлений атеросклероза на клеточном уровне: накопления внутриклеточных липидов, пролиферативной активности, синтезу соединительнотканного матрикса (клетки аорты) или секреции провоспалительных цитокинов (макрофаги).

Как известно, атерогенез является скрытым воспалительным процессом, регуляторами которого являются тканевые макрофаги, проявляющие повышенную активность в результате изменений в моноцитах (макрофагах) периферической крови под действием различных эндогенных патологических стимулов уже на ранних стадиях развития заболевания [Libby Р et al., 2009, Кжышковска Ю.Г и др. 2012]. Метод оценки функционального анализа активности макрофагов разрабатывался на основе данных о секреции фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа) и СС хемокина 18 (CCL18). Были получены перспективные экспериментальные данные, подтвердившие гипотезу о возможности использования макрофагов как модели для диагностики и тест-системы.

Эта методика может применяться в варианте экс виво, когда в культуру клеток добавляются не сами фармакологические вещества, а сыворотка крови, взятой у пациента после перорального приема препарата. Использование такого подхода позволяет оценивать антиатеросклеротическую активность не только лекарств, но и натуральных растительных компонентов. При этом получаемые результаты легко интерпретируются. Исследования на клетках максимально приближены к ситуации в организме, поскольку используется культивируемые клетки человека, которые взаимодействуют с компонентами крови, что очень точно имитирует ситуацию ин виво.

Исследования авторов заявки выявили антиатеросклеротические свойства многих веществ, что позволило разработать и создать серию функциональных пищевых продуктов и БАД к пище, обладающих антиатеросклеротическим терапевтическим потенциалом. Одним из продуктов из этой серии является ТИП на основе чеснока, левзеи и чая зеленого.

Результаты ранее выполненных работ по биотестированию, являющихся научно-техническим методическим заделом по тематике патента, опубликованы в международном рецензируемом издании: Sobenin I, Andrianova I, Ionova V, Karagodin V, Orekhov A. Anti-aggregatory and fibrinolytic effects of time-released garlic powder tablets. Applied Technologies and Innovations 2012 7(2):40-45.

В проведенном исследовании изучалась атерогенность сыворотки крови больных атеросклерозом после однократного приема дозы различных препаратов, включая ТИП и его ингредиенты. Кровь брали до и после однократной дозы приема препаратов. Сыворотки, полученные из образцов крови, добавляли к первичной культуре моноцитов-макрофагов.

Для оценки противовоспалительных свойств ТИП измеряли секрецию провоспалительных молекул в культивируемых макрофагах человека. Критерием оценки противовоспалительной эффективности было выраженное (не менее 15%) достоверное снижение атерогенности (экспрессии провоспалительных цитокинов) при приеме ТИП или его ингредиентов пациентами.

Таким образом, противовоспалительная эффективность ТИП составляет примерно 88% от эффективности диклофенака, одного из самых мощных нестероидных противовоспалительных средств, применяемых в современной медицине. Эффект ТИП, как видно из данных таблицы, является синергетическим по отношению к эффектам его составляющих.

Оценка антиокислительной эффективности препарата ТИП проводилась в экспериментах in vitro. Для количественной оценки антиокислительного действия ТИП был использован метод, основанный на сопоставлении эффекта глутатиона с активностью ТИП. Суть метода заключается в том, что эритроциты донорской крови подвергаются гемолизу под действием перекиси водорода. Затем опыт повторяется в присутствии глутатиона, взятого в физиологической концентрации. Защитный эффект глутатиона принимается за 100%. Затем определялся защищающий эффект ТИП и его антиоксидантный потенциал выражался в «глютатионовых» единицах, который оказался сопоставим с действием глютатиона.

Как показали проведенные опыты, трехкомпонентная композиция должна включать: чеснок Allium sativum L, левзею сафлоровидную Rhaponticum carthamoides L и зеленый чай Camellia sinensis L.

Содержание в экспериментальных образцах компонентов активного начала, определяющих их оздоровительные свойства, составило:

- сернистые соединения чеснока Allium sativum L. (аллинин и аллицин) не менее 0,5% от массы функционального пищевого ингредиента;

- сумма экдистероидов левзеи сафлоровидной Rhaponticum carthamoides L. (20-гидроксиэкдизон и инокостерон) - не менее 1% от массы функционального пищевого ингредиента;

- сумма галлокатехинов зеленого чая Camellia sinensis L. (эпикатехин, эпигаллокатехин, эпикатехин галлат, эпигаллокатехин галлат) - не менее 10% от массы функционального пищевого ингредиента.

Рецептура ТИП, в состав которого вошли растения в оптимальном сочетании, представлена в таблице 2.

Постмаркетинговые исследования выявили клиническую эффективность ТИП, который снижает заболеваемость сердечнососудистыми болезнями, острыми респираторными вирусными инфекциями и другими заболеваниями. По антиатеросклеротической эффективности ТИП не уступает известным лекарственным средствам, вызывающим регрессию атеросклероза, таким как статины и антагонисты кальция. Было выявлена прямая корреляция между способностью ТИП вызывать регрессию атеросклероза у пациентов и подавлением накопления липидов в культивируемых клетках на модели экс виво.

В частности, получены следующие данные о профилактической и клинической эффективности препарата ТИП:

- В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании было оценено влияние ТИП на динамику атеросклеротических изменений у 211 мужчин в возрасте 40-74 лет. Прогрессирование атеросклероза оценивали по изменению толщины интимомедиального слоя (ИМС) сонных артерий и состоянию стенок сосудов. Толщину ИМС оценивали методом ультрасонографии высокого разрешения в В-режиме. Исходная толщина ИМС составляла 0,935±0,009 мм. В группе мужчин, принимавших ТИП (1200 мг в сутки), наблюдалось уменьшение толщины ИМС (-0,028±0,008 мм в год), в то время как в группе плацебо наблюдалось умеренное прогрессирование атеросклеротических поражений, которое составило 0,014±0,009 мм в год (р=0,002). Достоверное уменьшение толщины ИМС было отмечено у 53,3% мужчин, принимавших ТИП, и у 25,5% в группе плацебо (р<0,05). Напротив, достоверное увеличение толщины ИМС было отмечено только у 19,0% мужчин, принимавших ТИП, и у 52,8% в группе плацебо (р<0,05). При включении в исследование сыворотки крови больных показано, что она обладает выраженными атерогенными свойствами, то есть вызывает в среднем 1,6-кратное увеличение содержания холестерина в культивируемых макрофагах. У мужчин, принимавших ТИП, атерогенность сыворотки крови снизилась в среднем на 45% от исходного уровня, в то время как в плацебо-группе существенных изменений атерогенности сыворотки крови не наблюдалось. Результаты исследования подтверждают, что длительный прием ТИП приводит к развитию прямого антиатеросклеротического эффекта, сочетающегося с выраженным подавлением атерогенных свойств сыворотки крови (рис. 1).

- В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании было изучено влияние ТИП на уровень липидов в сыворотке крови при умеренной гиперлипидемии у 42 пациентов в возрасте 35-70 лет. Первая группа пациентов принимала ТИП в дозе 1200 мг/сут, вторая группа - плацебо по 1 таблетке 2 раза в день, в течение 84 дней. В результате данного исследования было показано, что ТИП по сравнению с плацебо снижает общий холестерин на 11%, холестерин липопротеидов низкой плотности на 15%, повышает холестерин липопротеидов высокой плотности на 13%. Соответственно, ТИП может быть рекомендован для коррекции содержания липидов у больных умеренной гиперлипидемией.

- В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании было изучено влияние ТИП на показатели систем гемостаза и фибринолиза у больных церебральным атеросклерозом, осложненным хронической цереброваскулярной патологией. Исследование проводили в два этапа на перекрестных группах. Каждый этап состоял из подготовительного периода и периода медикаментозного воздействия. На первом этапе первая группа пациентов (n=15) принимала ТИП в дозе 1200 мг/сут; вторая группа (n=14) - плацебо. На втором этапе первая группа пациентов (n=15) принимала плацебо; вторая группа (n=14) - ТИП в том же режиме. Было установлено, что ТИП достоверно подавляет АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов крови in vitro и ex vivo. В то же время ТИП уменьшает содержание фибриногена в крови и нормализует исходно сниженные показатели фибринолитической активности и индекса фибринолиза. Поэтому ТИП, благодаря способности подавлять гиперактивность тромбоцитов, снижать уровень фибриногена, нормализовать фибринолитический потенциал крови и рассасывать острые тромбы, может быть рекомендован наряду с другими антитромботическими средствами для профилактики и лечения церебрального атеросклероза, осложненного хронической цереброваскулярной недостаточностью.

- В открытом эпидемиологическом исследовании, проведенном среди работающих здоровых жителей г. Москвы, было установлено, что прием ТИП в течение года привел к снижению уровня общего холестерина в среднем на 9%, триглицеридов - на 18%, в то время как уровень холестерина ЛВП повысился на 11% от исходного уровня. При этом у мужчин, получавших ТИП в течение года, расчетный 10-летний риск возникновения коронарной болезни сердца снизился на 16% от исходного значения и стал достоверно ниже значения, характерного для мужчин соответствующего возраста. Расчетный 4-летний риск инфаркта миокарда снизился на 5% и стал равным значению, характерному для мужчин соответствующего возраста в западноевропейских странах.

- В заочном открытом эпидемиологическом наблюдении, проведенном среди пожилых жителей г. Москвы, было установлено, что прием ТИП в течение года приводит к существенному (в 3,5 раза) снижению сердечно-сосудистой смертности, что в первую очередь может быть связано с антиагрегационным и антитромботическим действием биологически активных компонентов ТИП (рис. 2).

- В открытом исследовании было изучено влияние приема ТИП в течение 5 месяцев на заболеваемость острыми респираторными инфекциями у 172 школьников. Контрольную группу составили 468 школьников. Было установлено, что применение ТИП у детей не вызывало побочных реакций со стороны желудочно-кишечного тракта. Заболеваемость ОРВИ у детей, принимавших ТИП, уже во второй месяц лечения снизилась с 28,4% до 9,3%, по сравнению с уровнем до начала лечения, и была в 2,6 раза ниже, чем в контрольной группе. Заболеваемость ОРВИ в группе детей, принимавших ТИП, в течение всего срока исследования была в среднем в 2,4 раза ниже, чем в контрольной группе. В течение месяца после отмены препарата заболеваемость ОРВИ в группе детей, принимавших ТИП, сохранялась на низком уровне.

- В заочном открытом трехлетнем эпидемиологическом наблюдении, проведенном среди взрослых жителей г. Москвы, было установлено, что постоянный прием ТИП в течение года приводит к существенному (в среднем в 2,3 раза) снижению заболеваемости ОРВИ и гриппом, а при ежегодных сезонных эпидемических всплесках заболеваемость снижается в 4-5 раз.