СПОСОБ АКТИВАЦИИ ИЗОФЕРМЕНТА Р450 (CYP) 3A4 У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ

Заявленное изобретение относится к области клинической фармакологии, в частности к способам активации изофермента Р450 (CYP) 3A4 у пациентов с хронической сердечной недостаточностью (ХСН), и предназначено для лечения хронической сердечной недостаточности.

ХСН является самым распространенным клиническим синдромом, обусловленным поражением миокарда [1]. Клиническим проявлением ХСН является развитие отеков, гипоксия, нарушение кислотно-щелочного равновесия, повышение концентрации альдостерона в плазме крови [3-10]. Без медикаментозного лечения ХСН заканчивается летально. Существенную роль в развитии ХСН играет изофермент Р450 (CYP) 3A4, входящий в группу ферментов, участвующих в биотрансформации лекарственных средств.

Известен способ активации изофермента Р450 (CYP) 3A4 путем введения лекарственного препарата цитофлавин [2]. Способ активации изофермента Р450 (CYP) 3A4 заключается в том, что пациентам с ХСН вводят лекарственное средство цитофлавин внутривенно капельно по 10 мл в сутки в течение 3 месяцев. Концентрацию альдостерона и метаболита спироналактона канренона в плазме крови до и после введения цитофлавина определяли с помощью теста, основанного на определении концентрации моноэтилглицинксилидида - метаболита лидокаина (MEGX-тест) и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

После введения цитофлавина наблюдается снижение концентрации альдостерона в плазме крови пациента на 25%, что свидетельствует о повышении активности изофермента Р450 (CYP) 3A4, при этом концентрация канренона в плазме крови повышается с 80 мг/мл до 200 мг/мл, что приводит к повышению эффективности спироналактона.

К недостаткам этого известного способа следует отнести его значительную продолжительность по времени (до 90 сут.) и использование лекарственного средства цитофлавина, которое является многокомпонентным, при этом на его отдельные компоненты могут возникать аллергические реакции.

Задачей настоящего изобретения является сокращение сроков лечения ХСН и повышение эффективности лечения ХСН.

Поставленная задача решается благодаря тому, что в способе активации изофермента Р450 (CYP) 3A4 у пациентов с ХСН, включающем курсовое внутривенное капельное введение антиоксидантного лекарственного средства, предусмотрены следующие отличия, а именно то, что в качестве лекарственного средства используют этилметилгидроксипиридина малат в разовой дозе 50-200 мг, а продолжительность введения лекарственного средства сокращена до трех суток.

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4, под воздействием которого происходит снижение уровня альдостерона при одновременном повышении уровня канренона, что способствует повышению эффективности лечения ХСН.

Сущность предложенного способа заключается в следующем. Для повышения уровня активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 используют внутривенное капельное введение этилметилгидроксипиридина малата в количестве 50-200 мг однократно или в течение трех дней. Для определения концентрации альдостерона в крови пациента был использован способ определения альдостерона с помощью ВЭЖХ.

Между совокупностью существенных признаков заявляемого способа увеличения активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 у пациентов с хронической сердечной недостаточностью и достигаемым техническим результатом существует причинно-следственная связь, а именно введение этилметилгидроксипиридина малата в течение трех дней в количестве 50-200 мг один раз в день приводит к снижению уровня альдостерона в крови пациентов.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.

Пример 1. Повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 при ХСН II стадии.

Больной К., 54 г.

Клинический диагноз: ИБС, атеросклероз, кардиосклероз, АГ 2 степени, ФК 2.

Больной предъявлял жалобы на одышку, на тяжесть в ногах и боли в области сердца.

Исследование венозной крови проводили до и после введения этилметилгидроксипиридина малата в количестве 50 мг внутривенно. Введение однократное. Препарат вводили внутривенно капельно в течение 5-7 минут.

Концентрация альдостерона в плазме крови до введения лекарственного средства определялась на уровне 23,60 нг/мл, после введения этилметилгидроксипиридина малата уровень альдостерона снизился до 21,29 нг/мл. Результаты представлены в таблице 1 и на рис.1.

После введения этилметилгидроксипиридина малата пациентом отмечалось улучшение общего самочувствия, уменьшение одышки.

Пример 2. Повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 при ХСН II стадии.

Больная А., 66 лет.

Клинический диагноз: ХСН II ст., ИБС. Стенокардия напряжения II ф.к. Пароксизмальная форма фибрилляции предсердий. Гипертоническая болезнь III стадии, 3 степени, риск 4. ХСН II ф.к. (NYHA)/IIA.

Больная предъявляла жалобы на одышку и боли за грудиной при умеренной физической нагрузке, головную боль, слабость, судороги. Кожные покровы физиологической окраски. Пульс 70 ударов в минуту, ритмичный. Тоны приглушены, ритмичные. АД 150/90 мм рт.ст. Дыхание везикулярное, хрипов нет. Наблюдаются отеки голени и стоп. Гипертрофия миокарда ЛЖ, умеренное снижение сократительной способности миокарда.

Исследование венозной крови проводили до и после введения этилметилгидроксипиридина малата в количестве 100 мг. Препарат вводили внутривенно капельно, в течение 5-7 минут.

После введения препарата отмечалось улучшение общего самочувствия.

Концентрация альдостерона в плазме крови до введения препарата определялась на уровне 24,72 нг/мл, после введения препарата этилметилгидроксипиридина малата отмечалось снижение концентрации альдостерона до 13,56 нг/мл. Результаты представлены в таблице 2 и на рис.2.

Пример 3. Повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 при ХСН III стадии.

Больной Л., 55 лет.

Клинический диагноз: ИБС, стенокардия III ФК. Диффузный атеросклеротический и постинфарктный кардиосклероз. Постоянная форма мерцания предсердий. Желудочковая экстрасистолия. ХСН III ст., III ФК по NYHA. Синдром малого выброса.

Исследование венозной крови проводили до и после введения этилметилгидроксипиридина малата в количестве 100 мг. Препарат вводили внутривенно капельно, в течение 5-7 минут.

После введения препарата у пациента отмечалось улучшение общего самочувствия, уменьшение отеков, уменьшение головокружения, улучшение сна.

Концентрация альдостерона в плазме крови до введения препарата определялась на уровне 23,42 нг/мл, после введения препарата этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 14,09 нг/мл. Результаты представлены в таблице 3 и на рис.3.

Пример 4. Повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 при ХСН IV стадии.

Больной С., 67 лет.

Клинический диагноз: ИБС, эквиваленты стенокардии, безболевая ишемия миокарда. Постинфарктный и диффузный атеросклеротический кардиосклероз. Постоянная форма мерцания предсердий. ХСН IV ст.

Жалобы на слабость, быструю утомляемость, одышку, сжимающие боли в области сердца, отеки на ногах, судороги. Появление синюшности на кончике носа, вокруг губ, аритмия.

Исследование венозной крови проводили до и после введения этилметилгидроксипиридина малата в количестве 200 мг. Препарат вводили внутривенно капельно, в течение 5-7 минут.

После введения препарата у пациента отмечалось улучшение общего самочувствия, уменьшение отеков, улучшение переносимости физических нагрузок.

Концентрация альдостерона в плазме крови определялась на уровне 25,66 нг/мл, после приема этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 14,47 нг/мл. Результаты представлены в таблице 4 и на рис.4.

Пример 5. Повышение активности изофермента при риске развития ХСН III стадии.

Больной М., 73 г.

Клинический диагноз: Ишемическая болезнь сердца, Постинфарктный атеросклеротический кардиосклероз, Постоянная форма ФП, хроническая сердечная недостаточность III стадии, функциональный класс 2, НК 2А. Артериальная гипертензия 3 степени.

Исследование венозной крови проводили в течение трех суток до и после введения этилметилгидроксипиридина малата в количестве 200 мг. Препарат вводили внутривенно капельно, в течение 5-7 минут.

Концентрация альдостерона в плазме крови определяли в первый день до введения препарата на уровне 23,67 нг/мл, после введения препарата этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 20,13 нг/мл, во второй день концентрация альдостерона после введения препарата понижалась до 20,13 нг/мл, на третий день концентрация альдостерона после введения препарата снижалась до 12,56 нг/мл.

После курсового введения препарата у пациента отмечалось улучшение общего самочувствия, уменьшение одышки, уменьшение загрудинных болей. Результаты представлены в таблице 5 и на рис.5.

Пример 6. Повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 при ХСН II стадии.

Пациентка Е., 61 год.

Клинический диагноз: Ишемическая болезнь сердца: стенокардия напряжения II ФК (функциональный класс). Постинфарктный кардиосклероз (инфаркт миокарда от 2007 г.). Хроническая сердечная недостаточность II ФК (функциональный класс). Гипертоническая болезнь III стадия, 3 степень, очень высокий риск.

Жалобы на общую утомляемость, слабость, головокружение; повышение АД до 180 и 100 мм рт.ст., одышку при прохождении ~300 м, купирующуюся самостоятельно в покое; незначительные отеки стоп.

Исследование венозной крови проводили до и после введения этилметилгидроксипиридина малата один раз в сутки в дозе 200 мг в течении трех суток. Препарат вводили внутривенно капельно, в течение 5-7 минут.

Концентрация альдостерона в плазме крови определялась в первый день на уровне 25,36 нг/мл до введения ЛС, после введения этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снизилась до 19,57 нг/мл. На второй день и на третий день снижалась до 14,23 нг/мл.

После введения этилметилгидроксипиридина малата в дозе 200 мг внутривенно струйно у пациента отмечалось уменьшение общей утомляемости, головокружения и слабости, одышки - возможность прохождения более 400 м, улучшение общего самочувствия. Результаты представлены в таблице 6 и на рис.6.

Пример 7. Повышение активности изофермента Р450 (CYP) 3A4 при ХСН III стадии.

Больной Л., 61 год.

Клинический диагноз: Ишемическая болезнь сердца: стенокардия напряжения II ФК (функциональный класс); атеросклеротический кардиосклероз; ХСН III ФК (функциональный класс); атеросклероз аорты; гипертоническая болезнь III стадия; 3 степень; дислипидемия.

Жалобы на слабость, головокружение, одышку и чувство нехватки воздуха при прохождении 150-200 м, купирующуюся при приеме нитроглицерина и в покое, отеки голеней и стоп.

Исследование венозной крови проводилось до и после введения пациенту этилметилгидроксипиридина малата один раз в сутки в количестве 200 мг в течении трех суток. Препарат вводили в/в струйно медленно, в течение 5-7 минут.

Концентрация альдостерона в плазме крови определялась в первый день до введения этилметилгидроксипиридина малата на уровне 26,13 нг/мл, после введения этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась в первый день до 20,87 нг/мл, во второй день после введения пациенту этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 19,69 нг/мл, и на третий день после введения пациенту этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 11,15 нг/мл.

После курсового введения этилметилгидроксипиридина малата в течение 3-х дней у пациента отмечалось уменьшение одышки и чувства нехватки воздуха, улучшение сна, ослабление головокружения, улучшение общего самочувствия. Результаты представлены в таблице 7 и на рис.7.

Пример 8. Повышение активности изофермента при ХСН IV стадии.

Больной Е., 60 лет.

Клинический диагноз: Ишемическая болезнь сердца: стенокардия напряжения III ФК (функциональный класс), постинфарктный и атеросклеротический кардиосклероз (инфаркт миокарда от 2005 и 2010 года). Хроническая сердечная недостаточность IV ФК (функциональный класс). Атеросклероз аорты и коронарных артерий. Гипертоническая болезнь III стадия, 3 степень.

Жалобы на слабость, головокружения; выраженные отеки голеней, стоп; выраженная синюшность губ, ушных раковин, кончика носа, сжимающие боли в области сердца и иррадиирующие под лопатку, купирующиеся через 5 мин после приема Нитросорбида (2 таб.); одышку, возникающую в покое и при ходьбе 40-50 шагов по ровной поверхности, проходящую самостоятельно через 1-2 минуты после остановки; боли в ногах при ходьбе >20-50 м; онемение голеней, стоп.

Исследование венозной крови проводили до и после введения этилметилгидроксипиридина малата один раз в день в количестве 200 мг в течение трех дней. Препарат вводили в/в струйно медленно, в течение 5-7 минут.

Концентрация альдостерона в плазме крови определялась в первый день до введения этилметилгидроксипиридина малата на уровне на уровне 24,56 нг/мл, после введения этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 21,25 нг/мл, во второй день после введения пациенту этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 21,25 нг/мл и на третий день после введения пациенту этилметилгидроксипиридина малата концентрация альдостерона снижалась до 13,25 нг/мл.

После 3-дневного введения этилметилгидроксипиридина малата у пациента отмечалось уменьшение синюшности губ и кончика носа, уменьшение одышки, улучшение сна, ослабление головокружения, улучшение общего самочувствия. Результаты представлены в таблице 8 и на рис.8.

Пример 9. Способ определения альдостерона в плазме крови пациента.

В связи с тем, что альдостерон является потенциальным маркерным субстратом активности ферментов системы Р450, в частности фермента Р450 (CYP) 3A4, дополнительно была проведена апробация количественного способа определения концентрации альдостерона в плазме крови пациентов.

Материалы и методы, применяемые в способе количественного определения альдостерона в плазме крови пациента.

Условия пробоподготовки: В экстракционную пробирку к 500 мкл плазмы крови прибавляли 500 мкл ацетонитрила. Затем встряхивали на вортексе в течение 10 минут. Далее центрифугировали в течение 10 минут при 13200 об/мин. Органический слой фильтровали через фильтр-насадку на шприц с диаметром пор 0,45 мкм в микропробирки. Полученные микропробирки с фильтратом помещали в автосемплер хроматографа. Анализ проводили на жидкостном хроматографе Shimadzu UFLC с тандемным масс-спектрометром Shimadzu LCMS-8040.

Условия хроматографирования

Полученные экстракты хроматографируют в следующих условиях:

Подвижная фаза: ацетонитрил/0,1% раствор муравьиной кислоты в воде в соотношении 75:25

Колонка: Zorbax Eclipce XDB-C18, 5 мкм (150х4,6 мм)

Температура колонки: 30°C

Объем вводимой пробы: 15 мкл

Скорость потока: 0,5 мл/мин

Время хроматографирования: 0,5 мин

Условия МС-детектирования

Полярность: позитивная;

Режим: MRM

Основной ион: 359,2 m/z

Энергия соударения: 24 V

Для количественного определения альдостерона строили калибровочную кривую. Для этого готовили растворы альдостерона в плазме крови с концентрациями 1 нг/мл, 10 нг/мл, 50 нг/мл, 100 нг/мл, 500 нг/мл и 1000 нг/мл.

Вид хроматограммы альдостерона предтавлен на рис.10.

Уравнение калибровочной прямой:

S=452,1*С+541,4,

где

S - площадь пика,

С - концентрация альдостерона, нг/мл.

Коэффициент корреляции - 0,9971. Вид калибровочной прямой представлен на Рис.9.

В связи с тем, что уровень альдостерона после в/в введения этилметилгидроксипиридина малата в количестве от 50-200 значительно снижался, можно утверждать, что разработан способ активации изофермента Р450 (CYP) 3A4 у пациентов с хронической сердечной недостаточностью (рис.11).

Таким образом, реализация заявленного способа позволяет проводить контроль состояния пациента с хронической сердечной недостаточностью и проводить коррекцию медикоментозной терапии указанного заболевания. Аналогичным образом, с учетом раскрытия изобретения в описании, специалистом в данной области могут быть получены или выполнены другие варианты изобретения, которые охватываются формулой изобретения, приводимой ниже.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

АД - артериальное давление

в/в - внутривенное ведение

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ЛС - лекарственное средство

ЛП - лекарственный препарат

ХСН - хроническая сердечная недостаточность

ФК - функциональный класс

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Беленков Ю.Н., Марсев В.Ю. Лечение сердечной недостаточности в XXI веке: достижения, вопросы и уроки доказательной медицины. // Кардиология. - 2008. - №2. - С.6-16.

2. Кукес В.Г., Павлова Л.И. и др. Роль метаболической терапии в нормализации активности альдостеронового звена РААС у больных с хронической сердечной недостаточностью. - // Новые подходы к оптимизации фармакотерапии некоторых заболеваний внутренних органов с позиции персонализированной медицины //. М.: - 2010. - С.124.

3. Арчаков А.И., Карузина И.И., Адрианов Н.В. Цитохром Р450 и окислительная модификация макромолекул. // Вестник АМН СССР. - 1990. - N2. - С.21-27.

4. Баранова Е.И., Большакова О.О., Беркович О.А. Блокада альдостерона - новая стратегия лечения резистентной артериальной гипертензии. // Артериальная гипертензия. - 2008. - Т.14. - №3. - С.203-210.

5. Карабаева А.Ж. Альдостерон, сердечно-сосудистая система и почки. // Нефрология. - 2006. - Т.10. - №1. - С.25-34.

6. Беленков Ю.Н., Привалова Е.В., Данилогорская Ю.А., Железных Е.А., Князева Л.В. Оксидативный стресс при хронической сердечной недостаточности. Возможности фармакологической коррекции. // Кардиологический журнал. - 2009. - №1. - С.4-9.

7. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты. - М.: Издательство «Реафарм», 2004, 144 с.

8. Connell J. Aldosterone - the future challenge in cardiovascular disease. // British Journal of Diabetes & Vascular Disease. - 2013. - V9. P.370-376.

9. Archakov A.I., Bachmanova GX, Karuzina IX, Mengazetdinov D.E. The properties of cytochrome P450 and hydroxylase activity of reconstituted proteoliposomal membranes. // Acta Biol. Med. Germ. - 1979. - bd.38. - P.299-306.

10. Schachter M. Aldosterone antagonism: new ideas, new drugs // The british jornal of cardiology. - 2012. - V9. - №10. - P.533-537.