Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ДОНОРСКОЙ ЭРИТРОЦИТАРНОЙ МАССЫ

Изобретение относится к медицине, а именно, к фармакологии и трансфузиологии, и может быть использовано для консервирования эритроцитарной массы и хранения донорских эритроцитов до 30 суток при t=+4°С.

Консервирование донорской крови и эритроцитарной массы проводится с использованием гемоконсервантов и дополнительных веществ, способствующих укреплению клеточной мембраны эритроцитов, в качестве которых используются вещества, уплотняющие мембрану и частично обезвоживающие ее (сахароза, маннит, сорбит), а также коллоидные препараты (растворы желатина, поливинилпирролидона), которые, обволакивая эритроцитную мембрану, повышают ее стабильность при консервировании (Шевченко Ю.Л., Шабалин В.Н., Заривчатский М.Ф., Селиванов Е.А. «Руководство по общей и клинической трансфузиологии.» - Спб: ООО «Фолиант», 2003, с.127-128.).

Недостатком существующего способа является значительное снижение эффективности: отсутствие влияния на процессы перекисного окисления липидов и образование свободных радикалов при хранении донорских эритроцитов, что неизбежно приводит к ускоренному старению клеток.

Также известен способ консервирования донорской крови путем дополнительного введения 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината (мексидола, далее ОПС) в состав стандартного гемокон-серванта глюгицир в концентрации 0,25 мг/мл глюгицира. При этом консервант содержит в 1 литре воды натрия гидроцитрат двузаме-щенный 20 г, глюкозы безводной 30 г, а также дополнительно ОПС 0,25 г. Соотношение крови и консерванта 4:1 (Патент РФ №2410103).

Недостатком данного способа, несмотря на успешную коррекцию процессов перекисного окисления липидов в донорской крови и повышение ее качества по сравнению с кровью, консервированной только с использованием глюгицира, является снижение защитной активности заявленной комбинации глюгицира ОПС к 14-ым, 21-ым и 30-ым суткам хранения донорской крови.

Целью изобретения является более эффективная защита клеточных мембран эритроцитов, в большей степени ограничение процессов гемолиза и предупреждение образование микросгустков на поздних сроках хранения эритроцитарной массы (14-21-30 сутки).

Поставленная цель решается дополнительным введением 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малата (этоксидола, далее ОПМ) в состав гемоконсерванта глюгицир в концентрации 0,25 мг/мл глюгицира. Консервант содержит в 1 литре воды натрия гидроцитрат двузамещенный 20 г, глюкозы безводной 30 г, ОПМ 25 г. Соотношение крови и консерванта 4:1.

Технический результат заключается в повышении качества эритроцитарной массы при ее хранении до 14-21-30 суток. Консервант позволяет сохранить морфофункциональную полноценность эритроцитов в течение 30 суток.

Изобретение иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1.

Исследование влияния ОПМ проводилось в образцах эритро-цитной массы, заготовленной на гемоконсерванте глюгицир, который содержал 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл ОПМ.

Контролем служила эритроцитарная масса, заготовленная на глюгицире без добавок.

Серией сравнения явились образцы донорской эритроцитарной массы, заготовленной на гемоконсерванте глюгицир, который содержал 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл ОПС.

Исследования ряда показателей, отражающих качество эритроцитов, проводили в образцах эритроцитарной массы сразу после заготовки, затем, в процессе хранения при t=+4°С через 7 суток, 14 суток, 21 сутки и 30 суток.

Влияние ОПМ на морфо-функциональную полноценность донорских эритроцитов исследовали путем определения содержания свободного гемоглобина бензидиновым методом, доли осмотически неустойчивых эритроцитов (по содержанию свободного гемоглобина после помещения эритроцитов в 0,6% раствор натрия хлорида), количества микросгустков (подсчет под микроскопом), определяли процент гемолиза, среднего объема эритроцита (MCV) и ширины распределения эритроцитов (анизоцитоз) на гематологическом анализаторе МЕК-6410К (Япония).

Хранение донорской эритроцитной массы сопровождается увеличением проницаемости клеточной мембраны, ростом осмотической неустойчивости эритроцитов и увеличением содержания свободного гемоглобина, нарастанием количества микросгустков.

На сроках хранения свыше 7 суток в образцах эритроцитарной массы с добавлением ОПМ наблюдалось достоверно более значительное снижение количества микросгустков во всех изученных дозах (0,25 мг/мл, 0,5 и 1,0 мг/мл глюгицира), чем при добавлении к глюгициру ОПС. Так, при использовании препарата в концентрации 0,25 мг/мл показатель снижался относительно данных контроля на 14-е сутки 48%, на 21-е сутки - 47% и на 30-е сутки хранения - на 50% и был меньше серии сравнения, соответственно, на 41%, 31% и 34%.

При использовании для добавления к глюгициру ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл количество микросгустков в образцах эритроцитарной массы снижалось по сравнению с контролем к 14-м суткам на 41%, к 21-м - на 47% и к 30-м - на 52%, в том числе, по сравнению с показателями серии сравнения (с применением ОПС в соответствующей концентрации), на 33%, 30% и 46%, соответственно.

ОПМ в концентрации 1,0 мг/мл позволило ограничить рост количества микросгустков на 14-е, 21-е и 30-е сутки хранения на 41%, 34% и 47%, соответственно, по сравнению с контрольными данными. Кроме того, показатель был ниже серии сравнения на 34%, 14% и 41%.

Минимальное содержание микросгустков определялось в образцах с добавлением ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл. Динамические изменения гематологических показателей эритроцитов, свидетельствуют о целесообразности применения ОПМ при консервировании эритроцитарной массы (табл.1).

Пример 2.

Уровень свободного гемоглобина на 7-е сутки хранения донорской эритроцитарной массы на фоне добавления к консерванту ОПМ в концентрации 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл был ниже контрольных данных на 24%, 33% и 22%, соответственно, и достоверно не отличался от показателей группы сравнения с добавлением ОПС (табл.2).

К 14 суткам хранения эритроцитарной массы в образцах с добавлением к консерванту ОПМ уровень свободного гемоглобина был меньше контрольных данных на 20%, 42% и 27%. При этом в группе сравнения, где к консерванту глюгицир добавлялся ОПС в соответствующих дозах, достоверного снижения содержания свободного гемоглобина не наблюдалось (табл.2).

На 21 сутки хранения эритроцитарной массы с добавлением к консерванту глюгицир ОПМ уровень свободного гемоглобина был ниже показателей контроля на 58%, 69% и 61%, в то время как в серии сравнения с добавлением ОПС показатель снижался относительно контроля только при использовании концентрации 0,25 мг/мл на 34% (табл.2).

К 30-м суткам хранения донорской эритроцитарной массы наибольшее снижение уровня свободного гемоглобина наблюдалось при использовании концентрации ОПМ 0,5 мг/мл.

Пример 3.

Процент гемолиза в образцах донорской эритроцитарной массы снижался при добавлении ОПМ к консерванту глюгицир к 7 суткам хранения по сравнению с контролем на 52%, 69% и 70%, соответственно, при использовании концентрации ОПМ 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл. При этом показатель во всех исследованных концентрациях снижался достоверно в большей степени, чем при добавлении к глюгициру ОПС.

На 14 сутки хранения процент гемолиза также был ниже контроля на 64%, 69% и 63% при использовании концентрации ОПМ 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл, соответственно, и был достоверно меньше данных серии сравнения, где добавлялся ОПС, на 59%, 65% и 61%.

На 21 сутки хранения эритроцитарной массы процент гемолиза был ниже контрольных данных на 49% и 22% в образцах с использованием концентрации ОПМ 0,5 и 1,0 мг/мл. При этом более выраженное снижение процента гемолиза по сравнению с добавлением в консервант ОПС наблюдалось при использовании концентрации ОПМ 0,5 мг/мл (на 56%).

На 30-е сутки хранения эритроцитарной массы процент гемолиза был ниже контрольных данных на 46%, 58% и 48% в образцах с добавлением к консерванту ОПМ в концентрации 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл. Причем, при использовании концентрации 0,5 мг/мл показатель был ниже данных группы сравнения на 19%.

Таким образом, процент гемолиза снижался в большей степени при различных сроках хранения эритроцитарной массы в образцах, где к консерванту глюгицир добавлялся ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл.

Пример 4.

Доля осмотически неустойчивых эритроцитов снижалась по сравнению с контролем на всех сроках наблюдения при добавлении к консерванту глюгицир ОПМ в изученных концентрациях (табл.4). При этом при добавлении ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл показатель не отличался от данных серии сравнения, а в концентрации 1,0 мг/мл был ниже, чем при добавлении ОПС на 32%, 7% и 17% на сроках хранения 14, 21 и 30 суток.

Пример 5.

На всех сроках хранения эритроцитарной массы при добавлении к консерванту глюгицир ОПМ в изученных концентрациях наблюдается уменьшение процессов анизоцитоза (табл.5) и ограничение роста объема эритроцитов (табл.6). При этом предотвращается увеличение ширины распределения размеров эритроцитов и их объема свыше нормы при хранении образцов донорской эритроцитарной массы до 30 суток, в то время как в контроле в 80% случаев на поздних сроках хранения наблюдается увеличение размеров эритроцитов.

Дополнительное применение 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малата в составе гемоконсерванта «глюгицир» позволяет пролонгировать сроки хранения донорских эритроцитов и снизить уровень деструктивных процессов в хранящейся до востребования эритроцитной массе.