×
10.05.2015
216.013.48c4

СПОСОБ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ПРОБОПОДГОТОВКИ БЕЛКОВ ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии, а именно к технологии мяса и мясопродуктов, может быть использовано в ветеринарии. Изобретение представляет собой способ предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающийся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин с последующим хранением полученных образцов, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин, хранение при -4±2°C. Использование 10% р-ра сахарозы упрощает пробоподготовку белков. 2 табл.
Основные результаты: Способ предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающийся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин с последующим хранением полученных образцов, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин, полученные образцы хранят при температуре -4°C±2°C.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к технологии мяса и мясопродуктов, может быть использовано в ветеринарии.

Чтобы обеспечить наилучшие результаты для проявления активности гистохимически выявляемого фермента, необходимо, чтобы в среде поддерживалось значение pH, оптимальное для данного фермента. Это условие достигается введением в среду инкубации буферных растворов с заданными значениями pH. Наиболее распространенными буферными растворами являются фосфатный, ацетатный и трис-буфер.

Известен способ проведения электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, в котором описана предварительная пробоподготовка белков для электрофореза с использованием буферного раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl (Усанова О.Е. / Диссертация. Изучение протеомных изменений мышечной ткани свинины под воздействием технологических факторов // О.Е. Усанова - М. 2011. - 138, с. - 68) [1]. Буферный раствор приготавливали следующим образом:

1. 0,2 г Триса растворили в небольшом количестве воды;

2. Добавили 0,2 мл (200 мкл) HCl и довели до 100 мл водой;

3. Для приготовления 2N HCl - 18,2 мл HCl довели до 100 мл водой;

4. К раствору 0,015 М Трис HCl прилили 0,3 мл (300 мкл) 0,15 М NaCl.

Образцы мяса и мясных изделий измельчали до состояния фарша в блендаре, 10-20 г полученной массы гомогенизировали при комнатной температуре в течение 2-3 мин в 50 мл буферного раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl. Полученные гомогенаты центрифугировали при 20°C со скоростью 15000 оборотов в течение 30 мин. После центрифугирования образцы полученных проб хранили в замороженном состоянии при -18°C.

Расход времени составил 3-4 часа.

Недостатком данного способа является сложность проведения пробоподготовки из-за длительного и дорогостоящего процесса приготовления буферного раствора.

Задачей предлагаемого способа является упрощение пробоподготовки белков для электрофореза, использование более дешевого реактива.

Техническим результатом является сокращение времени на приготовление раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl для подготовки белков для электрофореза путем замены на 10% р-р сахарозы.

Для решения поставленной задачи и указанного технического результата в известном способе предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающемся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин и последующей заморозке полученных образцов, согласно изобретению гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин и хранят полученные образцы при температуре -4°C±2°C.

Сущность метода заключается в следующем: мясо и мясные изделия измельчают в блендаре, полученную массу гомогенизируют при комнатной температуре 5 мин с 50 мл раствора -10 г сахарозы на 100 мл воды. Полученные гомогенаты центрифугируют при температуре 20°C со скоростью 10000 оборотов в мин в течение 30 мин. Подготовленные таким образом полученные образцы для последующего хранения охлаждают при температуре -4°C±2°C.

Пример. Сыровяленый продукт (Суджук) из говядины в количестве 20 г измельчали в блендаре, 10 г полученной массы гомогенизировали в 50 мл 10% р-ра сахарозы при комнатной температуре, далее центрифугировали при температуре 20°C в течение 30 мин со скоростью 10000 оборотов в мин. Подготовленные таким образом экстракты охлаждали при температуре -4°C± 2°C для последующего хранения. Результаты целесообразности применения 10% раствора сахарозы показана в таблице 1.

Таблица 1
Влияние различных концентраций сахарозы на разделение белковых фракций в процессе электрофореза
Наименование раствора Полученный результат
5% раствор сахарозы Белковые фракции выражены слабо, нет четко выделенных границ между зоной тяжелых белков, средних и легких белков.
10% раствор сахарозы Белковые фракции выражены четко, ясно прослеживаются границы между зонами тяжелых, средних и легких белков.
15% раствор сахарозы Белковые фракции сливаются, границы между зонами не выделены.

Согласно результатам, приведенным в таблице 1, можно сделать следующие выводы: использование 10% раствора сахарозы для предварительной пробоподготовки белков для электрофореза более целесообразно, чем 5 и 15% растворы сахарозы.

Таблица 2
Сравнение способов при использовании различных методов исследований (использование раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl, 10% р-ра сахарозы, центрифугирования, хранения, расхода времени)
Наименование способа Наименование методов исследований
Используемые растворы Центрифугирование Хранение Расход времени
Известный способ 1.В растворе 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl идет экстрагирование веществ. При ценрифугировании со скоростью 15000 об/мин полученные гомогенаты располагаются в надосадочной зоне в количестве 35-40 мл. 1. Требуется размораживание полученных образцов. 3-4 ч
2. Требуется проводить дополнительное центрифугирование образцов.
Предлагаемый способ 1. В растворе идет экстрагирование веществ. При центрифугировании со скоростью 10000 об/мин полученные гомогенаты располагаются в надосадочной зоне в количестве 37-42 мл. 1. He требуется размораживание образцов. 1-1,5 ч
2. Не требуется проводить дополнительное центрифугирование.
2. Используется как катализатор в процессе солюбилизации.

Согласно данным, приведенным в таблице 2, можно сделать следующий вывод:

1. При использовании буферного раствора 015 М Трис HCl+0,15 М NaCl и 10% р-ра сахарозы идет экстрагирование веществ, а раствор сахарозы используется и как катализатор процессов;

2. При центрифугировании в известном способе количество гомогенатов на 2 мл меньше, чем в предлагаемом способе;

3. В известном способе полученные гомогенаты хранят в замороженном виде и образцы нужно размораживать и дополнительно центрифугировать;

4. Предлагаемый способ не требует размораживания и центрифугирования, что значительно сокращает время приготовления раствора в целом на 1,5 ч;

5. Кроме того, экспериментальные данные показали, что при использовании 10% раствора сахарозы в среде поддерживается требуемый уровень pH для электрофоретических исследований.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет упростить пробоподготовку белков для электрофореза и использовать более дешевые реактивы.

Способ предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающийся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин с последующим хранением полученных образцов, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин, полученные образцы хранят при температуре -4°C±2°C.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 51 items.
20.06.2014
№216.012.d51c

Бактериологическая петля

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена бактериологическая петля для культивирования микроорганизмов. Бактериологическая петля содержит рукоятку с одной стороны и съемный рабочий элемент с другой стороны. Рабочий элемент представляет собой металлический стержень с ушком на его конце....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002520327
Дата охранного документа: 20.06.2014
27.06.2014
№216.012.d739

Способ восстановления лемехов плугов

Изобретение может быть использовано для восстановления с упрочнением лемехов плугов сельскохозяйственной техники. На поверхности лезвия лемеха выполняют паз и заполняют его припоем. Устанавливают на припой металлокерамические пластины. В место стыка пластин с вертикальной гранью паза наносят...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002520875
Дата охранного документа: 27.06.2014
27.06.2014
№216.012.d914

Устройство для репозиции отломков трубчатых костей

Изобретение относится к ветеринарной хирургии, а именно к инструментам для операций на поврежденных костях конечностей животных. Устройство содержит соединенные шарниром дугообразно изогнутую захватывающую браншу и фиксирующую браншу, выполненные с рукоятками с одной стороны и рабочими...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002521350
Дата охранного документа: 27.06.2014
27.07.2014
№216.012.e584

Способ экстракции и разделения саркоплазматических и миофибриллярных белков мяса на фракции методом одномерного электрофореза в полиакриламидном геле

Изобретение относится к биологии, в частности к биохимии и молекулярной биологии, и может найти применение при разделении саркоплазматических и миофибриллярных белков мяса на фракции в полиакриламидном геле. Способ заключается в экстракции белков путем гомогенизации и центрифугирования образцов...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002524546
Дата охранного документа: 27.07.2014
10.09.2014
№216.012.f0d7

Способ контроля отключения и отказа автоматического повторного включения головного выключателя линии, питающей трансформаторную подстанцию, при самоустранившемся двухфазном коротком замыкании

Изобретение относится к автоматике электрических сетей и предназначено для контроля отключения и отказа автоматического повторного включения (АПВ) головного выключателя (ГВ) линии, питающей трансформаторную подстанцию, при самоустранившемся двухфазном коротком замыкании (КЗ). Технический...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527477
Дата охранного документа: 10.09.2014
10.09.2014
№216.012.f0d9

Способ автоматического регулирования напряжения на электрической подстанции

Использование: в области электротехники. Технический результат - поддержание в норме напряжения и повышение точности регулирования напряжения. Согласно способу задают соотношение между напряжением у ближайших и наиболее удаленных потребителей, получающих питание от отходящих линий электрической...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527479
Дата охранного документа: 10.09.2014
20.10.2014
№216.012.fff9

Способ контроля успешного автоматического повторного включения головного выключателя линии с уменьшением времени выдержки на его включение

Использование: в области электротехники. Технический результат - расширение функциональных возможностей. Согласно способу при появлении броска тока КЗ во все провода линии посылают зондирующие импульсы и определяют параметры аварийного режима путем вычисления количества точек отражения и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002531385
Дата охранного документа: 20.10.2014
20.10.2014
№216.013.0057

Подогреватель топлива

Изобретение может быть использовано в двигателях внутреннего сгорания. Подогреватель топлива, содержащий теплоизолированный корпус (1), в котором установлены позисторы (4) и токоподводящие элементы (2). Корпус (1) подогревателя выполнен в виде штуцера, позисторы (4) выполнены в форме сегмента...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002531479
Дата охранного документа: 20.10.2014
10.11.2014
№216.013.03cd

Способ оценки санитарно-гигиенического состояния молока

(57) Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для определения санитарно-гигиенического состояния молока. Оценивают общее количество бактерий и количество соматических клеток в молоке. Оценку осуществляют по данным измерения биоэлектрического потенциала в биологически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532371
Дата охранного документа: 10.11.2014
10.11.2014
№216.013.04c0

Устройство для накатывания

Изобретение относится к области машиностроения, в частности к устройствам для накатывания сетчатых рифлений и упрочнения поверхностного слоя методом пластического деформирования. Устройство содержит накатную головку, в которой закреплены попарно четыре ролика. Каждая пара роликов размещена на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532614
Дата охранного документа: 10.11.2014
Showing 1-10 of 78 items.
10.02.2013
№216.012.21d1

Состав для производства мясного фарша

Изобретение относится к мясной промышленности, в частности к производству фаршей для приготовления замороженных рубленых изделий из говядины. В говяжьем фарше в качестве биологически активных добавок используют дистилляты плодов в количестве 5% от массы фарша. В качестве дистиллятов плодов...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002474159
Дата охранного документа: 10.02.2013
20.02.2013
№216.012.275d

Способ защиты заглубленных зданий и сооружений от подпорного подтопления грунтовыми водами и устройство для его осуществления

Изобретение относится к строительству зданий и сооружений (ЗиС), а именно к способам их защиты от подпорного подтопления грунтовыми водами их подземной части. Способ защиты заглубленных зданий и сооружений от подпорного подтопления грунтовыми водами заключается в том, что формируют под всем...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475597
Дата охранного документа: 20.02.2013
20.02.2013
№216.012.27b3

Дефлектор для вытяжной вентиляционной трубы

Изобретение относится к дефлекторам, обеспечивающим побуждение естественной вытяжки загрязненного воздуха за счет ветрового напора, и может быть использовано в системах вентиляции. Для повышения эффективности работы и снижения металлоемкости дефлектора его диффузор выполнен в виде цилиндра,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475683
Дата охранного документа: 20.02.2013
10.04.2013
№216.012.3460

Способ диагностики субклинического мастита у коров

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики субклинического мастита у коров. Свежую каплю молока в объеме 2,0-2,5 мкл наносят на обезжиренное предметное стекло, положенное строго горизонтально, и высушивают при температуре около 20°С до получения структуры...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002478951
Дата охранного документа: 10.04.2013
20.05.2013
№216.012.4076

Устройство для ионизации воды

Изобретение относится к устройствам для обработки водных растворов ионами тяжелых металлов, в частности серебра. Оно может быть использовано в различных областях медицины, ветеринарии и в быту. Изобретение обеспечивает возможность визуального контроля силы тока, уменьшение трудоемкости...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482072
Дата охранного документа: 20.05.2013
27.05.2013
№216.012.43dc

Способ восстановления изношенных деталей из алюминиевых сплавов

Изобретение относится к области восстановления изношенных деталей, например, может быть использовано для восстановления с упрочнением наружных и внутренних цилиндрических, плоских и сложнопрофильных поверхностей деталей из алюминиевых сплавов. Способ включает приращение восстанавливаемой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482949
Дата охранного документа: 27.05.2013
27.05.2013
№216.012.4478

Способ получения стимулятора роста дрожжей saccharomyces cerevisiae

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при выращивании дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Способ предусматривает обезжиривание соломы гречихи 100%-ным ацетоном. Обезжиренную солому экстрагируют в 5 л 70%-ного этилового спирта на кипящей водяной бане в течение 1 часа....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483105
Дата охранного документа: 27.05.2013
27.05.2013
№216.012.4499

Способ нанесения покрытий

Изобретение относится к области машиностроения, а именно к электродуговым способам нанесения покрытий на поверхности изделий с использованием металлических проволок, в частности, ремонтном производстве при восстановлении формы и размеров деталей. Способ включает предварительную подготовку...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483138
Дата охранного документа: 27.05.2013
20.06.2013
№216.012.4d76

Дефлектор

Изобретение относится к приспособлениям, обеспечивающим побуждение естественной вытяжки загрязненного воздуха за счет ветрового напора, его очистку от пыли и микроорганизмов, и может найти применение в отраслях АПК, характеризующихся высокой бактериальной обсемененностью и запыленностью воздуха...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485412
Дата охранного документа: 20.06.2013
10.07.2013
№216.012.545d

Способ формирования износостойких покрытий на деталях из алюминиевых сплавов

Изобретение относится к области гальванотехники и может быть использовано для создания износостойких покрытий на трущихся поверхностях подшипников и опор скольжения, направляющих и других деталей машин из алюминиевых сплавов, применяемых в машиностроительной, металлообрабатывающей,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002487200
Дата охранного документа: 10.07.2013
+ добавить свой РИД