Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТОЛБНЯЧНОГО АНАТОКСИНА

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии в частности к способам получения анатоксина столбнячного анатоксина, очищенного жидкого используемого для специфической иммунотерапии. Препарат применяют для иммунотерапии больных и профилактики столбнячной инфекции.

Возбудитель столбняка по современной классификации относится к царству бактерии, типу Firmicutes, порядку Clostridiales, семейству Clostridiaceae, роду Clostridium, виду Clostridium tetani. По структуре Н-антигена выделяют 10 сероваров возбудителя, не отличающихся по другим свойствам друг от друга.

Известен способ получения столбнячного анатоксина, включающий обработку нативного столбнячного анатоксина добавлением 0,3-0.4% раствора формалина при температуре 37-39°С с последующим инкубированием в течение 21-25 дней отличающийся (Патент РФ №3247720 «Способ получения столбнячного анатоксина», МПК А61K 23/00, Опубликовано 05.04.1976, Бюл. 13).

Недостатком известного способа изготовления вакцины является негарантированный уровень полученного антигенного материала не обеспечивающий удовлетворительной защиты против вирусов ящура, циркулирующих в странах Закавказья и Ближнего Востока.

Задачей предполагаемого изобретения является увеличение иммуногенности готового продукта за счет снижения в нем различных примесных продуктов микробного происхождения.

Поставленная задача решается в способе получения столбнячного анатоксина, включающем обработку нативного столбнячного токсина добавлением 0,3-0.4% раствора формалина при температуре 37-39°С с последующим инкубированием в течение 21-25 дней до состояния анатоксина, тем, что к анатоксину добавляют 0,8-1,2% раствор дезмола до концентрации микробных клеток 25-30 млрд/мл с инкубацией в течение 30-60 минут с последующим добавлением сукцината хитозана, взятого в конечной концентрации 0,5% - 1,5%, реакционную смесь инкубиируют в водяной бане в течение 50-60 минут при температуре 37-60°С, далее центрифугируют при 2500-3000 об/мин в течение 10-15 минут, отделяют надосадочную жидкость, которую выдерживают в течение 50-60 минут при 37-60°С с последующим разведением физраствором до содержания 10-14 ЕС в 1 мл.

Известно моюще-дезинфицирующие средства, представляющие собой смеси синтетических детергентов, главным образом анионоактивных и бактерицидных хлорсодержащих веществ. К числу таких средств относится дезмол (авт. свид. №223979, кл. C11D 3/065, 1966 г.). Дезмол содержит поверхностно-активное - вещество триполифосфат натрия, метасиликат натрия, хлорамин, кальцинированную соду, сульфат натрия и воду.

Известен способ получения натриевой соли сукцината хитозана (Патент RU 2144040, МПК С08В 37/08, А61K 31/722, Опубликовано 10.01.2000), который может быть использован в ветеринарии, медицине и косметике в качестве пленкообразователя, гидранта или эмульгатора.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы способа получения столбнячного анатоксина аналогичное заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизны».

Все режимы способа осуществимы в промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:

Пример 1

Для его изготовления используется столбнячный токсин, представляющий собой фильтрат бульонной культуры возбудителя столбняка. Выращивание культуры осуществляется в жидкой питательной среде при 35°С в течение 7 дней известным способом (см. "Руководство по вакцинному и сывороточному делу", п/р ак. П.Н. Бургасова, М., Медицина, 1978, с. 103-133) К стерильному токсину добавляют 0,35% формалина (40%-ный раствор формальдегида), смесь выдерживают при температуре 37°С в течение 21 дней до состояния анатоксина. К анатоксину добавляют 0,8% раствор дезмола до концентрации микробных клеток 25 млрд/мл с инкубацией в течение 30 минут с последующим добавлением сукцината хитозана, взятого в конечной концентрации 0,5%, реакционная смесь инкубируют в водяной бане в течение 50 минут при температуре 37°С, далее центрифугируют при 2500 об/мин в течение 10 минут, отделяют надосадочную жидкость, которую выдерживают в течение 50 минут при 37°С а целевой продукт получают разведением надосадочной жидкости физраствором до содержания 10 ЕС в 1 мл, получая состав 1.

Пример 2

Для его изготовления используется столбнячный токсин, представляющий собой фильтрат бульонной культуры возбудителя столбняка. Выращивание культуры осуществляется в жидкой питательной среде при 35°С в течение 7 дней известным способом (см. "Руководство по вакцинному и сывороточному делу", п/р ак. П.Н. Бургасова, М., Медицина, 1978, с. 103-133) К стерильному токсину добавляют 0,4% формалина (40%-ный раствор формальдегида), смесь выдерживают при температуре 38°С в течение 25 дней до состояния анатоксина. К анатоксину добавляют 1,2% раствор дезмола до концентрации микробных клеток 25-30 млрд/мл с инкубацией в течение 60 минут с последующим добавлением сукцината хитозана, взятого в конечной концентрации 1,5%, реакционную смесь инкубируют в водяной бане в течение 60 минут при температуре 60°С, далее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, отделяют надосадочную жидкость, которую выдерживают в течение 60 минут при 60°С а целевой продукт получают разведением надосадочной жидкости физраствором до содержания 14 ЕС в 1 мл, получая состав 2.

Пример 3

Полученный анатоксин проверяется на стерильность, безвредность, антигенность и иммуногенность. Иммуногенные свойства составов 1 и 2, полученных соответственно примерам 1 и 2, а также известного анатоксина определяют путем введения анатоксина морским свинкам. Формируют 4 группы морских свиной по 10 в каждой группе, каждой которой вводили по 1 мл: 1-я группа животных получала состав 1, вторая - состав 2, третья - известный анатоксин и четвертая группа - физраствор. Через месяц животным подкожно вводят 100 DLM столбнячного токсина. В результате использования составов 1 и 2 выжили не менее 80% и 90% морских свинок соответственно, в то время как в группе 3 выживших оказалось 50%, а в группе 4 - ни одного выжившего животного.

Таким образом, заявляемое предложение повышает иммуногенность целевого продукта на 30-40%.