Результат интеллектуальной деятельности: СТАБИЛЬНЫЕ ЛИОФИЛИЗАТЫ, СОДЕРЖАЩИЕ 5,10-МЕТИЛЕН-(6R)-ТЕТРАГИДРОФОЛИЕВУЮ КИСЛОТУ

Настоящее изобретение относится к стабильным лиофилизатам, содержащим 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-(6R)-CH₂-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.

Как используется в настоящей заявке, 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ относится к 5,10-метилентетрагидрофолиевой кислоте в ее встречающейся в природе изомерной форме (N-[4-[(6aR)-3-амино-1,2,5,6,6а,7-гексагидро-1-оксоимидазо[1,5-f]птеридин-8(9Н)-ил]бензоил]-L-глутаминовая кислота), где хиральные центры на С6 птеридинового кольца и α-углерод глутаминовой кислоты находятся в их встречающейся в природе конфигурации.

5,10-метилентетрагидрофолиевая кислота в комбинации с 5-фторурацилом (5-ФУ), известна в качестве лекарственного средства для лечения солидных опухолей (Seley, K.L. Drugs 4 (1), 99, 2001). Активная форма, 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ, осуществляет ее химиотерапевтическое действие совместно с аналогом основания и метаболитом 5-ФУ 5-FdUMP путем ингибирования фермента тимидилатсинтаза (ТС). ТС катализирует превращение дезоксиуридилата (dUMP) в дезокситимидилат (dTMP), который является ключевой структурной единицей для синтеза ДНК. Деактивация ТС происходит путем образования ковалентного, тройного ингибирующего комплекса между ТС, аналогом основания 5-FdUMP, который представляет собой метаболит 5-ФУ, и 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ. Усиление цитотоксического эффекта 5-ФУ может достигаться путем увеличения внутриклеточной концентрации 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ, вследствие чего повышается стабильность тройного комплекса. Это вызывает непосредственное ингибирование синтеза и репарации ДНК, что в конечном итоге приводит к клеточной гибели и задержке роста опухоли.

Однако существуют нежелательные свойства, связанные с 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ, которые ограничивают ее фармацевтическое применение. Например, 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ является высокочувствительной к окислению и химическому разложению, что приводит к неблагоприятно высокому содержанию примесей. Чувствительность к окислению и химическое разложение 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ является чрезвычайно высокими, когда она представлена в своей аморфной форме и имеет большую поверхность, например, в ее фармацевтически применимой форме, такой как лиофилизат. Хорошо известно, что для пригодности для фармацевтического применения, соответствующая композиция должна соответствовать определенным требованиям, включая высокую химическую и изомерную стабильность, таким образом, чтобы можно было достичь эффективного хранения в течение приемлемого периода времени, без проявления существенного изменения физико-химических характеристик композиции, легкости манипулирования и обработки, и т.д.

5,10-метилентетрагидрофолиевая кислота представляет собой продукт присоединения тетрагидрофолиевой кислоты и формальдегида (см., например, Рое, М. и др. Biochemistry 18 (24), 5527, 1979; Kallen, R.G. Methods in Enzymology 18B, 705, 1971) и известна тем, что является чрезвычайно высокочувствительной к окислению на воздухе, а также нестабильна в нейтральных и/или кислых окружающих средах, что потенциально приводит к химическому разложению и/или гидролизу (см., например, Odin, Е. и др., Cancer Investigation 16 (7), 447, 1998; Osborn, М.J. и др., J. Am. Chem. Soc. 82, 4921, 1960; Hawkes, J., и Villota, R. Food Sci. Nutr. 28, 439, 1989). Попытки стабилизировать композиции, содержащие 5,10-метилентетрагидрофолаты, включают, например, (I) тщательное исключение атмосферного кислорода путем применения специальных технических устройств для восстановления твердых препаратов и инъекции 5,10-метилентетрагидрофолатов в среде без воздуха (см., например, Odin, Е. и др., Cancer Investigation 16 (7), 447, 1998; патент США №4,564,054); (II) добавление восстановителя, такого как L(+)-аскорбиновая кислота или ее соли, восстановленный гамма-глутатион, бета-меркаптоэтанол, тиоглицерин, N-ацетил-L-цистеин, и т.д. в качестве антиоксиданта для высокочувствительной 5,10-метилентетрагидрофолиевой кислоты и для тетрагидрофолиевой кислоты, в частности; (III) стабилизация с помощью соединений включения циклодекстрина (см., например, ЕР 0579996); (IV) добавление цитрата, при этом корригируя значения рН до щелочных значений (см., например, ЕР 1641460); или (V) образование различных кристаллических форм, таких как сульфатные соли (см., например, ЕР 0537492) или гемисульфатные соли (см., например, ЕР 2837631).

Все еще существует большая потребность в фармацевтических композициях в стабильном твердом состоянии, в особенности лиофилизатов, 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ.

Сейчас неожиданно было обнаружено, что определенные лиофилизаты, содержащие 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль, преодолевают ранее обсуждаемые известные недостатки и предоставляют возможность получения фармацевтических композиций в твердом состоянии с высокой чистотой и низким содержанием либо продуктов окисления или других продуктов химического разложения. Благоприятные характеристики стабильности лиофилизатов согласно настоящему изобретению будет предоставлять возможность эффективного применения для медицинских показаний.

В контексте настоящей заявки, термин фармацевтически приемлемые соли относится к кислым солям, таким как сульфатные или сульфонатные соли, предпочтительно сульфатные соли, еще более предпочтительно гемисульфатные соли, или к солям щелочных или щелочноземельных металлов, предпочтительно солям натрия, калия, магния или кальция.

Добавление дикарбоновой кислоты к 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ приводит к поддержанию чистоты активного компонента 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ на существенно высоком уровне во время процесса лиофилизации, и в то же время поддерживать количества побочных продуктов на приемлемом низком уровне. Полученные лиофилизированные продукты проявляют стабильность в течение месяцев или больше без существенной потери активного компонента, например, поддерживая количество активного компонента на уровне или выше 95% и более предпочтительно на уровне или выше 98% в течение нескольких месяцев, включая наиболее предпочтительно приблизительно 99%, 99,5% или 99,8%. Это обеспечивает приготовление, хранение и применение лиофилизатов 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ без существенного разложения перед восстановлением.

Кроме того, было обнаружено, что лиофилизаты согласно настоящему изобретению имеют другое содержание воды, чем соответствующий активный компонент.

Лиофилизация или сушка вымораживанием представляет собой процесс обезвоживания, который осуществляют путем замораживания водного раствора, содержащего растворенный в нем материал и затем понижения окружающего давления для предоставления возможности замороженной воде сублимироваться непосредственно из твердой фазы в газообразную фазу. Обычно существует четыре стадии в полном процессе лиофилизации: предварительная обработка, замораживание, первичная сушка, и вторичная сушка.

Предварительная обработка включает любой способ обработки материала перед замораживанием. Она может включать добавление других компонентов. Предварительная обработка возможна, но не всегда является необходимой для приготовления стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.

Замораживание часто осуществляют путем помещения водного раствора материала в колбу для сушки вымораживанием, которую охлаждают путем механического охлаждения, или применяя сухой лед или жидкий азот. В промышленном масштабе, замораживание водного раствора обычно осуществляют путем использования оборудования для сушки вымораживанием. На этой стадии, важным является охлаждение материала ниже его тройной точки, наиболее низкой температуры, при которой совместно могут существовать твердая и жидкая фазы материала. Это обеспечивает, что на следующих стадиях будет происходить сублимация, а не плавление. Замораживание предпочтительно осуществляют при температурах от -45°С до -70°С при приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль. Возможен отжиг в течение от 1 до 2 часов при температурах полки приблизительно от -5°С до -2°С, но он не является необходимым, для приготовления стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.

Во время фазы первичной сушки, давление понижают (в интервале нескольких миллибар), и поставляют достаточное количество тепла для сублимации материала на льду. На этой начальной фазе сушки, приблизительно 95% воды в материале сублимируется. Эта фаза может быть медленной (может происходить в течение нескольких дней в промышленном масштабе), поскольку, если добавить слишком много тепла, то может измениться структура материала. В фазе первичной сушки, давление контролируется путем применения частичного вакуума. Вакуум ускоряет сублимации, делая ее пригодной в качестве рассчитанного процесса сушки. При приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль, фазу первичной сушки начинают при температуре замораживания предпочтительно от -45°С до -70°С. После этого во время фазы первичной сушки, температуру повышаю, после необязательного стартового периода в течение от предпочтительно 10 минут до 120 минут при температуре замораживания, в динамике до предпочтительно приблизительно 0°С. Во время фазы первичной сушки, поддерживают давление от предпочтительно приблизительно 50 мкбар до 200 мкбар.

Фаза вторичной сушки направлена на удаление незамороженных молекул воды, поскольку лед был удален на фазе первичной сушки. На этой фазе, температуру повышают больше, чем на фазе первичной сушки, и можно даже выше 0°С, для распада любых физико-химических взаимодействий, которые могли образоваться между молекулами воды и замороженным материалом. Обычно давление также понижают на этой стадии для способствования десорбции (типично в диапазоне микробар, или фракций паскаля). Вторичную сушку предпочтительно осуществляют при температурах вплоть до приблизительно 25°С - 30°С и давлении приблизительно 50 мкбар - 200 мкбар при приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH2-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.

Фазу первичной и вторичной сушки можно комбинировать путем поддержания последовательного диапазона температур от температуры замораживания до температур вплоть до приблизительно 25°С - 30°С и давления приблизительно 50 мкбар - 200 мкбар при приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль. Диапазон температур может включать множественные стадии выдерживания, где температура поддерживается постоянной в течение определенного времени. Предпочтительно стадии выдерживания, если они присутствуют, осуществляют при температуре замораживания, при приблизительно 0°С и при приблизительно 25°С - 30°С.

После завершения процесса лиофилизации, вакуум обычно нарушают с помощью инертного газа, такого как азот, перед герметизацией материала. После завершение операции, остаточное конечное содержание воды лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль обычно составляет приблизительно от 1% до 5%.

Стабильность является чрезвычайно важным свойством и компонентом исследований фармацевтических препаратов и разработки лекарственных средств. Исследования химической стабильности осуществляют как в растворе, так и твердом состоянии. Установлено, что стабильность в состоянии раствора и твердом состоянии может отличаться как качественно, так и количественно. Также стабильность в твердом состоянии для кристаллического материала и аморфного материала, такого как лиофилизат, может отличаться. Обширные исследования осуществляют для анализа химической стабильности лекарственных веществ и их фармацевтических композиций, подвергая их воздействию различных стрессовых факторов, таких как высокая температура и/или высокая влажность. Эти исследования также обеспечивают информацию относительно продуктов разложения и помогают разработать полноценные спецификации, а также присущую стабильность фармацевтической композиции. Наиболее распространенные пути разложения лекарственного вещества включают, в частности, гидролиз, окисление и фотохимическое разложение.

Задачей испытания на стабильность является обеспечение подтверждений, как изменяется качество продукта в динамике во времени под влиянием различных факторов окружающей среды, таких как температура, влажность и свет, и установление подходящего срока годности при хранении для фармацевтического продукта и рекомендованных условий хранения для обеспечения безопасности пациента.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и янтарную кислоту или ее соль.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и малеиновую кислоту или ее соль.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и яблочную кислоту или ее соль.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и винную кислоту или ее соль.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и фумаровую кислоту или ее соль.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и щавелевую кислоту или ее соль.

Лиофилизаты согласно настоящему изобретению являются по существу аморфными, при этом имеют увеличенную стабильность, такую как увеличенная стабильность при хранении.

Лиофилизаты согласно настоящему изобретению также предпочтительно восстанавливаются в водный фармацевтический препарат для введения пациенту, который в этом нуждается.

Дальнейший аспект относится к способу приготовления лиофилизатов согласно настоящему изобретению, который включает стадии:

(I) растворение 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли в воде, содержащей дикарбоновую кислоту или ее соль;

(II) замораживание воды; и

(III) последующее удаление замороженной воды в вакууме.

Необязательно водное основание, такое как NaOH или KOH, добавляют на стадии (I) для полного растворения соединения 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота.

Раствор стадии а необязательно можно фильтровать через стерильный фильтр, перед осуществлением стадии (II).

Значение рН раствора на стадии (I) составляет выше 6, обычно приблизительно 8-14, предпочтительно приблизительно 9,3.

Дальнейший аспект относится к восстановленным фармацевтическим композициям лиофилизатов согласно настоящему изобретению, содержащим 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, такой как стерильная вода или жидкий фармацевтически приемлемый наполнитель, который необязательно дополнительно включает по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент, включая, но не ограничиваясь только ими, бактерициды, антибиотики, противовирусные средства, антисептики, противоопухолевые средства, противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты, противогрибковые агенты, и/или противовоспалительные агенты или другие биологически активные или терапевтические агенты, которые пригодны для применения на людях, в частности противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты, например 5-ФУ и производные, и антифолаты, например, метотрексат, Пеметрексед.

"Жидкий фармацевтически приемлемый носитель" относится к пропиленгликолю, полиэтиленгликолю, этанолу, диметилсульфоксиду (ДМСО), N-метилпирролидону (NMP), гликофуролу, изопропилиленглицерину (Solketal), глицеринформалю, ацетону, тетрагидрофурфуриловому спирту, моноглиму, диглиму, диметилизосорбиду или этиллактату, их смесям, или их водным смесям.

Дальнейший аспект относится к применению восстановленных фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению для терапии, предпочтительно для химиотерапии злокачественных новообразований.

Необязательно, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно включать по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент. В специфических вариантах осуществления, по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент может быть выбран из группы, включающей бактерициды, антибиотики, противовирусные средства, антисептики, противоопухолевые средства, противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты, противогрибковые агенты, и/или противовоспалительные агенты или другие биологически активные или терапевтические агенты, которые пригодны для применения на людях, в частности противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты. Противоопухолевое средство, такое как химиотерапевтический агент, может включать, но не ограничиваясь только ими, химиотерапевтические агенты, которые содержат специфические связывающие представители, белки, нуклеиновые кислоты или аналоги нуклеиновых кислот (такие как, но не ограничиваясь только ими, антисмысловые молекулы, рибозимы и миРНК), липиды, стероиды, большие молекулы, небольшие молекулы или металлы. Одно или несколько противоопухолевые средства могут включать один или несколько химиотерапевтических агентов, такие как, но не ограничиваясь только ими: нуклеиновые кислоты, в частности фторированные нуклеиновые кислоты (например, 5-фторурацил или его аналог или пролекарство), антифолаты (например, пеметрексед, ралтитрексед, лометрексол), ингибиторы топоизомеразы (например, иринотекан, топотекан), антиметаболитные лекарственные средства (например, метотрексат, гемцитабин, тезацитабин), модуляторы 5-ФУ, алкилирующие агенты (например, циклофосфамид, кармустин), ингибиторы биосинтеза нуклеиновых кислот (такие как митомицин, антрациклины (например, эпирубицин, доксорубицин), производные платины (например, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин), лекарственные средства, разрушающие микротрубочки (например, паклитаксел, доцетаксел, винорелбин, винкристин), лекарственные средства, блокирующие гормоны (например, тамоксифен), ингибиторы киназ, включая, но не ограничиваясь только ими, рецепторные и нерецепторные тирозинкиназы (например, Iressa, Tarceva, SU5416, РТК787, Gleevec), ингибиторы протеосомы (например, бортезомиб), иммуномодуляторы (например, левамизол), противовоспалительные лекарственные средства, ингибиторы васкуляризации, цитокины (например, интерлейкины, факторы некроза опухоли), и лекарственные средства, которые ингибируют активность цитокинов, гормонов, или рецепторов для цитокинов или гормонов (например, антитело к VEGF бевацизумаб или "Авастин"). Противоопухолевые средства также могут включать моноклональные антитела, такие как, но не ограничиваясь только ими, моноклональные антитела, которые связывают цитокины, гормоны или рецепторы гормонов (например, антитела, которые блокируют активацию EGF или VEGF факторов роста, такие как Авастин, эрбитукс, герцептин), и т.д.

В дальнейших аспектах, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также пригодны для комбинирования с известными противораковыми средствами. Эти известные противораковые агенты включают следующие: модуляторы эстрогенового рецептора, модуляторы андрогенового рецептора, модуляторы ретиноидного рецептора, цитотоксические агенты, антипролиферативные агенты, ингибиторы пренил-протеин-трансферазы, ингибиторы HMG-CoA редуктазы, ингибиторы ВИЧ протеазы, ингибиторы обратной транскриптазы и другие ингибиторы ангиогенеза.

Дополнительно, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению в особенности подходят для применения одновременно с лучевой терапией.

Выражение "модуляторы эстрогенового рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание эстрогена с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов эстрогенового рецептора включают, но не ограничиваясь только ими, тамоксифен, ралоксифен, идоксифен, LY353381, LY117081, торемифен, фулвестрант, 4-[7-(2,2-диметил-1-оксопропокси-4-метил-2-[4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил]-2Н-1-бензопиран-3-ил]фенил-2,2-диметилпропаноат, 4,4'-дигидроксибензофенон-2,4-динитрофенилгидразон и SH646.

Выражение "модуляторы андрогенового рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание андрогенов с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов андрогенового рецептора включают финастерид и другие ингибиторы 5α-редуктазы, нилутамид, флутамид, бикалутамид, лиарозол и абиратерон ацетат.

Выражение "модуляторы ретиноидного рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание ретиноидов с рецептором, независимо от механизма. Примеры таких модуляторов ретиноидного рецептора включают бексаротен, третиноин, 13-цис-ретиноевая кислота, 9-цис-ретиноевая кислота, α-дифторметилорнитин, ILX23-7553, транс-N-(4'-гидроксифенил)-ретинамид и N-4-карбоксифенилретинамид.

Выражение "цитотоксические агенты" относится к соединениям, которые приводят к смерти клетки главным образом путем прямого действия на функционирование клетки или ингибируют или препятствуют миозису клетки, включая алкилирующие агенты, факторы некроза опухоли, интеркалирующие агенты, ингибиторы микротрубулина и ингибиторы топоизомеразы.

Примеры цитотоксических агентов включают, но не ограничиваясь только ими, тирапазимин, сертенеф, кахектин, ифосфамид, тазонермин, лонидамин, карбоплатин, алтретамин, преднимустин, дибромдулцитол, ранимустин, фотемустин, недаплатин, оксалиплатин, темозоломид, гептаплатин, эстрамустин, импросульфан тозилат, трофосфамид, нимустин, диброспидиум хлорид, пумитепа, лобаплатин, сатраплатин, профиромицин, цисплатин, ирофулвен, дексифосфамид, цис-аминдихлор(2-метилпиридин)платина, бензилгуанин, глуфосфамид, GPX100, (транс,транс,транс)бис-му-(гексан-1,6-диамин)му-[диаминплатина(II)]бис[диамин(хлор)платина(II)]тетрахлорид, диаризидинилспермин, триоксид мышьяка, 1-(11-додециламино-10-гидроксиундецил)-3,7-диметилксантин, зорубицин, идарубицин, даунорубицин, бисантрен, митоксантрон, пирарубицин, пинафид, валрубицин, амрубицин, антинеопластон, 3'-деамино-3'-морфолино-13-деоксо-10-гидроксикарминомицин, аннамицин, галарубицин, элинафид, MEN10755 и 4-деметокси-3-деамино-3-азиридинил-4-метилсульфонилдаунорубицин (см. WO 00/50032).

Примеры ингибиторов микротрубулина включают паклитаксел, виндезин сульфат, 3',4'-дидегидро-4'-деокси-8'-норвинкалеукобластин, доцетаксол, ризоксин, доластатин, мивобулин изетионат, ауристатин, цемадотин, RPR109881, BMS184476, винфлунин, криптофицин, 2,3,4,5,6-пентафтор-N-(3-фтор-4-метоксифенил)бензолсульфонамид, ангидровинбластин, N,N-диметил-L-валил-L-валил-N-метил-L-валил-L-пролил-L-пролин-трет-бутиламид, TDX258 и BMS188797.

Ингибиторы топоизомеразы представляют собой, например, топотекан, гикаптамин, иринотекан, рубитекан, 6-этоксипропионил-3',4'-O-эксобензилиденчартреузин, 9-метокси-N,N-диметил-5-нитропиразоло[3,4,5-kl]акридин-2-(6Н)пропанамин, 1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1Н,12Н-бензо[de]пирано[3',4':b,7]индолизино[1,2b]хинолин-10,13(9Н,15Н)дион, луртотекан, 7-[2-(N-изопропиламино)этил]-(20S)камптотецин, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, этопозид фосфат, тенипозид, собузоксан, 2'-диметиламино-2'-деоксиэтопозид, GL331, N-[2-(диметиламино)этил]-9-гидрокси-5,6-диметил-6Н-пиридо[4,3-b]карбазол-1-карбоксамид, азулакрин, (5а,5аВ,8аа,9b)-9-[2-[N-[2-(диметиламино)этил]-N-метиламино]этил]-5-[4-гидрокси-3,5-диметоксифенил]-5,5а,6,8,8а,9-гексогидрофуро(3',4':6,7)нафто(2,3-d)-1,3-диоксол-6-он, 2,3-(метилендиокси)-5-метил-7-гидрокси-8-метоксибензо[с]фенантридиниум, 6,9-бис[(2-аминоэтил)амино]бензо[g]изохинолин-5,10-дион, 5-(3-аминопропил-амино)-7,10-дигидрокси-2-(2-гидроксиэтиламинометил)-6Н-пиразоло[4,5,1-de]акридин-6-он, N-[1-[2(диэтиламино)этиламино]-7-метокси-9-оксо-9Н-тиоксантен-4-илметил]формамид, N-(2-(диметиламино)этил)акридин-4-карбоксамид, 6-[[2-(диметиламино)этил]амино]-3-гидрокси-7Н-индено[2,1-с]хинолин-7-он и димесна.

"Антипролиферативные агенты" включают антисмысловые РНК и ДНК олигонуклеотиды, такие как G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231 и INX3001 и антиметаболиты, такие как, например, эноцитабин, кармофур, тегафур, пентостатин, доксифлуридин, триметрексат, флударабин, капецитабин, галоцитабин, цитарабин окфосфат, фостеабин натрия гидрат, ралтитрексед, палтитрексид, эмитефур, тиазофурин, децитабин, нолатрексед, пеметрексед, нелзарабин, 2'-деокси-2'-метилиденцитидин, 2'-фторметилен-2'-деоксицитидин, N-[5-(2,3-дигидробензофурил)сульфонил]-N'-(3,4-дихлорфенил)мочевина, N6-[4-деокси-4-[N2-[2(Е),4(Е)-тетрадекадиеноил]глициламино]-L-глицеро-β-L-манногептопиранозил]аденин, аплидин, эктеинасцидин, троксацитабин, 4-[2-амино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидро-3Н-пиримидино[5,4-b]-1,4-тиазин-6-ил-(S)-этил]-2,5-тиеноил-b-глутаминовая кислота, аминоптерин, 5-фторурацил, аланозин, сложный эфир 11-ацетил-8-(карбамоилоксиметил)-4-формил-6-метокси-14-окса-1,11-диазатетрацикло(7.4.1.0.0)тетрадека-2,4,6-триен-9-илуксусной кислоты, свайнсонин, лометрексол, дексразоксан, метиониназа, 2'-циано-2'-деокси-М4-палмитоил-1-(3-0-арабинофуранозил цитозин и 3-аминопиридин-2-карбоксальдегид тиосемикарбазон.

"Антипролиферативные агенты" также включают моноклональные антитела к факторам роста, отличающиеся от тех, которые перечислены для "ингибиторов ангиогенеза", такие как трастузумаб, и подавляющие опухоли гены, такие как р53, которые могут быть доставлены с помощью переноса генов, опосредованного рекомбинантным вирусом (см., например, патент США №6 069 134).

Лекарственные средства, приведенные в следующей таблице, предпочтительно, но не исключительно, комбинируют с восстановленными фармацевтическими композициями согласно настоящему изобретению.

Восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут применяться для терапии, специфически для химиотерапии злокачественных новообразований, то есть в способе лечения злокачественного новообразования, который включает введение терапевтически эффективного количества 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

В другом варианте осуществления, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению применяют для терапии, предпочтительно для химиотерапии, то есть для лечения злокачественного новообразования. Примеры злокачественных новообразований, подлежащих лечению, включают, но не ограничиваясь только ими, рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка, рак желчного пузыря, рак желчных проток, рак ободочной кишки, рак прямой кишки, рак печени, рак поджелудочной железы, рак яичников, рак головы и шеи, и мезотелиомный рак.

В предпочтительном варианте осуществления, злокачественное новообразование выбирают из различных форм злокачественных новообразований, включая рак ободочной кишки, рак желудка, рак молочной железы, рак кишечника, рак желчного пузыря, рак легких (специфически аденокарцинома), колоректальный рак (КРР), включая метастатический КРР, рак головы и шеи, рак печени и рак поджелудочной железы.

Восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению представлены в форме, подходящей для парентерального введения, такого как внутривенно или внутримышечно, подкожно, внутриартериально.

Для парентерального введения, флюидизированные единичные дозированные формы типично содержат восстановленные лиофилизаты, предпочтительно восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, необязательно дополнительный терапевтический агент, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, с образованием, например, растворов на водной основе или суспензий на масляной основе. Для парентеральных растворов, лиофилизаты согласно настоящему изобретению можно стерилизовать посредством фильтрации во время их приготовления, например, перед заполнением в подходящий флакон или ампулу.

В случае комбинированной терапии с применением восстановленной фармацевтической композиции согласно настоящего изобретения и по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, активные агенты могут вводиться в виде части одной и той же фармацевтической композиции или по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент может вводиться отдельно, то есть в виде раздельных (и возможно разных) фармацевтических композиций, необязательно с помощью различных путей введения, либо одновременно или последовательно.

Доза активного(ых) агента(ов), то есть 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ (и необязательно по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента), используемых для лечения, как описано в настоящей заявке, будет зависеть от различных факторов, включая возраст и состояние здоровья субъекта, подвергаемого лечению, тип и тяжесть заболевания, подвергаемого лечению, и частоты ведения, и т.д. Квалифицированные специалисты в области лечения злокачественных новообразований и химиотерапии смогут определить терапевтически эффективные количества и схемы применения для активного фармацевтического компонента 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ отдельно или в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом, как определено выше, на основании известных протоколов для оценки токсичности и эффективности.

Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству активного соединения, которое проявляет биологическую или медицинскую ответную реакцию в ткани, системе, животном, индивидууме или человеке, которая предполагается квалифицированным практиком (например, исследователем, ветеринаром, лечащим врачом или другим клиницистом или лицом, осуществляющим лечение), которая включает (I) предотвращение заболевания; и/или (II) ингибирование заболевания (например, остановку дальнейшего развития патологии и/или симптоматологии); и/или (III) ослабление заболевания (например, обращение патологии и/или симптоматологии). Аналогичным образом, термин "лечение", как используется в настоящей заявке, относится к: (I) предотвращение заболевания; и/или (II) ингибирование заболевания (например, остановку дальнейшего развития патологии и/или симптоматологии); и/или (III) ослабление заболевания (например, обращение патологии и/или симптоматологии).

Предпочтительная фармацевтическая композиция может содержать от 0,1% до 99 мас. %, предпочтительно 10-60 мас. %, активного фармацевтического компонента (то есть 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ необязательно в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом), в зависимости от способа введения.

Типичные диапазоны дозировок 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ для применения для лечения злокачественного новообразования могут находиться в диапазоне от 5 мг/м² до 1,5 г/м², предпочтительно от 30 мг/ м² до 500 мг/м² (для лечения рака ободочной и прямой кишки) соотв. от 10 мг/м² до 1000 мг/м² (для терапии с применением метотрексата), и более предпочтительно от приблизительно от 60 мг/м² до приблизительно 300 мг/м² (для лечения рака ободочной и прямой кишки) соотв. от 50 мг/м² до 500 мг/м² (для терапии с применением метотрексата).

Термины "изомерная чистота" соотв. "стереоизомерная чистота", как используется в настоящей заявке, относятся к количеству 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ в образце, который может содержать один или несколько других изомеров одного и того же соединения. Термины "изомерно чистый" соотв. "стереизомерно чистый", как используется в настоящей заявке, обозначает 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ в изомерном избытке по сравнению с другими изомерами больше, чем приблизительно 80%, предпочтительно больше, чем приблизительно 90%, предпочтительно больше, чем приблизительно 95%, более предпочтительно больше, чем приблизительно 97%, еще более предпочтительно больше, чем приблизительно 99%, более предпочтительно больше, чем приблизительно 99,5% или более, и наиболее предпочтительно вплоть до 100%, где остаток может составлять один или несколько других изомеров.

Термин "химическая чистота", как используется в настоящей заявке, обозначает процентное содержание предпочтительного соединения в образце. Термин "существенная химическая чистота", как используется в настоящей заявке, относится к соединению приблизительно с 80% химической чистотой, предпочтительно приблизительно 90%, более предпочтительно приблизительно 95%, более предпочтительно приблизительно 97%, более предпочтительно приблизительно 98% химической чистотой, и наиболее предпочтительно 99% или выше, чем 99%, например, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, 99,9 или вплоть до 100% химической чистотой, как определяется с помощью ВЭЖХ. Химические примеси могут включать непрореагировавший исходный материал (включая растворитель), продукты разложения 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ (такие как тетрагидрофолиевая кислота и ее продукты разложения), и т.д.

Термин "фармацевтически приемлемый", как используется в настоящей заявке, указывает на то, что носитель разрешен или признан контрольным органом для применения у животных, и более предпочтительно у людей, то есть он не является токсичным для хозяина или пациента. Дополнительно, предпочтительный носитель не будет препятствовать эффективности биологической активности активного компонента. Термин "носитель" относится к любому вспомогательному материалу, необходимому для конкретного предпочтительного способа введения и включает, например, растворитель (разбавители) наполнители, или другие вспомогательные вещества, с которыми вводят лиофилизаты согласно настоящему изобретению. Типично применяемые разбавители фармацевтические носители включают стерильные жидкости, такие как водные растворы и масла (например, из нефтепродуктов, животного, растительного или синтетического происхождения), например, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и другие. Типично применяемые водные жидкости включают воду, солевые растворы, водные растворы декстрозы и глицерина и другие. Подходящие фармацевтические наполнители включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, глицерин моностеарат, тальк, сухое снятое молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и другие. Примеры подходящих фармацевтических носителей хорошо известны в области техники и описаны, например, в "Remington's Pharmaceutical Sciences" под ред. E.W. Martin (18-ое изд., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990).

Примеры

Онлайн данные, записанные во время лиофилизации, представлены на Фиг. 1.

Пример 1: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и яблочную кислоту

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С (получая рН 14,0). Добавляли 6,96 г яблочной кислоты и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,0) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 11,65 г очищенной воды. В общей сложности 2,15 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1. 5,0 мл полученного прозрачного раствора (составляя 5,181 г - 5,184 г) вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (36 флаконов). Флаконы сразу замораживали с жидким азотом и лиофилизировали при <10^-1 мбар. Полученные флаконы содержали лиофилизат 102 мг 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рассчитанный в виде свободной кислоты) с яблочной кислотой. Вес осадка составлял 258 мг. 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 97,42% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ. Содержание воды составляло 2,7 мас. %, что соотв. 7,0 мг на флакон.

При восстановлении раствор имел осмоляльность 253 мОсмол/кг.

Пример 2: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и янтарную кислоту

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С (получая рН 14,0). Добавляли 10,56 г гексагидрата сукцината натрия и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,8) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 12,74 г очищенной воды. В общей сложности 14,8 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1.

5,0 мл полученного прозрачного раствора (составляющего 5,0959 г и 5,1079 г) вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (36 флаконов). Флаконы сразу замораживали с жидким азотом и лиофилизировали при <10^-1 мбар.

Полученные флаконы содержали лиофилизат 102 мг 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рассчитанный в виде свободной кислоты) с янтарной кислотой. Вес осадка составлял 242 мг. 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 97,35% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ. Содержание воды составляло 1,1 мас. %, что соотв.. 2,6 мг на флакон.

При восстановлении раствор имел осмоляльность 267 мОсмол/кг.

Пример 3: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и малеиновую кислоту

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С. Добавляли 13,92 г ди-натрий малеат гидрата и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,8) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Охлаждение прекращали и температуру повышали до комнатной температуры. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 17,05 г очищенной воды. В общей сложности 18,4 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1.

Прозрачный раствор выдерживали в течение 2 часов при комнатной температуре.

5,0 мл полученного прозрачного раствора вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (7 флаконов). Флаконы лиофилизировали. Полученные флаконы содержали лиофилизат 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты с малеиновой кислотой. 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 97,54% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ.

Пример 4: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и фумаровую кислоту

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С. Добавляли 6,26 г ди-натрия фумарат и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,8) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Охлаждение прекращали и температуру повышали до комнатной температуры. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 17,66 г очищенной воды. В общей сложности 19,1 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1. Прозрачный раствор выдерживали в течение 2 часов в атмосфере аргона при комнатной температуре.

5,0 мл полученного прозрачного раствора вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (7 флаконов). Флаконы лиофилизировали. Полученные флаконы содержали лиофилизат 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты с фумаровой кислотой. 5, 10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 96,80% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ.

Пример 5: Долгосрочная стабильность лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и дикарбоновую кислоту (содержание (6R)-5,10-СН₂-ТГФ)

Для определения долгосрочной стабильности лиофилизатов 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ, приготовленных в соответствии с Примерами 1-4, лиофилизаты хранили на воздухе при +5°С, +25°С/60% относительной влажности и +40°С/75%

относительной влажности. Содержание оставшейся 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ измеряли с помощью ВЭЖХ через периодические интервалы и представляли путем сравнения с исходным значением (% отн.). Результаты представлены в Таблицах 1 и 2.

Таблицы 1 и 2 убедительно показывают, что лиофилизаты 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ являются чрезвычайно стабильными в течение длительного периода времени даже при повышенных температурах.

Пример 6: Долгосрочная стабильность лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и дикарбоновую кислоту (содержание индикатора стабильности 10-формил-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты)

Для определения долгосрочной стабильности лиофилизатов (6R)-5,10-CH₂-ТГФ, приготовленных в соответствии с Примерами 1-4, лиофилизаты хранили на воздухе при +5°С, +25°С/60% относительной влажности и +40°С/75% относительной влажности. Содержание основного продукта разложения 10-формил-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты измеряли с помощью ВЭЖХ через периодические интервалы. Результаты представлены в Таблицах 3 и 4.

Таблицы 3 и 4 подтверждают, что лиофилизаты 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ являются чрезвычайно стабильными в течение длительного периода времени даже при повышенных температурах.

Не происходит ни плавления, ни коллапса во время процесса лиофилизации 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ в соответствии с настоящим изобретении. Процесс прогоняют при температуре полки 30°С и давлении 200 мкбар. Экстенсивное сжатие осадка уменьшается, корка, демонстрирующая плотную структуру, образуется на верху лиофилизатов согласно настоящему изобретению. Необязательно, осуществляют отжиг в течение 1-2 часов при температурах приблизительно от -5°С до -2°С.

Пример 7: Стабильность восстановленных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и дикарбоновую кислоту

Для определения стабильностей восстановленных лиофилизатов (6R)-5,10-CH₂-ТГФ, приготовленных в соответствии с Примерами 1-4, лиофилизаты, содержащие 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту на флакон, повторно растворяли в 10 мл воды (время растворения). Через дополнительные 50 минут, измеряли содержание 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Затем раствор охлаждали до -18°С и хранили в течение 12 дней при -18°С. После этого снова измеряли содержание 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Флаконы снова нагревали вплоть до комнатной температуры и хранили в течение дополнительных 5 дней. После этого снова измеряли содержание 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Соответствующее сравнительные флаконы, содержащие 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и три-цитрат натрия, 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и ацетат натрия, и только 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту (без дикарбоновой кислоты) обрабатывали и анализировали эквивалентно. Все результаты (измеренные с помощью ВЭЖХ) рассчитывали относительно исходного значения. Результаты представлены в Таблице 5.

Таблица 5 подтверждает, что восстановленные лиофилизаты 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ являются приемлемо стабильны в динамике, когда хранятся при низких температурах.