Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПТИЦ

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к средствам для профилактики и лечения вирусных заболеваний птиц.

Вирусные заболевания птиц являются крайне опасными, так как при их возникновении поражается вся птица, которая содержится в хозяйстве. Инфекционные заболевания протекают у птицы очень быстро, за несколько дней может пасть большое ее количество и может погибнуть все поголовье. В тяжелых случаях единственный способ избежать распространения заболевание - уничтожение зараженных птиц. При этом некоторые инфекционные заболевания домашней птицы представляют большую опасность не только для самих пернатых, но и для людей.

Наиболее подверженным вирусным заболевания являются молодые птицы в возрасте 1 - 5 месяцев. Источником заболевания могут быть зараженные особи, подстилка, вода и даже воздух. Заражение происходит алиментарно, аэрогенно и через перьевые фолликулы. Возможна передача вируса через продукты убоя больной птицы, предметы ухода и т.д.. Наиболее распространенными и опасными болезнями птиц вирусной этиологии являются: болезнь Марека - нейролимфоматоз птиц, болезнь Ньюкастла - псевдочума птиц, болезнь Гамборо, грипп - классическая чума птиц, а также оспа, лейкоз и ларинготрахеит. К этим болезням особо чувствительны куры, что приводит к большому падежу и серьезным потерям в хозяйствах. Кроме того подвержены указанными выше болезнями также индюшки, утки, фазаны, перепела, куропатки. Болеют и дикие птицы: вороны, лебеди, утки, скворцы, ласточки и т.д.

Единственным эффективным способом борьбы с вирусными инфекционными заболеваниями является поголовная вакцинация. Чтобы создать иммунитет цыплят вакцинируют в суточном возрасте. Вакцинация обеспечивает достаточно благополучную ситуацию в птицеводческих хозяйствах России. Однако, несмотря на эти меры, отмечаются вспышки вирусных заболеваний.

Вакцинация является весьма надежным и в настоящее время практически единственным способом предотвращения заболеваемости птиц. Однако, защита, обеспечиваемая существующими вакцинами, часто бывает недостаточной. Поэтому вопрос повышения эффективности средств борьбы с болезнями птиц является актуальным. Как правило, он решается изменением качества вакцин. Крайне редки работы предлагающие использование для борьбы с вирусными болезнями птиц лекарственных препаратов.

В патенте №2209076 Романов В.В. «СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНЕЙ ПТИЦ БАКТЕРИАЛЬНОЙ И ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ» для профилактики вирусных заболеваний птиц предложено использовать гомеопатический препарат содержащий Lachesis, Echinacea, Aconitum, Bryonia, Belladonna.

Авторы патента №2034565 «БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ КУР И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КУР» Лазарев Алексей Павлович; Левашов Андрей Вадимович; Сухарев Олег Иванович; Кононенко Сергей Алексеевич; Оксамитный Виктор Николаевич; Сапейко Василий Петрович предлагают использовать в качестве лекарственного средства содержащий белки, аминокислоты и другие продукты культивирования индуцированных лимфоидных клеток кур. Данное средство обладает высокой противовирусной активностью, определяемой in vitro, однако данных по эффективности не приведено.

В патенте №2283126 «Средство для профилактики и лечения вирусного гриппа птиц» предложено использовать в качестве противовирусного средства экстракт бересты. Результаты исследований свидетельствуют о том, что экстракт бересты оказывает профилактическое действие при гриппозной пневмонии мышей, обусловленной вирусом гриппа птиц A/H5N3. Лечебно-профилактическое введение препарата способствовало увеличению срока жизни мышей по сравнению с контрольной группой. Данные по эффективности препарата по отношению к птицам не приведены.

Патент SU 1671310 А1 «Способ профилактики вирусных заболеваний птиц» Г.Ф. Коромыслов, Г.И. Устинов, О.В. Жукова, Т.М. Андронова, С.М. Салгереев, Е.А. Мещерякова, В.Т. Иванов авторское свидетельство СССР №826534. Цель - повышение иммунитета и снижение реактогенности вакцин для профилактики болезни Ньюкастла и Марека - достигается использованием иммуностимулятора N-ацетилглюзаминил - β-1→4)-N-ацетиллмурамилаланил-D-азоглутамин (ГМПД), который вводится внутримышечно 10-15 дневным цыплятам в дозе 8-60 мкг/кг массы в 0,1-0,2 мл физ. раствора одновременно с вакциной, а затем перорально в той же дозе ежедневно с течении 3-10 дней. Наиболее близким аналогом является патент RU 2408370, опубл.: 10.01.2011, на способ вакцинации птиц против гриппа, включающий применение инактивированной вакцины в сочетании с иммуномодулятором, отличающийся тем, что в качестве иммуномодуля-тора используют мирамистин, причем вводят его интраназально по 0,2-0,3 мл в каждую носовую полость птицы.

Мирамистин - лекарственный препарат, относящийся к группе катионных антисептиков, поверхностно-активных веществ (четвертичные аммониевые соединения) и обладающий противомикробным, противовоспалительным и местным иммуноадьювантным действием. Препарат активен в отношении различных патогенных микроорганизмов, в том числе вирусов, грибков, бактерий и простейших.

Технической проблемой прототипа является недостаточная эффективность вакцинации, связанная с тем, что препарат «Мирамистин» является видоспецифичным. По этой причине препарат не может быть введен инъекционно, ввиду возможного развития анафилактического шока, часто наблюдающегося при инъекционных инфузиях видонеспецифичных биологических субстанций. Также препарат не эффективен в качестве противовирусного, что снижает эффективность вакцинации.

Задачей изобретения является устранение недостатков прототипа.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности вакцинации, связанное с тем, что вакцинацию проводят инъекционно препаратом, не имеющим видовую специфичность, и поэтому не вызывающим аллергические и пирогенные реакции, которые проявляются в виде повышения температуры, а также имеющим противовирусную эффективность.

Указанный технический результат достигается за счет того, что заявлен способ лечения и профилактики вирусных инфекционных заболеваний птиц, отличающийся тем, что цыплятам на 5-10 день жизни внутримышечно в зону наружной подвздошно-бедренной мышцы (museums iliofemoralis externus) с глубиной введения иглы 3-7 мм вводят в течение 2 секунд противовирусный препарат аллоферон в дозе 100 мкг на особь, причем дозу рассчитывают исходя из условия: 0,1 мл из разведенного 1 мг Аллокин в 1 мл физиологического раствора. Осуществление изобретения

Сущность способа выражена тем, что цыплятам на 5-10 день жизни внутримышечно в зону наружной подвздошно-бедренной мышцы (musculus iliofemoralis externus) с глубиной введения иглы 3-7 мм вводят в течение 2 секунд противовирусный препарат аллоферон в дозе 100 мкг на особь, причем дозу рассчитывают исходя из условия: 0,1 мл из разведенного 1 мг Аллокин в 1 мл.

Вводимый препарат на основе пептида аллоферон обладает противовирусным и иммуно-модулирующим действием.

Известно семейство цитокиноподобных пептидов - аллофероны, обладающих высокой противовирусной активностью (RU 2172322 Черныш С.И., Ким Су Ин, Беккер Т.П., Махалдиани Н.Б., Хоффманн Ж., Бюле Ф. «Аллофероны - иммуномодулирующие пептиды»). Механизм действия аллоферонов состоит в индукции синтеза эндогенных интерферонов и активации системы естественных киллеров. Препарат является безопасным для людей и животных.

На основе аллоферона создан противовирусный лекарственный препарат «Аллокин-альфа, лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения, 1 мг» (Р N 002829/01). Аллокин-альфа эффективен при терапии пациентов страдающих хронической папилло-мавирусной инфекцией, вызванной онкогенными вирусами папилломы человека; в комплексной терапии хронического рецидивирующего герпеса 1 и 2 типов; в составе комплексной терапии среднетяжелой (желтушной) формы острого гепатита В. Противовирусные и иммуномодулирующие свойства аллоферона в сочетании с вакцинацией могут дать большой положительный эффект в защите птиц от вирусных болезней. Данные исследований применения аллоферона подтверждены примером. Испытания проводили на сельскохозяйственной птице (суточные цыплята кросса «Смена 8», ФГБУ Селекционно-генетический центр «Смена», 141357, Московская область, Сергиево-Посадский район, дер. Березняки, д. 117). 280 цыплят по методу аналогов были разбиты на 8 групп по 35 цыплят в каждой.

Внутримышечную вакцинацию птицы проводили по схеме, представленной в Таблице 1, при этом использовались следующие вещества:

- препарат «Аллокин-альфа» (далее - Аллокин), 1 мг лиофилизата восстанавливали физиологическим раствором до объема 1 мл и вводили внутримышечно в область бедра в объеме 0,1 мл;

- опытным путем установили быстрый и безопасный для птицы способ введения иглы на глубину 3-7 мм с процедурой ввода инъекции в тело за 2 секунды;

- сухая культуральная вирусвакцина из штамма FC-126 вируса герпеса индеек (далее - вакцина-ВГИ, ВГИ) производства ООО НПП «АВИВАК» (188502, Ленинградская область, Ломоносовский район, д. Горбунки), флакон на 1000 доз восстанавливали до объема 50 мл мл и вводили внутримышечно в область бедра в объеме 0,2 мл.

На 28, 40, 50, 60, 70 и 80-е сутки после первой вакцинации цыплята были умерщвлены методом цервикальной дислокации с последующим получением материала (перьев и перьевых фолликулов) для проведения исследований по выявлению антигена. Методика получения антигена:

У каждой птицы с наружной поверхности бедра выщипывают по 10-15 перьев с наличием производящей ткани (эпителия перьевых фолликулов) внутри очина. Очины перьев цыплят одной группы измельчают ножницами на кусочки по 1-2 мм, затем их растирают в ступке или гомогенизаторе.

Массу заливают физиологическим раствором 1:10, и обрабатывают ультразвуком при частоте 28 кГц с тройной экспозицией 30 с (общая экспозиция - 1,5 мин). Полученный суспензию замораживают и оттаивают, после чего экстрагируют в течение 24 ч. при температуре 4°С.

Надосадочную жидкость экстракта используют в качестве испытуемого антигена в реакции диффузионной преципитации.

Выявление антигена к вирусу болезни Марека проводили согласно ГОСТ 25586-83 «Птица сельскохозяйственная. Методы лабораторной диагностики болезни Марека». Специфический антиген обнаруживали в эпителии перьевых фолликулов методом диффузионной преципитации в геле (РДП). Реакция диффузионной преципитации (РДП) - серологическая реакция, основанная на способности к диффузии в гелях специфических антител и растворимых гомологичных антигенов с образованием в толще геля комплекса [антиген + антитело], который обнаруживается в виде полосы преципитации.

Эффективность метода при диагностике ВБМ составляет 98,7%. Данный экспресс-метод отличается быстротой и простотой постановки, отсутствием необходимости в стерильности компонентов, а также дешевизной материалов, необходимых для его постановки. Эффективность препарата оценивали методом подсчета количества проб, взятых от птицы одной группы в одинаковые сроки, у которых выявлен антиген в диагностическом титре 1:2-1:4. Результаты определения вируса в экстракте перьевых фолликулов вакцинированных цыплят на 28, 40, 50, 60, 70, 80-е сутки после первой вакцинации представлены в Таблице 2.

Таблица 2. Результаты определение вируса в экстракте перьевых фолликулов вакцинированных цыплят.

Результаты динамики выявления антигена в материале, полученном от цыплят, подтверждают эффективность применения препарата «Аллокин-альфа» в качестве противовирусного при моделировании экспериментальной вирусной инфекции птиц путем введения вакцинного штамма ВГИ:

Группа №1 - вирус не выявлен ни в одной из проб на протяжении опыта.

Группа №2 - вирус выявлялся в подавляющем большинстве проб на протяжении всего опыта (83,3-100%).

Группа №3 - вирус не выявлен ни в одной из проб на протяжении опыта.

Группа №4 - отмечается отрицательная динамика выявления вируса (от 33,3% до 14,3%).

Группа №5 - четкой динамики выявления вируса в пробах не выявлено (33,3% - 25,0% - 40,0% - 33,3%).

Группа №6 - отмечается отрицательная динамика выявления вируса (от 50,0% до 16,7%).

Группа №7 - отмечается отрицательная динамика выявления вируса (от 33,3% до 16,7%).

Группа №8 - установлена отрицательная динамика - снижение числа положительных результатов РДП по индикации АГ ВГИ с увеличением срока взятия проб на исследования после вакцинации (50,0% положительных результатов РДП у проб, взятых на 28 сутки против 16,7% у проб, взятых на 80 день после вакцинации).

Отмечено также увеличение числа положительных результатов РДП по индикации АГ ВНИ в зависимости от времени применения препарата «Аллокин-альфа». При введении Аллокина на 10 сутки после вакцинации ВГИ (группа №7) число положительных результатов РДП составило 33% против 50% при исследовании проб от птиц, которым препарат вводили на 5 и 15 сутки (группы №№6 и 8) (взятие проб производили на 28 сутки). Полученные результаты свидетельствуют об эффективности применения препарата «Аллокин-альфа» при вакцинации сельскохозяйственной птицы вакцинным штаммом ВГИ. По результатам динамики выявления антигена в экстракте из перьевых фолликулов вакцинированных цыплят в реакции диффузионной преципитации установлено:

- препарат «Аллокин-альфа» не является видоспецифичным;

- препарат «Аллокин-альфа» эффективен в качестве противовирусного.