Результат интеллектуальной деятельности: ПОЛИМОРФНЫЕ МОДИФИКАЦИИ N-[(3-ФТОР-4-МЕТОКСИПИРИДИН-2-ИЛ)МЕТИЛ]-3-(МЕТОКСИМЕТИЛ)-1-({ 4-[(2-ОКСОПИРИДИН-1-ИЛ)МЕТИЛ]ФЕНИЛ} МЕТИЛ)ПИРАЗОЛ-4-КАРБОКСАМИДА И ИХ СОЛИ

Настоящее изобретение относится к новым полиморфным модификациям ингибитора плазменного калликреина, содержащим их фармацевтическим композициям и их применению в терапии.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ, ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ ИЗОБРЕТЕНИЮ

У ингибиторов плазменного калликреина существует ряд терапевтических применений, в частности, при лечении проницаемости сосудов сетчатки, ассоциированной с диабетической ретинопатией, диабетического отека желтого пятна и наследственного ангионевротического отека.

Плазменный калликреин представляет собой трипсиноподобную сериновую протеазу, которая может высвобождать кинины из кининогенов (cм. K. D. Bhoola et al., "Kallikrein-Kinin Cascade", Encyclopedia of Respiratory Medicine, p483-493; J. W. Bryant et al., "Human plasma kallikrein-kinin system: physiological and biochemical parameters" Cardiovascular and haematological agents in medicinal chemistry, 7, p234-250, 2009; K. D. Bhoola et al., Pharmacological Rev., 1992, 44, 1 и D. J. Campbell, "Towards understanding the kallikrein-kinin system: insights from the measurement of kinin peptides", Brazilian Journal of Medical and Biological Research 2000, 33, 665-677). Он является необходимым членом эндогенного каскада свертывания крови, хотя его роль в этом каскаде не включает высвобождение брадикинина или ферментативное расщепление. Плазменный прекалликреин кодируется одним геном и синтезируется в печени. Его секретируют гепатоциты в виде неактивного плазменного прекалликреина, который циркулирует в плазме в виде гетеродимерного комплекса, связанного с высокомолекулярным кининогеном, который активируется с высвобождением активного плазменного калликреина. Кинины представляют собой сильнодействующие медиаторы воспаления, которые действуют через сопряженные с G-белками рецепторы, и ранее проводили исследования антагонистов кининов (таких как антагонисты брадикинина) в качестве потенциальных терапевтических средств для лечения ряда нарушений (F. Marceau and D. Regoli, Nature Rev., Drug Discovery, 2004, 3, 845-852).

Полагают, что плазменный калликреин играет определенную роль в ряде воспалительных нарушений. Основным ингибитором плазменного калликреина является ингибитор C1-эстеразы серпин. Пациенты с генетической недостаточностью ингибитора C1-эстеразы страдают наследственным ангионевротическим отеком (HAE), что приводит к периодическому отеку лица, рук, гортани, желудочно-кишечного тракта и гениталий. Волдыри, образующиеся в течение острых эпизодов, содержат высокие уровни плазменного калликреина, который расщепляет высокомолекулярный кининоген, высвобождая брадикинин, что приводит к увеличенной проницаемости сосудов. Показано, что лечение большим белком ингибитора плазменного калликреина приводит к эффективному лечению HAE, предотвращая высвобождение брадикинина, который является причиной увеличенной проницаемости сосудов (A. Lehmann "Ecallantide (DX-88), a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditary angioedema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery" Expert Opin. Biol. Ther. 8, p1187-99).

У пациентов с развитым диабетическим отеком желтого пятна аномально увеличена представленность плазменной калликреин-кининовой системы. Недавно опубликовано, что плазменный калликреин способствует дисфункции сосудов сетчатки у крыс с диабетом (A. Clermont et al. "Plasma kallikrein mediates retinal vascular dysfunction and induces retinal thickening in diabetic rats" Diabetes, 2011, 60, p1590-98). Кроме того, введение ингибитора плазменного калликреина ASP-440 крысам с диабетом снижает проницаемость сосудов сетчатки и аномалии кровотока сетчатки. Таким образом, ингибитор плазменного калликреина может находить применение в качестве лечебного средства для снижения проницаемости сосудов сетчатки, ассоциированной с диабетической ретинопатией и диабетическим отеком желтого пятна.

Плазменный калликреин также играет определенную роль в свертывании крови. Эндогенный каскад свертывания может активировать фактор XII (FXII). После активации FXII (до FXIIa) FXIIa инициирует образование фибрина посредством активации фактора XI (FXI), что, таким образом, приводит к свертыванию крови. Плазменный калликреин является ключевым компонентом эндогенного каскада свертывания, так как он активирует FXII до FXIIa, что, таким образом, приводит к активации эндогенного каскада свертывания. Кроме того, FXIIa также активирует дополнительный плазменный прекалликреин, что приводит к образованию плазменного калликреина. Это приводит к усилению положительной обратной связи системы плазменного калликреина и эндогенного каскада свертывания (Tanaka et al. (Thrombosis Research 2004, 113, 333-339); Bird et al. (Thrombosis and Haemostasis, 2012, 107, 1141-50).

Контакт FXII крови с отрицательно заряженными поверхностями (такими как поверхности наружных трубок или мембрана оксигенатора, через которые проходит кровь при хирургических операциях в условиях искусственного кровообращения) индуцирует конформационные изменения в проферменте FXII, что приводит к образованию небольшого количества активного FXII (FXIIa). Образование FXIIa инициирует образование плазменного калликреина, что приводит к свертыванию крови, как описано выше. Активация FXII до FXIIa также может происходить в организме при контакте с отрицательно заряженными поверхностями различных источников (например, бактерий при сепсисе, РНК разрушенных клеток), таким образом, приводя к диссеминированному внутрисосудистому свертыванию (Tanaka et al. (Thrombosis Research 2004, 113, 333-339)).

Таким образом, ингибирование плазменного калликреина может ингибировать каскад свертывания крови, описанный выше, а также может являться пригодным при лечении диссеминированного внутрисосудистого свертывания и свертывания крови при хирургических операциях в условиях искусственного кровообращения, когда свертывания крови нежелательно. Например, Katsuura et al. (Thrombosis Research, 1996, 82, 361-368) продемонстрировали, что введение ингибитора плазменного калликреина, PKSI-527, при индуцированном LPS диссеминированном внутрисосудистом свертывании значимо подавляло уменьшение количества тромбоцитов и уровня фибриногена, а также увеличение уровня FDP, которое, как правило, происходит при диссеминированном внутрисосудистом свертывании. Bird et al. (Thrombosis and Haemostasis, 2012, 107, 1141-50) продемонстрировали, что у мышей с дефицитом плазменного калликреина увеличивалось время свертывания крови и значимо снижался тромбоз. Revenko et al. (Blood, 2011, 118, 5302-5311) продемонстрировали, что снижение уровней плазменного прекалликреина у мышей с использованием обработки антисмысловыми олигонуклеотидами, приводило к антитромботическому действию. Tanaka et al. (Thrombosis Research 2004, 113, 333-339) продемонстрировали, что взаимодействие крови с DX-88 (ингибитор плазменного калликреина) приводило к увеличению время активированного свертывания (ACT). Lehmann et al. (Expert Opin. Biol. Ther. 2008, 1187-99) продемонстрировали, что экалантид (ингибитор плазменного калликреина) задержит активированное контактом индуцированное свертывание. Lehmann et al. сделали заключение, что экалантид "обладал противосвертывающим действием in vitro, так как он ингибировал эндогенный путь свертывания, ингибируя плазменный калликреин".

Плазменный калликреин также играет определенную роль в ингибировании активации тромбоцитов и, таким образом, остановке кровотечения. Активация тромбоцитов является одним из наиболее ранних этапов гемостаза, который приводит к образованию тромбоцитарной пробки и быстрой остановке кровотечения после повреждения кровеносных сосудов. Решающим для удержания и активации тромбоцитов и последующей остановке кровотечения является взаимодействие между открытым коллагеном и тромбоцитами в участке повреждения сосуда.

После активации плазменный калликреин связывается с коллагеном и, таким образом, препятствует опосредуемой коллагеном активации тромбоцитов, опосредуемой рецепторами GPVI (Liu et al. (Nat Med., 2011, 17, 206-210)). Как указано выше, ингибиторы плазменного калликреина снижают активацию плазменного прекалликреина, ингибируя опосредованную плазменным калликреином активацию фактора XII и, таким образом, снижая усиление положительной обратной связи системы калликреина посредством системы контактной активации.

Таким образом, ингибирование плазменного калликреина уменьшает связывание плазменного калликреина с коллагеном, таким образом, снижая препятствование плазменным калликреином остановке кровотечения. Таким образом, ингибиторы плазменного калликреина могут быть пригодными при лечении внутримозгового кровоизлияния и кровотечения после операции. Например, Liu et al. (Nat Med., 2011, 17, 206-210) продемонстрировали, что системное введение низкомолекулярного ингибитора PK, ASP-440, уменьшало увеличение гематом у крыс. Внутримозговая гематома может образовываться после внутримозгового кровоизлияния и является результатом кровотечения из кровеносных сосудов в окружающую ткань головного мозга в результате повреждения сосудов. Кровотечение в модели внутримозгового кровоизлияния, описываемой Liu et al., индуцировали посредством хирургического вмешательства, включающего разрез паренхимы головного мозга, который повреждал кровеносные сосуды. Эти данные демонстрируют, что ингибирование плазменного калликреина уменьшало кровотечение и объем гематомы после операции. Björkqvist et al. (Thrombosis and Haemostasis, 2013, 110, 399- 407) продемонстрировали, что для уменьшения постоперативного кровотечения можно использовать апротинин (белок, ингибирующий сериновые протеазы, включая плазменный калликреин).

Также в качестве мишеней для ингибитора плазменного калликреина можно рассматривать другие осложнения диабета, такие как внутримозговое кровоизлияние, нефропатия, кардиомиопатия и нейропатия, которые все ассоциированы с плазменным калликреином.

Синтетические и низкомолекулярные ингибиторы плазменного калликреина описаны ранее, например, в Garrett et al. ("Peptide aldehyde…". J. Peptide Res. 52, p62-71 (1998)), T. Griesbacher et al. ("Involvement of tissue kallikrein but not plasma kallikrein in the development of symptoms mediated by endogenous kinins in acute pancreatitis in rats" British Journal of Pharmacology 137, p692-700 (2002)), Evans ("Selective dipeptide inhibitors of kallikrein" WO03/076458), Szelke et al. ("Kininogenase inhibitors" WO92/04371), D. M. Evans et al. (Immunolpharmacology, 32, p115-116 (1996)), Szelke et al. ("Kininogen inhibitors" WO95/07921), Antonsson et al. ("New peptides derivatives" WO94/29335), J. Corte et al. ("Six membered heterocycles useful as serine protease inhibitors" WO2005/123680), J. Stürzbecher et al. (Brazilian J. Med. Biol. Res 27, p1929-34 (1994)), Kettner et al. (патент США 5187157), N. Teno et al. (Chem. Pharm. Bull. 41, p1079-1090 (1993)), W. B. Young et al. ("Small molecule inhibitors of plasma kallikrein" Bioorg. Med. Chem. Letts. 16, p2034-2036 (2006)), Okada et al. ("Development of potent and selective plasmin and plasma kallikrein inhibitors and studies on the structure-activity relationship" Chem. Pharm. Bull. 48, p1964-72 (2000)), Steinmetzer et al. ("Trypsin-like serine protease inhibitors and their preparation and use" WO08/049595), Zhang et al. ("Discovery of highly potent small molecule kallikrein inhibitors" Medicinal Chemistry 2, p545-553 (2006)), Sinha et al. ("Inhibitors of plasma kallikrein" WO08/016883), Shigenaga et al. ("Plasma Kallikrein Inhibitors" WO2011/118672) и Kolte et al. ("Biochemical characterization of a novel high-affinity and specific kallikrein inhibitor", British Journal of Pharmacology (2011), 162(7), 1639-1649). Также в Steinmetzer et al. ("Serine protease inhibitors" WO2012/004678) описаны циклизированные пептидные аналоги, являющиеся ингибиторами плазмина и плазменного калликреина человека.

До настоящего времени для медицинского применения не одобрено ни одного низкомолекулярного синтетического ингибитора плазменного калликреина. Многие из молекул, описанных в известной области техники, страдают такими ограничениями, как плохая селективность в отношении родственных ферментов, таких как KLK1, тромбин и другие сериновые протеазы, и плохая применимость в виде перорального препарата. У больших белковых ингибиторов плазменного калликреина существуют риски анафилактических реакций, как опубликовано для экалантида. Таким образом остается необходимость в соединениях, которые селективно ингибируют плазменный калликреин, которые не вызывают анафилаксии и которые являются перорально доступными. Кроме того, абсолютное большинство молекул в известной области характеризуются высокополярными и ионизируемыми функциональными группами гуанидина или амидина. Хорошо известно, что такие функциональные группы могут являться лимитирующими для проницаемости кишечника и, таким образом, для пероральной доступности. Например, в Tamie J. Chilcote and Sukanto Sinha ("ASP-634: An Oral Drug Candidate for Diabetic MacularEdema", ARVO 2012 May 6^th - May 9^th, 2012, Fort Lauderdale, Florida, Presentation 2240) опубликовано, что ASP-440, бензамидин, обладает плохой пероральной доступностью. Также опубликовано, что всасывание можно улучшить, получая пролекарственное средство, такое как ASP-634. Однако хорошо известно, что пролекарственные средства могут обладать несколькими недостатками, например, плохой химической стабильностью и потенциальной токсичностью вследствие инертного носителя или вследствие непредвиденных метаболитов. В другой публикации, в качестве соединений, которые могут преодолевать проблемы, ассоциированные с лекарственными средствами, обладающими плохими или неудовлетворительными свойствами ADME-tox и физико-химическими свойствами заявлены индоламиды, хотя ингибирования плазменного калликреина не предоставлено или заявлено (Griffioen et al, "Indole amide derivatives and related compounds for use in the treatment of neurodegenerative diseases", WO2010/142801).

BioCryst Pharmaceuticals Inc. опубликовала исследование перорально доступного ингибитора плазменного калликреина BCX4161 ("BCX4161, An Oral Kallikrein Inhibitor: Safety and Pharmacokinetic Results Of a Phase 1 Study In Healthy Volunteers", Journal of Allergy and Clinical Immunology, Volume 133, Issue 2, Supplement, February 2014, page AB39 и "A Simple, Sensitive and Selective Fluorogenic Assay to Monitor Plasma Kallikrein Inhibitory Activity of BCX4161 in Activated Plasma", Journal of Allergy and Clinical Immunology, Volume 133, Issue 2, Supplement February 2014, page AB40). Однако дозы для человека являются относительно большими, в настоящее время в исследованиях для доказательства обоснованности концепции тестирование проходят дозы 400 мг три раза в сутки.

Существует всего несколько публикаций об ингибиторах плазменного калликреина, которые не содержат функциональных групп гуанидина или амидина. Одним из примеров является Brandl et al. ("N-((6-amino-pyridin-3-yl)methyl)-heteroaryl-carboxamides as inhibitors of plasma kallikrein" WO2012/017020), где описаны соединения, которые содержат амино-пиридиновую функциональную группу. Пероральная эффективность в модели на крысах продемонстрирована при относительно высоких дозах 30 мг/кг и 100 мг/кг, а фармакокинетический профиль не указан. Таким образом, еще не известно, обеспечивают ли такие соединения достаточные пероральную доступность или эффективность для дальнейшего предоставления в клинику. Другими примерами являются Brandl et al. ("Aminopyridine derivatives as plasma kallikrein inhibitors" WO2013/111107) и Flohr et al. ("5-membered heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors" WO2013/111108). Однако ни в одном из этих документов не опубликовано никаких данных in vivo и, таким образом, еще не известно, обеспечивают ли такие соединения достаточные пероральную доступность или эффективность для дальнейшего предоставления в клинику. Другим примером является Allan et al. "Benzylamine derivatives" WO2014/108679.

В производстве фармацевтических составов важно, чтобы активное соединение находилось в форме, в которых его удобно транспортировать и обрабатывать для обеспечения коммерчески эффективного процесса производства. Таким образом, химическая стабильность и физическая стабильность активного соединения являются важными факторами. Активное соединение и содержащие его составы должно быть способно к эффективному хранению в течение существенных периодов времени без выявления каких-либо значимых изменений в физико-химических характеристиках (например, в химическом составе, плотности, гигроскопичности и растворимости) активного соединения.

Известно, что производство конкретной твердой формы фармацевтического ингредиента может влиять на многие характеристики его свойств твердого состояния и обеспечивать преимущества в характеристиках растворимости, скорости растворения, химической стабильности, механических свойств, технической осуществимости, технологичности, фармакокинетики и биодоступности. Некоторые из них описаны в "Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use", P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.) (Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich). Способы производства твердых форм также описаны в "Practical Process Research and Development", Neal G. Anderson (Academic Press, San Diego) и "Polymorphism: In the Pharmaceutical Industry", Rolf Hilfiker (Ed) (Wiley VCH). Полиморфизм в фармацевтических кристаллах описан в Byrn (Byrn, S.R., Pfeiffer, R.R., Stowell, J.G., "Solid-State Chemistry of Drugs", SSCI Inc., West Lafayette, Indiana, 1999), Brittain,H.G., "Polymorphism in Pharmaceutical Solids", Marcel Dekker, Inc., New York, Basel, 1999) или Bernstein (Bernstein, J., "Polymorphism in Molecular Crystals", Oxford University Press, 2002).

Заявитель разработал новый ряд соединений, которые представляют собой ингибиторы плазменного калликреина, которые описаны в WO2016/083820 (PCT/GB2015/053615). Эти соединения демонстрируют хорошую селективность в отношении плазменного калликреина и являются потенциально пригодными при лечении диабетической ретинопатии, отека желтого пятна и наследственного ангионевротического отека. Одним из таких соединений является N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид. Первые попытки получить N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид проводили посредством выпаривания 1% растворитель аммиак-метанол/DCM, используемого при хроматография с выходом пены с данными XRPD (записанными способом B), которые демонстрируют в основном аморфное содержимое в соответствии с тверд формой, обозначаемой в настоящем документе как "форма A" (фигура 1a). В настоящее время заявитель разработал новые кристаллические формы этого соединение, которые в настоящем документе обозначены как "форма 1", "форма 2", "форма 3" и "форма 4". Новые твердые формы обладают выгодными физико-химическими свойствами, которые делают их подходящими для разработки.

Заявитель также разработал новые кристаллические формы солей N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, конкретно новые кристаллические гидрохлорид, сульфат, фосфат, мезилат, тозилат, эдизилат и безилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида. Новые твердые формы обладают выгодными физико-химическими свойствами, которые делают их подходящими для производства, в частности, они обладают малой гигроскопичностью, и их получение посредством кристаллизации является простым и масштабируемым.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, в соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения, предоставлены кристаллические полиморфные модификации N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида. В настоящей заявке эти полиморфные модификации могут быть обозначены как "форма 1", "форма 2", "форма 3" и "форма 4".

Кристаллические полиморфные модификации по настоящему изобретению обладают выгодными физико-химическими свойствами, которые делают их подходящими для производства. Например, данные гравиметрической сорбции паров (GVS) "формы 1" N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, фигура 5, в нормальных условиях (например, до 70% относительной влажности) демонстрируют, что наблюдается только относительно постепенное увеличение водосодержания. Это соответствует отсутствию значимой гигроскопичности. В отличие от этого аморфные материалы, как правило, являются в значимой степени гигроскопичными или даже растворяющимися за счет поглощения влаги, что часто преобразует материал в непригодную для обработки камедь. Кроме того, отсутствие потери массы перед плавлением образца формы 1 (cм. данные STA, фигура 3) свидетельствует о том, что форма 1 не является гидратированной или сольватированной. Стабильные гидраты могут являться неподходящими для фармацевтического производства вследствие того, что в них может происходить нежелательная трансформация вводимой безводной формы лекарственного средства после контакта лекарственного средства с водным окружением организма человека. Другим преимуществом кристаллических полиморфных модификаций является то, что их более легко обрабатывать. Т.е., их получение посредством кристаллизации (cм. примеры) является общим и легко масштабируемым способом для удаления нежелательных примесей.

Дополнительные доказательства пригодности кристаллических форм N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида для фармацевтического производства предоставлены данными о стабильности, описываемыми в настоящем документе. Два образцы формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида хранили при 25°C/60% отн. влажн. и 40°C/75% отн. влажн., упакованными в двойные полиэтиленовые пакеты и запаянными в бутылке из HDPE. В начальной временной точке, XRPD продемонстрировала, что образец является кристаллической и соответствующей форме 1 полиморфной модификацией. В условиях хранения при 25°C/60% отн. влажн. и 40°C/75% отн. влажн., XRPD продемонстрировала отсутствие изменений через 1 месяц и через 3 месяца (фигуры 46 и 47).

Растворимость свободного основания N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в воде являлась относительно низкой (<0,5 мг/мл), и поэтому исследовали соли N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предоставлены кристаллические полиморфные модификации солей N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, конкретно кристаллические полиморфные модификации гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида; сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида; фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида; мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида; тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида; эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида.

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретным кристаллическим полиморфным модификациям гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 5", "форма 6", "форма 7" и "форма 18".

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретной кристаллической полиморфной модификации сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая в настоящем документе обозначена как "форма 8".

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретным кристаллическим полиморфным модификациям фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 9", "форма 10" и "форма 11".

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретным кристаллическим полиморфным модификациям мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 12" и "форма 13".

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретной кристаллической полиморфной модификации тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая в настоящем документе обозначена как "форма 14".

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретным кристаллическим полиморфным модификациям эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 15" и "форма 16".

Кроме того, настоящее изобретение относится к конкретной кристаллической полиморфной модификации безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая в настоящем документе обозначена как "форма 17".

Новые кристаллические соли по настоящему изобретению обладают выгодными физико-химическими свойствами, которые делают их подходящими для производства. Например, форма 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида демонстрирует превосходную водорастворимость, и ее можно воспроизводимо масштабировать. Например, данные гравиметрической сорбции паров (GVS) формы 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, фигура 33, в нормальных условиях (например, до 70% относительной влажности) демонстрируют, что наблюдается только относительно постепенное увеличение водосодержания, и что гидратация является обратимой. Это соответствует отсутствию значимой гигроскопичности. Кроме того, сульфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида демонстрирует низкое стремление к полиморфизму, что продемонстрировано одной полиморфной модификацией, которую идентифицировали при скрининге полиморфных модификаций, описываемом в настоящем документе.

Название N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид означает структуру, приведенную на фигуре A.

Фигура A

До настоящего времени выделены и охарактеризованы четыре кристаллические полиморфных модификации N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 1", "форма 2", "форма 3" и "форма 4". Предпочтительно, кристаллическая форма представляет собой форму 1.

До настоящего времени выделены и охарактеризованы четыре кристаллические полиморфные модификации гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 5", "форма 6", "форма 7" и "форма 18".

До настоящего времени выделена и охарактеризована одна кристаллическая полиморфная модификация сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая в настоящем документе обозначена как "форма 8".

Как используют в настоящем документе, термин "сульфат" при обозначении соли N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида предназначен для включения моносульфатной соли и гемисульфатной соли. В одном из вариантов осуществления форма 8 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида представляет собой моносульфатную соль. В альтернативном варианте осуществления форма 8 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида представляет собой гемисульфатную соль.

До настоящего времени выделены и охарактеризованы три кристаллические полиморфные модификации фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 9", "форма 10" и "форма 11".

Как используют в настоящем документе, термин "фосфат" при обозначении соли N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида предназначен для включения монофосфатной соли и гемифосфатной соли. В одном из вариантов осуществления каждая из форм 9, 10 и 11 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида независимо представляет собой монофосфатную соль. В альтернативном варианте осуществления каждая из форм 9, 10 и 11 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида независимо представляет собой гемифосфатную соль.

До настоящего времени выделены и охарактеризованы две кристаллические полиморфные модификации мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 12" и "форма 13".

До настоящего времени выделена и охарактеризована одна кристаллическая полиморфная модификация тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая в настоящем документе обозначена как "форма 14".

До настоящего времени выделены и охарактеризованы две кристаллические полиморфные модификации эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которые в настоящем документе обозначены как "форма 15" и "форма 16".

Как используют в настоящем документе, термин "эдизилат" при обозначении соли N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида предназначен для включения моноэдизилатной соли и гемиэдизилатной соли. В одном из вариантов осуществления каждая из форм 15 и 16 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида независимо представляет собой моноэдизилатную соль. В альтернативном варианте осуществления каждая из форм 15 и 16 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида независимо представляет собой гемиэдизилатную соль. Предпочтительно, каждая из форм 15 и 16 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида независимо представляет собой моноэдизилатную соль.

До настоящего времени выделена и охарактеризована одна кристаллическая полиморфная модификация безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая в настоящем документе обозначена как "форма 17".

Настоящее изобретение относится к сольватам (например, гидратам) кристаллических форм N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и их солям, описываемым в настоящем документе.

В одном из аспектов изобретения форма 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида не является сольватом или гидратом.

В одном из аспектов изобретения форма 18 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида представляет собой сольват или гидрат, предпочтительно гидрат, более предпочтительно гемигидрат, моногидрат или дигидрат, наиболее предпочтительно дигидрат.

В одном из аспектов изобретения форма 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида представляет собой сольват или гидрат, предпочтительно гидрат, более предпочтительно гемигидрат, моногидрат или дигидрат, наиболее предпочтительно гемигидрат.

В одном из аспектов изобретения форма 15 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида представляет собой сольват или гидрат, предпочтительно гидрат, более предпочтительно гемигидрат, моногидрат или дигидрат.

В одном из аспектов изобретения форма 16 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида представляет собой сольват или гидрат, предпочтительно гидрат, более предпочтительно гемигидрат, моногидрат или дигидрат.

В настоящем описании пики рентгеновской порошковой дифракции (выражаемые в градусах 2θ) измеряют с использованием Kα-излучение Cu.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 1) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 и 16,3; или

(2) 11,2, 12,5, 13,2, 14,5, 16,3, 17,4 и 17,9; или

(3) 11,2, 12,5, 13,2, 14,5, 16,3, 17,4, 17,9, 21,2 и 22,0.

Термин "приблизительно" в этом контексте означает, что существует неопределенность в измерениях градусов 2θ в пределах ± 0,3 (выражаемая в градусах 2θ), предпочтительно ± 0,2 (выражаемая в градусах 2θ).

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 1) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 4,4, 11,2, 12,5, 13,2, 14,5, 16,3, 17,4, 17,9, 21,2, 22,0 и 22,6.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 1) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 2a.

Профиль рентгеновской порошковой дифракции полиморфной формы может быть описан в настоящем документе, как "по существу" такой же, как профиль, приведенный на определенной фигуре. Следует понимать, что пики в профилях рентгеновской порошковой дифракции могут немного отличаться по их положениям и относительным интенсивностям вследствие различных факторов, известных специалисту. Например, изменения положений пиков или относительных интенсивностей пиков профиля могут происходить из-за используемого оборудования, способа получения, предпочтительной упаковки и расположений образца, источника излучения, и способа и длительности сбора данных. Однако специалист для подтверждения подлинности полиморфной модификации может сравнить профили рентгеновской порошковой дифракции, приведенные на фигурах в настоящем документе, с профилями неизвестной полиморфной модификации.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 2) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 7.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 3) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 8.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 4) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 9.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 5) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 10.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 6) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 11.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 7) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 12.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 8) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 5,1, 7,5, 12,0, 15,2 и 17,9; или

(2) 5,1, 7,5, 12,0, 15,2, 17,9, 20,1 и 22,8; или

(3) 5,1, 7,5, 12,0, 15,2, 17,9, 20,1, 22,8, 24,4 и 25,8.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 8) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 5,1, 7,5, 12,0, 13,2, 15,2, 17,9, 18,2, 19,3, 20,1, 22,3, 22,8, 24,4 и 25,8.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 8) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 13 или фигура 30 (верх).

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 9) фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 4,5, 13,4, 16,3, 17,3 и 18,9; или

(2) 4,5, 13,4, 16,3, 17,3, 17,8, 18,9 и 19,3; или

(3) 4,5, 13,4, 16,3, 17,3, 17,8, 18,9, 19,3, 20,5 и 23,0.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 9) фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 4,5, 7,2, 10,1, 13,4, 16,3, 17,3, 17,8, 18,9, 19,3, 20,5, 21,2, 23,0, 25,4 и 27,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 9) фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 14.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 10) фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 15.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 11) фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 16.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 12) мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 5,0, 10,0, 14,8, 16,4 и 23,3; или

(2) 5,0, 10,0, 14,8, 16,4, 19,2, 20,3 и 23,3; или

(3) 5,0, 10,0, 14,8, 16,4, 19,2, 20,3, 21,5, 23,3 и 26,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 12) мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 5,0, 10,0, 13,8, 14,8, 16,4, 19,2, 20,3, 21,5, 23,3, 24,0, 26,2 и 27,6.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 12) мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 17.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 13) мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 18.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 14) тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 5,0, 9,6, 13,7, 17,8 и 23,3; или

(2) 5,0, 9,6, 13,7, 17,8, 20,1, 23,3 и 23,6; или

(3) 5,0, 9,6, 13,7, 14,9, 17,8, 18,8, 20,1, 23,3 и 23,6.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 14) тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 5,0, 9,6, 13,7, 14,9, 17,8, 18,8, 19,0, 20,1, 23,3, 23,6 и 24,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 14) тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 19.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 15) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 7,7, 10,3, 18,3, 19,4 и 20,7; или

(2) 7,7, 10,3, 15,7, 18,3, 19,4, 20,7 и 25,7; или

(3) 7,7, 10,3, 15,7, 18,3, 19,4, 20,7, 24,1, 25,1 и 25,7.;

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 15) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 7,7, 10,3, 15,7, 18,3, 19,4, 20,7, 24,1, 25,1, 25,7, 28,2 и 30,7.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 15) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 20 или на фигуре 37 (верх).

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 16) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 10,4, 18,5, 19,5, 22,4 и 25,2; или

(2) 10,4, 18,5, 19,5, 20,8, 22,4, 24,2 и 25,2; или

(3) 5,2, 10,4, 16,5, 18,5, 19,5, 20,8, 22,4, 24,2 и 25,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 16) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 5,2, 10,4, 16,1, 16,5, 18,5, 19,5, 20,8, 22,4, 23,3, 24,2 и 25,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 16) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 21 или фигура 42 (верх).

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 17) безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 5,3, 9,8, 14,9, 19,9 и 23,1; или

(2) 5,3, 9,8, 14,9, 19,2, 19,9, 23,1 и 24,6; или

(3) 5,3, 9,8, 14,9, 16,4, 17,4, 19,2, 19,9, 23,1 и 24,6.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 17) безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 5,3, 9,8, 14,9, 16,4, 17,4, 19,2, 19,9, 21,0, 22,3, 23,1, 24,6 и 25,8.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 17) безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 22.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 18) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики рентгеновской порошковой дифракции (Kα-излучение Cu, выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при:

(1) 5,5, 8,5, 11,6, 17,0 и 19,0; или

(2) 5,5, 8,5, 11,6, 17,0, 19,0, 22,8 и 26,1; или

(3) 5,5, 8,5, 11,6, 13,2 17,0, 19,0, 22,8, 23,8 и 26,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 18) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, содержащим характеристические пики (выражаемые в градусах 2θ) приблизительно при 5,5, 7,3, 8,5, 11,6, 13,2 17,0, 19,0, 20,6, 22,8, 23,8 и 26,2.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме (форме 18) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, по существу таким же, как профиль, приведенный на фигуре 24 (верх).

Специалист знаком со способами определения профилей XRPD. В частности, профиль рентгеновской порошковой дифракции образца соединения можно зарегистрировать с использованием дифрактометра Philips X-Pert MPD со следующими экспериментальными установками:

Анод трубки: Cu;

Напряжение генератора: 40 кВ;

Ток трубки: 40 мА;

Длина волны альфа1: 1,5406 Å;

Длина волны альфа2: 1,5444 Å;

Образец: 2 мг анализируемого образца осторожно спрессовывают на одиночном наклонно срезанном держателе образца для XRPD с нулевым фоном из диоксида кремния.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 1) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует эндотермический пик на ее термограмме DSC при 151 ± 3°C, предпочтительно 151 ± 2°C, более предпочтительно 151 ± 1°C.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 1) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с термограммой DSC по существу такой же, как термограмма, приведенная на фигуре 4.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 18) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует эндотермический пик на ее термограмме DSC при 149 ± 3°C, предпочтительно 149 ± 2°C, более предпочтительно 149 ± 1°C.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 18) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с термограммой DSC по существу такой же, как термограмма, приведенная на фигуре 26.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 8) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует эндотермический пик на ее термограмме DSC при 110 ± 3°C, предпочтительно 110 ± 2°C, более предпочтительно 110 ± 1°C.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 8) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с термограммой DSC по существу такой же, как термограмма, приведенная на фигуре 32.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 16) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, которая демонстрирует эндотермический пик на ее термограмме DSC при 110 ± 3°C, предпочтительно 110 ± 2°C, более предпочтительно 110 ± 1°C.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 16) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с термограммой DSC по существу такой же, как термограмма, приведенная на фигуре 44.

Специалист знаком со способами определения термограмм DSC. В частности, термограмму DSC образца соединения можно зарегистрировать посредством

(a) навешивания 5 мг образца в алюминиевый лоток DSC и негерметичного закрывания алюминиевой крышкой;

(b) помещения образца в Perkin-Elmer Jade DSC и выдерживания образца при 30°C до получения стабильной теплоотдачи с использованием продувки гелием 20 см³/мин;

(c) нагревания образца до температуры от 200 до 300°C при частоте сканирования 10°C/мин и мониторинга получаемой теплоотдачи с использованием продувки гелием 20 см³/мин.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 1) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, как описано выше, и термограммой DSC, как описано выше.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 18) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, как описано выше, и термограммой DSC, как описано выше.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 8) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, как описано выше, и термограммой DSC, как описано выше.

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (форме 16) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида с профилем рентгеновской порошковой дифракции, как описано выше, и термограммой DSC, как описано выше.

Кристаллическая форма по настоящему изобретению может находиться в несольватированной и сольватированной формах. Термин "сольват" используют в настоящем документе для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение по изобретению и определенное количество одного или нескольких фармацевтически приемлемых растворителей, например, метанола. Термин "гидрат" применяют, когда растворителем является вода.

Указание конкретного соединения также включает все изотопные варианты.

Настоящее изобретение также относится к способу обработки препарата формы 1 по настоящему изобретению, где указанный способ включает кристаллизацию указанной кристаллической формы из раствора N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Предпочтительно растворитель выбран из ацетонитрила и изопропанола (IPA). Более предпочтительно растворитель представляет собой изопропанол. После добавления N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворитель или смесь растворителей (например, ацетонитрила или изопропанола), комбинированную смесь (соединение и растворитель(и)) можно нагревать до температуры приблизительно 60-85°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно нагревать до температуры приблизительно 70-85°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно нагревать до температуры приблизительно 80-85°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно нагревать до температуры приблизительно 80, 81, 82, 83, 84 или 85°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно нагревать до температуры приблизительно 82°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно нагревать до кипения с обратным холодильником. После нагревания комбинированную смесь можно охлаждать. Альтернативно, комбинированную смесь можно охлаждать до температуры приблизительно 0-40°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно охлаждать до температуры приблизительно 10-30°C. Альтернативно, комбинированную смесь можно охлаждать до комнатной температуры. Альтернативно, комбинированную смесь можно охлаждать приблизительно до 0°C.

Настоящее изобретение также относится к способу получения формы 18 по настоящему изобретению, где указанный способ включает кристаллизацию указанной кристаллической формы из раствора гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Необязательно, указанный раствор гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида можно получать, добавляя соляную кислоту к раствору N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Предпочтительно, раствор N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей можно нагревать так, что твердое вещество растворяется до добавления соляной кислоты. Предпочтительно, растворитель представляет собой этилацетат или ацетонитрил. Более предпочтительно, растворитель представляет собой ацетонитрил. Кристаллизацию можно проводить посредством обработки ультразвуком и/или циклического изменения температуры смеси. Предпочтительно кристаллизацию проводят посредством обработки ультразвуком с последующим циклическим изменением температуры смеси. Циклическое изменение температуры может включать циклическое изменение температуры смеси приблизительно от 30-50°C до температуры окружающей среды, необязательно приблизительно от 40°C до температуры окружающей среды. Предпочтительно, циклическое изменение температуры проводят в течение приблизительно от 18 до приблизительно 24 часов.

Настоящее изобретение также относится к способу получения формы 8 по настоящему изобретению, где указанный способ включает кристаллизацию указанной кристаллической формы из раствора сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Необязательно, указанный раствор сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида можно получать, добавляя серную кислоту к раствору N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Предпочтительно, раствор N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей можно нагревать так, что твердое вещество растворяется до добавления серной кислоты. Предпочтительно, растворитель представляет собой ацетонитрил или ацетон. Более предпочтительно, растворитель представляет собой ацетонитрил. Кристаллизацию можно проводить посредством обработки ультразвуком и/или циклического изменения температуры смеси. Предпочтительно кристаллизацию проводят посредством обработки ультразвуком с последующим циклическим изменением температуры смеси. Циклическое изменение температуры может включать циклическое изменение температуры смеси приблизительно от 30-50°C до температуры окружающей среды, необязательно приблизительно от 40°C до температуры окружающей среды. Предпочтительно, циклическое изменение температуры проводят в течение приблизительно от 18 до приблизительно 24 часов.

Настоящее изобретение также относится к способу получения формы 15 по настоящему изобретению, где указанный способ включает кристаллизацию указанной кристаллической формы из суспензии эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Необязательно, указанную суспензию эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида можно получать, добавляя растворитель или смесь растворителей к смеси этандисульфоновой кислоты (например, гидрата этандисульфоновой кислоты) и N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида. Предпочтительно, растворитель представляет собой ацетон или этилацетат. Более предпочтительно, растворитель представляет собой ацетон. Кристаллизацию можно проводить посредством обработки ультразвуком и/или циклическое изменение температуры суспензии. Предпочтительно кристаллизацию проводят посредством обработки ультразвуком с последующим циклическим изменением температуры суспензии. Циклическое изменение температуры может включать циклическое изменение температуры суспензии приблизительно от 30-50°C до температуры окружающей среды, необязательно приблизительно от 40°C до температуры окружающей среды. Предпочтительно, циклическое изменение температуры проводят в течение приблизительно от 18 до приблизительно 24 часов.

Настоящее изобретение также относится к способу получения формы 16 по настоящему изобретению, где указанный способ включает кристаллизацию указанной кристаллической формы из раствора эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в растворителе или смеси растворителей. Необязательно, указанный раствор эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида можно получать, добавляя растворитель или смесь растворителей к смеси этандисульфоновой кислоты (например, гидрата этандисульфоновой кислоты) и N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида. Необязательно этандисульфоновую кислоту и смесь N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида нагревают до растворения твердого вещества. Предпочтительно, растворитель представляет собой тетрагидрофуран или ацетонитрил. Более предпочтительно, растворитель представляет собой ацетонитрил. Кристаллизацию можно проводить посредством обработки ультразвуком и/или циклического изменения температуры смеси. Предпочтительно кристаллизацию проводят посредством обработки ультразвуком с последующим циклическим изменением температуры смеси. Циклическое изменение температуры может включать циклическое изменение температуры суспензии приблизительно от 30-50°C до температуры окружающей среды, необязательно приблизительно от 40°C до температуры окружающей среды. Предпочтительно, циклическое изменение температуры проводят в течение приблизительно от 18 до приблизительно 24 часов.

Также способы по настоящему изобретению могут включать добавление затравок кристаллов кристаллической формы по изобретению.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к кристаллической форме по изобретению, получаемой способом по изобретению.

Как указано ранее, у кристаллической формы по настоящему изобретению существует ряд терапевтических применений, в частности, для лечения заболеваний или патологических состояний, опосредуемых плазменным калликреином.

Таким образом, настоящее изобретение относится к кристаллической форме N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и ее солям, как определено выше в настоящем документе, для применения в терапии. В предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 1. В другом предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 8.

Настоящее изобретение также включает применение кристаллической формы N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и его солей, как определено выше в настоящем документе, в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или патологического состояния, опосредуемых плазменным калликреином. В предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 1. В другом предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 8.

Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и его солей, как определено выше в настоящем документе, для применения в способе лечения заболевания или патологического состояния, опосредуемого плазменным калликреином. В предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 1. В другом предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 8.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания или патологического состояния, опосредуемого плазменным калликреином, где указанный способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества кристаллической формы N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и его солей, как определено выше в настоящем документе. В предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 1. В другом предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 8.

В одном из аспектов заболевание или патологическое состояние, опосредуемое плазменным калликреином, выбрано из снижения остроты зрения, диабетической ретинопатии, проницаемости сосудов сетчатки, ассоциированной с диабетической ретинопатией, диабетического отека желтого пятна, наследственного ангионевротического отека, диабета, панкреатита, внутримозгового кровоизлияния, нефропатии, кардиомиопатии, нейропатии, воспалительного заболевания кишечника, артрита, воспаления, септического шока, пониженного давления, злокачественного опухоли, респираторного дистресс-синдрома взрослых, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, свертывания крови при хирургических операциях в условиях искусственного кровообращения и кровотечения после операции. В предпочтительном варианте осуществления заболевание или патологическое состояние, опосредуемое плазменным калликреином, представляет собой диабетический отек желтого пятна. В другом предпочтительном варианте осуществления заболевание или патологическое состояние, опосредуемое плазменным калликреином, представляет собой наследственный ангионевротический отек.

В другом аспекте заболевание или патологическое состояние, в которое вовлечена активность плазменного калликреина, представляет собой окклюзию вен сетчатки.

Альтернативно, заболевание или патологическое состояние, опосредуемое плазменным калликреином, можно выбирать из проницаемости сосудов сетчатки, ассоциированной с диабетической ретинопатией, диабетического отека желтого пятна и наследственного ангионевротического отека. Альтернативно, заболевание или патологическое состояние, опосредуемое плазменным калликреином может представлять собой проницаемость сосудов сетчатки, ассоциированную с диабетической ретинопатией или диабетический отек желтого пятна. Кристаллические формы N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и его солей можно вводить в форме, подходящей для инъекции в глазную область пациента, в частности, в форме подходящей для внутривитреальной инъекции.

В контексте настоящего изобретения, указание в настоящем документе на "лечение" включает указания на приводящее к выздоровлению, паллиативное и профилактическое лечение, если нет конкретных указаний на обратное. Термины "терапия", "терапевтический" и "терапевтически" следует рассматривать точно также.

Кристаллическую форму по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами. Как правило, ее вводят в виде состава в ассоциации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Термин "эксципиент" используют в настоящем документе для описания любого ингредиента, отличного от соединения(ий) по изобретению, который может обеспечить функциональные (т.е., контроль скорости высвобождения лекарственного средства) и/или нефункциональные (т.е., технологическая добавка или разбавитель) характеристики составов. Выбор эксципиент в большой степени зависит от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние эксципиента на растворимость и стабильность и характеристики лекарственной формы.

В другом аспекте соединения по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с лазерной обработкой сетчатки. Комбинация лазерной терапии с интравитреальной инъекцией ингибитора VEGF для лечения диабетического отека желтого пятна известна (Elman M, Aiello L, Beck R, et al. "Randomized trial evaluating ranibizumab plus prompt or deferred laser or triamcinolone plus prompt laser for diabetic macular edema".Ophthalmology. 27 April 2010).

Фармацевтические композиции, подходящие для доставки кристаллической формы по настоящему изобретению, и способы их получения хорошо известны специалистам в данной области. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995).

Как правило, для введения пациентам-людям общая суточная доза кристаллической формы по изобретению находится в диапазоне от 0,1 мг до 10000 мг, или от 1 мг до 5000 мг, или от 10 мг до 1000 мг, конечно, в зависимости от способа введения. При введении посредством интравитреальной инъекции предусмотрена наименьшая доза от 0,0001 мг (0,1 мкг) до 0,2 мг (200 мкг) на глаз, или от 0,0005 мг (0,5 мкг) до 0,05 мг (50 мкг) на глаз.

Общую суточную дозу можно вводить одной или дробными дозами и по решению лечащего врача может выходить за типичный диапазон, указанный в настоящем документе. Эти дозы основаны на среднем человека с массой приблизительно от 60 кг до 70 кг. Лечащий врач может легко определить дозы для индивидуумов, масса которых выходит за этот диапазон, например, для грудного ребенка и пожилого индивидуума.

Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей кристаллическую твердую форму N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, как определено выше в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент. В предпочтительном варианте осуществления кристаллическая твердая форма представляет собой форму 1. В другом предпочтительном варианте осуществления кристаллическая форма представляет собой форму 8. Следует понимать, что указание на кристаллические твердые формы N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, как определено выше в настоящем документе, включает свободное основание и его соли, которые описаны выше в настоящем документе.

Фармацевтические композиции можно вводить местно (например, в глаз, на кожу или в легкое и/или дыхательные пути) в форме, например, глазных капель, кремов, растворов, суспензий, аэрозолей с гептафторалканом (HFA) и сухих порошковых составов; или системно, например, посредством перорального введения в форме таблеток, капсул, сиропов, порошков или гранул; или посредством парентерального введения в форме растворов или суспензий; или посредством подкожного введения; или посредством ректального введения в форме суппозиториев; или трансдермально. В дополнительном варианте осуществления фармацевтическая композиция находится в форме суспензии, таблетки, капсулы, порошка, гранулы или суппозитория.

В одном из вариантов осуществления изобретения активный ингредиент вводят перорально. Пероральное введение может включать глотание так, что соединение попадает в желудочно-кишечный тракт, и/или буккальное, лингвальное или сублингвальное введение, посредством которых соединение попадает в кровоток непосредственно из ротовой полости.

Составы, подходящие для перорального введения включают твердые порции, твердые составы из микрочастиц, полутвердые и жидкие составы (включая системы с несколькими фазами или дисперсионные системы), такие как таблетки; мягкие или твердые капсулы, содержащие множество гранул или наночастицы, жидкости, эмульсии или порошки; таблетки-леденцы (включая заполненные жидкостью); жевательные формы; гели; быстрорастворимые лекарственные формы; пленки; вагинальные суппозитории; спреи и буккальные/мукоадгезивные пластыри.

Составы, подходящие для перорального введения также можно разрабатывать для доставки кристаллической формы с немедленным высвобождением или с поддержанием скорости высвобождения, где профиль высвобождения может являться задержанным, пульсирующим, контролируемым, длительным или задержанным и длительным или модифицированным таким образом, который оптимизирует терапевтическую эффективность указанной кристаллической формы. Способы доставки соединения с контролем скорости высвобождения известны в данной области и включают полимеры с замедленным высвобождением, которые можно формулировать с указанными соединениями для контроля их высвобождения.

Жидкие составы (включая системы с несколькими фазами и дисперсионные системы) включают эмульсии, суспензии, растворы, сиропы и эликсиры. Такие составы можно предоставлять как наполнители в мягких или твердых капсулах. Жидкие составы также можно получать посредством восстановления твердой формы, например, из саше.

Кристаллическую форму по изобретению также можно использовать вы быстрорастворимых, быстрорассасывающихся лекарственных формах, таких как формы, описанные в Liang and Chen, Expert Opinion in Therapeutic Patents, 2001, 11 (6), 981-986.

Состав таблеток описан в Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1, by H. Lieberman and L. Lachman (Marcel Dekker, New York, 1980).

Далее изобретение проиллюстрировано предоставленными ниже неограничивающими примеры. В примерах предоставлены следующие фигуры:

Фигура 1a: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы A N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 41 из WO2016/083820 (PCT/GB2015/053615)).

Фигура 1b: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы A N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 1).

Фигура 2a: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 2).

Фигура 2b: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 3).

Фигура 2c: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 4).

Фигура 3: STA формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 2).

Фигура 4: термограмма DSC формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 2).

Фигура 5: изотермы гравиметрической сорбции паров (адсорбция и десорбция) формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 2).

Фигура 6: профиль рентгеновской порошковой дифракции (верх) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида после получения суспензии формы 1 с 90:10 IPA:вода. Нижний профиль рентгеновской порошковой дифракции представляет собой профиль формы 1 как в ссылке (пример 2).

Фигура 7: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 2 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 5).

Фигура 8: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 3 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 6).

Фигура 9: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 4 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 7).

Фигура 10: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 5 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 8).

Фигура 11: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 6 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 9).

Фигура 12: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 7 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 10).

Фигура 13: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 11).

Фигура 14: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 9 фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 12).

Фигура 15: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 10 фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 13).

Фигура 16: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 11 фосфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 14).

Фигура 17: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 12 мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 15).

Фигура 18: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 13 мезилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 16).

Фигура 19: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 14 тозилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 17).

Фигура 20: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 15 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 18).

Фигура 21: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 16 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 19).

Фигура 22: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 17 безилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 20).

Фигура 23: спектр ЯМР гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 21).

Фигура 24: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 18 (пример 21) (верх), наложенный на форму 5 (пример 8) (низ) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида.

Фигура 25: STA формы 18 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 21).

Фигура 26: термограмма DSC формы 18 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 21).

Фигура 27: изотермы гравиметрической сорбции паров (адсорбция и десорбция) формы 18 гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 21).

Фигура 28: профиль рентгеновской порошковой дифракции (верх) гидрохлорида N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида после получения суспензии формы 18 с 90:10 IPA:вода. Нижний профиль рентгеновской порошковой дифракции представляет собой профиль формы 18, как в ссылке (пример 21).

Фигура 29: спектр ЯМР сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 22).

Фигура 30: профиль рентгеновской порошковой дифракции масштабированной формы 8 (пример 22) (верх), наложенный на подвергнутый скринингу образец формы 8 (пример 11) (низ) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида.

Фигура 31: STA формы 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 22).

Фигура 32: термограмма DSC формы 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 22).

Фигура 33: изотермы гравиметрической сорбции паров (адсорбция и десорбция) формы 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 22).

Фигура 34: профиль рентгеновской порошковой дифракции (верх) сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида после получения суспензии формы 8 с 90:10 IPA:вода. Нижний профиль рентгеновской порошковой дифракции представляет собой профиль формы 8 как в ссылке (пример 22).

Фигура 35: профиль рентгеновской порошковой дифракции формы 8 сульфата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в примере 23.

Фигура 36: спектр ЯМР эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 24).

Фигура 37: профиль рентгеновской порошковой дифракции масштабированной формы 15 (пример 24) (верх), наложенный на подвергнутый скринингу образец формы 15 (пример 18) (низ) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида.

Фигура 38: STA формы 15 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 24).

Фигура 39: термограмма DSC формы 15 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 24).

Фигура 40: профиль рентгеновской порошковой дифракции (верх) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида после получения суспензии формы 15 с 90:10 IPA:вода. Нижний профиль рентгеновской порошковой дифракции представляет собой профиль формы 15 как в ссылке (пример 24).

Фигура 41: спектр ЯМР эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 25).

Фигура 42: профиль рентгеновской порошковой дифракции масштабированной формы 16 (пример 25) (верх), наложенный на подвергнутый скринингу образец формы 16 (пример 19) (низ) эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида.

Фигура 43: STA формы 16 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 25).

Фигура 44: термограмма DSC формы 16 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 25).

Фигура 45: изотермы гравиметрической сорбции паров (адсорбция и десорбция) формы 16 эдизилата N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (пример 25).

Фигура 46: профили рентгеновской порошковой дифракции формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в течение исследований стабильности при 25°C/60%отн. влажн. на 0 суток (верх), 1 месяц (серадина) и 3 месяца (низ).

Фигура 47: профили рентгеновской порошковой дифракции формы 1 N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида в течение исследований стабильности при 40°C/75% отн. влажн. стабильность на 0 суток (верх), 1 месяц (середина) и 3 месяца (низ).

Общее подробное описание экспериментов

В приводимых ниже примерах используют следующие сокращения и определения:

Если не указано иначе, все реакции проводили при атмосферном давлении азота.

Спектры ¹H ЯМР регистрировали на спектрометрах Bruker (400MHz) или JEOL (400MHz) относительно дейтериевого растворителя и при комнатной температуре.

Молекулярные ионы получали с использованием LCMS, которую проводили с использованием колонки Chromolith Speedrod RP-18e, 50×4,6 мм, с линейным градиентом 0,1% HCO₂H/MeCN от 10% до 90% в 0,1% HCO₂H/H₂O в течение 13 мин, при скорости потока 1,5 мл/мин, или с использованием Agilent, X-Select, кислой, 5-95% MeCN/воды в течение 4 мин. Данные собирали с использованием масс-спектрометра Thermofinnigan Surveyor MSQ с электроспрейной ионизацией в сочетании с системой Thermofinnigan Surveyor LC.

Альтернативно, молекулярные ионы получали с использованием LCMS, которую проводили с использованием колонки Agilent Poroshell 120 EC-C18 (2,7мкм, 3,0×50 мм) с 0,1% об./об. муравьиной кислоты в воде [элюент A]; MeCN [элюент B]; скорости потока 0,8 мл/мин и 1,5 минут времени уравновешивания образцов, градиент приведен ниже. Детекцию масс проводили на масс-спектрометре API 2000 (электроспрей).

Градиент:

Когда продукты очищали посредством флэш-хроматографии, "диоксид кремния" относится к силикагелю для хроматографии, от 0,035 до 0,070 мм (от 220 до 440 меш) (например, силикагелю Merck 60), а прилагаемое давление азота до 68,948 кПа ускоряло элюцию из колонки. Очистку посредством препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой проводили с использованием системы бинарного градиентного насоса Waters 2525 при скорости потока, как правило, 20 мл/мин с использованием фотодетектора Waters 2996 на диодной матрице.

Все растворители и коммерческие реагенты использовали в том состоянии, в котором получали.

Химические наименования получали с использованием автоматизированного программного обеспечения, такого как программное обеспечение Autonom, предоставляемой как часть пакета ISIS Draw MDL Information Systems или программное обеспечение Chemaxon, предоставляемое как компонент MarvinSketch или как компонент IDBS E-WorkBook.

Профили рентгеновской порошковой дифракции получали на дифрактометре Philips X-Pert MPD и, если не указано иначе, анализировали с использованием следующих экспериментальных условий (способ A):

Анод трубки: Cu

Напряжение генератора: 40 кВ

Ток трубки: 40 мА

Длина волны альфа1: 1,5406 Å

Длина волны альфа2: 1,5444 Å

Начальный угол [2θ]: 4

Конечный угол [2θ]: 40

Непрерывное сканирование

Приблизительно 2 мг анализируемого образца осторожно спрессовывали на одиночном наклонно срезанном держателе образца для XRPD с нулевым фоном из диоксида кремния. Затем образец вносили в дифрактометр для анализа.

Где указано, профили рентгеновской порошковой дифракции получали следующим способом (способ B):

Исследования рентгеновской порошковой дифракции проводили с использованием Bruker AXS D2 PHASER (D2-205355) в конфигурации Bragg-Brentano, оборудование № 2353. Используют анод Cu при 30 кВ, 10 мА, стандартном вращении предметного столика (5/мин) с поглотителем пучка и монохроматизацией посредством фильтра Kβ (0,59% Ni). Используемые щели представляют собой фиксированные дивергентные щели 1,0 мм (=0,61°), первичную аксиальную щель Соллера 2,5° и вторичную аксиальную щель Соллера 2,5°. Детектор представляет собой линейный детектор LYNXEYE с приемной щелью 5° отверстия детектора. Стандартный держатель образца (полость 0,1 мм в (51O) кремниевой подложке) вносит минимальный вклад в фоновый сигнал. Условия измерения: диапазон сканирования 5 -45° 2θ, вращение образца 5 об./мин., 0,5 сек/этап, 0,010°/этап, щель детектора 3,0 мм и все определяемые состояния регистрируются в файле контроля устройства. Программное обеспечение, используемое для получения данных, представляет собой Diffrac.Commander v4,0. Анализ данных проводят с использованием оценивающего программного обеспечения Diffrac.Eva V4.1. В образцах не проводили коррекцию на фон или сглаживание.

Данные DSC получали следующим способом: Приблизительно 5 мг каждого образца навешивали в алюминиевый лоток для DSC и негерметично закрывали алюминиевой крышкой. Затем образец вносили в Perkin-Elmer Jade DSC и выдерживали при 30°C. После достижения стабильной теплоотдачи, образец затем нагревали до температуры от 200 до 300°C при скорости сканирования 10°C/мин и проводили мониторинг получаемой в результате теплоотдачи. Использовали продувку гелием 20 см³/мин. Перед анализом в устройстве проводили верификацию температуры и теплоотдачи с использованием стандарта индия.

Данные гравиметрической сорбции паров (GVS) получали следующим способом: приблизительно 10 мг образца помещали в проволочную чашу весов для сорбции пара и помещали в весы для сорбции пара "IgaSorp" (Hiden Analytical Instruments). Затем образец высушивали, поддерживая 0% влажности в среде до отсутствия регистрации дальнейшего изменения массы. Затем образец подвергали линейному изменению от 0 до 90% относительной влажности с 10% увеличением относительной влажности, выдерживая образец на каждом этапе до достижения равновесия (99% завершения этапа). После достижения равновесия % относительной влажности в устройстве линейно повышали/понижали до следующего этапа и процедуру уравновешивания повторяли. После завершения цикла сорбции, образец затем высушивали тем же способом. Затем проводили мониторинг изменения массы в течение циклов сорбции/десорбции, обеспечивая определение гигроскопических характеристик образца.

Данные синхронного термического анализа (STA) получали следующим способом: приблизительно 5 мг образца аккуратно навешивали в керамический тигель и помещали его в камеру анализатора Perkin-Elmer STA 600 TGA/DTA при температуре окружающей среды. Затем образец нагревали со скоростью 10°C/мин, как правило от 25°C до 300°C, в течение чего проводили мониторинг изменения массы, а также сигнала DTA. Используемым продувающим газом являлся азот при скорости потока 20 см³/мин.

Примеры синтеза

Пример 1

A. 1-(4-гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он

4-(хлорметил)бензиловый спирт (5,0 г, 31,93 ммоль) растворяли в ацетоне (150 мл). Добавляли 2-гидроксипиридин (3,64 г, 38,3 ммоль) и карбонат калия (13,24 г, 95,78 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 3 часов после чего растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток помещали в хлороформ (100 мл). Этот раствор промывали водой (30 мл), насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили (Na₂SO₄) и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии (диоксид кремния), элюент 3% MeOH/97% CHCl₃, с получением белого твердого вещества, идентифицируемого как 1-(4-гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он (5,30 г, 24,62 ммоль, выход 77%).

[M+Na]⁺=238

B. 1-(4-хлорметилбензил)-1H-пиридин-2-он

1-(4-гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он (8,45 г, 39,3 ммоль), сухой DCM (80 мл) и триэтиламин (7,66 мл, 55,0 ммоль) охлаждали в ледяной бане. Добавляли метансульфонилхлорид (3,95 мл, 51,0 ммоль) и перемешивали в ледяной бане в течение 15 минут. Ледяную баню удаляли и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разделяли между DCM (100 мл) и насыщенным водным раствором NH₄Cl (100 мл). Водный слой экстрагировали дополнительным DCM (2×50 мл) и комбинированные органические вещества промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением 1-(4-хлорметилбензил)-1H-пиридин-2-она (8,65 г, 36,6 ммоль, выход 93%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[MH]⁺=234,1

C. Метил-3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилат

Карбонат калия (519 мг, 3,76 ммоль) добавляли к раствору метил-3-(метоксиметил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (320 мг, 1,88 ммоль; CAS no. 318496-66-1 (синтезированного способом, описанным в WO 2012/009009)) и 1-(4-(хлорметил)бензил)пиридин-2(1H)-она (527 мг, 2,26 ммоль) в DMF (5 мл) и нагревали при 60°C в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и промывали насыщенным солевым раствором (2×100 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и восстанавливали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии (колонка 40 г, 0-100% EtOAc в изогексане) с получением двух региоизомеров. Второй изомер собирали из колонки с получением метил-3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (378 мг, 1,01 ммоль, выход 53,7%) в виде бесцветной камеди.

[MH]⁺=368,2

D. 3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

К метил-3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилату (3,77 г, 10,26 ммоль) в THF (5 мл) и MeOH (5 мл) добавляли 2M раствор NaOH (15,39 мл, 30,8 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли 1M HCl (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и восстанавливали при пониженном давлении с получением 3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1,22 г, 3,45 ммоль, выход 33,6%) в виде белого порошка.

[MH]⁺=354,2

E. 3-фтор-4-метоксипиридин-2-карбонитрил

В большой флакон для микроволновой печи к раствору 2-бром-3-фтор-4-метоксипиридина (1 г, 4,85 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли цианид меди (I) (1,304 г, 14,56 ммоль). Реакционную пробирку герметизировали и нагревали до 100°C в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и EtOAc (20 мл). Густую суспензию обрабатывали ультразвуком и она требовала дополнительной воды (40 мл) и EtOAc (2×50 мл) с обработкой ультразвуком для разрушения твердого осадка. Комбинированные слои фильтровали через слой целита и органический слой выделяли, промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением бледно-зеленого твердого вещества, идентифицируемого как требуемое соединение 3-фтор-4-метоксипиридин-2-карбонитрил (100 мг, 0,578 ммоль, выход 12%)

F. Сложный трет-бутиловый эфир (3-фтор-4-метоксипиридин-2-илметил)карбаминовой кислоты

3-фтор-4-метоксипиридин-2-карбонитрил (100 мг, 0,578 ммоль) растворяли в безводном метаноле (10 мл, 247 ммоль) и добавляли гексагидрат хлорида никеля (14 мг, 0,058 ммоль) с последующим ди-трет-бутилдикарбонатом (255 мг, 1,157 ммоль). Полученный бледно-зеленый раствор охлаждали в ледяной бане с солью до -5°C, а затем порционно добавляли борогидрид натрия (153 мг, 4,05 ммоль), поддерживая температура реакционной смеси ≈0°C. Темно-коричневый раствор оставляли перемешиваться при 0°C и позволяли медленно нагреваться до комнатной температуры, а затем оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь выпаривали досуха при 40°C с получением черного остатка, который разбавляли DCM (10 мл) и промывали гидрокарбонатом натрия (10 мл). В полученной таким образом эмульсии органические вещества разделяли через фазоделительный картридж и концентрировали. Неочищенную жидкость очищали посредством хроматографии, проводя элюцию EtOAc/изогексаном с получением указанного в заголовке соединения, сложного трет-бутилового эфира (3-фтор-4-метоксипиридин-2-илметил)карбаминовой кислоты, в виде прозрачного желтого масла (108 мг, выход 62%)

[MH]⁺=257

G. Гидрохлорид C-(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метиламина

Сложный трет-бутиловый эфир (3-фтор-4-метоксипиридин-2-илметил)карбаминовой кислоты (108 мг, 0,358 ммоль) помещали в изопропиловый спирт (1 мл), а затем добавляли HCl (6N in изопропилов спирт) (1 мл, 0,578 ммоль) при комнатной температуре и оставляли перемешиваться при 40°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем растирали с простым эфиром, обрабатывали ультразвуком, а затем декантировали с получением твердого вещества кремового цвета (75 мг, выход 55%), идентифицируемого как гидрохлорид C-(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метиламина.

[MH]⁺=157

H. N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма A)

3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (825 мг, 2,34 ммоль) и гидрохлорид C-(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метиламина (450 мг, 2,34 ммоль) растворяли в DCM при охлаждении до 0°C. Добавляли гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (627,0 мг, 3,27 ммоль), HOBt (378,8 мг, 2,80 ммоль) и триэтиламин (1,63 мл, 1182 ммоль) при перемешивании, смеси позволяли нагреваться до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 20 часов. Добавляли хлороформ (50 мл), смесь промывали насыщенным NaHCO₃(водн.) и восстанавливали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством хроматографии, проводя элюцию метанолом/DCM. Полученное твердое вещество растворяли в горячем MeCN, позволяя охлаждаться и осаждаться, и полученные твердые вещества удаляли посредством фильтрации. Фильтрат восстанавливали при пониженном давлении затем лиофилизировали из MeCN/воды с получением указанного в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (720 мг, выход 62%).

[MH]⁺=492,0

ЯМР (CD₃OD) δ: 3,41 (3H, c), 4,03 (3H, c), 4,65 (2H, c), 4,72 (2H, д, J=2,3Hz), 5,24 (2H, c), 5,37 (2H, c), 6,44 (1H, тд, J=1,4, 6,8Hz), 6,62 (1H, д, J=9,0Hz), 7,18-7,22 (1H, м), 7,31-7,38 (4H, м), 7,56-7,60 (1H, м), 7,75 (1H, дд, J=1,9, 7,1Hz), 8,18 (1H, c), 8,27 (1H, д, J=5,6Hz) м.д.

Дифрактограмма XRPD N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма A) приведена на фигуре 1b. Выявлено, что форма A главным образом является аморфной.

Пример 2 - N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма 1)

3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (825 мг, 2,34 ммоль) и гидрохлорид C-(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метиламина (450 мг, 2,34 ммоль) растворяли в DCM при охлаждении до 0°C. Добавляли гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (627,0 мг, 3,27 ммоль), HOBt (378,8 мг, 2,80 ммоль) и триэтиламин (1,63 мл, 1182 ммоль) при перемешивании, смеси позволяли нагреваться до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 20 часов. Добавляли хлороформ (50 мл), смесь промывали насыщенным NaHCO₃(водн.) и восстанавливали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством хроматографии, проводя элюцию метанол/DCM. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученное твердое вещество растирали с простым диэтиловым эфиром. Полученные твердые вещества собирали посредством фильтрации с получением указанного в заголовке соединения.

Дифрактограмма XRPD N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 1) приведена на фигуре 2a.

Таблица положений пиков:

Синхронный термический анализ (STA)

Данные STA для формы 1 приведены на фигуре 3.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Данные DSC для формы 1 приведены на фигуре 4.

Гравиметрическая сорбция паров (GVS)

Данные GVS для формы 1 приведены в таблице ниже и приведены на фигуре 5.

Исследования суспензии

Форму 1 (20 мг) суспендировали в IPA/воде 90/10 (200 мкл или 300 мкл) и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 72 часов. Супернатант, вследствие малого объема, не фильтровали, а выпаривали и полученное твердое вещество анализировали посредством XRPD (фигура 6). Полученная XRPD (фигура 6) отличалась от XRPD на фигуре 2a, что демонстрирует, что свободное основание, возможно, обладает тенденцией к формированию гидрата(ов).

Визуальная водорастворимость

Форму 1 (10 мг) навешивали в стеклянный флакон и добавляли воду порциями по 100 мкл до 3 мл, затем 1 мл частями. Растворимость оценивали визуально после короткого периода уравновешивания.

У формы 1 не получено признаков ее полного растворения в 20 мл воды (<< 0,5мг/мл).

Пример 3 - N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма 1)

3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (825 мг, 2,34 ммоль) и гидрохлорид C-(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метиламина (450 мг, 2,34 ммоль) растворяли в DCM при охлаждении до 0°C. Добавляли гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (627,0 мг, 3,27 ммоль), HOBt (378,8 мг, 2,80 ммоль) и триэтиламин (1,63 мл, 1182 ммоль) при перемешивании, смеси позволяли нагреваться до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 20 часов. Добавляли хлороформ (50 мл), смесь промывали насыщенным NaHCO₃(водн.) и восстанавливали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством хроматографии, проводя элюцию метанолом/DCM. Полученное твердое вещество растворяли в горячем MeCN, позволяя охлаждаться и осаждаться, и полученные твердые вещества собирали посредством фильтрации с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (130 мг, выход 11%).

Дифрактограмма XRPD (полученная способом B) N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 1) приведена на фигуре 2b. Дифрактограмма XRPD (фигура 2b) выделенных твердых веществ подтвердила, что они находились в той же полиморфной форме, что и форма 1 (пример 2) (фигура 2a).

Таблица положений пиков:

Пример 4 - N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма 1)

3-(метоксиметил)-1-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (61 г, 0,173 моль) растворяли в DMF (400 мл) и порционно добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (27,99 г, 0,173 моль). После завершения добавления реакционную смесь нагревали до 50°C в течение 2 часов. В реакционную смесь порционно добавляли C-(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метиламин (26,95 г, 0,17 3 моль). Реакционную смесь нагревали до 50°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и капельно добавляли к смеси воды и насыщенного NaHCO₃(водн.) 3:1 (4000 мл). Полученную суспензию перемешивали в течение 30 мин с последующим выделением твердых веществ посредством фильтрации. Твердые вещества промывали водой (2×500 мл) с последующей сушкой в вакуумной печи с получением 119 г неочищенного продукта. Неочищенный продукт комбинировали с двумя другими отдельными партиями (начиная с 0,173 моль и 0,0874 моль исходной кислоты, соответственно) и совместно суспендировали в IPA (1400 мл) и нагревали до кипения с обратным холодильником. Добавляли дополнительные части IPA до полного растворения вещества при кипячении с обратным холодильником (всего 2000 мл добавленного IPA). Раствор поддерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 30 мин с последующим его охлаждением до комнатной температуры. Смесь дополнительно охлаждали в ледяной/водяной бане в течение 30 мин с последующим сбором продукта посредством фильтрации. Твердые вещества промывали IPA и сушили с получением 167,2 г указанного в заголовке продукта (выход 78,5%).

[MH]⁺=491,9

Спектр ЯМР (CD₃OD) согласовывался со спектром ЯМР из примера 1.

Дифрактограмма XRPD (полученная способом B) выделенных твердых веществ (фигура 2c) подтвердила, что они находились в той же полиморфной форме, что и форма 1 (пример 2 и пример 3) (фигуры 2a и 2b).

Данные по стабильности

Образец формы 1 помещали в двойные полиэтиленовые пакеты и закрывали в бутылке из HDPE и хранили в условиях 25°C/60% относительной влажности Образец повторно анализировали через 1 месяц и 3 месяца посредством XRPD (способом B). Данные приведены на фигуре 46. При хранении образца при 25°C/60% относительной влажности в течение 1 месяца или 3 месяцев изменений в дифрактограмме XRPD не наблюдали.

Дополнительные тесты образца формы 1, хранимого при 25°C/60% относительной влажности, проводили, как описано в таблице ниже:

Второй образец формы 1 упаковывали в двойные полиэтиленовые пакеты и закрывали в бутылке HDPE и хранили в форсированных условиях определения стабильности 40°C/75% относительной влажности. Образец повторно анализировали через 1 месяц и 3 месяца посредством XRPD (способом B). Данные приведены на фигуре 47. При хранении образца при 40°C/75% относительной влажности в течение 1 месяца или 3 месяцев изменений в дифрактограмме XRPD не наблюдали.

Дополнительные тесты образца формы 1, хранимого при 40°C/75% относительной влажности, проводили, как описано в таблица ниже:

Пример 5 - N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма 2)

N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (19,5 мг) в IPA/воде 90/10 (100 мкл) нагревали до растворения твердого вещества, проводя фильтрование при необходимости. Полученный раствор охлаждали, погружая теплый раствор в баню с жидким азотом. Затем образец переносили в холодильник. Полученные твердые вещества выделяли с получением N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 2).

Дифрактограмма XRPD N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 2) приведена на фигуре 7.

Таблица положений пиков:

Пример 6 - N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма 3)

Суспензию N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (30 мг) в метаноле/воде 50/50 (100 мкл) выдерживали при циклическом изменении температуры в течение 2 суток. Полученные твердые вещества выделяли с получением N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 3).

Дифрактограмма XRPD N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 3) приведена на фигуре 8.

Таблица положений пиков:

Пример 7 - N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (форма 4)

Суспензию N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (20 мг) в метаноле/воде 50/50 (100 мкл) нагревали. Растворялось не все твердое вещество, и, таким образом, смесь фильтровали. Фильтрату позволяли выпариваться в атмосфере азота с получением N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 4).

Дифрактограмма XRPD N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 4) приведена на фигуре 9.

Пример 8 - Пример 20 - ДАННЫЕ СКРИНИНГА СОЛЕЙ

Проводили скрининг солей N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида и регистрировали дифрактограммы XRPD продуктов.

Если противоион являлся твердым (п-толуолсульфоновой кислотой, этандисульфоновой кислотой и бензолсульфоновой кислотой), N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (≈ 15 мг) навешивали во флакон с ≈ 1,1 эквивалентом противоиона в виде физической смеси твердых веществ. Добавляли 150 мкл подходящего растворителя.

Если противоион являлся жидкостью (5M соляная кислота, 6M серная кислота, 85% ортофосфорная кислота, метансульфоновая кислота) подходящий объем, соответствующий ≈ 1,1 эквиваленту, добавляли к N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамиду (≈ 15 мг) в выбранный растворитель (150мкл) (в основном суспензию).

Смесь хорошо перемешивали вручную. Затем у всех суспензий или растворов циклически изменяли температуру между температурой окружающей среды и 40°C в течение ≈ 18-24 часов.

Если присутствовало достаточное количество твердого вещества, супернатант декантировали, если возможно, и твердое вещество сушили посредством выпаривания. Если наблюдали раствор, растворителю позволяли выпариваться в атмосфере азота, затем сушили. Все твердые вещества исследовали посредством XRPD.

Пример 8 - гидрохлорид N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 5)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой EtOAc или MeCN. Кислота представляет собой 5M соляную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 5 приведена на фигуре 10.

Пример 9 - гидрохлорид N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 6)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон. Кислота представляет собой 5M соляную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 6 приведена на фигуре 11.

Пример 10 - гидрохлорид N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 7)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой THF. Кислота представляет собой 5M соляную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 7 приведена на фигуре 12.

Пример 11 - Сульфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 8)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон или MeCN. Кислота представляет собой 6M серную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 8 приведена на фигуре 13.

Пример 12 - Фосфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 9)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон. Кислота представляет собой 85% ортофосфорную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 9 приведена на фигуре 14.

Таблица положений пиков:

Пример 13 - Фосфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 10)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой EtOAc. Кислота представляет собой 85% ортофосфорную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 10 приведена на фигуре 15.

Пример 14 - Фосфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 11)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой THF. Кислота представляет собой 85% ортофосфорную кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 11 приведена на фигуре 16.

Пример 15 - мезилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 12)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой THF. Кислота представляет собой метансульфоновую кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 12 приведена на фигуре 17.

Таблица положений пиков:

Пример 16 - мезилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 13)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон. Кислота представляет собой метансульфоновую кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 13 приведена на фигуре 18.

Пример 17 - тозилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 14)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон, EtOAc, THF или MeCN. Кислота представляет собой п-толуолсульфоновую кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 14 приведена на фигуре 19.

Таблица положений пиков:

Пример 18 - Эдизилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 15)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон или EtOAc. Кислота представляет собой этандисульфоновую кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 15 приведена на фигуре 20.

Пример 19 - Эдизилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 16)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой THF или MeCN. Кислота представляет собой этандисульфоновую кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 16 приведена на фигуре 21.

Пример 20 - безилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 17)

Получали способом скрининга солей, описанным выше, когда растворитель представлял собой ацетон, EtOAc, THF или MeCN. Кислота представляет собой бензолсульфоновую кислоту.

Дифрактограмма XRPD формы 17 приведена на фигуре 22.

Таблица положений пиков:

Пример 21 - Пример 25 - ЭКСПЕРИМЕНТЫ ПО МАСШТАБИРОВАНИЮ

Пример 21 - гидрохлорид N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 18)

N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (200 мг) нагревали в MeCN (2 мл) так, что твердое вещество растворялось. К теплому раствору добавляли несколько кристаллов образца после первичного скрининга (форма 5) с последующим добавлением 5M соляной кислоты (90 мкл) и хорошо перемешивали. Масляное твердое вещество отделяли и смесь обрабатывали ультразвуком в течение ≈ 1 минуты и продукт соскребали с лопатки. Полученную суспензию подвергали циклическому изменению температуры между 40°C и температурой окружающей среды в течение ночи (18-24 часов). Продукт собирали и добавляли MeCN (1 мл) для мобилизации с последующим фильтрованием продукта, промыванием MeCN (2×1 мл) и сушкой в вакуумной печи при 50°C в течение ≈ 24 часов до постоянной массы. (Выход 122 мг)

Спектр ЯМР выделенного продукта в d6-DMSO приведен на фигуре 23.

Дифрактограмма XRPD выделенного продукта (верх), наложенная на форму 5 (пример 8) (низ), приведен на фигуре 24. Дифрактограммы XRPD продемонстрировали, что выделенный продукт (форма 18) являлся другой полиморфной формой относительно формы 5.

Таблица положений пиков для формы 18:

Синхронный термический анализ (STA)

Данные STA для формы 18 приведены на фигуре 25.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Данные DSC для формы 18 приведены на фигуре 26.

Гравиметрическая сорбция паров (GVS)

Данные GVS для формы 18 приведены в таблице ниже и приведены на фигуре 27.

Исследования суспензии

Форму 18 (20 мг) суспендировали в IPA/воде 90/10 (200 мкл или 300 мкл) и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 72 часов. Супернатант выпаривали, а не фильтровали, вследствие малого объема, и полученное твердое вещество исследовали посредством XRPD (фигура 28). Полученные XRPD (фигура 28) продемонстрировали, что полученная форма после получения взвеси с IPA/водой 90/10 отличалась от формы 18.

Визуальная водорастворимость

Форму 18 (10 мг) навешивали в стеклянный флакон и добавляли воду 100 мкл частями до 3 мл, затем 1 мл частями. Растворимость оценивали визуально после короткого периода уравновешивания.

Исходно наблюдали, что форма 18 растворяется в 0,1 мл воды, но затем она снова осаждалась. Твердое вещество затем снова не растворялось до 20 мл.

Пример 22 - Сульфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 8)

N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (200 мг) нагревали в ацетонитриле (2 мл) так, что твердое вещество растворялось. К теплому раствору добавляли 6M серную кислоту (75мкл), хорошо перемешивали и обрабатывали ультразвуком непосредственно после перемешивания. Наблюдали немного мутный раствор с небольшим количеством масла, но кристаллов не осаждалось. Добавляли несколько кристаллов образца после первичного скрининга при температуре окружающей среды и твердое вещество быстро накапливалась при дальнейшей обработке ультразвуком. Полученную суспензию подвергали циклическому изменению температуры между 40°C и температурой окружающей среды в течение ночи (18-24 час). Продукт фильтровали, промывали MeCN (2×1 мл) и сушили в вакуумной печи при 50°C в течение ≈ 24 часов до постоянной массы. (Выход 133 мг).

Спектр ЯМР выделенного продукта в d6-DMSO приведен на фигуре 29.

Дифрактограмма XRPD выделенного продукта (верх), наложенная на подвергнутый скринингу образец формы 8 (пример 11) (низ), приведена на фигуре 30. Дифрактограммы XRPD продемонстрировали, что полиморфная форма выделенного продукта являлась такой же, как полиморфная form подвергнутого скринингу образца формы 8 (пример 11).

Таблица положений пиков для формы 8:

Синхронный термический анализ (STA)

Данные STA для формы 8 приведены на фигуре 31.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Данные DSC для формы 8 приведены на фигуре 32.

Гравиметрическая сорбция паров (GVS)

Данные GVS для формы 8 приведены в таблице ниже и приведены на фигуре 33.

Исследования суспензии

Форму 8 (20 мг) суспендировали в IPA/воде 90/10 (200 мкл или 300 мкл) и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 72 часов. Супернатант выпаривали, а не фильтровали, вследствие малого объема, и полученное твердое вещество исследовали посредством XRPD (фигура 34). После получения суспензии в IPA/воде 90/10 изменений в профиле рентгенограммы не наблюдали.

Визуальная водорастворимость

Форму 8 (10 мг) навешивали в стеклянный флакон и добавляли воду 100 мкл частями до 3 мл, затем 1 мл частями. Растворимость оценивали визуально после короткого периода уравновешивания.

Форма 8 полностью растворялась в 0,1 мл воды ( ≈ >> 100мг/мл).

Пример 23 - сульфат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 8)

N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (2,00 г, 4,07 ммоль) перемешивали в MeCN (25 мл). Смесь нагревали до 65°C и удерживали при этой температуре до растворения всего исходного вещества. К теплому раствору добавляли 6M водную серную кислоту (0,75 мл, 4,5 ммоль). Смесь интенсивно перемешивали и формировалось белое твердое вещество. Смесь охлаждали до комнатной температуры и твердые вещества выделяли посредством фильтрации, промывки с малыми объемами MeCN. Твердые вещества сушили в течение 24 часом при 45°C с получением указанного в заголовке соединение (2,6 г).

[MH]⁺=491,5

ЯМР (CD₃OD) δ: 3,40 (3H, c), 4,26 (3H, c), 4,67 (2H, c), 4,82 (2H, д, J=1,6Hz), 5,23 (2H, c), 5,35 (2H, c), 6,42-6,48 (1H, м), 6,61 (1H, д, J=9,2Hz), 7,30 и 7,34 (каждый 2H, каждый д, J=8,2 Гц), 7,54-7,62 (1H, м), 7,72-7,80 (2H, м), 8,18 (1H, д, J=1,5 Гц), 8,54 (1H, д, J=6,9Hz) м.д.

Дифрактограмма XRPD (полученная способом B) выделенного продукта приведена на фигуре 35. Дифрактограмма XRPD продемонстрировала, что полиморфная форма выделенного продукта являлась такой же, как полиморфная форма масштабированного образца формы 8 в примере 22.

Пример 24 - эдизилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 15)

Гидрат этандисульфоновой кислоты (85 мг) и N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (200 мг) навешивали в стеклянный флакон и к физической смеси твердых веществ добавляли ацетон (2 мл). Полученную суспензию нагревали, но растворения не наблюдали. После обработки ультразвуком смесь растирали лопаточкой для удаления немного масляной твердой формы со дна флакона. Полученную суспензию подвергали циклическому изменению температуры между 40°C и температурой окружающей среды в течение ночи (18-24 часов). Продукт фильтровали, промывали ацетоном (2×1 мл) и сушили в вакуумной печи при 50°C в течение ≈ 24 часов до постоянной массы. (Выход 158 мг).

Спектр ЯМР выделенного продукта в d6-DMSO приведен на фигуре 36.

Дифрактограмма XRPD выделенного продукта (верх), наложенная на подвергнутый скринингу образец формы 15 (пример 18) (низ), приведена на фигуре 37. Дифрактограммы XRPD продемонстрировали, что выделенный продукт не являлся таким же кристаллическим, как образец после первичного скрининга (форма 15, пример 18), как выявляли по интенсивности пиков, но профиль находился в соответствии с профилем, полученным при первичном скрининге (пример 18).

Таблица положений пиков для формы 15:

Синхронный термический анализ (STA)

Данные STA для формы 15 приведены на фигуре 38.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Данные DSC для формы 15 приведены на фигуре 39.

Исследования суспензии

Попытка получить водяную взвесь посредством смешивания формы 15 (20 мг) и деионизированной воды (200 мкл) в течение 72 часов привела к полному растворению образца.

Форму 15 (20 мг) суспендировали в IPA/воде 90/10 (200 мкл или 300 мкл) и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 72 часов. Супернатант выпаривали, а не фильтровали, вследствие малого объема, и полученное твердое вещество исследовали посредством XRPD (фигура 40). Отличий в профиле рентгенограммы после получения суспензии в IPA/воде 90/10 не наблюдали.

Визуальная водорастворимость

Форму 15 (10 мг) навешивали в стеклянный флакон и добавляли воду 100 мкл частями до 3 мл, затем 1 мл частями. Растворимость оценивали визуально после короткого периода уравновешивания.

Форма 15 полностью растворялась в 0,1 мл воды ( ≈ >> 100мг/мл), а затем при повторе с использованием даже меньшего количества воды, в 0,05 мл (> 200мг/мл).

Пример 25 - эдизилат N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида (форма 16)

Гидрат этандисульфоновой кислоты (85 мг) и N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид (200 мг) навешивали в стеклянный флакон и к физической смеси твердых веществ добавляли ацетонитрил (2 мл). Полученную суспензию нагревали и большинство твердого вещества растворялось за исключением одного агломерата кислоты. Кристаллы осаждались при более высокой температуре с последующим получением полностью прозрачного раствора. Немного масляный продукт обрабатывали ультразвуком и растирали лопаточкой и оставшееся масло застывало и диспергировало. Полученную суспензию подвергали циклическому изменению температуры между 40°C и температурой окружающей среды в течение ночи (18-24 часов). Продукт фильтровали, промывали ацетонитрилом (2×1 мл) и сушили в вакуумной печи при 50°C в течение ≈ 24 часов до постоянной массы. (Выход 162 мг).

Спектр ЯМР выделенного продукта в d6-DMSO приведен на фигуре 41.

Дифрактограмма XRPD выделенного продукта (верх), наложенная на подвергнутый скринингу образец формы 16 (пример 19) (низ), приведен на фигуре 42. Дифрактограммы XRPD продемонстрировали, что выделенный продукт не являлся таким же кристаллическим, как образец после первичного скрининга (форма 16, пример 19), как выявляли по интенсивности пиков, но профиль находился в соответствии с профилем, полученным при первичном скрининге (пример 19).

Таблица положений пиков для формы 16:

Синхронный термический анализ (STA)

Данные STA для формы 16 приведены на фигуре 43.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Данные DSC для формы 16 приведены на фигуре 44.

Гравиметрическая сорбция паров (GVS)

Данные GVS для формы 16 приведены в таблице ниже и приведены на фигуре 45.

Визуальная водорастворимость

Форму 16 (10 мг) навешивали в стеклянный флакон и добавляли воду 100 мкл частями до 3 мл, затем 1 мл частями. Растворимость оценивали визуально после короткого периода уравновешивания.

Форма 16 полностью растворялась в 0,1 мл воды ( ≈ >> 100мг/мл), а затем, при повторе, с использованием даже меньшего количества воды 0,05 мл (> 200мг/мл).

Пример 26 - Биологические способы

Способность N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида ингибировать плазменный калликреин можно определять с использованием приводимых ниже биологических анализов:

Определение IC₅₀ плазменного калликреина

Ингибирующую активность в отношении плазменного калликреина in vitro определяли стандартными опубликованными способами (cм. например, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). Плазменный калликреин человека (Protogen) инкубировали при 25°C с флуорогенным субстратом H-DPro-Phe-Arg-AFC и различными концентрациями тестируемого соединения. Остаточную ферментативную активность (исходную скорость реакции) определяли, посредством определения изменения оптической плотности при 410 нм и определяли значение IC₅₀ для тестируемого соединения.

При тестировании в этом анализе N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид продемонстрировал IC₅₀ (PKal человека) 3,3 нМ.

N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид также подвергали скринингу на ингибирующую активность в отношении родственного фермента KLK1 с использованием следующего биологического анализа:

Определение IC₅₀ для KLK1

Ингибирующую активность KLK1 in vitro определяли стандартными опубликованными способами (cм. например, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). KLK1 человека (Callbiochem) инкубировали при 25°C с флуорогенным субстратом H-DVal-Leu-Arg-AFC и различными концентрациями тестируемого соединения. Остаточную ферментативную активность (исходная скорость реакции) определяли посредством определения изменения оптической плотности при 410 нм и определяли значение IC₅₀ тестируемого соединения.

При тестировании в этом анализе N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид продемонстрировал IC₅₀ (человек KLK1) >40000 нМ.

N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид также подвергали скринингу на ингибирующую активность в отношении родственного фермента FXIa с использованием следующего биологического анализа:

Определение % ингибирования для FXIa

Ингибирующую активность FXIa in vitro определяли стандартными опубликованными способами (cм. например, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). FXIa человека (Enzyme Research Laboratories) инкубировали при 25°C с флуорогенным субстратом Z-Gly-Pro-Arg-AFC и 40 мкм тестируемого соединения. Остаточную ферментативную активность (исходная скорость реакции) определяли посредством определения изменения оптической плотности при 410 нм.

При тестировании в этом анализе N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамид продемонстрировал % ингибирования при 40 мкм (человек FXIa) 0%.

Пример 27 - Фармакокинетика

Фармакокинетическое исследование N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида проводили для оценки фармакокинетики после введения одной пероральной дозы мышам крыс Sprague-Dawley. Двум крысам вводили одну п/о дозу 5 мл/кг номинальной композиции тестируемого соединения в носителе 2 мг/мл (10 мг/кг). После дозирования собирали образцы крови в течение периода 24 часов. Временные точки забора образцов составляли 5, 15 и 30 минут, затем 1, 2, 4, 6, 8 и 12 часов. После сбора образцы крови центрифугировали и плазматическую фракцию анализировали на концентрацию тестируемого соединения посредством LCMS.

Данные о пероральном воздействии, полученные в этом исследовании для N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамида, приведены ниже: