Результат интеллектуальной деятельности: АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА КАЛЛИКРЕИНА ПЛАЗМЫ

Это изобретение относится к гетероциклическим производным, которые являются ингибиторами калликреина плазмы, и к содержащим их фармацевтическим композициям, и к применению таких производных.

Уровень техники

Гетероциклические производные настоящего изобретения являются ингибиторами калликреина плазмы и имеют целый ряд терапевтических применений, в частности, при лечении проницаемости сосудов сетчатки глаза, связанной с диабетической ретинопатией и диабетическим макулярным отеком.

Калликреин плазмы представляет собой трипсиноподобную серин-протеазу, которая способна высвобождать кинины из кининогенов (смотрите публикации K.D. Bhoola et al., "Kallikrein-Kinin Cascade", Encyclopedia of Respiratory Medicine, p483-493; J.W. Bryant et al., "Human plasma kallikrein-kinin system: physiological and biochemical parameters" Cardiovascular and haematological agents in medicinal chemistry, 7, p234-250, 2009; K.D. Bhoola et al., Pharmacological Rev., 1992, 44, 1; и D.J. Campbell, "Towards understanding the kallikrein-kinin system: insights from the measurement of kinin peptides", Brazilian Journal of Medical and Biological Research 2000, 33, 665-677). Он является необходимым участником собственного каскада реакций свертывания крови, хотя его роль в этом каскаде не включает высвобождение брадикинина или ферментативное расщепление. Плазменный прокалликреин кодируется одним геном и синтезируется в печени. Он секретируется гепатоцитами в виде неактивного плазменного прокалликреина, который циркулирует в плазме в виде гетеродимерного комплекса, связанного с высокомолекулярным кининогеном, который активируется с выделением активного калликреина плазмы. Кинины являются эффективными медиаторами воспаления, которые действуют через сопряженный с G-белком рецептор, и антагонисты кининов (такие как антагонисты брадикинина) были ранее исследованы в качестве возможных терапевтических средств для лечения ряда нарушений (F. Marceau and D. Regoli, Nature Rev., Drug Discovery, 2004, 3, 845-852).

Считают, что калликреин плазмы играет определенную роль при ряде воспалительных нарушений. Основным ингибитором калликреина плазмы является ингибитор C1 эстеразы. Пациенты, у которых обнаруживается генетически обусловленный дефицит ингибитора C1 эстеразы, страдают от врожденного ангионевротического отека (HAE), который в результате приводит к рецидивирующему опуханию лица, рук, горла, желудочно-кишечного тракта и гениталий. Волдыри, образовавшиеся при острых приступах, содержат высокие уровни калликреина плазмы, который расщепляет высокомолекулярный кининоген, высвобождая брадикинин, что приводит к повышенной проницаемости сосудов. Было показано, что лечение с использованием ингибитора калликреина плазмы на основе крупных белковых молекул является эффективным в случае врожденного ангионевротического отека (HAE) в результате предотвращения высвобождения брадикинина, который вызывает повышенную проницаемость сосудов (A. Lehmann, "Ecallantide (DX-88), a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditary angioneurotic edema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery", Expert Opin. Biol. Ther. 8, p1187-99).

Калликреин-кининовая система является аномально избыточной у пациентов с прогрессирующим диабетическим макулярным отеком. Недавно было сообщено, что калликреин плазмы способствует дисфункциям сосудов сетчатки глаза у крыс, страдающих диабетом (A. Clermont et al., "Plasma kallikrein mediates retinal vascular dysfunction and induces retinal thickening in diabetic rats", Diabetes, 2011, 60, p1590-98). Кроме того, введение ингибитора калликреина плазмы ASP-440 улучшало ситуацию у крыс с диабетом, как с точки зрения проницаемости сосудов сетчатки глаза, так и нарушения кровотока в сетчатке глаза. Поэтому, ингибитор калликреина плазмы может найти терапевтическое применение для уменьшения проницаемости сосудов сетчатки глаза при диабетической ретинопатии и диабетическом макулярном отеке.

Другие осложнения при диабете, такие как внутримозговое кровоизлияние, нефропатия, кардиомиопатия и невропатия, каждое из которых связано с калликреином плазмы, могут также рассматриваться в качестве мишеней для ингибитора калликреина плазмы.

Синтетические и низкомолекулярные ингибиторы калликреина плазмы были описаны ранее, например, в публикациях Garrett et al., "Peptide aldehyde....", J. Peptide Res. 52, p62-71 (1998); T. Griesbacher et al., "Involvement of tissue kallikrein but not plasma kallikrein in the development of symptoms mediated by endogenous kinins in acute pancreatitis in rats", British Journal of Pharmacology 137, p692-700 (2002); Evans, "Selective dipeptide inhibitors of kallikrein", WO03/076458; Szelke et al., "Kininogenase inhibitors", WO92/04371; D. M. Evans et al., Immunolpharmacology, 32, p115-116 (1996); Szelke et al., "Kininogen inhibitors", WO95/07921; Antonsson et al., "New peptides derivatives", WO94/29335; J. Corte et al., ”Six membered heterocycles useful as serine protease inhibitors”, WO2005/123680; J. Stürzbecher et al., Brazilian J. Med. Biol. Res 27, p1929-34 (1994); Kettner et al., US 5187157; N. Teno et al., Chem. Pharm. Bull. 41, p1079-1090 (1993); W. B. Young et al., "Small molecule inhibitors of plasma kallikrein", Bioorg. Med. Chem. Letts. 16, p2034-2036 (2006); Okada et al., "Development of potent and selective plasmin and plasma kallikrein inhibitors and studies on the structure-activity relationship", Chem. Pharm. Bull. 48, p1964-72 (2000); Steinmetzer et al., "Trypsin-like serine protease inhibitors and their preparation and use", WO08/049595; Zhang et al., "Discovery of highly potent small molecule kallikrein inhibitors" Medicinal Chemistry 2, p545-553 (2006); Sinha et al., "Inhibitors of plasma kallikrein" WO08/016883; Shigenaga et al., "Plasma Kallikrein inhibitors" WO2011/118672; и Kolte et al., "Biochemical characterization of a novel high-affinity and specific kallikrein inhibitor", British Journal of Pharmacology (2011), 162(7), 1639-1649. Кроме того, в публикации Steinmetzer et al., "Serine protease inhibitors" WO2012/004678 описаны аналоги циклизированных пептидов, которые являются ингибиторами человеческого плазмина и калликреина плазмы.

К настоящему времени, низкомолекулярный синтетический ингибитор калликреина плазмы еще не получил разрешения на медицинское применение. Молекулы, описываемые известным уровнем техники, обладают такими недостатками, как низкая селективность по отношению к родственным ферментам, таким как KLK1, тромбин и другие серин-протеазы, и низкая пероральная доступность. Применение ингибиторов калликреина плазмы на основе крупных белковых молекул связано с риском возникновения анафилактических реакций, как об этом было сообщено в случае препарата экаллантида. Таким образом, остается необходимость в соединениях, которые селективно ингибируют калликреин плазмы, которые не вызывают анафилаксию и которые характеризуются пероральной доступностью. Кроме того, подавляющее большинство молекул известного уровня техники характеризуется высокополярной и способной к ионизации гуанидиновой или амидиновой функциональностью. Хорошо известно, что наличие таких функциональностей может негативно влиять на всасывание в кишечнике и, соответственно, на пероральную доступность. Например, в публикации Tamie J. Chilcote and Sukanto Sinha, "ASP-634: An Oral Drug Candidate for Diabetic Macular Edema", ARVO 2012 May 6^th-May 9^th, 2012, Fort Lauderdale, Florida, Presentation 2240 сообщалось, что недостатком ASP-440, бензамидина, является его низкая пероральная доступность. Кроме того, сообщалось, что всасывание может быть улучшено за счет создания пролекарства, такого как ASP-634. Однако хорошо известно, что пролекарства могут обладать рядом недостатков, например, низкой химической стабильностью и возможной токсичностью инертного носителя или образованием неожидаемых метаболитов. В другом сообщении, в качестве соединений, которые могли бы устранить проблемы, связанные с лекарственными средствами, обладающими низкими или несоответствующими всасыванием, распределением, метаболизмом и выведением токсических соединений и неподходящими физико-химическими свойствами, заявляются амиды индола, хотя и не представлены или не заявлены данные по поводу их ингибирующих свойств в отношении калликреина плазмы (Griffioen et al., "Indole amide derivatives and related compounds for use in the treatment of neurodegenerative diseases", WO2010, 142801).

Фирма BioCryst Pharmaceuticals Inc. сообщила о создании перорально доступного ингибитора калликреина плазмы BCX4161 ("BCX4161, An Oral Kallikrein Inhibitor: Safety and Pharmacokinetic Results Of a Phase 1 Study In Healthy Volunteers", Journal of Allergy and Clinical Immunology, Volume 133, Issue 2, Supplement, February 2014, page AB39 и "A Simple, Sensitive and Selective Fluorogenic Assay to Monitor Plasma Kallikrein Inhibitory Activity of BCX4161 in Activated Plasma", Journal of Allergy and Clinical Immunology, Volume 133, Issue 2, Supplement February 2014, page AB40). Однако дозы для человека являются относительно большими, на данный момент для подтверждения концептуальных исследований испытываемые дозы составляют 400 мг три раза в сутки.

Имеется только несколько сообщений по поводу ингибиторов калликреина плазмы, которые не содержат гуанидиновую или амидиновую функциональности. Одним примером является публикация Brandl et al., "N-((6-amino-pyridin-3-ил)methyl)-heteroaryl-carboxamides as inhibitors of plasma kallikrein", WO2012/017020, в которой описываются соединения, содержащие аминопиридиновую функциональность. Пероральная эффективность в модели на крысах проявляется при относительно высоких дозах 30 мг/кг и 100 мг/кг, но не приводятся данные по фармакокинетическому профилю. Таким образом, пока еще неизвестно, будут ли такие соединения обеспечивать достаточную пероральную доступность или эффективность, для того чтобы быть использованными в клинической практике. Другими примерами являются публикация Brandl et al., "Aminopyridine derivatives as plasma kallikrein inhibitors", WO2013/111107 и публикация Flohr et al., "5-membered heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors" WO2013/111108. Однако, ни в одном из этих документов не приводится никаких in vivo данных и, поэтому, пока еще неизвестно, будут ли такие соединения обеспечивать достаточную пероральную доступность или эффективность, для того чтобы быть использованными в клинической практике.

Следовательно, в настоящее время все еще существует необходимость в разработке новых ингибиторов калликреина плазмы, которые могли бы применяться для лечения разнообразных нарушений, в частности, для уменьшения проницаемости сосудов сетчатки глаза при диабетической ретинопатии и диабетическом макулярном отеке. Важно, чтобы предпочтительные соединения обладали хорошим фармакокинетическим профилем и, в частности, могли применяться в качестве лекарственных средств для перорального введения.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к ряду гетероциклических производных, которые являются ингибиторами калликреина плазмы. Эти соединения характеризуются высокой селективностью в отношении калликреина плазмы и могут применяться при лечении нарушения остроты зрения, диабетической ретинопатии, макулярного отека, врожденного ангионевротического отека, диабета, панкреатита, внутримозгового кровоизлияния, нефропатии, кардиомиопатии, невропатии, воспалительного заболевания кишечника, артрита, воспаления, септического шока, гипотензии, рака, синдрома расстройства дыхания у взрослых, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, при операции в условиях искусственного кровообращения и при кровотечении после хирургического вмешательства. Кроме того, изобретение относится к фармацевтическим композициям ингибиторов, к применению композиций в качестве терапевтических средств, и к способам лечения с применением этих композиций.

В первом аспекте, настоящее изобретение предлагает соединения формулы I

Формула (I)

где

B представляет собой конденсированное 6,5- или 6,6-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где, когда B представляет собой 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, оно связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент;

W, X, Y и Z независимо выбирают из C, N, O и S, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный ароматический гетероцикл;

где,

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, CF₃ и R16; где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и его независимо выбирают из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, CF₃ и R16;

A выбирают из арила и гетероарила;

R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила;

R16 представляет собой углеродсодержащую 3-, 4-, 5- или 6-членную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или ненасыщенной неароматической и которая может необязательно содержать 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранные из N, O и S, где кольцевая система R16 в свою очередь необязательно замещена заместителями, выбранными из алкила и оксо;

алкил представляет собой линейный насыщенный углеводород, имеющий до 10 углеродных атомов (C₁-C₁₀), или разветвленный насыщенный углеводород, имеющий от 3 до 10 углеродных атомов (C₃-C₁₀); алкил может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из (C₁-C₆)алкокси, OH, CN, CF₃, COOR10, CONR10R11, фтора и NR10R11;

алкокси представляет собой линейный O-связанный углеводород, имеющий от 1 до 6 углеродных атомов (C₁-C₆), или разветвленный линейный O-связанный углеводород, имеющий от 3 до 6 углеродных атомов (C₃-C₆); алкокси может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из OH, CN, CF₃, COOR10, CONR10R11, фтора и NR10R11;

арил представляет собой фенил, бифенил или нафтил; арил может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из алкила, алкокси, метилендиокси, этилендиокси, OH, галогена, CN, морфолинила, пиперидинила, гетероарила, -(CH₂)_0-3-O-гетероарила, арила^b, -O-арила^b, -(CH₂)_1-3-арила^b, -(CH₂)_1-3-гетероарила, -COOR10, -CONR10R11, -(CH₂)_1-3-NR14R15, CF₃ и -NR10R11;

арил^b представляет собой фенил, бифенил или нафтил, который может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, морфолинила, пиперидинила, -COOR10, -CONR10R11, CF₃ и NR10R11;

гетероарил представляет собой 5, 6, 9 или 10 членное моно- или бициклическое ароматическое кольцо, содержащее, когда это возможно, 1, 2 или 3 кольцевых элемента, независимо выбранные из N, NR8, S и O; гетероарил может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из алкила, алкокси, OH, OCF₃, галогена, CN, арила, морфолинила, пиперидинила, -(CH₂)_1-3-арила, гетероарила^b, -COOR10, -CONR10R11, CF₃ и -NR10R11;

гетероарил^b представляет собой 5, 6, 9 или 10 членное моно- или бициклическое ароматическое кольцо, содержащее, когда это возможно, 1, 2 или 3 кольцевых элемента, независимо выбранные из N, NR8, S и O; где гетероарил^b может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, морфолинила, пиперидинила, арила, -(CH₂)_1-3-арила, -COOR10, -CONR10R11, CF₃ и NR10R11;

R10 и R11 независимо выбирают из H и алкила, или R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и которое может быть необязательно моно- или дизамещено заместителями, выбранными из оксо, алкила, алкокси, OH, F и CF₃;

R14 и R15 независимо выбирают из алкила, арила^b и гетероарила^b; или R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и необязательно может быть оксозамещенным;

и и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты;

где соединение формулы (I) не является следующим соединением:

В другом аспекте, настоящее изобретение предлагает пролекарство определенного в изобретении соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

В еще одном аспекте, настоящее изобретение предлагает N-оксид определенного в изобретении соединения формулы (I) или его пролекарство или его фармацевтически приемлемую соль.

Следует иметь в виду, что некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в сольватированной, например, гидратированной, а также в несольватированной формах. Следует иметь в виду, что настоящее изобретение охватывает все такие сольватированные формы.

Во втором аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы I,

Во втором аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы I,

Формула (I)

где:

A, W, X, Y и Z определены выше в первом аспекте;

B представляет собой конденсированное 6,5- или 6,6-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где когда B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, оно связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или независимо выбирают из H, алкила, галогена, OH, арила, гетероарила и CF₃; при условии, что, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 должен присутствовать, и когда он присутствует, его независимо выбирают из алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃;

гетероарил представляет собой 5, 6, 9 или 10 членное моно- или бициклическое ароматическое кольцо, содержащее, когда это возможно, 1, 2 или 3 кольцевых элемента, независимо выбранные из N, NR8, S и O; гетероарил может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, арила, морфолинила, пиперидинила, -(CH₂)_1-3-арила, гетероарила^b, -COOR10, -CONR10R11, CF₃ и -NR10R11;

алкил, алкокси, арил, гетероарил^b, R8, R9, R10 и R11 определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше первым аспектом, где B представляет собой конденсированное 6,6-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше вторым аспектом, где B представляет собой конденсированное 6,6-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше первым аспектом, где B выбирают из необязательно моно-, ди- или тризамещенного изохинолинила, где указанный заместитель (заместители) выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше вторым аспектом, где B выбирают из необязательно моно-, ди- или тризамещенного изохинолинила, где указанный заместитель (заместители) выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (II),

Формула (II)

где R1, R2 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl; и где A,W, X, Y, Z, R5, R6, R7, алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом или втором аспекте; и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (II),

Формула (II)

где

W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный гетероцикл, выбранный из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или независимо выбирают из H, алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9 и CF₃; где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9 CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, R16 и CF₃;

R1, R2 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl;

и где A, R8, R9, алкил, алкокси, арил и гетероарил определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (II),

Формула (II)

где

W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный гетероцикл, выбранный из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, арил, гетероарила и CF₃; где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃;

R1, R2 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl;

и где A, R8, R9, алкил, алкокси, арил и гетероарил определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (IIa),

Формула (IIa)

где R1, R2 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl; и где A, W, X, Y, R5, R6, R7, алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом или втором аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (IIa),

Формула (IIa)

где R1, R2 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl;

W, X и Y независимо выбирают из C, N, O и S, в результате чего кольцо, содержащее W, X и Y, представляет собой пятичленный ароматический гетероцикл;

и где A, R5, R6, R7, алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом или втором аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше первым аспектом, где B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше вторым аспектом, где B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где B связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенными выше первым или вторым аспектом, где B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, F, Cl и -CN; и где алкил определен выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше первым аспектом, где B выбирают из необязательно замещенного индола, необязательно замещенного индазола и необязательно замещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше вторым аспектом, где B выбирают из необязательно замещенного индола, необязательно замещенного индазола и необязательно замещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где указанное индольное, индазольное или 1H-пирроло[2,3-b]пиридиновое кольцо связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенными выше первым или вторым аспектом, где B выбирают из необязательно замещенного индола, необязательно замещенного индазола и необязательно замещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, F, Cl и -CN; и где алкил определен выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше первым аспектом, где B выбирают из необязательно моно-, ди- или тризамещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина, где указанный заместитель (заместители) выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенным выше вторым аспектом, где B выбирают из необязательно моно-, ди- или тризамещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина, где указанный заместитель (заместители) выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где указанное 1H-пирроло[2,3-b]пиридиновое кольцо связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент; и где алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает соединение в соответствии с приведенными выше первым или вторым аспектом, где B выбирают из необязательно моно-, ди- или тризамещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, F, Cl и -CN; и где алкил определен выше в первом аспекте.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (III),

Формула (III)

где R1 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl; и где A, W, X, Y, Z, R5, R6, R7, алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (III),

Формула (III)

где

W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный гетероцикл, выбранный из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃; где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃;

R1 и R3 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl;

и где A, R8, R9, алкил, алкокси, арил и гетероарил определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В другом аспекте, изобретение включает подгруппу соединений формулы (I), определяемых формулой (III),

Формула (III)

где

W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный гетероцикл, выбранный из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃; где по меньшей мере один из R5, R6 и R7 присутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃;

R1 и R3 независимо выбирают из H и алкила;

и где A, алкил, арил, гетероарил определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В изобретении также описывается подгруппа соединений, определяемых формулой (IV),

Формула (IV)

где R4 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl; и где A, W, X, Y, Z, R5, R6, R7, алкил, алкокси, R8 и R9 определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В изобретении также описывается подгруппа соединений, определяемых формулой (IV),

Формула (IV)

где

W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный гетероцикл, выбранный из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, арила, гетероарила, -NR8R9, -CN, циклопропила и CF₃, и, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 не отсутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, арила, гетероарила, -NR8R9, -CN, циклопропила и CF₃;

R4 выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl;

и где A, R8, R9, алкил, алкокси определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В изобретении также описывается подгруппа соединений, определяемых формулой (IV),

Формула (IV)

где

W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный гетероцикл, выбранный из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола;

R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃, и, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 не отсутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, арила, гетероарила и CF₃;

R4 выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl;

и где A, R8, R9, алкил, алкокси определены выше в первом аспекте;

и его таутомеры, изомеры, стереоизомеры (в том числе энантиомеры, диастереоизомеры и их рацемические и скалемические смеси), его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Настоящее изобретение также включает следующие ограничения, которые могут быть применены к любому из описанных выше аспектов изобретения:

- B представляет собой конденсированное 6,5 или 6,6- гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила; где когда B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, оно связано с -(CH₂)_n- через его 6-членный кольцевой компонент.

- B представляет собой конденсированное 6,5 или 6,6- гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее один, два или три атома N и не содержащее других гетероатомов, которое необязательно монамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой конденсированное 6,6- гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее один атом N и не содержащее других гетероатомов, которое необязательно монамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой конденсированное 6,6- гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее один атом N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N и O, которое необязательно монамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой конденсированное 6,6- гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее один атом N и не содержащее другие гетероатомы, которое необязательно монамещено заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой конденсированное 6,6-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и не содержащее другие гетероатомы, которое необязательно монозамещено с помощью NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, F, Cl и -CN.

- B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и, необязательно, один или два дополнительных гетероатома, независимо выбранные из N, O и S, которое необязательно моно-, ди- или тризамещено заместителем, выбранным из алкила, F, Cl и -CN; где B связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент.

- B выбирают из необязательно замещенного индола, необязательно замещенного индазола и необязательно замещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, F, Cl и -CN.

- B выбирают из необязательно замещенного индола, необязательно замещенного индазола и необязательно замещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, F, Cl и -CN; и где указанное индольное, индазольное или 1H-пирроло[2,3-b]пиридиновое кольцо связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент.

- B представляет собой необязательно моно-, ди- или тризамещенный изохинолинил, где указанный необязательный заместитель (заместители) выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой необязательно монозамещенный изохинолинил; где указанный необязательный заместитель выбирают из алкила, алкокси, OH, и NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B представляет собой необязательно замещенный 1H-пирроло[2,3-b]пиридин, где указанный заместитель (заместители) выбирают из алкила, алкокси, OH, F, Cl, CN, COOR8, CONR8R9, CF₃ и NR8R9, и где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- B выбирают из необязательно моно-, ди- или тризамещенного 1H-пирроло[2,3-b]пиридина; где указанные необязательные заместители выбирают из алкила, F, Cl и -CN; и где указанное 1H-пирроло[2,3-b]пиридиновое кольцо связано с -CONH-CH₂- через его 6-членный кольцевой компонент.

- Предпочтительно, чтобы B представлял собой необязательно монозамещенный изохинолинил, где указанный необязательный заместитель представляет собой NR8R9; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- Предпочтительно, чтобы B представлял собой необязательно ди- или тризамещенный изохинолинил, где один из указанных необязательных заместителей представляет собой NR8R9, а другие указанные необязательные заместители представляют собой алкил; где R8 и R9 независимо выбирают из H и алкила.

- Более предпочтительно, чтобы B представлял собой необязательно ди- или тризамещенный изохинолинил, где один из указанных необязательных заместителей представляет собой NR8R9, а другие указанные необязательные заместители представляют собой алкил; где R8 и R9 представляют собой H.

- Более предпочтительно, чтобы B представлял собой необязательно монозамещенный изохинолинил, где указанный необязательный заместитель представляет собой NR8R9; и где R8 и R9 представляют собой H.

- Более предпочтительно, чтобы B представлял собой необязательно ди- или тризамещенный изохинолинил, где один из указанных необязательных заместителей представляет собой NR8R9, а другой один или два указанных необязательных заместителей представляют собой алкил; где R8 и R9 представляют собой H.

- R1, R2, R3 и R4 независимо выбирают из H, алкила, COOR8, CONR8R9, OH, алкокси, NR8R9, F и Cl.

- Предпочтительно, чтобы R1, R2, R3 и R4 независимо выбирали из H, алкила, Cl и F.

- Предпочтительно, чтобы R1, R2, R3 и R4 независимо выбирали из H, алкила и Cl.

- Более предпочтительно, чтобы R1, R2 и R3 независимо выбирали из H и алкила.

- Более предпочтительно, чтобы R1, R2 и R3 независимо выбирали из H и метила.

Более предпочтительно, чтобы R4 выбирали из H и Cl.

- W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, представляет собой пятичленный ароматический гетероцикл.

- W, X, Y и Z независимо выбирают из C и N, в результате чего кольцо, содержащее W, X, Y и Z, выбирают из пиррола, пиразола, имидазола, 1,2,3-триазола и 1,2,4-триазола.

- Предпочтительно, чтобы X представлял собой N.

- W представляет собой C, X и Y представляют собой N, и Z представляет собой C или N.

- X и Y представляют собой N, и W и Z представляют собой C.

- X, Y и Z представляют собой N, и W представляет собой C.

- X и Z представляют собой N, и W и Y представляют собой C.

- W представляет собой N, и X, Y и Z представляют собой C.

- X представляет собой N, и W, Y и Z представляют собой C.

- R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, CF₃ и -R16, где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и его независимо выбирают из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, R16 и CF₃.

- R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, OH, арила, гетероарила и CF₃, где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и его независимо выбирают из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила и CF₃.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, алкила, -NR8R9, -CN, R16, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, алкила, -NR8R9, -CN, циклопропила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, метила, -NH₂, -CN, циклопропила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, метила, -NH₂, циклопропила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, алкила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, метила, CF₃ и фенила.

- R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, арила и CF₃.

- R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, метила, этила, н-пропила, фенила и CF₃.

- Предпочтительно, чтобы R5 представлял собой H, и R6 и R7 представляли собой метил.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 выбирают из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, R16 и CF₃, и R7 представляет собой H.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 выбирают из алкила, -NR8R9, -CN, циклопропила, CF₃ и арила, и

- R5, R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, галогена, OH, арила, гетероарила и CF₃, где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и независимо выбирается из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила и CF₃.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, алкила, -NR8R9, -CN, R16, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, алкила, -NR8R9, -CN, циклопропила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, метила, -NH₂, -CN, циклопропила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, метила, -NH₂, циклопропила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, алкила, CF₃ и арила.

- R5 отсутствует или его выбирают из H, метила, CF₃ и фенила.

- R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, алкила, арила и CF₃.

- R6 и R7 независимо отсутствуют или их независимо выбирают из H, метила, этила, н-пропила, фенила и CF₃.

- Предпочтительно, чтобы R5 представлял собой H, и R6 и R7 представляли собой метил.

- R14 и R15 независимо выбирают из алкила, арила^b и гетероарила^b; или R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и необязательно может быть оксозамещенным.

- R14 и R15 независимо выбирают из алкила и гетероарила^b; или R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и необязательно может быть оксозамещенным.

- R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и необязательно может быть оксозамещенным.

- R16 представляет собой углеродсодержащую 3-, 4-, 5- или 6-членную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или ненасыщенной неароматической и которая может необязательно содержать 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранные из N, O и S, где кольцевая система R16 в свою очередь необязательно замещена заместителями, выбранными из алкила и оксо.

- R16 представляет собой углеродсодержащую 3-, 4-, 5- или 6-членную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или ненасыщенной неароматической и которая может необязательно содержать 1 или 2 гетероатома, выбранные из N, O и S, где кольцевая система R16 в свою очередь необязательно замещена заместителями, выбранными из метила, этила и оксо.

- R16 выбирают из оксазола, тиофена, циклопропила, циклобутила, пирролидинила и морфолинила, каждого необязательно замещенного заместителями, выбранными из метила и оксо.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 и R7 представляют собой H.

- X, Y и Z представляют собой N, W представляет собой C, и R7 представляет собой H.

- W представляет собой N, X, Y и Z представляют собой C, R7 представляет собой этил, R6 представляет собой метил, и R5 представляет собой H.

- X представляет собой N, W, Y и Z представляют собой C, R5 представляет собой H, и R6 и R7 представляют собой метил.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 выбирают из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, R16 и CF₃, и R7 представляет собой H.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 выбирают из алкила, -NR8R9, -CN, циклопропила, CF₃ и арила, и R7 представляет собой H.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 выбирают из метила, -NH₂, -CN, циклопропила, CF₃, и R7 представляет собой H.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 представляет собой R16, и R16 определен выше в первом аспекте.

- X и Y представляют собой N, W и Z представляют собой C, и R5 выбирают из алкила, галогена, OH, арила, гетероарила и CF₃, и R7 представляет собой H.

- A выбирают из арила и гетероарила, каждого необязательно замещенного, как указано выше в первом аспекте.

- A представляет собой гетероарил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, арила, морфолинила, пиперидинила, -COOR10, -CONR10R11, CF₃ и -NR10R11; где R10 и R11 выбирают из H и алкила, или R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и которое может быть необязательно моно- или дизамещено заместителями, выбранными из оксо, алкила, алкокси, OH, F и CF₃.

- A представляет собой гетероарил, необязательно замещенный заместителем, выбранным из алкила, алкокси, OH, галогена, CN, арила, морфолинила и пиперидинила.

- Предпочтительно, чтобы A представлял собой гетероарил, замещенный фенилом.

- Предпочтительно, чтобы A представлял собой гетероарил, замещенный NR10R11; где R10 и R11 выбирают из H и алкила, или R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и которое может быть необязательно моно- или дизамещено заместителями, выбранными из оксо, алкила, алкокси, OH, F и CF₃.

- Предпочтительно, чтобы A представлял собой тиазолил, замещенный фенилом.

- Предпочтительно, чтобы A представлял собой фенил, замещенный гетероарилом, -(CH₂)_1-3-гетероарилом и -(CH₂)_1-3-NR14R15.

- Предпочтительно, чтобы A выбирали из:

- Предпочтительно, чтобы A выбирали из:

- Предпочтительно, чтобы A выбирали из:

и R10 и R11 определены выше в первом аспекте.

Настоящее изобретение также охватывает, но этим не ограничивая, соединения, перечисленные в аспектах ниже.

В одном аспекте, изобретение включает соединение, выбранное из следующих соединений:

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-Этил-4-метил-5-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-Этил-4-метил-5-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(Пиридин-2-илокси)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Изопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклобутил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Гидроксиметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циано-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

4-Метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-(3,5-Диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-ил-метил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

5-Амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(6-Пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-ил-пиридин-3-ил-метил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Амино-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Метоксиметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Дифторметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-тиофен-3-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

5-Амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(2-Пирролидин-1-илпиридин-4-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(6-Этоксипиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[2-(3,3-Дифторпирролидин-1-ил)пиридин-4-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-(3,3-Дифторпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((R)-3-Метилпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((S)-3-Метилпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((S)-3-Фторпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((R)-3-Фторпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((S)-2-Метилпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((R)-2-Метилпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-(2-Пирролидин-1-илпиримидин-5-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(5-Пирролидин-1-илпиразин-2-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[2-((S)-3-Метилпирролидин-1-ил)пиридин-4-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-(3-Гидроксиметилпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-[6-((R)-3-Гидроксиметилпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(6-Пропоксипиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(5-Фтор-6-пирролидин-1-ил-пиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

1-(6-Этокси-5-фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(4-Пиразол-1-илметилбензил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Цианопиразол-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Карбамоилпиразол-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(6-Пиразол-1-илметилпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(2-Пиразол-1-илметилтиазол-4-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[2-(4-Метилпиразол-1-илметил)тиазол-4-илметил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-{6-[(2-метоксиэтил)метиламино]пиридин-3-илметил}-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-[6-(3,3-дифторпирролидин-1-ил)пиридин-3-илметил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-(4-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-ил-метил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-(6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-(4-[1,2,3]триазол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-(6-феноксипиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(5-Хлор-6-этоксипиридин-3-илметил)-3-циклопропил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Циклопропил-1-(6-диэтиламино-5-фторпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(5-Хлор-6-пирролидин-1-ил-пиридин-3-илметил)-3-циклопропил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Амино-1-(6-этоксипиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

3-Амино-1-(6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В одном аспекте, изобретение включает соединение, выбранное из следующих соединений:

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-Этил-4-метил-5-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-Этил-4-метил-5-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(Пиридин-2-илокси)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В одном аспекте, изобретение включает соединение, выбранное из следующих соединений:

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-7-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-Этил-4-метил-5-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-Этил-4-метил-5-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(2-Фенилтиазол-4-илметил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-(2-Фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид;

и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В одном аспекте, изобретение включает соединение, выбранное из следующих соединений:

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]-пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]-пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид;

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-индол-5-илметил)амид;

3-Амино-1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-индазол-4-илметил)амид;

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-индазол-4-илметил)амид;

1-(6-Пирролидин-1-ил-пиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (5-хлор-1H-индазол-3-илметил)амид;

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (5-хлор-1H-индазол-3-илметил)амид;

и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Терапевтические применения

Как уже упоминалось ранее, соединения настоящего изобретения являются сильнодействующими и селективными ингибиторами калликреина плазмы. Поэтому их применяют при лечении болезненных состояний, при которых этиологическим фактором является повышенная активность калликреина плазмы.

Соответственно, настоящее изобретение предлагает соединение формулы (I) для применения в медицине.

Настоящее изобретение также предусматривает применение соединения формулы (I) для производства лекарственного препарата для лечения или предотвращения заболевания или состояния, которые органически связаны с активностью калликреина плазмы.

Настоящее изобретение также предлагает соединение формулы (I) для применения при лечении или предотвращении заболевания или состояния, которые органически связаны с активностью калликреина плазмы.

Настоящее изобретение также предлагает способ лечения заболевания или состояния, которые органически связаны с активностью калликреина плазмы, включающий введение субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В одном аспекте, заболевание или состояние, которые органически связаны с активностью калликреина плазмы, выбирают из нарушения остроты зрения, диабетической ретинопатии, диабетического макулярного отека, врожденного ангионевротического отека, диабета, панкреатита, внутримозгового кровоизлияния, нефропатии, кардиомиопатии, невропатии, воспалительного заболевания кишечника, артрита, воспаления, септического шока, гипотензии, рака, синдрома расстройства дыхания у взрослых, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, операции в условиях искусственного кровообращения и кровотечения после хирургического вмешательства.

В предпочтительном аспекте, заболевание или состояние, которые органически связаны с активностью калликреина плазмы, представляет собой проницаемость сосудов сетчатки глаза, связанное с диабетической ретинопатией и диабетическим макулярным отеком.

Комбинированная терапия

Соединения настоящего изобретения могут быть введены в комбинации с другими терапевтическими средствами. Подходящие комбинированные терапии включают соединение формулы (I), объединенное с одним или более лекарственными средствами, выбранными из средств, которые ингибируют тромбоцитарный фактор роста (PDGF), эндотелиальный фактор роста (VEGF), интегрин альфа 5 бета 1, стероиды, других средств, которые ингибируют калликреин плазмы, и других ингибиторов воспаления. Конкретные примеры терапевтических средств, которые могут быть объединены с соединениями настоящего изобретения, включают средства, раскрытые в патентном документе EP2281885A и в публикации S. Patel, Retina, 2009 Jun; 29(6 Suppl):S45-8.

При использовании комбинированной терапии, соединения настоящего изобретения и указанные средства для комбинирования могут существовать в одной и той же или в различных фармацевтических композициях, и могут быть введены раздельно, последовательно или одновременно.

В другом аспекте, соединения настоящего изобретения могут быть введены в комбинации с лазерным лечением сетчатки глаза. Известна комбинация лазерной терапии с интравитреальной инъекцией ингибитора VEGF при лечении диабетического макулярного отека (Elman M, Aiello L, Beck R, et al., "Randomized trial evaluating ranibizumab plus prompt or deferred laser or triamcinolone plus prompt laser for diabetic macular edema", Ophthalmology, 27 April 2010).

Определения

Термин "алкил" включает насыщенные углеводородные радикалы, содержащие:

- линейные группы, имеющие до 10 углеродных атомов (C₁-C₁₀), или до 6 углеродных атомов (C₁-C₆), или до 4 углеродных атомов (C₁-C₄). Примеры таких алкильных групп включают, но этим не ограничивая, C₁-метил, C₂-этил, C₃-пропил и C₄- н-бутил;

- разветвленные группы, имеющие от 3 до 10 углеродных атомов (C₃-C₁₀), или от 3 до 7 углеродных атомов (C₃-C₇), или от 3 до 4 углеродных атомов (C₃-C₄). Примеры таких алкильных групп включают, но этим не ограничивая, C₃-изопропил, C₄-вторбутил, C₄-изобутил, C₄-третбутил и C₅-неопентил;

каждый из которых необязательно замещен, как указано выше.

Циклоалкил представляет собой моноциклический насыщенный углеводород, имеющий от 3 до 7 углеродных атомов; где циклоалкил может быть необязательно замещен заместителем, выбранным из алкила, алкокси и NR10R11; где R10 и R11 независимо выбирают из H и алкила, или R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 1 или 2 двойными связями и которое может быть необязательно моно- или дизамещено заместителями, выбранными из оксо, алкила, алкокси, OH, F и CF₃. Циклоалкильные группы могут содержать от 3 до 7 углеродных атомов, или от 3 до 6 углеродных атомов, или от 3 до 5 углеродных атомов, или от 3 до 4 углеродных атомов. Примеры подходящих моноциклических циклоаокильных групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Термин "алкокси" включает O-связанный углеводородный радикал, содержащий:

- линейные группы, имеющие от 1 до 6 углеродных атомов (C₁-C₆), или от 1 до 4 углеродных атомов (C₁-C₄). Примеры таких алкоксильных групп включают, но этим не ограничивая, C₁-метокси, C₂-этокси, C₃-н-пропокси и C₄-н-бутокси;

- разветвленные группы, имеющие от 3 до 6 углеродных атомов (C₃-C₆) или от 3 до 4 углеродных атомов (C₃-C₄). Примеры таких алкоксильных групп включают, но этим не ограничивая, C₃-изопропокси и C₄-вторбутокси и третбутокси;

каждый из которых необязательно замещен, как указано выше.

Если не указано иначе, то галоген выбирают из Cl, F, Br и I.

Арил определен выше. Обычно, арил может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями. Необязательные заместители выбирают из заместителей, указанных выше. Примеры подходящих арильных групп включают фенил и нафтил (каждый необязательно замещен, как указано выше). Предпочтительно, чтобы арил выбирали из фенила, замещенного фенила (замещенного, как указано выше) и нафтила.

Гетероарил определен выше. Примеры подходящих гетероарильных групп включают тиенил, фуранил, пирролил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, индолил, бензимидазолил, бензотриазолил, хинолинил и изохинолинил (необязательно замещенный, как указано выше). Предпочтительно, чтобы гетероарил выбирали из пиридила, бензотиазола, индола, N-метилиндола, тиазола, замещенного тиазола, тиофенила, фурила, пиразина, пиразола и замещенного пиразола; где заместители указаны выше.

Термин "N-связанный", например, в "N-связанном гетероциклоалкиле", означает, что гетероциклоалкильная группа присоединена к оставшейся части молекулы через кольцевой атом азота.

Термин "O-связанный", например, в "O-связанном углеводородном rрадикале", означает, что углеводородный радикал присоединен к остальной части молекулы через атом кислорода.

В группах, таких как -COOR* и -(CH₂)_1-3-арил, символ "-" обозначает точку присоединения замещающей группы к остальной молекуле.

"Фармацевтически приемлемая соль" означает физиологически или токсикологически приемлемую соль и включает, в соответствующих случаях, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания и фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты. Например, (i) когда соединение изобретения содержит одну или более кислотных групп, например, карбоксильные группы, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания, которые могут быть образованы, включают соли натрия, калия, кальция, магния и аммония или соли органических аминов, таких как, диэтиламин, N-метилглюкамин, диэтаноламин, или аминокислот (например, лизина) и другие подобные соли; (ii) когда соединение изобретения содержит группу с основными свойствами, такую как аминогруппа, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, которые могут быть образованы, включают гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, фосфаты, ацетаты, цитраты, лактаты, тартраты, мезилаты, сукцинаты, оксалаты, фосфаты, эзилаты, тозилаты, бензолсульфонаты, нафталиндисульфонаты, малеаты, адипаты, фумараты, гиппураты, камфораты, ксинафоаты, п-ацетамидобензоаты, dдигидроксибензоаты, гидроксинафтоаты, сукцинаты, аскорбаты, олеаты, бисульфаты и другие подобные соли.

Могут также быть образованы полусоли кислот и оснований, например, гемисульфатные и гемикальциевые соли.

Обзор подходящих солей приведен в справочном руководстве "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

"Пролекарство" относится к соединению, которое способно к превращению in vivo в результате метаболизма (например, в результате гидролиза, восстановления или окисления) в соединение изобретения. Подходящие группы для образования пролекарств описаны в монографии "The Practice of Medicinal Chemistry", 2^nd Ed. pp561-585 (2003) и в публикации F. J. Leinweber, Drug Metab. Res., 1987, 18, 379.

Соединения изобретения могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах. Используемый в изобретении термин "сольват" описывает молекулярный комплекс, включающий соединение изобретения и стехиометрическое количество молекул одного или более фармацевтически приемлемых растворителей, например, этанола. Термин "гидрат" используют, когда растворителем является вода.

Когда соединения изобретения существуют в одной или более геометрической, оптической, энантиомерной, диастереомерной и таутомерной формах, включая, но этим не ограничивая, цис- и транс-формы, E- и Z-формы, R-, S- и мезо-формы, кето- и енол-формы, и если не указано иначе, то ссылка на конкретное соединение включает все такие изомерные формы, в том числе их рацемические и другие смеси. В случае необходимости, такие изомеры могут быть отделены от их смесей путем применения или модификации известных методов (например, хроматографических методов или методов перекристаллизации). В случае необходимости, такие изомеры могут быть получены путем применения или модификации известных методов (например, асимметрического синтеза).

В контексте настоящего изобретения, ссылка на "лечение" включает ссылки на радикальное лечение, паллиативное лечение и профилактическое лечение.

Общие методы

Соединения формулы (I) следует оценить на основе их биофармацевтических свойств, таких как растворимость и стабильность раствора (в зависимости от pH), проницаемость и другие подобные, для того чтобы выбрать наиболее подходящую лекарственную форму и способ введения для лечения предполагаемого симптома. Они могут быть введены отдельно или в комбинации с одним или более другими соединениями изобретения или в комбинации с одним или более другими лекарственными средствами (или в виде любой их комбинации). Обычно, они могут быть введены в виде композиции совместно с одним или более фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами. Используемый в изобретении термин "вспомогательное вещество" описываем любой ингредиент помимо соединения (соединений) изобретения, который может придавать или функциональную (то есть, регулирование скорости высвобождения лекарственного средства), и/или нефункциональную (то есть, вещество для улучшения технологических свойств или разбавитель) характеристику композициям. Выбор вспомогательного вещества будет в большой степени зависеть от таких факторов, как конкретный способ введения, воздействие вспомогательного вещества на растворимость и стабильность, и природа лекарственной формы.

Соединения изобретения, предназначенные для фармацевтического применения, могут быть введены в виде твердого вещества или жидкости, например, в виде таблетки, капсулы или раствора. Фармацевтические композиции, подходящие для доставки соединений настоящего изобретения, и способы их приготовления являются совершенно очевидными для специалистов в этой области. Такие композиции и способы из приготовления описаны, например, в монографии Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995).

Соответственно, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, включающую соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.

Для лечения таких состояний, как проницаемость сосудов сетчатки глаза, связанная с диабетической ретинопатией и диабетическим макулярным отеком, соединения изобретения могут быть введены в форме, подходящей для инъекции, в область глазницы пациента, в частности, в форме, подходящей для интравитреальной инъекции. Предполагается, что композиции, подходящие для такого применения, должны иметь форму стерильных растворов соединения изобретения в соответствующей водной среде. Композиции могут быть введены пациенту под руководством лечащего врача.

Соединения изобретения могут быть также введены непосредственно в кровоток, в подкожную ткань, в мышцу или во внутренний орган. Подходящие способы парентерального введения включают внутривенный, интраартериальный, интраперитонеальный, интратекальный, интравентрикулярный, интрауретральный, интрастернальный, интракраниальный, внутримышечный, внутрисуставной и подкожный. Подходящие устройства для парентерального введения включают устройства для инъекций с иглой (в том числе с микроиглой), устройства для инъекций без иглы и устройства для инфузии.

Парентеральные формы представляют собой обычно водные или масляные растворы. Когда раствор является водным, используют вспомогательные вещества, такие как сахара (включая, но этим не ограничивая, глюкозу, маннит, сорбит, и другие подобные), соли, углеводы и буферные вещества (предпочтительно, pH от 3 до 9), но для некоторых применений, парентеральные композиции могут быть соответствующим образом приготовлены в виде стерильного неводного раствора или в виде сухой формы, используемой в сочетании с подходящей средой, такой как стерильная апирогенная вода.

Парентеральные формы могут включать имплантаты, полученные из способных к разложению полимеров, таких как полиэфиры (то есть, полимолочная кислота, полилактид, полилактид-ко-гликолид, поликапролактон, полигидроксибутират), полиортоэфиры и полиангидриды. Эти формы могут быть введены через хирургический разрез в подкожную ткань, мышечную ткань или непосредственно в конкретные органы.

Приготовление парентеральных форм в стерильных условиях, например, путем лиофилизации, может быть легко осуществлено, используя стандартные фармацевтические методы, хорошо известные специалистам в этой области.

Растворимость соединений формулы (I), используемых при приготовлении парентеральных растворов, может быть увеличена в результате применения соответствующих методов приготовления, таких как введение сорастворителей и/или веществ, повышающих растворимость, таких как поверхностно-активные вещества, мицеллярные структуры и циклодекстрины.

В одном варианте осуществления, соединения изобретения могут быть введены перорально. Пероральное введение может включать в себя проглатывание, в результате чего соединение попадает в желудочно-кишечный тракт, и/или буккальное, лингвальное или сублингвальное введение, при помощи которого соединение попадает непосредственно в кровоток из полости рта.

Формы, подходящие для перорального введения, включают твердые гранулы, твердые микрочастицы, полутвердую и жидкую форму (в том числе многофазные или дисперсные системы), такую как таблетки; мягкие или твердые капсулы, содержащие множество частиц или наночастицы, жидкости, эмульсии или порошки; леденцы, в том числе заполненные жидкостью); препараты для разжевывания; гели; быстро диспергирующиеся лекарственные формы; пленки; суппозитории; спреи; и буккальные/мукоадгезивные пластыри.

Формы, подходящие для перорального введения, могут также быть предназначены для доставки соединений изобретения с немедленным высвобождением или с замедленным высвобождением, когда профиль высвобождения может быть отсроченным, импульсным, регулируемым, замедленным, или отсроченным и замедленным, или модифицированным таким образом, чтобы оптимизировать терапевтическую эффективность указанных соединений. Способы доставки соединений с замедленным высвобождением хорошо известны в фармацевтике и включают использование при приготовлении лекарственной формы замедляющих высвобождение полимеров вместе с указанными соединениями для регулирования их высвобождения.

Примеры замедляющих высвобождение полимеров включают способные к разложению полимеры и неразлагаемые полимеры, которые могут быть использованы для высвобождения указанных соединений в результате процесса диффузии или комбинации процесса диффузии и разрушения полимера. Примеры замедляющих высвобождение полимеров включают гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, натрий- карбоксиметилцеллюлозу, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, ксантановую камедь, полиметакрилаты, полиэтиленоксид и полиэтиленгликоль.

Жидкие (в том числе многофазные и дисперсные системы) формы включают эмульсии, растворы, сиропы и эликсиры. Такие формы могут присутствовать в качестве наполнителей в мягких и твердых капсулах (изготовленных, например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы) и обычно включают носитель, например, воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и один или более эмульгаторов и/или суспендирующих средств. Жидкие формы могут быть также приготовлены путем растворения твердого вещества, например, из пакетика с порошком.

Соединения изобретения могут также быть использованы в бысторастворимых, быстрораспадающихся лекарственных формах, таких как описанные в публикации Liang and Chen, Expert Opinion in Therapeutic Patents, 2001, 11 (6), 981-986.

Приготовление таблеток обсуждается в монографии Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1, by H. Lieberman and L. Lachman (Marcel Dekker, New York, 1980).

Для введения людям, суммарная суточная доза соединений изобретения обычно составляет от 0,01 мг до 1000 мг, или от 0,1 мг до 250 мг, или от 1 мг до 50 мг, в зависимости, разумеется, от способа введения.

Суммарная доза может быть введена в форме разовой дозы или в форме разделенных доз и может, по решению лечащего врача, выходить за пределы приведенного в изобретении типичного диапазона. Эти дозы рекомендованы для обычного человека, имеющего массу тела приблизительно от 60 кг до 70 кг. Для лечащего врача не составит особой сложности определить дозы для субъектов, чья масса тела выходит за пределы этого диапазона, таких как дети и люди пожилого возраста.

Методы синтеза

Соединения настоящего изобретения могут быть получены в соответствии с методиками, приведенными на следующих схемах и в примерах, используя соответствующие материалы, и дополнительно проиллюстрированными с помощью конкретных примеров, приведенных ниже. Кроме того, используя описанные в изобретении методики, любой специалист в этой области может легко получить дополнительные соединения, которые входят в объем заявленного изобретения. Однако соединения, проиллюстрированные в примерах, не следует истолковывать в качестве ограничения для изобретения. Примеры дополнительно иллюстрируют более подробно получение соединений настоящего изобретения. Для специалистов в этой области является очевидным, что для получения этих соединений могут быть использованы известные изменения условий и процессов при осуществлении следующих препаративных методик.

Соединения изобретения могут быть выделены в форме их фармацевтически приемлемых солей, таких как описанные в изобретении выше.

Может возникнуть необходимость в защите реакционноспособных функциональных групп (например, гидрокси, амино, тио или карбокси) в промежуточных соединениях, используемых при получении соединений изобретения, для предотвращения их нежелательного участия в реакции, приводящей к образованию соединений. Могут быть использованы традиционные защитные группы, например, описанные в монографии T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective groups in organic chemistry", John Wiley and Sons, 4^th Edition, 2006. Например, обычной защитной группой для аминогруппы, подходящей для применения в изобретении, является третбутоксикарбонильная (Boc) группа, которая легко удаляется в результате обработки кислотой, такой как трифторуксусная кислота или хлористый водород в органическом растворителе, таком как дихлорметан. В качестве варианта, защитной группой для аминогруппы может быть бензилоксикарбонильная (Z) группа, которая может быть удалена путем гидрирования в атмосфере водорода с палладиевым катализатором, или 9-флуоренилметилоксикарбонильная (Fmoc) группа, которая может быть удалена с помощью растворов вторичных органических аминов, таких как диэтиламин или пиперидин, в органических растворителях. Карбоксильные группы обычно защищает в форме эфиров, таких как метиловый, этиловый, бензиловый или третбутиловый, которые могут быть все удалены гидролизом в присутствии оснований, таких как гидроксид лития или натрия. Бензильные защитные группы могут быть также удалены путем гидрирования в атмосфере водорода с палладиевым катализатором, в то время как третбутильные группы могут быть также удалены трифторуксусной кислотой. В качестве варианта, защитную группу на основе трихлорэтилового эфира удаляют с помощью цинка в уксусной кислоте. Обычной защитной группой для гидроксильной группы, используемой в изобретении, является метиловый эфир, условия для удаления которой включают кипячение с обратным холодильником в 48% водной HBr в течение 1-24 часов или перемешивание с трибромидом бора в дихлорметане в течение 1-24 часов. В качестве варианта, когда гидроксильная группа защищена в форме бензилового эфира, условия для его удаления включают гидрирование в атмосфере водорода с палладиевым катализатором.

Соединения общей формулы I могут быть получены, используя традиционные методы синтеза, например, но этим не ограничивая, синтез, показанный на схеме 1. Амин 2 подвергают реакции сочетания с кислотой 1 с получением соединения 3. Эту реакцию сочетания обычно проводят, используя стандартные условия для реакции сочетания, такие как гидроксибензотриазол и карбодиимид, такой как водорастворимый карбодиимид, в присутствии органического основания. Другие стандартные методы проведения сочетания включают реакцию кислот с аминами в присутствии 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиния гексафторфосфата или бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония гексафторфосфата или бромтриспирролидинофосфония гексафторфосфата в присутствии органических оснований, таких как триэтиламин, диизопропилэтиламин или N-метилморфолин. В качестве варианта, образование амида может происходить через хлорангидрид в присутствии органического основания. Такие хлорангидриды могут быть получены методами, подробно описанными в литературе, например, реакцией кислоты с оксалилхлоридом или тионилхлоридом.

Схема 1

В качестве варианта, соединения общей формулы I могут быть получены, используя синтез, проиллюстрированный на схеме 2. Кислота 1 может быть подвергнута реакции сочетания с амином 4, используя подходящие описанные ранее методы сочетания, с получением соединения 5, в котором вторая аминогруппа защищена с помощью стандартной защитной группы, такой третбутилоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (Z) или 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc). На типичной второй стадии защитную группу удаляют с получением соединения 3, используя ранее описанные стандартные методы.

Схема 2

В качестве варианта, соединения общей формулы I могут быть получены, используя синтез, проиллюстрированный на схеме 3. Кислота 6 может быть подвергнута реакции сочетания с амином 4, используя подходящие описанные ранее методы сочетания, с получением соединения 7, в котором вторая аминогруппа защищена с помощью стандартной защитной группы, такой как третбутилоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (Z) или 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc). На типичной второй стадии азот гетероциклического кольца алкилируют с помощью соединения 8 с получением соединения 9. Алкилирование может быть проведено в присутствии основания, такого как карбонат калия, карбонат цезия, карбонат натрия или гидрид натрия, и в этом случае уходящая группа представляет собой галогенид или сульфонат. В качестве варианта, алкилирование может быть проведено, используя спирт, при условиях реакции Мицунобу в присутствии трифенилфосфина. На третьей стадии защитную группу удаляют с получением соединения 10, используя ранее описанные стандартные методы.

Схема 3

В качестве варианта, соединения общей формулы I могут быть получены, используя синтез, проиллюстрированный на схеме 4. Пиррол 15 может быть получен за две стадии, первая из которых включает реакцию натриевой соли алкилкетоацетата 11 с хлоркетоном 12 в присутствии основания, такого как карбонат калия, с получением соединения 13, которое на типичной второй стадии реагирует с амином 14 в присутствии кислоты, такой как, но этим не ограничивая, производные сульфоновой кислоты, например, п-толуолсульфоновая кислота, с получением соединения 15, которое на типичной третьей стадии затем гидролизуют в соответствующую кислоту 16, используя ранее описанные стандартные методы. На типичной четвертой стадии кислота 16 может быть подвергнута реакции сочетания с амином 2, используя подходящие описанные ранее методы сочетания, с получением соединения 17. Вторая аминогруппа может быть защищена с помощью стандартной защитной группы, такой как третбутилоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (Z) или 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc), если такую защиту используют, то последняя стадия будет включать удаление защитной группы с применением ранее описанных стандартных методов.

Схема 4

В качестве варианта, соединения общей формулы I могут быть получены, используя синтез, проиллюстрированный на схеме 5. Триазол 19 может быть получен реакцией алкилпропиолата с азидом 18 при условиях азид-алкинового циклоприсоединения Хьюсгена, применяя катализатор, такой как соли меди с производными аскорбиновой кислоты. На типичной второй стадии эфир гидролизуют в соответствующую кислоту 20, используя описанные выше стандартные методы. На типичной третьей стадии кислота 20 может быть подвергнута реакции сочетания с амином 2, используя подходящие описанные ранее методы сочетания, с получением соединения 21. Вторая аминогруппа может быть защищена с помощью стандартной защитной группы, такой как третбутилоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (Z) или 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc), если такую защиту используют, то последняя стадия будет включать удаление защитной группы с применением ранее описанных стандартных методов.

Схема 5

В качестве варианта, соединения общей формулы I могут быть получены, используя синтез, проиллюстрированный на схеме 6. Имидазол 23 может быть получен реакцией производного акрилата 22 с амином 14 в присутствии органических оснований, таких как диизопропилэтиламин или триэтиламин. На типичной второй стадии эфир гидролизуют в соответствующую кислоту 24, используя ранее описанные стандартные методы. На типичной третьей стадии кислота 24 может быть подвергнута реакции сочетания с амином 2, используя подходящие описанные ранее методы сочетания, с получением соединения 25. Вторая аминогруппа может быть защищена с помощью стандартной защитной группы, такой как третбутилоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (Z) или 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc), если такую защиту используют, то последняя стадия будет включать удаление защитной группы с применением ранее описанных стандартных методов.

Схема 6

В качестве варианта, соединения общей формулы I могут быть получены, используя синтез, проиллюстрированный на схеме 7. На типичной первой стадии азот гетероциклического кольца дериватизируют путем реакции соединения 7 с сульфонилхлоридом 26 в присутствии органических оснований, таких как диизопропилэтиламин или триэтиламин, с получением соединения 27. На типичной последней стадии защитную группу удаляют с получением соединения 28, используя ранее описанные стандартные методы.

Схема 7

Примеры

Далее изобретение иллюстрируется следующими неограничивающими примерами, в которых используются следующие условные обозначения и определения:

Все реакции проводили в атмосфере азота, если не указано иначе.

¹H ЯМР спектры регистрировали на спектрометре Bruker (400 МГц) относительно дейтерированного растворителя и при комнатной температуре.

Молекулярные ионы получали, используя жидкостную хроматомасс-спектрометрию (LCMS), которую проводили с помощью колонки Chromolith Speedrod RP-18e, 50×4,6 мм с линейным градиентом от 10% до 90% 0,1% HCO₂H/MeCN в 0,1% HCO₂H/H₂O в течение 13 минут, с расходом 1,5 мл/мин, или с помощью колонки Agilent, X-Select, кислотной, 5-95% MeCN/вода в течение 4 минут. Данные собирали, используя масс-спектрометр Thermofinnigan Surveyor MSQ с ионизацией электрораспылением в сочетании с системой высокоэффективной жидкостной хроматографии Thermofinnigan Surveyor LC.

Химические названия образовывали с помощью программного обеспечения Autonom, поставляемого в качестве части графического пакета ISIS для изображения химических структур фирмой MDL Information Systems.

Когда продукты очищали флэш-хроматографией, "силикагель" обозначает силикагель для хроматографии, от 0,035 до 0,070 мм (от 220 до 440 меш) (например, Merck силикагель 60), и создаваемое давление азота до 10 фунтов на квадратный дюйм (0,069 Мпа) ускоряло элюирование колонки. Очистку методом препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой проводили, используя бинарную градиентную насосную систему Waters 2525 при расходах обычно 20 мл/мин и детектор с фотодиодной матрицей Waters 2996.

Все растворители и производимые промышленностью реагенты использовали без дополнительной очистки.

ПРИМЕР 1

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 2-Ацетил-4-оксопентановой кислоты этиловый эфир

Натриевую соль этилацетоацетата (17,10 г, 112 ммоль) суспендировали в ацетоне (500 мл). Добавляли карбонат калия (15,54 г, 112 ммоль) и йодид калия (3,73 г, 22,48 ммоль), и полученный раствор кипятили с обратным холодильником. Добавляли по каплям хлорацетон (11,41 г, 124 ммоль) в течение 5 минут. После завершения добавления смесь кипятили с обратным холодильником в течение еще 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и твердый материал отфильтровывали и промывали ацетоном. Полученный фильтрат испаряли и очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 75% петролейный эфир, 25% EtOAc, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением желтого масла, идентифицированного как 2-ацетил-4-оксо-пентановой кислоты этиловый эфир (10,1 г, 54,2 ммоль, 48% выход).

B. 1-[2-фенил)тиазол-4-илметил]-2,5-диметил-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты этиловый эфир

2-Ацетил-4-оксопентановой кислоты этиловый эфир (1,8 г, 9,66 ммоль) растворяли в толуоле (35 мл), добавляли 2-фенил-тиазоил-4-метиламин (2,02 г, 10,62 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (183 мг, 0,97 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 часов, после чего ее разбавляли этилацетатом и промывали с помощью NaHCO₃ (1×30 мл), воды (1×30 мл), солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 85% петролейный эфир, 15% EtOAc, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением бесцветного масла, идентифицированного как 1-[2-фенил)тиазол-4-илметил]-2,5-диметил-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,26 г, 3,69 ммоль, 38% выход).

[M+H]⁺=341.

C. 2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновая кислота

1-[2-Фенил)тиазол-4-илметил]-2,5-диметил-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,07 г, 3,14 ммоль) растворяли в этаноле (50 мл). Добавляли гидроксид натрия (629 мг, 15,72 ммоль) в воде (5 мл). Реакционную смесь нагревали при 90°C в течение 3 дней, после чего растворитель удаляли под вакуумом. Остаток разбавляли водой и подкисляли до pH 1 с помощью 1M HCl и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом с получением желтовато-белового твердого вещества, идентифицированного как 2,5-диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновая кислота (980 мг, 3,14 ммоль, 100% выход).

[M+H]⁺=313.

D. 2-((E)-2-Диметиламиновинил)терефталонитриловый эфир

Метилтерефталонитрил (1,42 г, 9,99 ммоль) и реагент Бредерека (3,48 г, 19,98 ммоль) растворяли в DMF (15 мл). Реакционную смесь нагревали при 75°C в атмосфере азота в течение 72 часов, после чего растворитель удаляли под вакуумом. Растирание с петролейным эфиром давало ярко-желтое твердое вещество, идентифицированное как 2-((E)-2-диметиламиновинил)терефталонитриловый эфир (1,88 г, 0,95 ммоль, 95% выход).

¹H ЯМР (CD₃OD) δ: 3,20 (6H, с), 5,34 (1H, д, J=13,4 Гц), 7,21 (1H, дд, J=8,0 Гц, 1,4 Гц), 7,9 (1H, д, 13,4 Гц), 7,61 (1H, д, J=8,0 Гц), 7,94 (1H, д, J=1,2 Гц)

E. 1-Амино-2-(2,4-диметоксибензил)-1,2-дигидроизохинолин-6-карбонитрил

2-((E)-2-Диметиламиновинил)терефталонитриловый эфир (1,85 г, 9,38 ммоль) растворяли в 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1H)-пиримидиноне (5 мл) и добавляли 2,4-диметоксибензиламин (2,35 г, 14,07 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 75°C в атмосфере азота. Через 3 часа реакционную смесь охлаждали и добавляли диэтиловый эфир/петролейный эфир (15:85). Желтое твердое вещество отфильтровывали, сушили под вакуумом и идентифицировали как 1-амино-2-(2,4-диметоксибензил)-1,2-дигидроизохинолин-6-карбонитрил (2,65 г, 8,38 ммоль, 89% выход)

[M+H]⁺=320

¹H ЯМР (CD₃OD) δ: 3,85 (3H, с), 3,92 (3H, с), 5,02 (2H, с), 6,39 (1H, д, J=7,4 Гц), 6,57 (1H, дд, J=8,4 Гц, 2,4 Гц), 6,66 (1H, д, J=2,4 Гц), 7,18 (1H, д, J=8,4 Гц), 7,24 (1H, д, J=7,4 Гц), 7,72 (1H, дд, J=8,5 Гц, 1,4 Гц), 7,93 (1H, с), 8,45 (1H, д, J=8,5 Гц)

F. 1-Аминоизохинолин-6-карбонитрил

1-Амино-2-(2,4-диметоксибензил)-1,2-дигидроизохинолин-6-карбонитрил (1,6 г, 5,0 ммоль) растворяли в анизоле (17 мл) и трифторуксусной кислоте (20 мл). Реакционную смесь нагревали при 105°C в атмосфере азота в течение 12 часов, после чего реакционную смесь охлаждали, добавляли диэтиловый эфир/петролейный эфир (3:7), полученное твердое вещество отфильтровывали, сушили под вакуумом и идентифицировали как 1-аминоизохинолин-6-карбонитрил (770 мг, 4,54 ммоль, 91%).

[M+H]⁺=170.

¹H ЯМР (CD₃OD) δ: 7,23-7,25 (1H, д, J=6,9 Гц), 7,65 (1H, д, J=6,8 Гц), 8,11 (1H, дд, J=8,7 Гц, 1,6 Гц), 8,33 (1H, с), 8,45 (1H, д, J=8,7 Гц).

G. (1-Аминоизохинолин-6-илметил)карбаминовой кислоты третбутиловый эфир

1-Аминоизохинолин-6-карбонитрил (200 мг, 1,18 ммоль) растворяли в метаноле (20 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли гексагидрат хлорид никеля(II) (28 мг, 0,12 ммоль) и дитретбутилдикарбонат (516 г, 2,36 ммоль), затем порциями боргидрид натрия (313 г, 8,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре от 0°C до комнатной температуры в течение 3 дней. Удаляли MeOH испарением. Остаток растворяли в CHCl₃ (70 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (1×30 мл), водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом с получением желтого масла, идентифицированного как (1-аминоизохинолин-6-илметил)-карбаминовой кислоты третбутиловый эфир (110 мг, 0,4 ммоль, 34% выход).

[M+H]⁺=274.

H. 6-Аминометилизохинолин-1-иламина гидрохлорид

(1-Аминоизохинолин-6-илметил)карбаминовой кислоты третбутиловый эфир (110 мг, 0,40 ммоль) растворяли в 4M HCl в диоксане (40 мл). Через 18 часов при комнатной температуре растворитель удаляли под вакуумом с получением бледно-коричневого твердого вещества, идентифицированного как 6-аминометилизохинолин-1-иламина гидрохлорид (67 мг, 0,39 ммоль, 96% выход).

[M+H]+=174.

I. 2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновую кислоту (87 мг, 0,28 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (15 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли 6-аминометил-изохинолин-1-иламина гидрохлорид (48 мг, 0,28 ммоль), затем HOBt (45 мг, 0,31 ммоль) и триэтиламин (147 мг, 1,4 ммоль). Затем добавляли водорастворимый карбодиимид (75 мг, 0,39 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли хлороформом (200 мл) и промывали с помощью NaHCO₃ (1×50 мл), воды (1×50 мл), солевого раствора (1×50 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1), фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 2,5-диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (68 мг, 0,14 ммоль, 52% выход).

[M+H]⁺=468.

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 2,28 (3H, с), 2,56 (3H, с), 4,52 (2H, д, J=5,9 Гц), 5,18 (2H, с), 6,33 (1H, с), 7,05 (1H, д, J=6,4 Гц), 7,31 (1H, с), 7,48-7,52 (3H, м), 7,55 (1H, д, J=9,9 Гц), 7,65 (1H, с), 7,68 (1H, д, J=6,5 Гц), 7,81-8,00 (2H, с, br,), 7,89-7,91 (2H, м), 8,25 (1H, т, J=5,9 Гц), 8,32 (1H, д, J=8,6 Гц).

ПРИМЕР 2

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-7-илметил)амид

A. 2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-7-илметил)амид

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновую кислоту (93 мг, 0,30 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (15 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли 7-аминометил-изохинолин-1-иламина гидрохлорид (C. A. A. Van Boeckel et al.,WO 98/47876) (56 мг, 0,33 ммоль), затем HOBt (48 мг, 0,32 ммоль) и триэтиламин (211 мг, 2,1 ммоль). Затем добавляли водорастворимый карбодиимид (80 мг, 0,42 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли хлороформом (200 мл) и промывали с помощью NaHCO₃ (1×50 мл), воды (1×50 мл), солевого раствора (1×50 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1), фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 2,5-диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-7-илметил)амид (30 мг, 0,06 ммоль, 21% выход).

[M+H]⁺=468.

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 2,26 (3H, с), 2,57 (3H, с), 4,49 (2H, д, J=5,9 Гц), 5,17 (2H, с), 6,32 (1H, с), 6,85 (2H, с, уш), 6,88 (1H, д, J=5,9 Гц), 7,28 (1H, с), 7,46-7,52 (3H, м), 7,58 (1H, дд, J=8,1, 0,9 Гц), 7,65 (1H, д, J=8,4 Гц), 7,73 (1H, д, J=5,9 Гц), 7,89-7,92 (2H, м), 8,10 (1H, с, уш), 8,17 (1H, т, J=5,9 Гц).

ПРИМЕР 3

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид

A. 2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид

2,5-Диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновую кислоту (120 мг, 0,38 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (20 мл) и DMF (2 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Затем добавляли 5-аминометил-7-азаиндола гидрохлорид (57 мг, 0,38 ммоль), HOBt (62 мг, 0,41 ммоль) и триэтиламин (192 мг, 1,92 ммоль) и водорастворимый карбодиимид (104 мг, 0,54 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли хлороформом (100 мл) и промывали с помощью NaHCO₃ (1×30 мл), воды (1×50 мл), солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 4% MeOH, 96% дихлорметан, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 2,5-диметил-1-(2-фенилтиазол-4-илметил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид (62 мг, 0,14 ммоль, 37% выход).

[M+H]⁺=442

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 2,24 (3H, с), 2,55 (3H, с), 4,43 (2H, д, J=6,0 Гц), 5,15 (2H, с), 6,27 (1H, с), 6,38-6,39 (1H, м), 7,22 (1H, с), 7,41 (1H, т, J=2,9 Гц), 7,46-7,51 (3H, м), 7,83 (1H, д, J=1,6 Гц), 7,85-7,90 (2H, м), 8,09 (1H, т, J=6,0 Гц), 8,17 (1H, д, J=1,9 Гц), 11,51 (1H, с).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 4

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 1-(4-Гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он

4-(Хлорметил)бензиловый спирт (5,0 г, 31,93 ммоль) растворяли в ацетоне (150 мл), добавляли 2-гидроксипиридин (3,64 г, 38,3 ммоль) и карбонат калия (13,24 г, 95,78 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 3 часов, после чего растворитель удаляли под вакуумом, и остаток растворяли в хлороформе (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 3% MeOH, 97% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-(4-гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он (5,30 г, 24,62 ммоль, 77% выход).

[M+Na]⁺=238

B. 1-(4-Бромметилбензил)-1H-пиридин-2-он

1-(4-Гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он (2,30 г, 6,97 ммоль) растворяли в дихлорметане (250 мл). К этому раствору добавляли трибромид фосфора (5,78 г, 21,37 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли с помощью CHCl₃ (250 мл), фильтрат промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (1×30 мл), водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, которое идентифицировали как 1-(4-бромметилбензил)-1H-пиридин-2-он (2,90 г, 10,43 ммоль, 98% выход).

[M+H]⁺=278

C. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

1-(4-Бромметилбензил)-1H-пиридин-2-он (2,80 г, 10,07 ммоль) растворяли в DMF (50 мл), добавляли этил 1H-пиразол-4-карбоксилат (1,69 г, 12,08 ммоль) и карбонат цезия (9,84 г, 30,2 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 18 часов, после чего реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 3% MeOH, 97% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого пенообразного твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)-бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (3,20 г, 9,49 ммоль, 94% выход).

[M+H]⁺=338

D. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (3,20 г, 9,49 ммоль) растворяли в THF (50 мл) и воде (5 мл), добавляли гидроксид лития (1,13 г, 47,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 48 часов, после чего растворитель концентрировали под вакуумом, и остаток растворяли в CHCl₃ (150 мл), водный слой экстрагировали и подкисляли с помощью 1M HCl до pH 2 и экстрагировали с помощью CHCl₃ (3×50 мл), объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом, остаток растирали с помощью EtOAc и петролейного эфира с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота (3,20 г, 6,14 ммоль, 65% выход).

[M+H]⁺=310, 332 (M+Na)

E. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (80 мг, 0,26 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (2,5 мл). Добавляли HATU (108 мг, 0,28 ммоль), затем 6-(аминометил)-изохинолин-1-амин (49 мг, 0,28 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (67 мг, 0,52 ммоль). Через 18 часов при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли хлороформом (400 мл), промывали с помощью NH₄Cl (1×30 мл), воды (1×30 мл), солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом, получая желтое масло. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1). Фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)-бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (22 мг, 0,046 ммоль, 18% выход).

[M+H]⁺=465

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 4,55 (2H, д, J=6,0 Гц), 5,08 (2H, с), 5,33 (2H, с), 6,23 (1H, тд, J=1,4, 6,7 Гц), 6,40 (1H, дд, J=1,3, 9,5 Гц), 6,94 (1H, д, J=6,1 Гц), 7,10-7,32 (5H, м), 7,38-7,47 (2H, м), 7,59 (1H, с, уш), 7,71-7,81 (2H, м), 7,92 (1H, с), 8,21 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,28 (1H, с), 8,72 (1H, т, J=5,9 Гц).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 5

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]-триазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 1-(4-Азидометилбензил)-1H-пиридин-2-он

1-(4-Гидроксиметилбензил)-1H-пиридин-2-он (570 мг, 2,65 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]уедец-7-ен (806 мг, 5,30 ммоль) растворяли в DMF (20 мл). Добавляли дифенилфосфорилазид (1,09 г, 3,97 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, после чего реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 3% MeOH, 97% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого пенообразного твердого вещества, идентифицированного как 1-(4-азидометилбензил)-1H-пиридин-2-он (430 мг, 1,79 ммоль, 68% выход).

[M+Na]⁺=361

B. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]-триазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

1-(4-Азидометилбензил)-1H-пиридин-2-он (340 мг, 1,41 ммоль), этилпропиолат (139 мг, 1,41 ммоль), (+)-натрия L-аскорбат (280 мг, 1,41 ммоль) и пентагидрат сульфата меди(II) (71 мг, 0,28 ммоль) растворяли в третбутаноле (20 мл) и воде (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, после чего реакционную смесь разбавляли хлороформом (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток растирали с этилацетатом и петролейным эфиром с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (430 мг, 1,27 ммоль, 90% выход).

[M+H]⁺=486

C. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]-триазол-4-карбоновой кислоты

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]-триазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (110 мг, 0,32 ммоль) растворяли в THF (50 мл) и воде (5 мл), добавляли гидроксид лития (39 мг, 1,62 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 18 часов, после чего растворитель концентрировали под вакуумом, и остаток растворяли в EtOAc (50 мл), водный слой отделяли, подкисляли с помощью 1M HCl до pH 2 и экстрагировали с помощью CHCl₃ (3×50 мл), объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 3% MeOH, 97% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением бесцветного масла, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)-бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновая кислота (140 мг, 0,45 ммоль, 49% выход).

D. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]-триазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]-триазол-4-карбоновую кислоту (100 мг, 0,26 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (3,5 мл). Добавляли HATU (147 мг, 0,39 ммоль) и 6-(амино-метил)изохинолин-1-амин (61,4 мг, 0,35 ммоль), затем N,N-диизопропилэтиламин (67 мг, 0,52 ммоль). Через 1 час при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли хлороформом (400 мл), промывали с помощью NH₄Cl (1×30 мл), воды (1×30 мл), солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом, получая желтое масло. Растирание со смесью метанол/диэтиловый эфир (3:7, 10 мл) давало желтое твердое вещество, идентифицированное как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид (107 мг, 0,22 ммоль, 85% выход).

[M+H]⁺=466

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 4,61 (2H, д, J=6,2 Гц), 5,08 (2H, с), 5,63 (2H, с), 6,22 (1H, тд, J=1,4, 6,7 Гц), 6,34-6,48 (1H, м), 7,12 (1H, д, J=6,7 Гц), 7,29 (2H, д, J=8,3 Гц), 7,34 (2H, д, J=8,3 Гц), 7,41 (1H, ддд, J=2,1, 6,6, 8,9 Гц), 7,63 (1H, дд, J=1,5, 8,7 Гц), 7,67 (1H, д, J=6,7 Гц), 7,72 (1H, с); 7,74-7,81 (1H, м), 8,42 (3H, д, J=8,7 Гц), 8,67 (1H, с), 9,26 (1H, т, J=6,2 Гц).

ПРИМЕР 6

1-Этил-4-метил-5-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. Этил 1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат

К бесцветному раствору этил 4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (0,5 г, 3,26 ммоль) в DMF (5 мл) при 0°C добавляли гидрид натрия (0,137 г, 3,43 ммоль) (вспенивание). После перемешивания в течение 30 минут, к суспензии добавляли этилйодид (0,317 мл, 3,92 ммоль). Полученную белую густую суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение субботы и воскресенья. Реакционную смесь разбавляли водой (10 мл) и добавляли EtOAc (50 мл). Слои разделяли, и органическую фазу промывали водой (4×10 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением бледно-желтого масла, (0,6456 г), которое затем сушили с получением этил 1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (0,5657 г, 3,06 ммоль, 94% выход).

[M+H]⁺=182

B. Этил 5-(4-(хлорметил)бензоил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат

Хлорид цинка(II) (3,35 г, 24,61 ммоль) загружали в колбу объемом 100 мл и сушили под вакуумом при 120°C в течение 2 часов для полного удаления воды. В колбе создавали атмосферу азота и добавляли раствор 4-(хлорметил)бензоилхлорида (4,0 г, 21,16 ммоль) в безводном дихлорэтане (25 мл). Смесь охлаждали на ледяной бане и добавляли по каплям раствор этил 1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (2,23 г, 12,30 ммоль) в безводном дихлорэтане (8 мл). Через 10 минут, ледяную баню удаляли, и реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 1 часа 30 минут. Смесь нагревали в течение еще 30 минут, затем выливали в ледяную воду (200 мл) и экстрагировали с помощью DCM (3×125 мл). Объединенные органические слои промывали водой (100 мл), 1M HCl (100 мл) и солевым раствором (100 мл), затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенную смесь очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-15% EtOAc/изогексаны, делая выдержку при 0% and 10% EtOAc, с получением требуемого продукта этил 5-(4-(хлорметил)бензоил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (2,12 г, 6,16 ммоль, 50,1% выход) в виде бледно-желтого твердого вещества и нежелательного изомера этил 3-(4-(хлорметил)бензоил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (1,00 г, 2,097 ммоль, 17,04% выход) в виде смолообразного твердого вещества, загрязненного 4-хлорметил-бензойной кислотой.

[M+H]⁺=334/336

C. Этил 5-((4-(хлорметил)фенил)(гидрокси)метил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат

Раствор этил 5-(4-(хлорметил)бензоил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (2,26 г, 6,77 ммоль) в безводном THF (20 мл) и безводном MeOH (3 мл) обрабатывали порциями боргидрида натрия (0,512 г, 13,54 ммоль)(через 5 минут использовали ледяную баню для регулирования выделения тепла), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Метод ВЭЖХ (XSelect, 4 мин) указывал на >95% превращение в требуемое соединение. Добавляли еще 100 мг боргидрида натрия, и смесь перемешивали в течение еще 30 минут. Реакционную смесь выливали в насыщенный водный раствор NH₄Cl (120 мл) и перемешивали в течение 5 минут. Водный слой экстрагировали с помощью DCM (3×50 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением этил 5-((4-(хлорметил)фенил)(гидрокси)метил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (2,30 г, 6,84 ммоль) в виде прозрачной маслянистой пены.

[M-H₂O+H]⁺=318/320

D. Этил 5-(4-(хлорметил)бензил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат

Раствор этил 5-((4-(хлорметил)фенил)(гидрокси)метил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (2,16 г, 6,43 ммоль) в безводном DCM (22 мл) охлаждали на ледяной бане и обрабатывали 2,2,2-трифторуксусной кислотой (9,85 мл, 129 ммоль), затем триэтилсиланом (1,233 мл, 7,72 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 45 минут. Смесь осторожно выливали в насыщенный водный раствор NaHCO₃ (250 мл, охлажденный на ледяной бане), и двухфазную систему перемешивали в течение 15 минут и затем экстрагировали с помощью DCM (3×75 мл). Объединенные органические слои промывали водой (100 мл), солевым раствором (100 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенную смесь очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-10% EtOAc/изогексаны, с получением этил 5-(4-(хлорметил)бензил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (1,46 г, 4,34 ммоль, 64,4% выход) в виде прозрачного смолообразного масла.

[M+H]⁺=320/322

E. Этил 1-этил-4-метил-5-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)-метил)бензил)-1H-пиррол-2-карбоксилат

Этил 5-(4-(хлорметил)бензил)-1-этил-4-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат (715 мг, 2,236 ммоль) и пиридин-2(1H)-он (425 мг, 4,47 ммоль) растворяли в безводном MeCN (8 мл) и добавляли карбонат калия (618 мг, 4,47 ммоль). Смесь перемешивали при 67°C (при температуре бани DrySyn) в течение ночи. Смесь распределяли между EtOAc (30 мл) и водой (30 мл). Значение рН доводили до ~7 с помощью 1M HCl, и органический слой собирали. Водный слой экстрагировали дополнительным количеством EtOAc (2×30 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 10-90% EtOAc/изогексаны, делая выдержку при ~65%, с элюированием продукта. Содержащие продукт фракции объединяли с получением этил 1-этил-4-метил-5-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиррол-2-карбоксилата (715 мг, 1,851 ммоль, 83% выход) в виде бледно-желтой смолы после сушки в течение ночи под вакуумом.

[M+H]⁺=379

F. 1-Этил-4-метил-5-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)-бензил)-1H-пиррол-2-карбоновая кислота

Раствор этил 1-этил-4-метил-5-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиррол-2-карбоксилата (621 мг, 1,641 ммоль) в THF (11 мл), MeOH (7 мл) и воды (10 мл) обрабатывали гидроксидом лития (295 мг, 12,31 ммоль), и смесь нагревали при 65°C при перемешивании в течение ночи. Большую часть растворителей удаляли под вакуумом. Полученную мутную смесь распределяли между EtOAc (20 мл) и водой (20 мл), содержащей 1M NaOH (1 мл). Органический слой отбрасывали, а водный слой подкисляли до ~pH 6 с помощью 1M HCl, что приводило к образованию осадка. Осадку давали возможность отстояться в течение 20 минут перед фильтраций, промывали осадок водой на фильтре (10 мл). Твердое вещество сушили под вакуумом в присутствии CaCl₂ в течение 3 часов с получением 1-этил-4-метил-5-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (543 мг, 1,534 ммоль, 93% выход).

[M+H]⁺=351

G. 1-Этил-4-метил-5-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)-бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

В сцинтилляционный флакон загружали 1-этил-4-метил-5-(4-((2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил)бензил)-1H-пиррол-2-карбоновую кислоту (75 мг, 0,214 ммоль), 6-(аминометил)изохинолин-1-амин (40,8 мг, 0,235 ммоль), HATU (90 мг, 0,235 ммоль) и DCM (3,5 мл). Добавляли N,N-диизопропилэтиламин (74,6 мкл, 0,428 ммоль), и смесь перемешивали в течение субботы и воскресенья.

Смесь разбавляли с помощью DCM (содержащего следы MeOH для улучшения растворимости) (3 мл) и насыщенного водного раствора NH₄Cl (4 мл) и встряхивали, затем оставляли постоять до тех пор, пока слои не расслаивались. Смесь пропускали через картридж для разделения фаз (15 мл), органический слой собирали, затем концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0,5-6,5% MeOH (1% NH₃)/DCM, с получением 1-этил-4-метил-5-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)-бензил]-1H-пиррол-2-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида (97 мг, 0,188 ммоль, 88% выход) в виде желтовато-белой пены.

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 0,94 (3H, т, J=7,0 Гц), 2,00 (3H, с), 3,93 (2H, с), 4,15 (2H, к, J=6,9 Гц), 4,49 (2H, д, J=6,0 Гц), 5,04 (2H, с), 6,21 (1H, тд, J=6,7, 1,4 Гц), 6,39 (1H, д, J=9,1 Гц), 6,70-6,74 (3H, м), 6,84 (1H, д, J=5,6 Гц), 7,04 (2H, д, J=8,2 Гц), 7,20 (2H, д, J=8,2 Гц), 7,33-7,44 (2H, м), 7,51 (1H, с), 7,68-7,81 (2H, м), 8,12 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,48 (1H, т, J=6,1 Гц).

[M+H]⁺=506

ПРИМЕР 7

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид

A. 1-(4-Хлорметилбензил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

Полимер с нанесенным на него трифенилфосфином (3,0 ммоль/г, 3 экв, 1,0 г) подвергали набуханию в THF/дихлорметан (1:1, 100 мл). В атмосфере азота добавляли этил 3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоксилат (1,0 г, 4,80 ммоль) и 4-(хлорметил)-бензиловый спирт (903 мг, 5,76 ммоль), затем раствор диизопропилазодикарбоксилата (1,46 г, 7,21 ммоль) в THF/дихлорметан (1:1, 10 мл) в течение 30 минут. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, смесь фильтровали, и смолу промывали 3 раза смесью дихлорметан/метанол (15 мл). Объединенные фильтраты испаряли под вакуумом. Были идентифицированы два основных продукта, которые разделяли флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 20% EtOAc, 80% петролейный эфир, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белых твердых веществ, идентифицированных как 1-(4-хлорметилбензил)-5-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (450 мг, 1,3 ммоль, 27% выход) и 1-(4-хлорметил-бензил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,12 г, 3,23 ммоль, 67% выход)

[M+H]⁺=347

B. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифтор-метил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

1-(4-Хлорметилбензил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (980 мг, 2,84 ммоль) растворяли в ацетоне (50 мл). Добавляли 2-гидроксипиридин (323 мг, 3,39 ммоль) и карбонат калия (1,17 г, 8,48 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 3 часов, после чего растворитель удаляли под вакуумом, и остаток растворяли в EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 3% MeOH, 97% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением бесцветного масла, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,10 г, 2,71 ммоль, 96% выход).

[M+H]⁺=406

C. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифтор-метил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,10 г, 2,71 ммоль) растворяли в THF (50 мл) и воде (5 мл) и добавляли гидроксид лития (325 мг, 13,57 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 18 часов, после чего растворитель концентрировали под вакуумом, и остаток растворяли в EtOAc (50 мл), водный слой экстрагировали и подкисляли с помощью 1M HCl до pH 2 и экстрагировали CHCl₃ (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота (980 мг, 2,60 ммоль, 96% выход).

[M+H]⁺=379

D. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифтор-метил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (80 мг, 0,21 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂(50 мл) и DMF (2,5 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли 5-аминометил-7-азаиндола гидрохлорид (37 мг, 0,25 ммоль), затем HOBt (32 мг, 0,23 ммоль) и триэтиламин (64 мг, 0,64 ммоль). Затем добавляли водорастворимый карбодиимид (49 мг, 0,25 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли хлороформом (200 мл), NaHCO₃ (1×30 мл), водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 8% MeOH, 92% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом. Остаток лиофилизировали из смеси вода/ацетонитрил с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид (55 мг, 0,11 ммоль, 51% выход).

[M+H]⁺=507

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 4,45 (2H, д, J=5,7 Гц), 5,07 (2H, с), 5,39 (2H, с), 6,20 (1H, к, J=7,6 Гц), 6,38-6,41 (2H, м), 7,28 (4H, с), 7,41-7,46 (2H, м), 7,76 (1H, к, J=6,8 Гц), 7,85 (1H, д, J=1,7 Гц), 8,17 (1H, д, J=2,0 Гц), 8,41 (1H, с), 8,75-8,77 (1H, м), 11,59 (1H, с).

ПРИМЕР 8

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]-пиридин-5-илметил)амид

A. 1-третбутил-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил

Смесь 5-амино-1-третбутил-1H-пиррол-3-карбонитрила (2,6 г, 15,93 ммоль) и пентан-2,4-диона (1,595 г, 15,93 ммоль,) растворяли в этаноле (80 мл) и добавляли концентрированную HCl (0,2 мл). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 18 часов. Смесь концентрировали под вакуумом, и неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя при ступенчатых градиентах 95:5-9:1 петролейный эфир/этилацетат с получением желтого масла, идентифицированного как 1-третбутил-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил (3,05 г, 13 ммоль, 84% выход).

[M+H]⁺=228,4

¹H ЯМР: (CDCl₃), δ: 1,81 (9H, с), 2,58 (3H, с), 2,70 (3H, с), 6,84 (1H, с), 7,75 (1H, с)

B. 5-Бром-1-третбутил-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил

Раствор 1-третбутил-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрила (2,820 г, 12,4 ммоль) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере N₂ охлаждали, по меньшей мере, до -5°C (лед/NaCl, 3:1). Затем добавляли 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоин (1,774 г, 6,203 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при -5°C или ниже. После перемешивания при -5°C добавляли еще 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоин (88 мг, 0,31 ммоль), и перемешивание продолжали при -5°C в течение еще 3 часов Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора Na₂SO₃, затем подогревали реакционную смесь до комнатной температуры. Добавляли 1M NaOH, и слои разделяли. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (2×10 мл), объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (2×10 мл) и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя смесью петролейный эфир/этилацетат 95:5. Содержащие продукт фракции концентрировали, и остаток перекристаллизовывали из смеси этилацетат/петролейный эфир с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 5-бром-1-третбутил-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил (3,19 г, 10,42 ммоль, 84% выход).

[M+H]⁺=305,7

¹H ЯМР: (CDCl₃), δ: 1,81 (9H, с), 2,78 (3H, с), 2,82 (3H, с), 7,78 (1H, с)

C. 5-Бром-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил

5-Бром-1-(третбутил)-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил (2,1 г, 6,87 ммоль) добавляли порциями к перемешиваемой суспензии трихлорида алюминия (2,75 г, 20,6 ммоль) в хлорбензоле (160 мл). После добавления, смесь нагревали до 100°C в течение ночи, в результате чего образовывался черный смолистый раствор. Через 24 часа, реакционную смесь охлаждали, затем выливали в воду (300 мл) и дихлорметан (300 мл). Смесь осторожно обрабатывали концентрированной HCl (135 мл), и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем фильтровали, промывая водой и дихлорметаном. Полученное твердое вещество сушили под вакуумом в присутствии CaCl₂ в течение субботы и воскресенья с получением бледно-серого твердого вещества, идентифицированного как 5-бром-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил (1,56 мг, 6,16 ммоль, 90% выход).

D. 5-Бром-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин

Суспензию 5-бром-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонитрила (1,56 г, 6,16 ммоль) в концентрированной хлористоводородной кислоте, 37% (235 мл) кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Затем добавляли еще концентрированной HCl (100 мл), и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение еще 20 часов. Смесь охлаждали и выливали в смесь льда с водой (1 л) и нейтрализовывали с помощью 2N NaOH до pH 9, в результате чего образовывался осадок. Осадок фильтровали, промывали водой, затем сушили под вакуумом в присутствии CaCl₂ с получением серого твердого вещества, идентифицированного как 5-бром-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]-пиридин (1,3 г, 5,72 ммоль, 92% выход).

[M+H]⁺=225,1

¹H ЯМР: (CDCl₃), δ: 2,66 (3H, с), 2,82 (3H, с), 6,49 (1H, дд, J=3,5, 2,1 Гц), 7,29 (1H, дд, J=3,4, 2,7 Гц), 11,14 (1H, уш.с)

E. 4,6-Диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбонитрил

5-Бром-4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин (1,3 г, 5,72 ммоль) растворяли в N,N-диметилацетамиде (20 мл). Раствор дегазировали с помощью N₂, затем добавляли порошок цинка (45 мг, 0,693 ммоль), ацетат цинка (127 мг, 0,693 ммоль), 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (128 мг, 0,23 ммоль), Zn(CN)₂ (339 мг, 2,888 ммоль) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (106 мг, 0,116 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 120°C в течение 48 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали с помощью 2M NH₄OH и солевого раствора. Органический слой сушили над MgSO₄ и фильтровали. После концентрирования под вакуумом неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя с помощью 9:1, 8:2, 7:3, 1:1 петролейный эфир/этилацетат. Фракции собирали и концентрировали под вакуумом. Желтое твердое вещество растирали в диэтиловом эфире с получением желтовато-белового твердого вещества, идентифицированного как 4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбонитрил (660 мг, 3,83 ммоль, 67% выход).

[M+H]⁺=172,1

¹H ЯМР: (CDCl₃), δ: 2,76 (3H, с), 2,86 (3H, с), 6,59 (1H, дд, J=3,5, 2,0 Гц), 7,36 (1H, дд, J=3,5, 2,4 Гц), 10,86 (1H, уш.с)

F. (4,6-Диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)-карбаминовой кислоты третбутиловый эфир

4,6-Диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбонитрил (610 мг, 3,56 ммоль) растворяли в метаноле (75 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли гексагидрат хлорида никеля(II) (85 мг, 0,36 ммоль) и дитретбутилдикарбонат (1,56 г, 7,13 ммоль), затем порциями боргидрид натрия (943 мг, 24,94 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре от 0°C до комнатной температуры в течение 18 часов. MeOH удаляли испарением. Остаток растворяли в CHCl₃ (70 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (1×30 мл), водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом с получением желтого масла. Очищали флэш-хроматографией, (на силикагеле), элюент 40% петролейный эфир, 60% EtOAc, с получением белого твердого вещества, идентифицированного как (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)карбаминовой кислоты третбутиловый эфир (710 мг, 2,56 ммоль, 72% выход).

[M+H]⁺=276,1

¹H ЯМР: (CDCl₃), 1,49 (9H, с), 2,61 (3H, с), 2,71 (3H, с), 4,46 (1H, уш.с), 4,51 (2H, д, J=4,4 Гц), 6,50 (1H, дд, J=3,5, 2,0 Гц), 7,25 (1H, дд, J=3,4, 2,5 Гц), 9,64 (1H, уш.с);

G. C-(4,6-Диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метиламина гидрохлорид

4,6-Диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)-карбаминовой кислоты третбутиловый эфир (710 мг, 2,56 ммоль) растворяли в 4M HCl в диоксане (10 мл). Через 2 часа при комнатной температуре растворитель удаляли под вакуумом с получением желтого твердого вещества, идентифицированного как C-(4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метиламина гидрохлорид (360 мг, 2,00 ммоль, 80% выход).

[M+H]⁺=176,4

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), 2,53 (3H, с), 2,60 (3H, с), 3,94 (2H, с), 4,76 (2H, уш.с), 6,43 (1H, д, J=2,3 Гц), 7,28 (1H, дд, J=3,2, 1,9 Гц), 11,32 (1H, уш.с)

H. 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифтор-метил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид

1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (80 мг, 0,21 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл) и DMF (2,5 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли C-(4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метил-амина гидрохлорид (44 мг, 0,25 ммоль), затем HOBt (32 мг, 0,23 ммоль) и триэтиламин (64 мг, 0,64 ммоль). Затем добавляли водорастворимый карбодиимид (49 мг, 0,25 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли хлороформом (200 мл) и промывали с помощью NaHCO₃ (1×30 мл), воды (1×30 мл) и солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 8% MeOH, 92% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом. Остаток лиофилизировали из смеси вода/ацетонитрил с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(2-оксо-2H-пиридин-1-илметил)бензил]-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,6-диметил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид (55 мг, 0,11 ммоль, 51% выход).

[M+H]⁺=535

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 4,69 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,07 (2H, с), 5,40 (2H, с), 6,21-6,24 (1H, м), 6,39 (1H, д, J=9,0 Гц), 7,00 (1H, д, J=6,9 Гц), 7,26-7,30 (5H, м), 7,39-7,44 (2H, м), 7,77 (1H, к, J=6,6 Гц), 8,14 (1H, с), 8,43 (1H, с), 8,89 (1H, т, J=5,8 Гц), 13,11 (1H, с).

ПРИМЕР 9

2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. [4-(4-Метилпиразол-1-илметил)фенил]метанол

4-(Хлорметил)бензилспирт (5,47 г, 34,9 ммоль) растворяли в ацетоне (50 мл), добавляли 4-метилпиразол (2,86 г, 34,9 ммоль) и карбонат калия (5,07 г, 36,7 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и при 60°C в течение 30 часов, после чего растворитель удаляли под вакуумом, и остаток растворяли в EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (MgSO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент с градиентом 10-80% EtOAc в изогексане, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как [4-(4-метилпиразол-1-илметил)фенил]метанол (3,94 г, 18,90 ммоль, 54% выход).

[M+H]⁺=203

B. 1-(4-Хлорметилбензил)-4-метил-1H-пиразол

[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)фенил]метанол (2,03 г, 10,04 ммоль) и триэтиламин (1,13 г, 11,54 ммоль) растворяли в дихлорметане (40 мл). К этому раствору добавляли по каплям метансульфонилхлорид (1,26 г, 11,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли с помощью CHCl₃ (250 мл), фильтрат промывали насыщенным раствором NH₄Cl (1×30 мл), водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент с градиентом 0-60% EtOAc в изогексане, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-(4-хлорметилбензил)-4-метил-1H-пиразол (1,49 г, 6,62 ммоль, 60% выход).

[M+H]⁺=221, 223

C: 2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты метиловый эфир

Раствор метил 2,5-диметил-1H-пиррол-3-карбоксилата (0,382 г, 2,492 ммоль) в безводном DMF (8 мл) охлаждали на ледяной бане, затем обрабатывали последовательно порциями гидрида натрия (0,071 г, 2,95 ммоль), затем 1-(4-(хлорметил)бензил)-4-метил-1H-пиразола (0,50 г, 2,266 ммоль), и смесь перемешивали при ~ 5°C в течение 1 часа. Ледяную баню удаляли, и смесь перемешивали в течение еще 45 минут. Еще добавляли гидрид натрия (~0,5 экв.), и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили водой (40 мл) и подвергали экстракции с помощью DCM (3×40 мл), но присутствие DMF вызывало образование эмульсии. Объединенные DCM слои промывали солевым раствором, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Добавляли солевой раствор (40 мл) к исходному водному слою и экстрагировали его с помощью EtOAc (3×40 мл). Объединенные EtOAc слои промывали водой (3×20 мл), солевым раствором (30 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали с остатком DCM экстракта (4 миллибар и 55°C) для удаления остаточного DMF. Соединение очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-70% EtOAc/изогексаны с получением 2,5-диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты метилового эфира (602 мг, 1,748 ммоль, 77% выход) в виде бледно-желтого масла, которое медленно кристаллизовалось при стоянии.

[M+H]⁺=338

D: 2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновая кислота

Раствор метил 2,5-диметил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиррол-3-карбоксилата (459 мг, 1,360 ммоль) в тетрагидрофуране (8 мл), метаноле (5 мл) и воде (7 мл) обрабатывали гидроксидом лития (163 мг, 6,80 ммоль), и смесь нагревали при 65°C при перемешивании в течение 48 часов до завершения реакции. Большую часть растворителей удаляли под вакуумом. Полученную мутную смесь распределяли между EtOAc (50 мл) и водой (50 мл), содержащей 1M NaOH (2 мл). Органический слой отбрасывали, и водный слой подкисляли до ~pH 3 с помощью 1M HCl (становился мутным). Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (3×50 мл), и объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением 2,5-диметил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (448 мг, 1,358 ммоль, 90% выход) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[M+H]⁺=324

E: 2,5-Диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

В сцинтилляционный флакон загружали 2,5-диметил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-илметил)бензил)-1H-пиррол-3-карбоновую кислоту (93 мг, 0,289 ммоль), 6-(аминометил)изохинолин-1-амин (80 мг, 0,462 ммоль), HATU (121 мг, 0,318 ммоль) и 25% DMF/DCM (3,5 мл). Затем добавляли N,N-диизопропилэтиламин (101 мкл, 0,577 ммоль), и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью MeOH (10 мл), в результате чего образовывался раствор. Раствор пропускали через колонку для хроматографии с сильным катионообменником (3 г), промывая MeOH, элюируя с помощью 1% NH₃/MeOH. Неочищенный материал очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0 - 8% MeOH/DCM(1% NH₃) с получением 2,5-диметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)-бензил]-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амида (66 мг, 0,134 ммоль, 46,3% выход) в виде бледно-желтого порошка.

[M+H]⁺=479

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,99 (3H, д, J=0,7 Гц), 2,07 (3H, с), 2,37 (3H, с), 4,50 (2H, д, J=6,0 Гц), 5,07 (2H, с), 5,20 (2H, с), 6,37 (1H, д, J=1,1 Гц), 6,70 (2H, с), 6,83-6,92 (3H, м), 7,16 (2H, д, J=8,2 Гц), 7,22 (1H, с), 7,39 (1H, дд, J=1,7, 8,6 Гц), 7,52 (2H, с, уш), 7,76 (1H, д, J=5,8 Гц), 8,13 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,21 (1H, т, J=6,1 Гц).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 10

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

1-(4-Хлорметилбензил)-4-метил-1H-пиразол (986 мг, 4,47 ммоль) растворяли в DMF (28 мл), добавляли этил 1H-имидазол-4-карбоксилат (626 мг, 4,47 ммоль) и карбонат калия (1,42 г, 10,28 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней, после чего реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент с градиентом 50-100% EtOAc в изогексане, элюировали 2 продукта, первый при ~90% EtOAc/изогексаны, второй при 100% EtOAc. Фракции объединяли и испаряли под вакуумом.

Первый элюируемый продукт выделяли в виде белого твердого вещества, идентифицированного как 3-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3H-имидазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (675 мг, 2,06 ммоль, 46% выход).

[M+H]⁺=325

Второй элюируемый продукт выделяли в виде прозрачной смолы, идентифицированной как 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (540 мг, 1,652 ммоль, 37% выход).

[M+H]⁺=325

B. 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновая кислота

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (471 мг, 1,45 ммоль) растворяли в THF (7 мл), этаноле (4,5 мл) и воде (6,3 мл), добавляли гидроксид лития (174 мг, 7,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 65°C в течение 2 часов, после чего растворитель концентрировали под вакуумом, и остаток растворяли в CHCl₃ (150 мл), водный слой экстрагировали и подкисляли с помощью 1M HCl до pH 2 и экстрагировали CHCl₃ (3×50 мл), объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл), солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1). Фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновая кислота (245 мг, 0,82 ммоль, 51% выход).

[M+H]⁺=295

C. 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (50 мг, 0,169 ммоль) растворяли в DMF/CH₂Cl₂ (1:3, 3 мл). Добавляли HATU (71 мг, 0,186 ммоль), затем 6-(аминометил)изохинолин-1-амин (80 мг, 0,464 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (44 мг, 0,337 ммоль). Через 18 часов при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли хлороформом (400 мл) промывали с помощью NH₄Cl (1×30 мл), воды (1×30 мл), солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом, получая желтое масло. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1). Фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (47 мг, 0,102 ммоль, 60% выход).

[M+H]⁺=452

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,99 (3H, с), 4,52 (2H, д, J=6,3 Гц), 5,20 (1H, с), 5,22 (1H, с), 6,70 (2H, с), 6,83 (1H, д, J=5,8 Гц), 7,16-7,25 (3H, м), 7,26-7,32 (2H, м), 7,38 (1H, дд, J=1,7, 8,6 Гц), 7,46-7,56 (2H, м), 7,69-7,78 (2H, м), 7,85 (1H, д, J=1,3 Гц), 8,11 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,58 (1H, т, J=6,3 Гц).

ПРИМЕР 11

3-Метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. N'-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]гидразин-карбоновой кислоты третбутиловый эфир

Раствор 1-(4-(хлорметил)бензил)-4-метил-1H-пиразола (3,5 г, 15,86 ммоль) и третбутилкарбазата (8,38 г, 63,4 ммоль) в абсолютном EtOH (21 мл) обрабатывали N,N-диизопропилэтиламином (2,76 мл, 15,86 ммоль), и смесь перемешивали при 60°C в течение 24 часов. Метод LCMS указывал на образование требуемого продукта и на реакцию продукта со вторым эквивалентом исходного хлорида [445]⁺ при соотношении 3:1. Растворители удаляли под вакуумом, и остаток распределяли между EtOAc (150 мл) и насыщенным водным раствором NH₄Cl (происходило помутнение, добавляли некоторое количество воды). Органический слой отделяли и промывали водой (75 мл) и солевым раствором (75 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-50% EtOAc/изогексаны. Детектируемый хромофор является слабым; продукт присутствовал во многих фракциях. Каждую пятую фракцию анализировали методом ВЭЖХ, и самый чистый набор фракций объединяли с получением >7 г материала. Метод ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 1119-13-1) показал ~85% чистоту при присутствии избытка третбутилкарбазата. Продукт очищали в аппарате для вакуумной дистилляции Kugelrohr (в форме трубки с шаровым расширением) (3 цикла до тех пор, пока материал более не обнаруживался в колбе для сбора продукта) при 2,9 миллибар/110-115°C (измеренных). Метод ¹H ЯМР (DMSO-d₆) показал удаление третбутилкарбазата. Смесь дополнительно очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-60% THF/DCM. Соединение элюировалось более быстро, чем ожидалось (в ~15% THF). Несколько фракций чистого продукта извлекали следом за пиком с получением 1,77 г требуемого соединения с >95% чистотой по данным ¹H ЯМР. Были также получены смешанные фракции, и они соответствовали требуемому соединению с 78% чистотой по данным ¹H ЯМР.

[M+H]⁺=317

B. [4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]гидразин

К перемешиваемому раствору 4-третбутил 2-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-илметил)бензил)гидразинкарбоксилата (369 мг, 1,166 ммоль) в диоксане (5 мл) добавляли по каплям HCl 4M в диоксане (1 мл, 32,9 ммоль), образовывался плотный осадок, и перемешивание продолжали в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (20 мл). Плотный осадок не разрушался при обработке ультразвуком. Возникали трудности с фильтрованием материала. Сушка в течение ~30 минут на фильтровальной бумаге не давала сухого твердого вещества. Материал был слегка гигроскопичным. Материал переносили в колбу и непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

[M+H]⁺=217

C. 3-Метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

К перемешиваемой суспензии 5-ацетилурацила (150 мг, 0,971 ммоль) и [4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]гидразина дигидрохлорида (337 мг, 1,165 ммоль) в EtOH (10 мл) добавляли концентрированную HCl (0,5 мл), и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником (80°C) в течение 24 часов. Наблюдали образование тонкой белой суспензии. Анализ методом LCMS показал, что главный пик [M+H]⁺=353 соответствует промежуточному соединению амина. Еще через 3 часа реакция больше не происходила. В реакционную смесь добавляли концентрированную H₂SO₄ (0,5 мл) и нагревали до 120°C в течение 50 минут с помощью микроволнового излучения. Реакционную смесь испаряли досуха, и остаток растворяли в EtOAc (100 мл). Органический раствор промывали с помощью NaOH (2M, 50 мл), солевого раствора (50 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и испаряли досуха. Неочищенный продукт очищали хроматографией (колонка 12 g, 0-50% EtOAc в изогексанах) с получением 3-метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (144 мг, 0,417 ммоль, 42,9% выход) в виде бесцветного масла. Анализ методом ВЭЖХ (колонка PFP, 40% метанол, кислотный, детектирование при 225 нм) показал присутствие чистого 3-региоизомера.

[M+H]⁺=339

D. 3-Метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

К перемешиваемому раствору 3-метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (144 мг, 0,426 ммоль) в THF (3 мл) и MeOH (2 мл) добавляли NaOH 2M (638 мкл, 1,277 ммоль) и выдерживали при комнатной температуре в течение ночи. Анализ показал полное превращение в требуемую кислоту. Реакционную смесь подкисляли до pH 5, используя 1M HCl. Продукт экстрагировали в EtOAc (20 мл), и органический слой промывали солевым раствором (2×20 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали, и растворитель удаляли с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 3-метил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота (83 мг, 0,254 ммоль, 59,7% выход).

[M+H]⁺=311

E. 3-Метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

К перемешиваемому раствору 3-метил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (75 мг, 0,242 ммоль) и 6-(аминометил)изохинолин-1-амина, 2HCl (59,5 мг, 0,242 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (169 мкл, 0,967 ммоль) и HATU (96 мг, 0,254 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Анализ показал полное превращение в требуемый продукт. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл) и промывали NaOH (2M, 20 мл), солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали, и растворитель испаряли при пониженном давлении. Неочищенное твердое вещество предварительно абсорбировали на силикагеле перед очисткой хроматографией (колонка 12 g, 0-10% MeOH (1% NH₃) в DCM, с остановкой при 5%, с получением 3-метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амида гидрохлорида (65,2 мг, 0,140 ммоль, 58,0% выход) в виде белого порошка. Свободное основание растворяли в MeOH (1 мл) и добавляли HCl 4M в диоксане (35,0 мкл, 0,140 ммоль, 1 экв.). Осаждалось твердое вещество, и MeOH удаляли в потоке воздуха. Диоксан удаляли под вакуумом. Остаток растирали в диэтиловом эфире (5 мл) с получением 3-метил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорида (62 мг, 0,117 ммоль, 48,6% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]⁺=466

ЯМР (d₆-DMSO) δ: 1,99 (3H, J=0,7 Гц), 2,31 (3H, с), 4,57 (2H, д, J=5,9 Гц), 5,23 (4H, д, J=7,4 Гц), 7,16-7,28 (6H, м), 7,54 (1H, т, J=0,9 Гц), 7,64-7,73 (2H, м), 7,79 (1H, д, J=1,6 Гц), 8,24 (1H, с), 8,54 (1H, д, J=8,7 Гц), 8,61 (1H, т, J=6,0 Гц), 9,05 (2H, уш.с), 13,14 (1H, с)

ПРИМЕР 12

3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 1-(4-Бромметилбензил)-4-метил-1H-пиразол

[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)фенил]метанол (2,05 г, 10,1 ммоль) растворяли в дихлорметане (50 мл). К этому раствору добавляли трифенилфосфин (3,05 г, 11,6 ммоль). Полученный раствор охлаждали на ледяной бане, затем добавляли порциями тетрабромид углерода (3,69 г, 11,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли с помощью CHCl₃ (100 мл). Фильтрат промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (1×30 мл), водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 95% петролейный эфир, 5% EtOAc, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, которое идентифицировали как 1-(4-бромметилбензил)-4-метил-1H-пиразол (1,64 г, 6,19 ммоль, 61% выход).

[M+H]⁺=265

B. 3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

Этил 3-циклопропил-1H-пиразол-4-карбоксилат (100 мг, 0,56 ммоль) растворяли в DMF (20 мл). Добавляли 1-(4-бромметил-бензил)-4-метил-1H-пиразол (155 мг, 0,58 ммоль) и карбонат калия (153 мг, 1,1 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней, после чего реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 98% дихлорметан, 2% метанол, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 3-циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (190 мг, 0,52 ммоль, 94% выход).

[M+H]⁺=365

C. 3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (190 мг, 0,52 ммоль) растворяли в этаноле (10 мл) и добавляли гидроксид натрия (208 мг, 5,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 18 часов, после чего растворитель концентрировали под вакуумом, и остаток растворяли в CHCl₃ (150 мл), водный слой экстрагировали и подкисляли с помощью 1M HCl до pH 2 и экстрагировали CHCl₃ (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1), фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 3-циклопропил-1-[4-(4-метил-пиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота (150 мг, 0,45 ммоль, 86% выход).

[M+H]⁺=337

D. 3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

3-Циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (65 мг, 0,19 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл) и DMF (2,5 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли 6-аминометилизохинолин-1-иламин (34 мг, 0,19 ммоль), затем HOBt (31 мг, 0,23 ммоль) и триэтиламин (98 мг, 0,97 ммоль). Затем добавляли водорастворимый карбодиимид (52 мг, 0,27 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли хлороформом (100 мл) и IPA (10 мл), промывали с помощью NaHCO₃ (1×30 мл), воды (1×30 мл) и солевого раствора (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом, получая желтое масло. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент дихлорметан:MeOH:NH₃ (100:10:1), фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 3-циклопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (46 мг, 0,09 ммоль, 48% выход).

[M+H]⁺=496

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 0,73-0,76 (2H, м), 0,79-0,84 (2H, м), 1,98 (3H, с), 2,55-2,67 (1H, м), 4,50 (2H, д, J=5,9 Гц), 5,19 (2H, с), 5,21 (2H, с), 6,71 (2H, с), 6,85 (1H, д, J=5,8 Гц), 7,18 (4H, s), 7,23 (1H, с), 7,36-7,39 (1H, м), 7,52 (2H, с), 7,76 (1H, д, J=5,8 Гц), 8,12 (2H, д, J=8,4 Гц), 8,46 (1H, т, J=5,9 Гц).

ПРИМЕР 13

3-Изопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. Этил 3-изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)-бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилат

К перемешиваемому раствору этил 3-изопропил-1H-пиразол-4-карбоксилата (446 мг, 2,447 ммоль) и 1-(4-(хлорметил)бензил)-4-метил-1H-пиразола (540 мг, 2,447 ммоль) в DMF (8 мл) добавляли K₂CO₃ (676 мг, 4,89 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли солевым раствором (10 мл) и EtOAc (10 мл), и слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄), фильтровали и испаряли при пониженном давлении. Неочищенное соединение очищали хроматографией (колонка 24 g, EtOAc в изогексанах 0-50%) с получением этил 3-изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (702 мг, 1,762 ммоль, 72,0% выход) в виде вязкого бледно-желтого масла.

[M+H]⁺=367

B. 3-Изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)-бензил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

К перемешиваемой смеси этил 3-изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (690 мг, 1,883 ммоль) и гидроксида лития (135 мг, 5,65 ммоль) в THF (8 мл) и воде (4 мл) при комнатной температуре добавляли гидроксид лития (135 мг, 5,65 ммоль). Добавляли MeOH (1 мл) для увеличения растворимости. Реакционную смесь перемешивали и нагревали при 50°C в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, подкисляли до pH ~3 с помощью 1M HCl и экстрагировали с помощью EtOAc (3×5 мл). Органические фазы сушили (Mg₂SO₄), фильтровали и испаряли при пониженном давлении с получением бледно-желтого твердого вещества. Этот образец неочищенного вещества очищали хроматографией (колонка 12 g, (2:1 EtOAc-MeCN в DCM 0-50%) с получением 3-изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (256 мг, 0,749 ммоль, 40% выход). Образование нежелательного 5-региоизомера не наблюдалось.

[M+H]⁺=339

C. 3-Изопропил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

К перемешиваемому раствору 3-изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (129 мг, 0,381 ммоль), 6-(аминометил)изохинолин-1-амина дигидро-хлорида (100 мг, 0,406 ммоль) и HATU (174 мг, 0,457 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (266 мкл, 1,525 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (15 мл) и промывали 2M раствором NaOH (2×20 мл). Органическую фазу сушили (Na₂SO₄), фильтровали и испаряли при пониженном давлении. неочищенное вещество очищали хроматографией (колонка 4 g, MeOH в DCM 0-5% и 1% Et₃N) с получением требуемого соединения в форме свободного основания. Метод ¹H ЯМР в DMSO-d₆ подтверждал образование структуры свободного амина. Продукт растворяли в DCM (1 мл), добавляли 4M HCl в диоксане (124 мкл, 0,496 ммоль), и полученную хлопьевидную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Растворитель затем испаряли при пониженном давлении с получением N-((1-аминоизохинолин-6-ил)метил)-3-изопропил-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)-бензил)-1H-пиразол-4-карбоксамида, HCl (170 мг, 0,319 ммоль, 84% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]⁺=494

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,17 (6H, д, J=6,9 Гц); 1,99 (3H, т, J=0,7 Гц); 3,57 (1H, г, J=6,2 Гц); 4,56 (2H, д, J=5,8 Гц); 5,25 (4H, д, J=15,4 Гц); 7,16-7,27 (6H, м); 7,55 (1H, к, J=0,8 Гц); 7,63-7,72 (2H, м); 7,79 (1H, д, J=1,6 Гц); 8,19 (1H, с); 8,54 (1H, д, J=8,6 Гц); 8,64 (1H, т, J=5,9 Гц); 9,08 (2H, с); 13,22 (1H, с).

ПРИМЕР 14

3-Циклобутил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. (E)-Этил 2-(циклобутанкарбонил)-3-(диметиламино)акрилат

В колбу, загруженную этил 3-циклобутил-3-оксопропаноатом (0,935 г, 5,49 ммоль), добавляли 1,1-диметокси-N,N-диметилметанамин (0,876 мл, 6,59 ммоль) и диоксан (30 мл). Нагревали при 70°C в течение 7 часов. Реакционную смесь отгоняли в виде азеотропа с толуолом (2×30 мл) для удаления каких-либо остаточных количеств 1,1-диметокси-N,N-диметилметанамина. Предполагали, что достигался количественный выход, и материал непосредственно использовали на следующей стадии.

[M+H]⁺=216

B. Этил 3-циклобутил-1H-пиразол-4-карбоксилат

К перемешиваемому раствору 1132-12 (E)-этил 2-(циклобутан-карбонил)-3-(диметиламино)акрилата (1,24 г, 5,50 ммоль) (неочищенного) в EtOH (30 мл) добавляли гидразин, H₂O (0,803 мл, 8,26 ммоль) и кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь испаряли для удаления избытка гидразина. Неочищенный материал растворяли в EtOAc (150 мл) и промывали водным раствором NaHCO₃ (100 мл), затем солевым раствором (100 мл), сушили над сульфатом магния, и растворитель удаляли с получением этил 3-циклобутил-1H-пиразол-4-карбоксилата (709 мг, 3,54 ммоль, 64,3% выход) в виде образующегося при стоянии воскообразного твердого вещества.

[M+H]⁺=195

C. 3-Циклобутил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид гидрохлорид

Методика такая же, как в Примере 13, методах A-C

[M+H]⁺=506

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,70-1,83 (1H, м); 1,81-1,98 (1H, м); 1,99 (3H, д, J=0,8 Гц); 2,12-2,25 (4H, м); 4,55 (2H, д, J=5,8 Гц); 5,23 (2H, с); 5,29 (2H, с); 7,15-7,29 (6H, м); 7,55 (1H, т, J=0,9 Гц); 7,63-7,72 (2H, м); 7,78 (1H, д, J=1,5 Гц); 8,20 (1H, с); 8,49-8,61 (2H, м); 9,03 (2H, с); 13,11 (1H, с).

ПРИМЕР 15

3-Гидроксиметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 3-Гидроксиметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

Трибромид бора (118 мкл, 0,118 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 3-метоксиметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амида (45 мг, 0,091 ммоль) в DCM (0,3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель испаряли при пониженном давлении, и остаток абсорбировали на силикагеле, затем очищали хроматографией (колонка 4 g, 0-10% MeOH в DCM, 1% Et₃N) с получением формы свободного основания требуемого соединения в виде белого твердого вещества. Это твердое вещество растворяли в DCM (1 мл) и MeOH (0,5 мл). Добавляли 4M HCl в диоксане (29,5 мкл, 0,118 ммоль), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Растворители испаряли при пониженном давлении с получением 3-гидроксиметил-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорида (39 мг, 0,075 ммоль, 82% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]⁺=482,3

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1.99 (3H, с), 4.56 (2H, с), 4.64 (2H, д, J=5.8 Гц), 5.22 (2H, с), 5.28 (2H, с), 7.16-7.31 (6H, м), 7.55 (1H, т, J=0.9 Гц), 7.63-7.74 (2H, м), 7.82 (1H, д, J=1.6 Гц), 8.34 (1H, с), 8.55 (1H, д, J=8.7 Гц), 8.90-9.05 (3H, м), 13.17 (1H, с).

ПРИМЕР 16

3-Циано-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. Этил 3-циано-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоксилат

Методика такая же, как в Примере 13 метод A

[M+H]⁺=350

B. 3-Циано-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

Перемешиваемый раствор этил 3-циано-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (100 мг, 0,286 ммоль) в THF (0,3 мл) и MeOH (0,3 мл) обрабатывали раствором гидроксида лития (10,28 мг, 0,429 ммоль) в воде (0,3 мл). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 часов. Растворители удаляли под вакуумом, и остаток распределяли между EtOAc (1 мл) и водой (1 мл). Органический слой удаляли, а водный слой доводили до pH 4 с помощью 1M HCl, в результате чего образовывался осадок. Осадок в течение короткого времени обрабатывали ультразвуком, затем фильтровали, промывая обильно водой. В результате сушки под вакуумом получали 3-циано-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (70 мг, 0,196 ммоль, 68,5% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]⁺=322

C. 3-Циано-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

В колбу загружали 3-циано-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (232 мг, 0,722 ммоль), 6-(аминометил)изохинолин-1-амина дигидрохлорид (195 мг, 0,794 ммоль), HATU (302 мг, 0,794 ммоль), безводный DCM (4,5 мл) и безводный DMF (1,5 мл). Добавляли N,N-диизопропилэтиламин (503 мкл, 2,89 ммоль), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Образовывался осадок. Растворители удаляли под вакуумом, суспендировали в метаноле и фильтровали с получением 293 мг твердого вещества. Твердое вещество очищали хроматографией на сильной катионообменной смоле (8 г), загружая в большом количестве MeOH/DCM (3:1, ~150 мл), промывая MeOH, элюируя 1% NH₃/MeOH, с получением 243 мг материала. Материал очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-10% MeOH (1% NH3/DCM), с получением 3-циано-1-[4-(4-метил-пиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорида (193 мг, 56% выход) в виде белого порошка.

Образец продукта (60 мг) растворяли в DCM (1 мл) и MeOH (0,5 мл), затем обрабатывали 4M HCl в диоксане (~100 мкл), в результате чего образовывался осадок. Осадок выдерживали в течение 1 минуты, затем концентрировали под вакуумом с получением 63 мг моно-HCl соли

[M+H]⁺=477

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,98 (3H, с), 4,60 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,24 (2H, с), 5,47 (2H, с), 7,17-7,28 (4H, м), 7,32 (2H, д, J=8,1 Гц), 7,55 (1H, с), 7,63-7,74 (2H, м), 7,82 (1H, с), 8,56 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,61 (1H, с), 9,12 (2H, уш.с), 9,23 (1H, т, J=5,9 Гц), 13,29 (1H, с).

ПРИМЕР 17

4-[(1-Аминоизохинолин-6-илметил)карбамоил]-1-[4-(4-метил-пиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-3-карбоновая кислота

A. 4-[(1-Аминоизохинолин-6-илметил)карбамоил]-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты гидрохлорид

Перемешиваемую суспензию 3-циано-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амида (25 мг, 0,052 ммоль) в MeOH (0,25 мл) обрабатывали раствором гидроксида лития (12,56 мг, 0,525 ммоль) в воде (0,25 мл). Смесь перемешивали при 60°C (температура бани DrySyn) в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали, затем доводили до pH 3 с помощью 1M HCl. Осадок фильтровали, промывая водой, и сушили под вакуумом с получением белого порошка. Смесь растворяли в DCM (0,5 мл) и MeOH (0,5 мл) и обрабатывали с помощью 4M HCl в диоксане (29,5 мкл, 0,118 ммоль). Смесь выдерживали в течение 1 минуты, затем концентрировали под вакуумом с получением 4-[(1-амино-изохинолин-6-илметил)-карбамоил]-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты гидрохлорида (20 мг, 0,036 ммоль, 68,1% выход) в виде белого порошка.

[M+H]⁺=496

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,98 (3H, с), 4,69 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,23 (2H, с), 5,43 (2H, с), 7,18-7,26 (4H, м), 7,31 (2H, д, J=8,1 Гц), 7,54 (1H, с), 7,63-7,77 (2H, м), 7,85 (1H, с), 8,57 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,64 (1H, с), 9,13 (2H, уш.с), 10,04 (1H, т, J=5,8 Гц), 13,31 (1H, с), 14,85 (1H, уш.с).

ПРИМЕР 18

4-Метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 2-(4-Бромбензил)-4-метилтиазол-5-карбоновой кислоты этиловый эфир

Раствор 2-(4-бромфенил)этантиоамида (1,98 г, 8,60 ммоль) и этил 2-хлор-3-оксобутаноата (1,428 мл, 10,32 ммоль) в пиридине (30 мл) и этаноле (30 мл) перемешивали при 90°C в течение 18 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли этилацетатом (100 мл) и добавляли 2N хлористоводородную кислоту (100 мл). Органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и испаряли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали хроматографией (колонка 40 g, EtOAc в гексане 0-50%) с получением 2-(4-бромбензил)-4-метилтиазол-5-карбоновой кислоты этилового эфира (1,33 г, 5,00 ммоль, 52,1% выход) в виде белого твердого кристаллического вещества.

[M+H]⁺=340, 342

B. Калий трифтор(N-метилфомепизол)борат

Гексаметилдисилазид калия (2,992 г, 15,00 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемой смеси 4-метил-1H-пиразола (1,067 г, 13,00 ммоль) и бромметилтрифторбората калия (2,008 г, 10 ммоль) в диоксане (10 мл). Полученную смесь перемешивали при 85°C в течение ночи, затем при комнатной температуре в течение субботы и воскресенья. Реакционную смесь гасили водой (2 мл) и сушили при пониженном давлении (водяная баня при 50°C). Неочищенное твердое вещество растворяли в растворе горячего ацетона квалификации для ВЭЖХ, затем фильтровали для удаления KCl. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, растворяли в ацетоне (14 мл) и осаждали путем добавления Et₂O (30 мл) с получением требуемого продукта (660 мг, 2,91 ммоль, 29,1% выход) в виде белого твердого вещества.

C. 4-Метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты этиловый эфир

Смесь трифтор(N-метилфомепизол)бората калия (386 мг, 1,911 ммоль) и 2-(4-бромбензил)-4-метилтиазол-5-карбоновой кислоты этилового эфира (591 мг, 1,737 ммоль) в диоксане (4 мл) и воде (1 мл) перемешивали и кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа. Натрий 2'-(дициклогексилфосфино)-2,6-диметокси-[1,1'-бифенил]-3-сульфонат (89 мг, 0,174 ммоль), [PdCl(аллил)]₂ (31,8 мг, 0,087 ммоль) и карбонат цезия (1698 мг, 5,21 ммоль) в диоксане (8 мл) и воде (2 мл) подвергали дегазации с помощью аргона в течение 15 минут. Затем смесь нагревали и перемешивали при 100°C в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли, абсорбировали на силикагеле и очищали хроматографией (колонка 12 g, 0-50% EtOAc в изогексанах) с получением 4-метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты этилового эфира (278 мг, 0,547 ммоль, 31,5% выход) в виде желтого вязкого масла.

[M+H]⁺=356

D. 4-Метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновая кислота

К перемешиваемой смеси 4-метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты этилового эфира (278 мг, 0,782 ммоль) в THF (1 мл) и воде (0,5 мл) при комнатной температуре добавляли гидроксид натрия (130 мг, 3,25 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и испаряли при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в 2M NaOH (5 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×5 мл). Затем водную фазу подкисляли до pH ~3 и экстрагировали с помощью EtOAc (3×5 мл). Объединенные органические слои сушили (MgSO4), фильтровали и испаряли при пониженном давлении с получением 4-метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты (232 мг, 0,602 ммоль, 77% выход) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[M+H]⁺=328

E. 4-Метил-2-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]тиазол-5-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

Методика такая же, как в Примере 13 метод C

[M+H]⁺=483

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 2,00 (3H, с); 2,55 (3H, с); 4,28 (2H, с); 4,56 (2H, д, J=5,8 Гц); 5,23 (2H, с); 7,15-7,36 (6H, м); 7,56 (1H, т, J=0,9 Гц); 7,62-7,71 (2H, м); 7,78 (1H, д, J=1,6 Гц); 8,52 (1H, д, J=8,7 Гц); 8,80 (1H, т, J=5,9 Гц); 9,00 (2H, с); 13,04 (1H, с)

ПРИМЕР 19

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)-амид

A. Этил 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоксилат

К раствору этанолата натрия (1418 мг, 20,83 ммоль) и диэтил 2-(этоксиметилен)малоната (842 мкл, 4,17 ммоль) в EtOH (10 мл) добавляли по каплям раствор 1-(4-(гидразинилметил)бензил)-4-метил-1H-пиразола, 2HCl (1446 мг, 5 ммоль) в EtOH (20 мл) при охлаждении на водяной бане со льдом. Полученную смесь перемешивали при нагревании до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, затем распределяли между DCM (50 мл) и водой (50 мл, доведенной до pH 5 с помощью 1N HCl). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (2×50 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением желтого масла. Масло очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-40% MeCN/DCM, с получением 210 мг этил 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоксилата.

[M+H]⁺=341

B. 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

Раствор этил 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоксилата (200 мг, 0,588 ммоль) в смеси THF (2 мл) и MeOH (0,5 мл) обрабатывали гидроксидом лития (70,4 мг, 2,94 ммоль) и водой (0,75 мл). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Затем добавляли воду (0,5 мл), для того чтобы смесь стала прозрачной, и смесь нагревали при 50°C в течение ночи. Органические вещества удаляли под вакуумом, и водный раствор переносили в делительную воронку, промывая водой (7 мл). Водную фазу (при pH 10) экстрагировали с помощью EtOAc (10 мл). Водный слой собирали и доводили до pH 4 с помощью 1M HCl, в результате чего образовывался осадок. Осадок выдерживали в течение 5 мин, затем подвергали обработке ультразвуком до образования тонкодисперсного порошка, затем собирали фильтрацией, промывая небольшим количеством воды. В результате сушки под вакуумом в присутствии CaCl₂ получали 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (147 мг, 0,466 ммоль, 79% выход) в виде желтовато-белого порошка.

[M+H]⁺=313

C. 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

В сцинтилляционный флакон загружали 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (75 мг, 0,240 ммоль), 6-(аминометил)-изохинолин-1-амина дигидрохлорид (65,0 мг, 0,264 ммоль), HATU (100 мг, 0,264 ммоль) и безводный DCM (2 мл) и безводный DMF (0,3 мл). Добавляли N,N-диизопропилэтиламин (167 мкл, 0,961 ммоль), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 часов. Затем добавляли HATU (30 мг), N,N-диизопропилэтиламин (80 мкл) и амин (20 мг) вместе с DMF (1 мл). Смесь нагревали при 40°C в течение 2,5 часов. Реакционную смесь распределяли между EtOAc (25 мл) и 2N NaOH (15 мл). Водный слой экстрагировали дополнительным количеством EtOAc (2×25 мл), и объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Анализ методом ВЭЖХ водной фазы и выделенной органической фазы показывал, что весь продукт находился в водном слое. Водный слой доводили до pH 7 концентрированной HCl (при этом образовывался относительно нерастворимый материал) и экстрагировали с помощью EtOAc (содержащего MeOH, 2×30 мл) и DCM (содержащего следы MeOH, 30 мл). Объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток растирали с помощью DCM и затем MeOH с получением ~15 мг желтого твердого вещества. Хроматография (на силикагеле) с элюированием с помощью THF давала 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-оксо-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-ил-метил)амид (9 мг, 0,012 ммоль, 4,81% выход, 70% чистота) в виде белого порошка.

[M+H]⁺=468

ЯМР (d₆-DMSO) δ: 1,98 (3H, с), 4,55 (2H, д, J=6,0 Гц), 5,09 (2H, с), 5,21 (2H, с), 6,82 (2H, уш.с), 6,87 (1H, д, J=6,2 Гц), 7,16-7,26 (5H, м), 7,38 (1H, дд, J=8,6, 1,8 Гц), 7,52 (2H, м), 7,74 (1H, д, J=5,8 Гц), 7,93 (1H, т, J=6,1 Гц), 8,04 (1H, с), 8,14 (1H, д, J=8,6 Гц), 11,10 (1H, уш.с).

ПРИМЕР 20

3-(3,5-Диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-ил-метил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амид

A: Этил 3-бром-1H-пиразол-4-карбоксилат

К раствору третбутилнитрита (3,04 мл, 25,6 ммоль) в безводном MeCN (80 мл) добавляли бромид меди(II) (5,71 г, 25,6 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 часа в атмосфере N₂, затем порциями добавляли этил 3-амино-1H-пиразол-4-карбоксилат (3,39 г, 21,85 ммоль) в течение 15 минут. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 минут, затем нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали, и ацетонитрил удаляли под вакуумом. Остаток растворяли в EtOAc (250 мл) и промывали солевым раствором (3×100 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали до образования темно-зеленого твердого вещества (5,64 г, 18,02 ммоль, 82% выход, 70% чистота). Продукт непосредственно использовали на следующей стадии без очистки.

[M+H]⁺=219/221

B: 3-Бром-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

К перемешиваемой суспензии этил 3-бром-1H-пиразол-4-карбоксилата (500 мг, 2,283 ммоль) и 1-(4-(хлорметил)бензил)-4-метил-1H-пиразола (504 мг, 2,283 ммоль) в DMF (2,5 мл) добавляли карбонат калия (631 мг, 4,57 ммоль), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1,5 часов. Температуру увеличивали до 50°C в течение 24 часов, затем реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (50 мл) и воды (30 мл), содержащей солевой раствор (30 мл). Водный слой экстрагировали дополнительным количеством EtOAc (2×40 мл), и объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-45% EtOAc/изогексаны, делая выдержку при 40%, с элюированием двух региоизомеров.

5-Бром-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (54 мг, 0,100 ммоль, 4,40% выход) выделяли в виде прозрачной смолы, которая кристаллизовалась при стоянии. Метод двумерной спектроскопии ядерного эффекта Оверхаузера (2D NOESY) показал отсутствие взаимодействия между бензильными протонами и кольцевым протоном пиразольного ядра (при 8,03 ppm).

[M+H]+=403/405

Третуемый изомер 3-бром-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (217 мг, 0,527 ммоль, 23% выход) выделяли в виде прозрачной смолы, которая кристаллизовалась при стоянии. Метод 2D NOESY показал наличие взаимодействия между одним из пары бензильных протонов и кольцевым протоном пиразольного ядра (при 8,52 ppm), что подтверждало образование требуемого изомера.

[M+H]⁺=403/405

C: 3-(3,5-Диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

Смесь 3-бром-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (85 мг, 0,211 ммоль), 3,5-диметил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)изоксазола (58,8 мг, 0,263 ммоль), карбоната калия (65,5 мг, 0,474 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (24,36 мг, 0,021 ммоль) объединяли в пробирке для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения и добавляли диоксан (0,6 мл) и воду (0,2 мл). Смесь дегазировали с помощью N₂ в течение 5 минут, затем нагревали при 100°C в течение 5,5 часов, затем при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь распределяли между EtOAc (40 мл) и водой (30 мл). Водный слой экстрагировали дополнительным количеством EtOAc (2×15 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный остаток очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-60% EtOAc/изогексаны, с получением 3-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)-бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (37 мг, 0,086 ммоль, 41,0% выход) в виде белого порошка.

[M+H]⁺=420

D: 3-(3,5-Диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

Перемешиваемый раствор 3-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (32,3 мг, 0,077 ммоль) в THF (0,25 мл) и MeOH (0,25 мл) обрабатывали раствором гидроксида лития (4,61 мг, 0,193 ммоль) в воде (0,25 мл). Быстро образовывался осадок. Добавляли дополнительное количество MeOH (0,5 мл), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 часов. Метод LCMS указывал, что гидролиз прошел только на ~15%. Добавляли дополнительное количество THF до тех пор, пока не образовывался раствор (суммарный объем ~2,5 мл). Добавляли дополнительное количество LiOH (5 мг), и смесь нагревали при 50°C в течение 3 часов, затем при температуре окружающей среды в течение ночи. Растворители удаляли под вакуумом, и остаток распределяли между EtOAc (5 мл) и водой (4 мл). Водный слой доводили до ~pH 4 с помощью 1M HCl, в результате чего образовывался осадок. Осадок фильтровали, промывая водой, затем сушили под вакуумом с получением 3-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (21 мг, 0,053 ммоль, 69,0% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]⁺=392

E: 3-(3,5-Диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-амино-изохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

В сцинтилляционный флакон загружали 3-(3,5-диметилизо-ксазол-4-ил)-1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоты (18,7 мг, 0,048 ммоль), 6-(амино-метил)изохинолин-1-амина дигидрохлорид (18,81 мг, 0,076 ммоль), HATU (19,98 мг, 0,053 ммоль), безводный DCM (0,5 мл) и безводный DMF (0,15 мл). Добавляли N,N-диизопропилэтиламин (33,3 мкл, 0,191 ммоль), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Растворители удаляли под вакуумом. Остаток повторно растворяли в MeOH (2 мл) и очищали хроматографией на сильной катионообменной смоле (1,5 г), промывая MeOH, элюируя с помощью 1% NH₃/MeOH. Полученный материал очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-10% MeOH (0,3% NH₃)/DCM с получением свободного основания в виде белого порошка. Свободное основание растворяли в DCM (0,75 мл), затем обрабатывали 4M HCl в диоксане (26,3 мкл, 0,105 ммоль). Раствор выдерживали в течение 10 минут, затем концентрировали. В результате сушки получали 3-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (19 мг, 0,030 ммоль, 63,4% выход) в виде бледно-желтого порошка.

[M+H]⁺=547

ЯМР (d₆-DMSO): 1,98 (3H, с), 2,04 (3H, с), 2,21 (3H, с), 4,53 (2H, д, J=5,9 Гц), 5,23 (2H, с), 5,38 (2H, с), 7,15-7,26 (4H, м), 7,30 (2H, д, J=8,2 Гц), 7,54 (1H, с), 7,63-7,71 (2H, м), 7,76 (1H, с), 8,44 (1H, с), 8,53 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,80 (1H, т, J=6,0 Гц), 9,09 (2H, уш.с), 13,26 (1H, уш.с).

ПРИМЕР 21

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A: 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

В пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения загружали 3-бром-1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (300 мг, 0,744 ммоль), предшественник катализатора RuPhos, хлор(2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропокси-1,1'-бифенил)[2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладий(II) (34,7 мг, 0,045 ммоль), дициклогексил(2',6'-диизопропокси-[1,1'-бифенил]-2-ил)фосфин-RuPhos (20,83 мг, 0,045 ммоль), морфолин (386 мкл, 4,46 ммоль), карбонат цезия (630 мг, 1,934 ммоль) и безводный THF (5 мл). Смесь быстро дегазировали с помощью N₂ и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 10 минут, затем нагревали до 85°C (температура бани DrySyn) в течение ночи. Метод LCMS указывал на присутствие ~1:1:1 смеси исходный материал:дебромирование:продукт. Добавляли дополнительные количества предшественника катализатора RuPhos, хлор(2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропокси-1,1'-бифенил)[2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладия(II) (34,7 мг, 0,045 ммоль), дициклогексил(2',6'-диизопропокси-[1,1'-бифенил]-2-ил)фосфина-RuPhos (20,83 мг, 0,045 ммоль) и морфолина (150 мкл), и смесь перемешивали при 85°C (температура бани DrySyn) в течение ночи. Растворители удаляли под вакуумом, и остаток распределяли между EtOAc (10 мл) и водой (10 мл). Водную фазу экстрагировали с помощью EtOAc (10 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (5 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-80% EtOAc/изогексаны, с получением 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (128 мг, 0,309 ммоль, 41,6% выход) в виде прозрачной смолы.

[M+H]⁺=410

B: 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

Перемешиваемый раствор этил 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (125 мг, 0,305 ммоль) в THF (1 мл) и MeOH (1 мл) обрабатывали раствором гидроксида лития (18,28 мг, 0,763 ммоль) в воде (1 мл), и смесь нагревали при 40°C в течение субботы и воскресенья. Какие-либо оставшиеся органические растворители удаляли под вакуумом, и остаток распределяли между EtOAc (10 мл) и водой (7 мл). Водный слой доводили до ~pH 4 с помощью 1M HCl. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (3×10 мл), и объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали с получением 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-3-морфолино-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (109 мг, 0,271 ммоль, 89% выход) в виде смолообразного желтого твердого вещества.

[M+H]⁺=382

C: 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

В сцинтилляционный флакон загружали 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-3-морфолино-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (106 мг, 0,278 ммоль), 6-(аминометил)изохинолин-1-амина дигидрохлорид (82 мг, 0,333 ммоль), HATU (116 мг, 0,306 ммоль), безводный DCM (1 мл) и безводный DMF (0,3 мл). Добавляли N,N-диизопропилэтиламин (194 мкл, 1,112 ммоль), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Растворители удаляли под вакуумом. Остаток повторно растворяли в MeOH (2 мл) и очищали хроматографией на сильной катионообменной смоле (2,5 г), промывая MeOH, элюируя с помощью 1% NH₃/MeOH. Полученный материал очищали хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 0-10% MeOH (0,3% NH₃)/DCM, с получением свободного основания в виде белой пены. Свободное основание растворяли в DCM (0,75 мл) и MeOH (0,15 мл), затем обрабатывали 4M HCl в диоксане (153 мкл, 0,611 ммоль). Раствор выдерживали в течение 10 mминут, затем концентрировали. В результате сушки получали 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-3-морфолин-4-ил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (125 мг, 0,212 ммоль, 76% выход) в форме моно HCl соли в виде бледно-желтого порошка.

[M+H]⁺=537

ЯМР (d₆-DMSO): 1,98 (3H, с), 3,03-3,10 (4H, м), 3,58-3,64 (4H, м), 4,58 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,18 (2H, с), 5,23 (2H, с), 7,16-7,28 (6H, м), 7,55 (1H, с), 7,65-7,72 (2H, м), 7,79 (1H, с), 8,20 (1H, с), 8,48-8,60 (2H, м), 9,16 (2H, уш.с), 13,39 (1H, уш.с).

СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 22

1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)-амид

A. 6-Амино-5-йод-2-метилникотинонитрил

6-Амино-2-метилникотинонитрил (3,0 г, 22,53 ммоль) и 1-йод-пирролидин-2,5-дион (8,62 г, 38,3 ммоль) растворяли в осушенном DMF (35 мл). Коричневый раствор нагревали до 80°C в течение 24 часов, после чего реакционную смесь разбавляли водой (50 мл). Экстрагировали с помощью EtOAc (4×75 мл). Объединенные органические слои промывали водой (5×30 мл), солевым раствором (50 мл), затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке RediSep (колонка 80 g, 0-30% EtOAc в изогексанах) с получением коричневого твердого вещества, идентифицированного как 6-амино-5-йод-2-метилникотинонитрил (3,0 г, 9,84 ммоль, 43,7% выход)

[M+H]⁺=260

B. 6-Амино-2-метил-5-((триметилсилил)этинил)никотинонитрил

В высушенную в атмосфере N₂ колбу добавляли 6-амино-5-йод-2-метилникотинонитрил (4 г, 13,13 ммоль), триэтиламин (2,74 мл, 19,69 ммоль), осушенный THF (30 мл) и осушенный DCM (10 мл) с получением оранжевого раствора. Дегазировали с помощью N₂ в течение 5 минут, затем добавляли бис(трифенилфосфин)палладия(II) хлорид (0,276 г, 0,394 ммоль) и йодид меди(I) (0,125 г, 0,656 ммоль) с получением суспензии черного цвета. Затем по каплям добавляли этинилтриметилсилан (2,040 мл, 14,44 ммоль) в течение 5 минут, в результате чего суспензия превращалась в красновато-коричневый раствор, который перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь распределяли между EtOAc (100 мл) и водой (100 мл). Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2×50 мл), и объединенные органические слои промывали водой (2×50 мл) и солевым раствором (50 мл), затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали хроматографией она колонке RediSep (колонка 80 g, 0-25% EtOAc в изогексанах) с получением бледно-оранжевого твердого вещества, идентифицированного как 6-амино-2-метил-5-((триметилсилил)-этинил)никотинонитрил (2,2 г, 9,40 ммоль, 72% выход)

[M+H]⁺=230

C. N-Ацетил-N-(5-циано-6-метил-3-((триметилсилил)этинил)-пиридин-2-ил)ацетамид

В колбу в атмосфере N₂ добавляли 6-амино-2-метил-5-((триметилсилил)этинил)никотинонитрил (2,2 г, 9,59 ммоль) и пиридин (15 мл, 9,59 ммоль). Смесь охлаждали на ледяной бане, затем добавляли по каплям ацетилхлорид (1,569 мл, 22,06 ммоль) с получением суспензии светло-коричневого цвета. Перемешивали в течение 10 минут, подогревали до комнатной температуры, затем нагревали при 40°C в течение 1 часа. Добавляли осушенный THF (10 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 часов. Добавляли осушенный DCM (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Нагревали до 60°C в течение 2 часов. Перемешивали при комнатной температуре в течение еще 18 часов. Летучие компоненты удаляли под вакуумом, и остаток отгоняли с толуолом в виде азеотропа (30 мл). Метод LCMS показывал присутствие в основном исходного материала и следы моно- и диацилирования. Ресуспендировали в DCM (20 мл) и обрабатывали пиридином (1,940 мл, 23,98 ммоль), затем ацетилхлоридом (1,569 мл, 22,06 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Метод LCMS показывал превращение в продукты моно- и бис-ацилирования при присутствии следового количества исходного материала. Реакционную смесь нагревали до 40°C в течение 1 часа. Метод LCMS показывал превращение в бис-ацелированный материал (~60% чистота). Разбавляли с помощью EtOAc (200 мл) и промывали 1N HCl (60 мл). Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (50 мл), и объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (30 мл), водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл), затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом до получения остатка коричневого цвета (4,0 г). Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке RediSep (колонка 40 g, 0-20% EtOAc в изогексанах). Материал выделяли (4,0 г) в виде коричневого масла. Анализ методом LCMS подтвердил образование N-ацетил-N-(5-циано-6-метил-3-((триметилсилил)-этинил)пиридин-2-ил)ацетамида (60% чистота методом УФ) наряду с 3 примесями (10-15% каждая). Материал использовали в следующей реакции без дополнительной очистки/анализа.

D. 6-Метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбонитрил

В колбу в атмосфере N₂ добавляли N-ацетил-N-(5-циано-6-метил-3-((триметилсилил)этинил)пиридин-2-ил)ацетамид (4,3 г, 6,86 ммоль), осушенный THF (20,0 мл), затем тетрабутиламмония фторид (1,0 M в THF) (10,29 мл, 10,29 ммоль). Темно-коричневую реакционную смесь нагревали до 70°C, затем разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке RediSep (колонка 40 g, 0-35% EtOAc в изогексанах) и элюировали два основных пика. В колбу в атмосфере N₂ добавляли N-(5-циано-3-этинил-6-метилпиридин-2-ил)ацетамид (1,03 г, 3,21 ммоль), осушенный THF (2,0 мл) с получением бледно-желтого раствора. Затем добавляли тетрабутиламмония фторид (1,0 M в THF) (15 мл, 15,00 ммоль) и нагревали до 72°C в течение 1 часа с получением темно-оранжевого раствора. Метод ВЭЖХ показал полное превращение исходного материала. Охлаждали до комнатной температуры. Разбавляли с помощью EtOAc (150 мл) и промывали водой (100 мл). Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2×50 мл), затем объединенные органические слои промывали водой (2×50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением оранжевого твердого вещества, суспендировали в Et₂O:MeOH (9:1, 15 мл), собирали фильтрацией и промывали с помощью Et₂O (15 мл). Сушили при пониженном давлении в течение 10 минут, затем в вакуумном шкафу в течение 1 часа с получением желтовато-коричневого твердого вещества, идентифицированного как 6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-карбонитрил (0,69 г, 4,26 ммоль, 74,7% выход).

[M+H]⁺=158

E. Третбутил ((6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метил)карбамат

В колбу в атмосфере N₂ добавляли 6-метил-1H-пирроло[2,3-b]-пиридин-5-карбонитрил (0,64 г, 4,07 ммоль), дитретбутил- дикарбонат (1,777 г, 8,14 ммоль), хлорид никеля(II) (0,053 г, 0,407 ммоль) и MeOH (50 мл) с получением суспензии бледно-коричневого цвета. Охлаждали на ледяной бане, затем порциями добавляли боргидрид натрия (1,078 г, 28,5 ммоль) в течение 1 часа. Подогревали до комнатной температуры на ледяной бане в течение 18 часов. Летучие компоненты удаляли под вакуумом, и коричневый остаток распределяли между DCM (100 мл) и насыщенным раствором NaHCO₃ (50 мл). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (2×30 мл), затем объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очищали колоночной хроматографией (RediSep 40 g, загружен в сухом виде, 0-100% EtOAc в изогексанах). Сушили в вакуумном шкафу (40°C) в течение ночи. Получали белое твердое вещество, идентифицированное как третбутил ((6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метил)карбамат (0,74 г, 2,78 ммоль, 68,2% выход).

[M+H]⁺=262

F. 6-Метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метанамин

Третбутил ((6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метил)-карбамат (0,74 г, 2,83 ммоль) суспендировали в DCM (7,0 мл). Добавляли TFA (5 мл, 64,9 ммоль), и полученный прозрачный желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часов. Материал выделяли путем поглощения и высвобождения, используя хроматографию на сильной катионообменной смоле, промывая MeOH (50 мл) и элюируя с помощью 1% NH₃ в MeOH (100 мл). Концентрировали под вакуумом и сушили в вакуумном шкафу (40°C в течение 2 часов) с получением желтовато-белого твердого вещества, идентифицированного как 6-метил-1H-пирроло[2,3-b]-пиридин-5-ил)метанамин (0,47 г, 2,62 ммоль, 93% выход).

[M+H]⁺=162

G. Этил 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилат

Раствор (4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)фенил)метанола (500 мг, 2,472 ммоль), этил 1H-пиразол-4-карбоксилата (364 мг, 2,60 ммоль) и трифенилфосфина (713 мг, 2,72 ммоль) в безводном THF (8 мл) обрабатывали по каплям с помощью (E)-диизопропил диазен-1,2-дикарбоксилата (560 мкл, 2,84 ммоль). Через 4 часа при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали на силикагеле и очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом 10-100% EtOAc/изогексаны (продукт элюировали при ~70% EtOAc). Фракции испаряли с получением белого твердого вещества, идентифицированного как этил 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (610 мг, 1,862 ммоль, 75% выход).

[M+H]⁺=325

H. 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

Раствор этил 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (610 мг, 1,881 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл) и воде (10 мл) обрабатывали гидроксидом лития (225 мг, 9,40 ммоль), и смесь нагревали при 50°C при перемешивании в течение ночи. Растворители удаляли под вакуумом, и остаток суспендировали между EtOAc (50 мл) и водой (50 мл). Водную фазу доводили до pH 1 с помощью 1M HCl, и органический слой собирали. Водную фазу экстрагировали с помощью EtOAc (2×50 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота (518 мг, 1,713 ммоль, 91% выход).

[M+H]⁺=297.

I. 1-[4-(4-Метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)-амид

В сцинтилляционный флакон загружали 1-(4-((4-метил-1H-пиразол-1-ил)метил)бензил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (0,092 г, 0,310 ммоль) и суспендировали в осушенном DCM (3 мл), добавляли (6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)метанамин (0,050 г, 0,310 ммоль), HATU (0,130 г, 0,341 ммоль) и затем N,N-диизопропилэтиламин (0,108 мл, 0,620 ммоль), суспензии перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь испаряли, и полученный остаток гасили насыщенным раствором хлорида аммония (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Твердое вещество фильтровали при пониженном давлении и помещали в вакуумный шкаф при 40°C на 2 дня. Твердое вещество растирали с этилацетатом (5 мл), в который был добавлен метанол (0,1 мл), обрабатывали ультразвуком и затем фильтровали при пониженном давлении с получением бледно-коричневого твердого вещества, которое помещали в вакуумный шкаф при 40°C, с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-[4-(4-метилпиразол-1-илметил)бензил]-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (6-метил-1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илметил)амид (62 мг, 0,14 ммоль, 37% выход).

[M+H]⁺=440

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 1,98 (3H, т, J=0,7 Гц), 2,51 (3H, с), 4,45 (2H, д, J=5,5 Гц), 5,20 (2H, с), 5,30 (2H, с), 6,34 (1H, дд, J=1,9, 3,4 Гц), 7,15-7,19 (2H, м), 7,20-7,25 (3H, м), 7,32 (1H, дд, J=2,4, 3,4 Гц), 7,51 (1H, т, J=0,9 Гц), 7,74 (1H, с), 7,90 (1H, д, J=0,7 Гц), 8,25 (1H, д, J=0,7 Гц), 8,41 (1H, т, J=5,5 Гц), 11,37 (1H, с).

ПРИМЕР 23

5-Амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 1-(4-Гидроксиметилбензил)-1H-пиразол

4-(Хлорметил)бензиловый спирт (650 мг, 4,15 ммоль) и пиразол (311 мг, 4,57 ммоль) растворяли в MeCN (30 мл). Добавляли K₂CO₃ (860,5 мг, 6,23 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 50°C в течение 48 часов. Летучие компоненты удаляли под вакуумом. Добавляли этилацетат (60 мл) и воду (20 мл). Органический слой фильтровали и испаряли под вакуумом. Очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с помощью 40% EtOAc в петролейном эфире с получением бесцветного масла, идентифицированного как 1-(4-гидроксиметилбензил)-1H-пиразол (480 мг, 61% выход).

B. 1-(4-Бромметилбензил)-1H-пиразол

1-(4-Гидроксиметилбензил)-1H-пиразол (480 мг, 2,55 ммоль) и трифенилфосфин (769 мг, 2,93 ммоль) растворяли в DCM (15 мл). Полученный раствор охлаждали на ледяной бане, затем добавляли порциями тетрабромид углерода (930 мг, 2,81 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Смесь разбавляли с помощью DCM, промывали водой (2×50 мл) и солевым раствором (30 мл) и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (на силикагеле) (20-40% EtOAC/петролейный эфир). Содержащие соединение фракции концентрировали под вакуумом с получением желтовато-белого твердого вещества, идентифицированного как 1-(4-бромметил-бензил)-1H-пиразол (410 мг, 64% выход).

C. 3-Амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир и 5-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир.

К 5-амино-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловому эфиру (200 мг, 1,29 ммоль) в ацетонитриле (7 мл) добавляли карбонат калия (356 мг, 2,58 ммоль) и 1-(4-бромметилбензил)-1H-пиразол (324 мг, 1,29 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали колоночной хроматографией (на силикагеле), элюируя с помощью смеси 6:6:7 ацетонитрил:этилацетат:петролейный эфир, с получением 3-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (129 мг, 31% выход) и 5-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (119 мг, 28% выход).

D. 3-Амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

К 3-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловому эфиру (119 мг, 0,37 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли гидроксид натрия (102 мг, 2,56 ммоль), и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 48 часов. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток растворяли в воде (2 мл), и значение pH доводили до pH~5 с помощью 2M HCl (до тех пор, пока реакционная смесь не становилась непрозрачной). Добавляли EtOAc, и твердое вещество переходило в органический слой, но не растворялось. Водный слой удаляли, и органический слой фильтровали с получением желтовато-белого твердого вещества, которое промывали диэтиловым эфиром, с получением 3-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты, которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

E. 3-Амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида TFA соль

К 3-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоте (49,1 мг, 0,17 ммоль) в дихлорметане (15 мл) и DMF (2 мл) при 0°C добавляли HOBt (26,8 мг, 0,20 ммоль) и водорастворимый карбодиимид (44,3 мг, 0,23 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут добавляли триэтиламин (115 мкл, 0,83 ммоль) и 6-аминометилизохинолин-1-иламин (28,6 мг, 0,17 ммоль), и реакционную смесь подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов. Реакционную смесь распределяли между EtOAc (30 мл) и водой (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (30 мл). Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Очистка методом препаративной ВЭЖХ давала 3-амино-1-(4-пиразол-1-илметилбензил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)-амида TFA соль в виде желтовато-белого твердого вещества.

[M+H]⁺=453

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 2,98 (1H, уш.с), 4,02 (2H, уш.с), 4,55 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,07 (2H, с), 5,31 (2H, с), 6,26 (1H, т, J=2,0), 7,19-7,25 (5H, м), 7,44 (1H, д, 1,8 Гц), 7,64 (1H, д, J=7,0 Гц), 7,68 (1H, дд, J=8,7, 1,3 Гц), 7,79 (2H, дд, J=9,0, 2,0 Гц), 8,02 (1H, с), 8,49 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,51 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,93 (2H, уш.с), 12,84 (1H, уш.с).

ПРИМЕР 24

1-(6-Пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 5-Бромметил-2-фторпиридин

2-Фтор-5-метилпиридин (5,0 г, 45 ммоль) растворяли в 1,2-дихлорэтане (120 мл). К этому раствору добавляли N-бром-сукцинимид (9,61 г, 54 ммоль) и азобисизобутиронитрил (AIBN) (739 мг, 4,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником. Через 18 часов реакционную смесь разбавляли хлороформом (100 мл) и промывали водой (1×50 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 95% петролейный эфир, 5% EtOAc, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением желтого масла идентифицированного как 5-бромметил-2-фторпиридин (6,89 г, 36,25 ммоль, 81% выход).

[M+H]⁺=192

B. 1-(6-Фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

Этил 3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоксилат (1,57 г, 7,53 ммоль) растворяли в DMF (20 мл), добавляли 5-бромметил-2-фторпиридин (1,3 г, 6,84 ммоль) и карбонат цезия (6,69 г, 20,53 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 50°C. Через 18 часов реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 85% петролейный эфир, 15% EtOAc, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-(6-фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир. (1,26 г, 3,97 ммоль, 58% выход).

C. 1-(6-Фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

1-(6-Фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,26 г, 3,97 ммоль) растворяли в THF (50 мл) и воде (5 мл) и добавляли гидроксид лития (476 мг, 19,86 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C. Через 18 часов растворитель концентрировали под вакуумом, и остаток растворяли в EtOAc (50 мл), водный слой отделяли и подкисляли с помощью 1M HCl до pH 2 и экстрагировали с помощью CHCl₃ (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом с получением бесцветного масла, идентифицированного как 1-(6-фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота (980 мг, 3,39 ммоль, 85% выход).

[M+H]⁺=290

D. 1-(6-Пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

1-(6-Фторпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (300 мг, 1,04 ммоль) растворяли в диоксане (25 мл) и пирролидине (2 мл), и реакционную смесь перемешивали при 80°C. Через 18 часов реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), этот раствор промывали водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 1% AcOH, 9%MeOH, 90% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого пенообразного твердого вещества, идентифицированного как 1-(6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота. (267 мг, 0,785 ммоль, 76% выход).

[M+H]⁺=341

E. 1-(6-Пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)-амид

1-(6-Пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (180 мг, 0,53 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл) и DMF (2,5 мл). Этот раствор охлаждали до 0°C. Добавляли 6-аминометилизохинолин-1-иламин.HCl (122 мг, 0,58 ммоль), затем HOBt (77 мг, 0,58 ммоль) и триэтиламин (161 мг, 1,58 ммоль). Затем добавляли водорастворимый карбодиимид (122 мг, 0,63 ммоль). Через 18 часов при температуре от 0°C до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли хлороформом (100 мл) и изопропанолом (10 мл) и промывали раствором NaHCO₃ (1×30 мл), водой (1×30 мл) и солевым раствором (1×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и испаряли под вакуумом, получая желтое масло. Остаток очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюент 15% MeOH, 85% CHCl₃, фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением белого твердого вещества. Остаток обрабатывали HCl в метаноле (4 мл), растворитель испаряли под вакуумом, и остаток лиофилизировали из смеси вода/ацетонитрил с получением белого твердого вещества, идентифицированного как 1-(6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-3-трифторметил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид (135 мг, 0,254 ммоль, 48% выход).

[M+H]⁺=496

¹H ЯМР: (d₆-DMSO), δ: 2,01 (4H, т, J=6,0 Гц), 3,47 (4H, т, J=6,3 Гц), 4,59 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,45 (2H, с), 7,10 (1H, д, , J=9,0 Гц), 7,20 (1H, д, J=7,1 Гц), 7,70 (2H, дд, J=1,2 and 8,3 Гц), 7,81 (1H, с), 7,94 (1H, д, J=8,8 Гц), 8,15 (1H, с), 8,58 (1H, д, J=8,7 Гц), 8,64 (1H, с), 9,17-9,20 (2H, м), 13,30 (1H, с).

ПРИМЕР 25

3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. (6-Хлор-5-метоксипиридин-3-ил)метанол

К перемешиваемому раствору 6-хлор-5-метоксиникотиновой кислоты метилового эфира (0,5 г, 2,48 ммоль) в безводном THF (20 мл), охлажденному до 0°C, в атмосфере азота добавляли LiAlH₄ (104 мг, 2,728 ммоль). Реакционную смесь подогревали до комнатной температуры в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили водой (5 мл). Добавляли калий натрий тартрат (сегнетову соль) для облегчения разрушения суспензии. Смесь фильтровали через целит, тщательно промывая водой (20 мл) и этилацетатом (100 мл). Фильтрат собирали, и слои разделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), сушили над MgSO₄, и растворитель удаляли под вакуумом. Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом до 40% петролейный эфир, 60% этилацетат. Чистые фракции концентрировали, получая названное соединение (6-хлор-5-метокси-пиридин-3-ил)метанол в виде белого твердого вещества (360 мг, 2,074 ммоль, 84% выход).

[M+H]⁺=174

B. 5-Бромметил-2-хлор-3-метоксипиридин

В атмосфере N₂, (6-хлор-5-метоксипиридин-3-ил)метанол (360 мг, 2,074 ммоль) и трифенилфосфин (626 мг, 2,385 ммоль) растворяли в осушенном DCM (5 мл). Полученный раствор охлаждали на ледяной бане, затем добавляли порциями тетрабромид углерода (756 мг, 2,281 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 часов. Смесь разбавляли дихлорметаном (30 мл), промывали водой (2×50 мл) и солевым раствором (30 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом до 85% петролейный эфир, 15% этилацетат. Содержащие соединение фракции концентрировали под вакуумом с получением бесцветного масла, идентифицированного как 5-бромметил-2-хлор-3-метоксипиридин (220 мг, 0,93 ммоль, 45% выход).

[M+H]⁺=238

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 3,97 (3H, с), 4,47 (2H, с), 7,25 (1H, д, J=2,0 Гц), 8,01 (1H, д, J=2,0 Гц)

C. 1-(6-Хлор-5-метоксипиридин-3-илметил)-3-циклопропил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

3-Циклопропил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (60 мг, 0,333 ммоль) растворяли в DMF (2 мл) и обрабатывали карбонатом калия (91 мг, 0,660 ммоль). Добавляли 5-бромметил-2-хлор-3-метоксипиридин (78 мг, 0,330 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение субботы и воскресенья. Добавляли этилацетат (60 мл) и воду (20 мл), и слои разделяли. Органический слой промывали водой (3×15 мл), солевым раствором (10 мл), фильтровали и испаряли. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом до 60% петролейный эфир, 40% этилацетат. 1-(6-Хлор-5-метоксипиридин-3-илметил)-3-циклопропил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир выделяли в виде бесцветного масла, которое отверждалось при стоянии в белое твердое вещество (78 мг, 0,232 ммоль, 70% выход).

[M+H]⁺=336

D. 3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

Суспензию 1-(6-хлор-5-метоксипиридин-3-илметил)-3-циклопропил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (78 мг, 0,232 ммоль) в пирролидине (763 мкл, 9,282 ммоль) и 1,4-диоксане (300 мкл) нагревали при 90°C в течение ночи. Реакционную смесь затем охлаждали и растворяли в этилацетате (20 мл), добавляли NaHCO₃ (10 мл), и органический слой отделяли, промывали солевым раствором, сушили (MgSO₄) и концентрировали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом до 60% петролейный эфир, 40% этилацетат. 3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир выделяли в виде бесцветного масла (85 мг, 0,229 ммоль, 98% выход).

[M+H]⁺=371

E. 3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

К 3-циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловому эфиру (85 мг, 0,229 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли гидроксид натрия (92 мг, 2,295 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Затем реакционную смесь охлаждали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток растворяли в воде (2 мл), и значение pH доводили до pH~4,7 с помощью 2M HCl. Водный слой промывали хлороформом (3×10 мл). Объединенные органические слои концентрировали с получением требуемого продукта 3-циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества (60 мг, 0,175 ммоль, 76% выход).

[M+H]+=343

F. 3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид гидрохлорид

К 3-циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-илпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоте (60 мг, 0,175 ммоль) в дихлорметане (5 мл) при 0°C добавляли HOBt (28 мг, 0,210 ммоль) и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (47 мг, 0,245 ммоль). Через 10-15 минут добавляли триэтиламин (122 мкл, 0,876 ммоль) и 6-(аминометил)изохинолин-1-амин (30 мг, 0,175 ммоль). Добавляли DMF (3 мл) для улучшения растворимости, и реакционную смесь подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 дней. Реакционную смесь разбавляли хлороформом (50 мл) и добавляли насыщенный водный раствор NaHCO₃ (15 мл). Слои разделяли, и органический слой промывали водой (5×20 мл), затем солевым раствором (15 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией (на силикагеле), элюируя с градиентом до 3,5% метанол, 95,5% дихлорметан, 1% NH₄OH. Продукт обрабатывали смесью HCl/диоксан в течение 30 минут, концентрировали под вакуумом и лиофилизировали из смеси ацетонитрил/вода. 3-Циклопропил-1-(5-метокси-6-пирролидин-1-ил-пиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид выделяли в форме дигидрохлоридной соли в виде желтовато-белого твердого вещества (50 мг, 0,088 ммоль, 99% выход).

[M+H]⁺=498

¹H ЯМР (d₆-DMSO): 0,75-0,79 (2H, м), 0,81-0,87 (2H, м), 1,11-1,95 (4H, м), 2,57-2,63 (1H, м), 3,77 (4H, уш.с), 3,86 (3H, с), 4,58 (2H, д, J=5,8 Гц), 5,19 (2H, с), 7,21 (1H, д, J=7,0 Гц), 7,41 (1H, д, J=1,3 Гц), 7,54 (1H, д, J=1,0 Гц), 7,67-7,69 (1H, м), 7,69-7,72 (1H, м), 7,80 (1H, с), 8,31 (1H, с), 8,59 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,79 (1H, т, J=5,8 Гц), 9,17 (2H, уш.с), 13,39 (1H, с)

ПРИМЕР 26

1-(6-Этоксипиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A: 5-Хлорметил-2-фторпиридин

В колбу объемом 500 мл загружали 2-фтор-5-метилпиридин (23,42 г, 211 ммоль), 1-хлорпирролидин-2,5-дион (42,2 г, 316 ммоль), бензойный пероксиангидрид (1,361 г, 4,22 ммоль), уксусную кислоту (1 мл, 17,47 ммоль) и ацетонитрил (132 мл, 2527 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником, получая бледно-желтый раствор, который кипятили с обратным холодильником в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали и гасили водой (20 мл), затем этилацетатом (30 мл) и солевым раствором (30 мл). Две фазы разделяли, и водную фазу повторно экстрагировали этилацетатом (30 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и испаряли с получением вязкой оранжевой суспензии. Продукт растирали с DCM (100 мл), и полученное твердое вещество удаляли фильтрацией. Фильтрат испаряли при пониженном давлении с получением прозрачного оранжевого масла. Неочищенный продукт разделяли на две порции по 19 г и очищали на колонке с 330 г силикагеля, жидкость загружали в DCM и элюировали с градиентом этилацетат-изогексан (5:95). Содержащие продукт фракции объединяли и испаряли под вакуумом с получением прозрачного почти бесцветного масла, идентифицированного как 5-(хлорметил)-2-фторпиридин (14,6 г, 99 ммоль, 46,9% выход).

[M+H]⁺=146

B. 1-(6-Фторпиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир

К перемешиваемому раствору 5-(хлорметил)-2-фторпиридина (750 мг, 5,15 ммоль) и этил 3-фенил-1H-пиразол-4-карбоксилата (1114 мг, 5,15 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли K₂CO₃ (1424 мг, 10,30 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение субботы и воскресенья. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (150 мл) и промывали водой (100 мл) и солевым раствором (2×100 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали, и неочищенный материал испаряли непосредственно на силикагеле. Неочищенный продукт очищали хроматографией (колонка 40 g, 0-60% (3:1 EtOAc:MeCN) в изогексанах). 1-(6-Фторпиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (1,69 г, 4,16 ммоль, 81% выход) выделяли при стоянии в виде воскооброазного твердого вещества в форме смеси региоизомеров. Материал непосредственно использовали на следующей стадии.

[M+H]⁺=326

C: 1-(6-Этоксипиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты

В перемешиваемую колбу для проведения реакций при воздействии микроволнового излучения, содержащую этанол (3 мл), добавляли этоксид натрий (586 мг, 8,61 ммоль) и 1-(6-фтор-пиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (700 мг, 2,152 ммоль). Реакционный сосуд герметизировали и нагревали до 90°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), насыщенного раствора NH₄Cl (10 мл) и воды (100 мл). Органические слои промывали солевым раствором (100 мл), и растворитель удаляли. Неочищенный материал растворяли в THF (10 мл) и MeOH (3 мл), затем добавляли 2M NaOH (2152 мкл, 4,30 ммоль) и выдерживали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь подкисляли до ~pH 5 с помощью 1M HCl, и продукт экстрагировали в EtOAc (2×30 мл). Органические фазы промывали солевым раствором (30 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали, и растворитель удаляли. Неочищенный продукт очищали хроматографией (колонка 40 g, 0-70% (3:1 EtOAc:MeCN, 1% уксусная кислота) в изогексанах) с получением 1-((6-этоксипиридин-3-ил)метил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (65 мг, 0,191 ммоль, 9% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]⁺ =324

D: 1-(6-Этоксипиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

К перемешиваемому раствору 1-((6-этоксипиридин-3-ил)метил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (65 мг, 0,201 ммоль) и 6-(аминометил)изохинолин-1-амина.2HCl (49,5 мг, 0,201 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (140 мкл, 0,804 ммоль) и HATU (84 мг, 0,221 ммоль) и выдерживали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл) и промывали NaOH (2 M, 20 мл) и затем солевым раствором (2×40 мл). Органические фазы предварительно абсорбировали непосредственно на силикагеле и очищали хроматографией (колонка 12 g, 0-7% MeOH (1% NH3) в DCM) с получением формы свободного основания названного соединения (54,2 мг, 0,100 ммоль, 49,7% выход) в виде белого порошка. Твердое вещество отгоняли в виде азеотропа с толуолом (3×5 мл) под высоким вакуумом для удаления какого-либо остаточного N,N-диизопропилэтиламина перед получением соли. Материал суспендировали в DCM (3 мл) и добавляли HCl 4M в диоксане (27,1 мкл, 0,109 ммоль, 1 экв.). Растворитель удаляли под вакуумом. Остаток суспендировали в воде (3 мл) и затем лиофилизировали в течение ночи с получением 1-(6-этоксипиридин-3-илметил)-3-фенил-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида в форме HCl соли в виде белого твердого вещества (54,2 мг, 0,100 ммоль, 49,7% выход).

[M+H]⁺=479,3

ПРИМЕР 27

1-(6-Этоксипиридин-3-илметил)-3-(2-метоксиацетиламино)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амид

A. 3-Амино-1-(6-фторпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир 1132-35

К перемешиваемому раствору 3-амино-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (1,785 г, 11,51 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляли этоксид натрия (1,566 г, 23,01 ммоль). Через 5 минут добавляли раствор 5-(хлорметил)-2-фторпиридина (1,675 г, 11,51 ммоль) в EtOH (3 мл), и реакционную смесь нагревали до 80°C. Через 90 минут уменьшали объем реакционной смеси под вакуумом и затем разбавляли с помощью EtOAc (200 мл) и воды (100 мл). Органическую фазу отделяли и промывали солевым раствором (100 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали, и растворитель удаляли. Неочищенный продукт очищали хроматографией (колонка 80 g, медленно 0-40% (3:1 EtOAc:MeCN) в изогексанах). Нежелательный региоизомер 5-амино-1-(6-фторпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир выделяли из первого набора фракций (768 мг, 2,76 ммоль, 24% выход) в виде масла, которое при стоянии отверждалось в воскообразное твердое вещество. Требуемый изомер 3-амино-1-(6-фторпиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (712 мг, 2,61 ммоль, 22,7% выход) выделяли в виде воскообразного твердого вещества из второго набора фракций.

[M+H]⁺=265

B. 3-Амино-1-(6-этоксипиридин-3-илметил)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

В колбу для проведения реакций при воздействии микроволнового излучения, содержащую этанол (5 мл), добавляли NaH (260 мг, 6,51 ммоль) и перемешивали в течение 10 минут. Добавляли суспензию этил 3-амино-1-((6-фторпиридин-3-ил)метил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (430 мг, 1,627 ммоль) в EtOH (4 мл). Смесь герметизировали и нагревали до 90°C в течение ночи. Добавляли NaOH (2M, 2 мл) и нагревали до 50°C в течение 1 часа. Реакционную смесь испаряли досуха, и остаток растворяли в воде (10 мл), и значение рН доводили до pH 5, затем экстрагировали с помощью EtOAc (10×20 мл). Объединенные органические слои затем испаряли. Неочищенный материал очищали хроматографией (колонка 12 g, 0-70% (3:1 EtOAc:MeCN, 1% уксусная кислота в изогексанах) с получением 3-амино-1-((6-этоксипиридин-3-ил)метил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (195 мг, 0,736 ммоль, 45,2% выход) в виде белого порошка после перегонки в виде азеотропа с толуолом (2×20 мл).

[M+H]⁺=263

C. 1-((6-Этоксипиридин-3-ил)метил)-3-(2-метоксиацетамидо)-1H-пиразол-4-карбоновая кислота

К перемешиваемому раствору 3-амино-1-((6-этоксипиридин-3-ил)метил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (142 мг, 0,541 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (142 мкл, 0,812 ммоль) и 2-метоксиацетилхлорид (54,5 мкл, 0,596 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь испаряли для удаления DCM. Неочищенный остаток подвергали воздействию ультразвука в воде (10 мл). Добавляли хлористоводородную кислоту (2M, 1 мл), и продукт экстрагировали в EtOAc (30 мл). Органический слой сушили над сульфатом магния, и растворитель испаряли при пониженном давлении с получением 1-((6-этоксипиридин-3-ил)метил)-3-(2-метоксиацетамидо)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты в виде желтого твердого вещества (160 мг, 0,469 ммоль, 87% выход).

[M+H]+=335

D. 1-(6-Этоксипиридин-3-илметил)-3-(2-метокси-ацетил-амино)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорид

К перемешиваемому раствору 1-((6-этоксипиридин-3-ил)метил)-3-(2-метоксиацетамидо)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (81,0 мг, 0,242 ммоль), 6-(аминометил)изохинолин-1-амина дигидрохлорида (65,6 мг, 0,267 ммоль) и HATU (111 мг, 0,291 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли триэтиламин (135 мкл, 0,969 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь затем разбавляли с помощью EtOAc (15 мл) и промывали 2M NaOH (2×20 мл). Органическую фазу сушили (Na₂SO₄), фильтровали и испаряли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали хроматографией (колонка 4 g, MeOH в DCM 0-5% и 1% Et₃N) с получением требуемого продукта в форме свободного основания. Продукт растворяли в DCM (1 мл), добавляли 4M HCl в диоксане (79 мкл, 0,315 ммоль), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Растворитель затем испаряли при пониженном давлении с получением 1-(6-этокси-пиридин-3-илметил)-3-(2-метокси-ацетиламино)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-аминоизохинолин-6-илметил)амида гидрохлорида (47,5 мг, 0,089 ммоль, 36,5% выход) в виде белого твердого вещества.

[M+H]=490

ЯМР (d₆-DMSO) 1,31 (3H, т, J=7,0 Гц), 3,36 (3H, с), 3,96 (2H, с), 4,30 (2H, к, J=7,0 Гц), 4,60 (2H, д, J=5,9 Гц), 5,27 (2H, с), 6,83 (1H, дд, J=0,7, 8,5 Гц), 7,17 (1H, д, J=6,8 Гц), 7,60-7,72 (3H, м), 7,73-7,78 (1H, м), 8,17-8,27 (2H, м), 8,40-8,50 (3H, м), 8,83 (1H, т, J=6,0 Гц), 10,51 (1H, с), 12,74 (1H, с).

Соединения в следующих таблицах синтезировали так же, как описано в Примерах 1-3 и 6-27 и в Справочных примерах 4 и 5. Соединения 31-33, 45-50, 52, 105-109, 115-118 и 127-129 синтезированы в Справочных примерах.

Таблица 1 1 A Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 28 492,6 493 29 481,6 482 30 468,6 469

Таблица 2 Номер примера W Z Y Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 31 CH CH N 451,5 452 32 CH N CH 451,5 452 33 CH N N 452,5 453 34 C-CH3 C-CH3 N 479,6 480 35 CH C-Ph N 527,6 528 36 CH C-CF3 N 519,5 520 37 CH C-NH2 N 466,5 467 38 CH N 495,6 496 39 CH N 501,5 502 40 CH N 533,6 268 [M+2H]/2 41 CH C-CON(CH3)2 N 522,6 523 42 CH N 533,7 534 43 CH C-Cl N 486,0 486

Таблица 3 Номер примера A W Y Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 44 C-CH3 C-CH3 491,6 492 45 CH N 429,5 430 46 CH N 511,6 513 47 CH N 450,5 451 48 CH N 468,5 469 49 CH N 450,6 451 50 CH N 482,5 483 51 C-CF3 N 495,5 496 52 CH N 480,4 481 53 C-NH2 N 452,5 453

Таблица 4 Номер примера A Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 54 495,5 496 55 470,5 471 56 531,5 532 57 531,5 532 58 509,5 510 59 509,5 510 60 513,5 514 61 513,5 514 62 509,5 510 63 509,5 510 64 496,5 497 65 496,5 497 66 484,5 485 67 509,5 510 68 509,5 510 69 525,5 526 70 525,5 526 71 484,5 485 72 498,5 499 73 513,5 514 74 504,9 505 75 488,4 489 76 505,5 506 77 530,5 531 78 548,5 549 79 506,5 507 80 470,5 471 81 512,5 513 82 526,5 527 83 506,5 507 84 535,5 536 85 535,5 536

Таблица 5 Номер примера A Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 86 485,6 486 87 503,6 504 88 497,6 498 89 497,6 498 90 467,6 468 91 478,6 479 92 496,5 497 93 490,6 491 94 477 477 95 487,6 488 96 469,6 470 97 502,0 502

Таблица 6 Номер примера A Z Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 98 C-NH2 417,5 418 99 C-NH2 442,5 443 100 C-N(CH3)2 470,6 471 101 524,6 525 102 522,6 523 103 509,6 256 [M+2H]/2 104 512,6 513

Таблица 7 Номер примера A V U Z Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 105 N CH CH 485,6 486 106 N CH CH 442,5 443 107 N CH CH 424,5 425 108 N CH CH 423,5 424 109 N CH CH 456,5 457 110 CH C-CH3 C-CF3 506,5 507 111 CH N C-CF3 493,5 494 112 CH CH C-CF3 492,5 493,1 113 CH N C-NH2 453,5 454 114 N CH C-CF3 469,5 470

Таблица 8 Номер примера R1 R3 Z Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 115 H H N 426,5 427 116 H CH3 N 440,5 441 117 H H CH 425,5 426 118 CH3 CH3 CH 453,5 454 119 CH3 CH3 C-CF3 521,5 522 120 H H 465,6 466 121 H H C-CF3 493,5 494 122 CH3 CH3 493,6 494

Таблица 9 Номер примера A U V Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 123 CH CH 492,5 493 124 N CH 493,5 494 125 CH N 493,5 494 126 N CH 506,5 507

Таблица 10 Номер примера A Молекулярная масса свободного основания [M+H]+ 127 527,9 528 128 503,9 504 129 540,9 541

Методы исследования биологической активности

Способность соединений формулы (I) ингибировать калликреин плазмы может быть определена с использованием следующих методов исследования биологической активности:

Определение величины IC₅₀ для калликреина плазмы

Ингибирующую активность в отношении калликреина плазмы in vitro определяли, используя опубликованные в литературе стандартные методы (смотрите, например, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). Человеческий калликреин плазмы (фирмы Protogen) инкубировали при 37°C с флуорогенным субстратом H-DPro-Phe-Arg-AFC и различными концентрациями испытуемого соединения. Остаточную ферментативную активность (начальную скорость реакции) определяли путем измерения изменения оптического поглощения при 410 нм и рассчитывали величину IC₅₀ для испытуемого соединения.

Данные, полученные в этих исследованиях, приведены в Таблице 13 ниже:

Выбранные соединения были подвергнуты дополнительному скринингу на ингибирующую активность в отношении родственного фермента KLK1. Способность соединений формулы (I) ингибировать KLK1 может быть определена, используя следующее исследование биологической активности:

Определение величины IC₅₀ для KLK1

Ингибирующую активность в отношении KLK1 in vitro определяли, используя опубликованные в литературе стандартные методы (смотрите, например, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). Человеческий KLK1 (фирмы Callbiochem) инкубировали при 37°C с флуорогенным субстратом H-DVal-Leu-Arg-AFC и различными концентрациями испытуемого соединения. Остаточную ферментативную активность (начальную скорость реакции) определяли путем измерения изменения оптического поглощения при 410 нм и рассчитывали величину IC₅₀ для испытуемого соединения.

Данные, полученные в этом исследовании, приведены в Таблице 14 ниже:

Выбранные соединения были подвергнуты дополнительному скринингу на ингибирующую активность в отношении родственных ферментов плазмина, тромбина, трипсина, фактора Xa и фактора XIIa. Способность соединений формулы (I) ингибировать эти ферменты может быть определена, используя следующие исследования биологической активности:

Определение селективности в отношении ферментов

Человеческие серин-протеазные ферменты плазмин, тромбин, трипсин, фактор Xa и фактор XIIa исследовали на ферментную активность, используя соответствующий флуорогенный субстрат. Активность протеазы измеряли путем мониторинга суммарного количества испускаемой флуоресценции из субстрата в течение 5 минут. Линейную скорость увеличения флуоресценции за минуту выражали как процент (%) активности. Величину Km для распада каждого субстрата определяли путем стандартного преобразования уравнения Михаэлиса-Ментена. Исследования ингибирующей способности соединения проводили при концентрации субстрата Km, и активности рассчитывали в виде концентрации ингибитора, обеспечивающей 50% ингибирование (IC₅₀) активности неингибированного фермента (100%).

Данные, полученные в этих исследованиях, приведены в Таблице 15 ниже:

Фармакокинетика

Фармакокинетические исследования соединений, приведенных в Таблице 16, проводили для оценки фармакокинетики после введения разовой пероральной дозы самцам крыс линии Sprague-Dawley. Двум крысам вводили перорально однократно из расчета 5 мл/кг номинальной 2 мг/мл (10 мг/кг) композиции испытуемого соединения в смеси 5% кремофор:5% этанол:90% забуференный фосфатом физиологический раствор. После дозирования, собирали пробы крови в течение 24 часов. Моменты времени для проведения измерений составляли 5, 15 и 30 минут, затем 1, 2, 4, 6, 8, 12 и 24 часа. После сбора, пробы крови центрифугировали, и фракцию плазмы анализировали на концентрацию испытуемого соединения методом LCMS. Данные по пероральному воздействию, полученные в этих исследованиях, приведены ниже: