Результат интеллектуальной деятельности: Способ приготовления анатомических препаратов верхних и нижних конечностей, ишемизированных в результате тромбогенных осложнений

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, патологической анатомии, топографической анатомии, музейной технике.

Использование: в области медицины, в частности нормальной анатомии, патологической анатомии, музейной технике.

Сосудистые заболевания широко распространены, и их своевременная диагностика и лечения способствуют увеличению продолжительности и качества жизни. Заболевания артерий нижних конечностей – это группа нозологий, сопровождающихся постепенной закупоркой артерий сосудов и вызывающих синдром ишемии нижних конечностей. Тромбогенные нарушения являются ведущим звеном в развитии такой патологии.

В свою очередь, эти нарушения проявляются такими заболеваниями, как тромбоз глубоких вен и обширная легочная тромбоэмболия. Касательно механизмов появления тромботических масс стоит рассматривать такие состояния, как предсмертный ДВС-синдром, активация системы комплемента, вирусная диссеминация с вовлечением эндотелия в инфекционный процесс, а также активацию путей свертывания, вызванную гипоксемией. Это требует от специалистов точного знания топографо-анатомических характеристик органов и систем, являющихся мишенями для данного вируса. Анатомические сведения необходимы также для развития фундаментальной медицины и клинических медицинских специальностей.

Современные высокотехнологичные методы, имеющиеся в распоряжении клиницистов, врачей-диагностов и специалистов в области фундаментальных исследований все еще уступают в наглядности и способности к визуализации классическим морфологическим методикам, что в свою очередь создает потребность в использовании качественных патологоанатомических препаратов для оценки тех или иных патологических процессов, а также для создания наглядных пособий и атласов, что особенно важно при изучении относительно новых, ранее плохо изученных патологий.

Современным инструментальным методом визуализации тромботической окклюзии сосудов является ангиография. К недостаткам такого метода можно отнести недостаточную визуализацию топографических характеристик комплекса анатомических структур конечности и невозможность оценки степени ее ишемизации.

В патоморфологии для оценки массивности и топологии тромбозов и эмболий, при изучении операционного материала используют метод макроскопического исследования и вырезки препарата нетравматической ампутации и экзартикуляции на уровне голени (послойное препарирование).

Согласно данному методу, ампутант препарируют, выделяют и выполняют перпендикулярные серийные разрезы бедренной, подколенной, передней и задней большеберцовых артерий и соответствующих вен. Оценивают макроскопические параметры, позволяющие оценить степень сужения артерии, степень облитерации, наличие тромбов. Схема данного метода представлена на фиг. 11-14.

Недостатками данного метода является то, что подобное послойное препарирование нарушает топографо-анатомическое расположение сосудов относительно мягкотканных и костных структур, а также в значительной мере искажает первоначальный вид ампутанта.

Известен метод изготовления пластинчатых патологоанатомических препаратов по Талалаеву: из свежего, нефиксированного органа вырезается тонкая пластинка, которая фиксируется и обрабатывается по методу Кайзеринга. А именно: после фиксации пластинка отжимается и проводится через 96° спирты. Далее производится заливка в уксуснокислый агар и препарат закладывается между двумя стеклами.

Недостатком данного метода является то, что спирт значительно обезвоживает ткани, тем самым искажая их нормальные размеры и топографические отношения. Наряду с этим, данный метод не предполагает дальнейшего микроскопического исследования.

Известен метод Брунетти, который предназначен для изготовления демонстрационных препаратов. Заключается он в том, что сосуды органа или целого трупа вначале промывают водой, а затем спиртом. Для удаления жира через сосуды пропускают сернистый эфир. Далее вся сосудистая система органа наполняется танином, выступающим в роли дубильного вещества. После этого через сосудистую систему органа пропускается сухой подогретый воздух, благодаря которому орган высушивается изнутри. В результате препараты выставляются без банок, в полусухом состоянии, и имеют объемную форму, а также сохраняют эластичность и подвижность.

Недостатками данного метода в случае наблюдения тромботической окклюзии сосудов является невозможность сохранения тромботических масс в сосудах, а также потеря первоначальной консистенции препарата и утрата цвета, наряду с этим метод является сложным в исполнении и не позволяет провести микроскопического исследования.

Согласно методу Малофеева Ю.М и соавторов, иссекают фрагмент, содержащий комплекс органов, с третьего шейного позвонка по десятый грудной позвонок. Помещают органокомплекс в фиксирующую жидкость при температуре 20-37°С на 1-7 суток с последующим вымачиванием зафиксированного объекта от одного до пяти часов в проточной воде. Затем нарезают материал на отдельные фрагменты толщиной 0,2-0,3 см, маркируют и ведут дальнейшую фиксацию. В качестве фиксирующей жидкости используют 10 об.% водный раствор формалина.

Недостатками данного метода является утрата первоначального цвета препарата, консистенции и размера. Также данный метод не предусматривает возможности визуализации точной скелетотопии, что в свою очередь не дает точной топографии различных патологий, в том числе тромбоз сосудов.

Наиболее близким аналогом, принимаемым нами за прототип, является метод “ледяной анатомии” Н.И. Пирогова, основанный на заморозке отдельных фрагментов тела и их распиливании в трех проекциях при помощи механической пилы. «Шевченко Ю. Л., Китаев В. М. "Ледяная анатомия" Н.И. Пирогова - прообраз современных лучевых изображений. Хирургия. Журналим. Н.И. Пирогова. 2010;(9):4-8.»

Было предложено выполнение распилов классическим способом: выполняли фиксацию, препарирование задней поверхности шеи с выделением и маркировкой остистых отростков шейных позвонков. Затем проводили заморозку фрагмента в морозильной камере, а после - стандартный распил.

Недостатками прототипа являются потеря первоначальной топографии шеи в результате предварительного препарирования, а также утрата истинного размера, цвета и консистенции исследуемого участка. Метод Н.И. Пирогова заключается в заморозке отдельных фрагментов тела и их распиливании в трех проекциях при помощи механической пилы. Очевидным плюсом является хорошая визуализация топографии органов, точность и наглядность всех структур распила. Однако в современном мире имеется возможность заменить механическую пилу на более современные аналоги для улучшения точности и ровности распила.

Нами предлагается метод распила конечностей в аксиальной проекции на ленточнопильном станке с предварительной заморозкой в морозильной камере и с последующей фиксацией препарата в формалине.

Задачей изобретения является разработка способа приготовления анатомических препаратов верхних и нижних конечностей, ишемизированных в результате тромбогенных осложнений.

Технический результат заключается в разработке метода препарирования ампутанта с использованием элементов “Ледяной анатомии” по Н.И. Пирогову для достоверной визуализации топографии пораженных тромбозом поверхностных и глубоких сосудов на каждой конечности, а также участков мышечной ткани на различных этапах повреждения, вызванного критической ишемией, с максимально возможным сохранением топографо-анатомических характеристик ампутанта в процессе изготовления распилов.

Технический результат достигается тем, что производят промывку ампутированных верхних и нижних конечностей в 0,9 об.% растворе натрия хлорида. Затем нефиксированный материал замораживают в холодильной установке при температуре -15ºС в течение 24 часов. Замороженную конечность помещают на рабочую поверхность ленточнопильного станка JET модели JWBS-10S, после чего конечность фиксируют при помощи параллельного упора на столе станка и циркулярной пилой осуществляют распилы в аксиальной проекции шагом 5 см, а затем производят фиксацию распилов в 10об.% растворе формалина.

Данный способ позволяет изготовить распилы нативных препаратов заданной толщины для визуализации сосудисто-нервных пучков, мышечных, костных и соединительнотканных компонентов (в т.ч., артериального влагалища) с сохранением естественного цвета тканей, их нормальной эластичности и исходного вида сосудистого русла на всем протяжении исследуемой конечности.

ИЗОБРЕТЕНИЕ ПОЯСНЯЕТСЯ ФИГУРАМИ (Фиг.1-14)

На фиг.1 Препарат распила верхней конечности на уровне нижней трети предплечья с сосудами с обтурирующими тромбамии участками мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией.

На фиг.2 Препарат распила верхней конечности на уровне средней трети предплечья с сосудами с обтурирующими тромбамии участками мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией.

На фиг.3-4 Препарат верхней конечности на уровне верхней трети плеча с сосудами с обтурирующими тромбами и участками мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией.

На фиг.5-6 Препарат верхней конечности на уровне средней трети плеча с сосудами с обтурирующими тромбамии участками мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией.

На фиг.7-8Препарат верхней конечности на уровне нижней трети плеча с сосудами с обтурирующими тромбамии участками мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией.

На фиг.9 Макросъёмка препарата нижней конечности с сосудами с обтурирующими тромбами и участками мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией.

На фиг.10 Микроскопическая картина смешанного тромба из участков тромботической окклюзии сосудов нижней конечности.

На фиг.11-12 Схема разреза кожи для послойного препарирования мышц и сосудов на передней и задней поверхностях нижних конечностей.

На фиг.13Схема разреза кожи для послойного препарирования мышц и сосудов на передней поверхности верхних конечностей.

На фиг. 14 Схема разреза кожи для послойного препарирования мышц и сосудов на задней поверхности верхних конечностей.

Способ осуществляется следующим образом: ампутированная конечность, промывается в 0,9об.% растворе NaCl в емкости соответствующего объема. Далее нефиксированный материал помещается в пластмассовый контейнер и подвергается заморозке в холодильной установке при температуре -15ºС в течении 24 часов, чем достигается адекватное уплотнение и сохранение топографо-анатомических отношений различных структур исследуемого материала. По истечении указанного времени ампутант извлекается из холодильной установки.

Следующим этапом является препарирование. Для этого замороженную конечность помещают на рабочую поверхность ленточнопильного станка JET модели JWBS-10S. После чего конечность фиксируют при помощи параллельного упора на столе станка и циркулярной пилой осуществляют распилы в аксиальной проекции шагом 5 см. (фиг. 1-9).

Мы считаем, что именно шаг в 5 см. является наиболее оптимальным для визуализации топографии конечности, так как при таком шаге отсутствует возможность повреждения при транспортировке, фиксации и экспонировании особенно уязвимых структур: сосудов, артериальных влагалищ и сосудисто-нервных пучков, анатомо-топографические особенности которых более уязвимы на распилах меньшей толщины. При этом распил с шагом в 5 см. достаточно информативен для правильной интерпретации состояния определенного топографического участка конечности, в отличие от более толстого распила.

Заключительным этапом производится фиксация распилов в контейнере в 10 об.% растворе формалина для последующего хранения и экспонирования в музее, при сохранении возможности проведения гистологической верификации состояния мышц, мягких тканей, сосудистого русла (фиг. 10).

ПРИМЕР ПРАКТИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Авторами апробирован предложенный метод препарирования на 4 верхних и 6 нижних ампутированных конечностях, полученных после хирургических операций. Предварительно промытые в 0,9об.% растворе NaCl и замороженные в холодильной установке при -15ºС в течении 24 часов, конечности поочередно подвергались распиливанию в аксиальной проекции на уровнях топографических областей, заданных целью препарирования, при помощи ленточнопильного станка JET модели JWBS-10S с шагом, равным 5 см. В общей сложности было получено двадцать восемь распилов, на которых отчетливо визуализировались сосуды с обтурирующими тромбами и участки мышечной ткани на разной степени повреждения, вызванного ишемизацией (фиг. 1-9). Полученные распилы представляли собой материал, пригодный для дальнейшего микроскопического препарирования с целью гистологический верификации патологического процесса (фиг. 10). Сами распилы далее сохранялись в 10об.% растворе формалина.

Таким образом использование апробированного метода позволяет сохранить точное топографо-анатомическое соотношение всех структур препарируемого материала. Использование нативного препарата позволяет сохранить естественный цвет, нормальную эластичность его структур, а также исходный вид сосудистого русла на всем протяжении конечности, без выдавливания тромбов. Предварительная заморозка предотвращает возможное смещение отдельных структур конечности во время распиливания на ленточнопильном станке. Также точность и прицельность распилов, в отличие от классического метода послойного разделения структур конечности, позволяет получать распилы с заранее заданным шагом на необходимом уровне исследуемой конечности, в том числе для последующей гистологической верификации.