×
22.07.2020
220.018.3542

Результат интеллектуальной деятельности: Способ получения лимфоцитов крупнорогатого скота

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарной медицине, в частности к генной инженерии, и касается выделения жизнеспособных клеток из периферической крови крупного рогатого скота. Техническим результатом изобретения является выделение жизнеспособных лимфоцитов, обладающих большим выходом мононуклеаров.

Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарной медицине, в частности к генной инженерии, и касается выделения жизнеспособных клеток (лимфоцитов) из периферической крови крупного рогатого скота.

Известен способ получения лимфоцитов из тонкого кишечника мыши (патент RU 2514653 , МПК С12N 5/0781 , C12N 5/0783, опубл. 27.04.2014, бюл. №12), включающий извлечение биологического материала – участка кишечника самок мышей линии СВА в возрасте 5-12 недель, от желудка до слепой кишки, промывание его фосфатно-буферным раствором, удаление пейеровых бляшек, измельчение биологического материала в присутствии фосфатно-солевого буфера, содержащего 0,1-0,2 мас.% дитиотреитола при перемешивании при комнатной температуре, последующую промывку биологического материала фосфатно-солевым буферным раствором через нейлоновую сетку, собственное выделение лимфоцитов из стенки тонкого кишечника путем последовательного инкубирования материала в растворе фосфатно-солевого буфера, содержащего 0,2-0,3 мас.% бычьего сывороточного альбумина при перемешивании магнитной мешалкой при +30-40°С в течение 10-15 минут, удаление надосадочной жидкости с помощью нейлоновой сетки, промывание осадка фосфатно-солевым буфером, последующее инкубирование осадка биологического материала фосфатно-буферным раствором, инкубирование биологического материала в клеточной среде RPMI-1640, содержащей 1-5 мас.% телячьей сыворотки, 0,2-0,3 М HEPES и 20-40 U/мл коллагеназы при перемешивании магнитной мешалкой при 30-40°С в течение 10-13 минут, фильтрование полученной суспензии, отмывку суспензии от коллагеназы и осаждение лимфоцитов дважды в клеточной среде RPMI-1640, содержащей 1-5 мас.% эмбриональной телячьей сыворотки и 0,2-0,3 М HEPES, с использованием центрифугирования при 1200-1500 об/мин и при 0+4°С, и далее осуществляют определение выхода живых клеток с помощью камеры Горяева.

Недостатком данного способа является использование большого количества химических реагентов и дорогостоящих компонентов для выделения, таких как бычий сывороточный альбумин, эмбриональная телячья сыворотка, коллагеназа, среда RPMI-1640, камера Горяева, нейлоновая сетка. Способ предполагает эвтаназию животных с извлечением отдела кишечника, очисткой от инородных масс, удаление пейеровых бляшек, продольное и поперечное измельчение кишечника, размягчение кишечных тканей с помощью различных реагентов, ферментативную обработку кишечных тканей (используется различные типы коллагеназы - фермента, разрушающего межтканные связи).

Известнасреда для выращивания культуры аутологичных лимфоцитов (патент RU 2 393 218 , МПК С12N 5/0781, опубл. 27.06.2010, бюл. № 18), содержащая культуральную среду RPMI-1640 (RoswellParkMemorialInstitute), отличающаяся тем, что дополнительно содержит 10%-ный раствор фитогемоагглютинина и сыворотку собственной крови, полученную из любой центральной или периферической вены пациента, для которого выращивают культуру аутологичных лимфоцитов.

Недостатками ее является то, что нет выхода чистой взвеси лимфоцитов для исследования, большая длительность для выращивания культуры аутологичных лимфоцитов (минимум 72 часа), что не позволяет применять способ в ветеринарной медицине, а также использование достаточно дорогостоящих химических реактивов для выращивания культуры, таких какфитогемоагглютинин.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является способ выделения мононуклеаров из крови человека (патент РФ 2061958, МПК G01N33/53, МПКG01N33/483, опубл. 10.06.1996), включающий отбор крови, добавление антикоагулянта, нанесение пробы на градиент и центрифугирование в градиенте плотности в растворах, содержащих высокомолекулярное вещество, отличающийся тем, что цельную кровь наслаивают на градиент в соотношении кровь градиент 2:1, центрифугируют при 400 g в течение 30 мин, при этом градиент представляет собой смесь верографина с поливинилпирролидоном, взятых в соотношении 1:4 (по объему).

Недостатком данного способа является применение дорогостоящего препарата поливинилпирролидона, однако есть возможность выделения мононуклеаров без данного препарата.

Технической задачей является создание способа выделения жизнеспособных клеток агрунолоцитов (лимфоцитов) крупного рогатого скота.

Технический результат заключается в выделении жизнеспособных лимфоцитов крупного рогатого скота, обладающих большим выходом мононуклеаров.

Техническая задача решается, а технический результат достигается в способе выделения мононуклеаров из крови крупного рогатого скота, включающем отбор крови, добавление антикоагулянта, нанесение пробы на градиент и центрифугирование в градиенте плотности в растворах, содержащих высокомолекулярное вещество.

Отличием от прототипа является то, что цельную кровь наслаивают на градиент (PBS - Верографин) в соотношении «кровь-градиент» 1:1, центрифугируют при 3000 оборотах в течение 30 мин, при этом градиент представляет собой смесь верографина с фосфатно-солевым буфером, взятых в отношении 10 (20) мл 76% раствора верографина, 43.1 (86.2) мл дистиллированной воды и 0.45 (0.9) мл фосфатно-солевого буфера.

Способ получения лимфоцитов крупного рогатого скота осуществляется следующим образом.

Готовят градиент PBS (фосфатно-солевой буфер) - Верографин с плотностью 1,078 г/см3.С этой целью 10 (20) мл 76% раствора верографина смешивают с 43.1 (86.2) мл дистиллированной воды и добавляют 0.45 (0.9) мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ), доводят до плотности до 1,078 г/см3. В2-3 мл раствора PBS-Верографин наслаивают 2-3 мл периферической крови, в соотношении 1:1. Затем проводят центрифугирование при 3000 об/мин в течение 30 мин для разделения фракций форменных элементов в градиенте плотности.

При этом плавучая плотность мононуклеаров и лимфоцитов меньше, чем таковая величина используемого градиента, поэтому данные клетки располагаются над градиентом. Гранулоциты и эритроциты, имеющие большую плавучую плотность, в процессе седиментации проходят через градиентный раствор и опускаются на дно пробирки.

В результате центрифугирования кровь разделяется на 4 отдельные фракции: первая фракция на дне пробирки содержит эритроциты и обломки клеток крови. Вторая фракция – это раствор PBS-Верографин. Третья фракция, расположенная над градиентом, представляет собой суспензию лимфоидных клеток. Четвертая фракция образована плазмой с тромбоцитами. Слой лимфоцитов осторожно собирается по всей площади сечения пробирки, переносится в чистую, сухую центрифужную пробирку.

Необходимые реагенты, материалы и оборудование: Раствор PBS- Верографин с удельной плотностью ρ = 1, 078г/см3; стерильные пластиковые или стеклянные пробирки емкостью 5–10 мл; центрифуга; центрифужные пробирки.

Данный способ может с успехом использоваться в ветеринарной медицине.

Таким образом, предлагаемый способ получения лимфоцитов соответствует критериям изобретения "Новизна", "Изобретательский уровень", "Промышленная применимость".

Способ выделения мононуклеаров из крови крупного рогатого скота, включающий отбор крови, нанесение пробы на градиент плотности и центрифугирование, содержащих высокомолекулярное вещество, отличающийся тем, что цельную кровь наслаивают на градиент PBS-Верографин, в соотношении «кровь-градиент» 1:1, центрифугируют при 3000 оборотах в течение 30 мин, при этом градиент представляет собой смесь верографина с фосфатно-солевым буфером, взятых в отношении 10 мл 76% раствора верографина, 43,1 мл дистиллированной воды и 0,45 мл фосфатно-солевого буфера.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 51-60 из 72.
06.07.2019
№219.017.a6f7

Белково-углеводная основа с зерновыми компонентами для структурированных десертов

Изобретение относится к пищевой промышленности. Предложена белково-углеводная основа с зерновыми компонентами для структурированных десертов, включающая структурообразователь, пенообразователь, молоко, ванилин, льняную или амарантовую муку и в качестве подсластителя фруктозу. Также предложена...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002693748
Дата охранного документа: 04.07.2019
17.07.2019
№219.017.b580

Способ производства хлебобулочных изделий

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ производства хлебобулочных изделий включает смешивание муки, воды, необходимых по рецептуре компонентов, замес теста, его брожение, разделку, расстойку и выпечку полученных тестовых заготовок. В качестве растительной добавки используют муку...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002694591
Дата охранного документа: 16.07.2019
02.10.2019
№219.017.ce4d

Способ получения суфле куриного функционального назначения

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к приготовлению суфле куриного функционального назначения на предприятиях общественного питания, и может быть использовано в безглютеновом, диетическом питании. Способ предусматривает двойное измельчение на мясорубке отварного филе...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002700638
Дата охранного документа: 18.09.2019
02.10.2019
№219.017.ce7e

Способ производства сдобного печенья сеталика

Изобретение относится к области пищевой промышленности. Способ производства сдобного печенья предусматривает приготовление эмульсии путем взбивания сахара белого, маргарина, меланжа, введения в нее муки, перемешивания и добавления углеаммонийной соли, разрыхлителя, ванильного сахара. В качестве...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002700647
Дата охранного документа: 18.09.2019
19.10.2019
№219.017.d863

Способ производства безоболочных колбасок для функционального питания

Изобретение относится к мясной промышленности, а именно к производству безоболочных колбасок на основе гидроколлоидной технологии из экстракта морских водорослей, волокон и стабилизаторов. Способ производства безоболочных сыровяленых колбасок характеризуется тем, что мясное сырье измельчают на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002703484
Дата охранного документа: 17.10.2019
26.11.2019
№219.017.e6a0

Способ профилактической обработки зерна

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Предложен способ профилактической обработки зерна, производимый в среде анолита, полученного на установке типа СТЭЛ, с последующей мойкой и сушкой зерна до влажности не более 14%. Обработку зерна проводят ультразвуком низких частот 24- 26 кГц с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002707130
Дата охранного документа: 22.11.2019
26.11.2019
№219.017.e6a2

Способ производства бисквитно-сбивного печенья

Изобретение относится к пищевой промышленности. Предложен способ производства печенья, в котором взбивают яичный меланж с рафинадной пудрой в течение 5-7 мин до увеличения объема смеси в 2,5-3 раза, вносят муку пшеничную 1-го сорта, муку льняную и муку из семян пайзы, взятые в соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002707132
Дата охранного документа: 22.11.2019
06.12.2019
№219.017.e9e3

Устройство определения угла поворота секции дождевальной машины кругового действия

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения. Устройство определения угла поворота секции дождевальной машины кругового действия содержит шарнир карданного типа (1). На неподвижной части (2) шарнира (1) установлен ультразвуковой приемопередатчик (3) с изолирующим экраном...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002707919
Дата охранного документа: 02.12.2019
13.01.2020
№220.017.f4bb

Способ учета златогузки в лесных и садовых насаждениях

Изобретение относится к лесному и садоводческому хозяйству и может быть использовано для защиты растений от вредителя. Способ определения заселенности лесных и садовых насаждений златогузкой заключается в установлении численности вредителя на исследуемом участке насаждений. В насаждении на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002710696
Дата охранного документа: 10.01.2020
01.02.2020
№220.017.fc65

Изделие из возвратных хлебобулочных отходов

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к хлебопекарному производству. Изделие из возвратных хлебобулочных отходов изготовлено из хлебобулочных отходов, молочной сыворотки, растительного масла, муки ржаной или муки ржаной в смеси с гречневой мукой, или рисовой мукой, или крупой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002712512
Дата охранного документа: 29.01.2020
Показаны записи 11-20 из 20.
17.02.2018
№218.016.2a92

Способ определения величины объемного заряда облаков

Изобретение относится к метеорологии и может быть использовано в системах мониторинга опасных явлений погоды, а также в исследованиях электрических процессов в атмосфере и геофизических исследованиях. Достигаемый технический результат – упрощение определения объемной плотности грозоопасного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002642830
Дата охранного документа: 29.01.2018
10.05.2018
№218.016.381d

Лекарственная композиция и способ ее применения для профилактики и терапии диспепсических состояний новорожденных телят, полученных от инфицированных лейкозом коров

Группа изобретений относится к ветеринарной медицине и предназначена для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят, полученных от инфицированных и больных энзоотическим лейкозом коров. Используется лекарственная композиция, содержащая, мас.% на 100 мл...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646831
Дата охранного документа: 07.03.2018
26.10.2018
№218.016.9650

Способ нейрорепарации при пояснично-крестцовом синдроме

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к неврологии и ортопедии. Осуществляют забор 4-5 мл крови у животного. Отделяют из крови 2,5-3 мл обогащенной тромбоцитами аутоплазмы, которую вводят в зону выхода корешков спинномозговых нервов из фораминальных отверстий. При этом животным до 4 кг...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002670680
Дата охранного документа: 24.10.2018
16.01.2019
№219.016.b01a

Способ определения границ резекции при лечении остеосаркомы

Изобретение относится к области медицины, а конкретнее к области онкологии, травматологии и ортопедии, и может быть использовано при хирургическом лечении больных с остеосаркомой. Способ определения границы резекции при лечении остеосаркомы, при котором в предоперационном периоде выполняют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677064
Дата охранного документа: 15.01.2019
03.03.2019
№219.016.d233

Способ обработки ofdm сигналов и устройство для его реализации

Изобретение относится к технике связи и предназначено для обработки OFDM сигналов в условиях воздействия внутрисистемных помех, обусловленных асинхронной работой передающих устройств. Технический результат заключается в повышении надежности связи за счет снижения влияния внутрисистемных помех,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680971
Дата охранного документа: 01.03.2019
11.03.2019
№219.016.d9d6

Способ управления артиллерийским орудием при стрельбе

Способ может быть использован в вооружении для управления артиллерийскими снарядами. Способ включает определение координат цели целеуказателем и передачу их в пульт командира огневой позиции. В пульте командира огневой позиции рассчитывают установки стрельбы для цели и орудия и передают...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002379614
Дата охранного документа: 20.01.2010
09.05.2019
№219.017.4e68

Препарат для лечения и профилактики дисбактериальных состояний кишечника у птиц

Изобретение относится к ветеринарии. Препарат для лечения и профилактики дисбактериальных состояний кишечника у птиц содержит инулин, приготовленный на молочной сыворотке, закваску живых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium, приготовленную на обезжиренном молоке,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002410105
Дата охранного документа: 27.01.2011
24.11.2019
№219.017.e623

Система и способ проверки эцп файла

Изобретение относится к области проверки сертификатов ЭЦП файлов. Техническим результатом является снижение ошибок первого рода при определении категории файла, передаваемого по сети через устройство передачи данных. В способе признают при помощи средства проверки сертификат ЭЦП обнаруженного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002706873
Дата охранного документа: 21.11.2019
26.11.2019
№219.017.e6a0

Способ профилактической обработки зерна

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Предложен способ профилактической обработки зерна, производимый в среде анолита, полученного на установке типа СТЭЛ, с последующей мойкой и сушкой зерна до влажности не более 14%. Обработку зерна проводят ультразвуком низких частот 24- 26 кГц с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002707130
Дата охранного документа: 22.11.2019
08.12.2019
№219.017.eb1f

Система и способ стойкой к атакам проверки эцп файлов

Изобретение относится к вычислительной технике. Технический результат заключается в обеспечении проверки ЭЦП файла, осуществляемой при обнаружении атаки в отношении системных средств проверки ЭЦП. Способ проверки ЭЦП файла в условиях атаки на вычислительное устройство пользователя содержит...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002708353
Дата охранного документа: 05.12.2019
+ добавить свой РИД