(Z)-2((4-R-5-R-3-(ЭТОКСИКАРБОНИЛ)ТИОФЕН-2-ИЛ)АМИНО)-4-ОКСО-4-R-БУТ-2-ЕНОВЫЕ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретения относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса 2-амино-4-арил-4-оксобутановых кислот, а именно к (Z)-2-((4-R¹-5-R²-3-(этоксикарбонил)тиофен-2-ил)амино)-4-оксо-4-R³-бут-2-еновым кислотам 1-3 общей формулы:

R^l+R²=(СН₂)₄₎ R³=4-МеС₆Н₅(1); R^l=Ph, R²=Н,

R³=4-BrC₆H₅(2); R^l=Me, R²=Me, R³=4-ClC₆H₅(3).

обладающие противомикробной активностью, что позволяет предположить их использование в медицине в качестве лекарственного средства с противомикробными свойствами.

Аналогом по структуре заявляемым соединениям является (Z)-2-((2,4-динитрофенил)амино)-4-оксо-4-(4-хлорфенил)бут-2-еновая кислота 4, обладающая противомикробной активностью [Химико-фармацевтический журнал, 2002, Т. 36, №11 С. 28-303] формулы:

Приведены данные по противомикробной активности соединения 4:

Эталоном сравнения был выбран фенилсалицилат формулы:

которое широко применяется в лечебной практике, и являются аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 950].

Задачей изобретения является поиск в ряду производных 2-амино-4-арил-4-оксобутановых кислот веществ с выраженным противомикробным действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением (Z)-4-оксо-4-(п-толил)-2-((3-(этоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)амино)бут-2-еновой кислоты, (Z)-4-(4-бромфенил)-4-оксо-2-((4-фенил-3-(этоксикарбонил)тиофен-2-ил)амино)бут-2-еновой кислоты и (Z)-2-((4,5-диметил-3-(этоксикарбонил)тиофен-2-ил)амино)-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-бут-2-еновой кислоты, которые обладают противомикробной активностью.

Заявляемые соединения 1-3 синтезируют взаимодействием замещенных производных 2,4-диоксобутановой кислоты с 4,5-дизамещенными этиловыми эфирами 2-амино-тиофен-3-карбоновой кислоты в среде этилового спирта при 60°С с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме:

R¹+R²=(СН₂)₄, R³=4-МеС₆Н₅(1); R^l=Ph, R²=Н,

R³=4-BrC₆H₅(2); R^l=Me, R²=Me, R³=4-ClC₆H₅(3).

Пример 1. Получения соединения 1. К раствору 2.06 г (0.01 моль) 4-(4-метилфенил)-2,4-диоксобутановой кислоты в 10 мл этилового спирта прибавляют раствор 2.25 г (0.01 моль) этилового эфира 2-амино-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-3-карбоновой кислоты в 10 мл того же растворителя и выдерживают при комнатной температуре 24 часа. Смесь охлаждают до 0°С, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из ацетонитрила. Выход 73%. Т_разл.=188-190°С. Найдено, %: С 63.92, Н 5.66, N 3.35, S 7.77. C₂₂H₂₃NO₅S. Вычислено, %: С 63.91, Н 5.61, N 3.39, S 7.75. ИК спектр (ФСМ 1202, вазелиновое масло, v, см^-1): 1715 (COOEt), 3442 (NH). Спектр ЯМР ¹Н (Varian Mercury300, 300 МГц, DMSO_d6), δ, м.д.: 1.33 (т, J 7.2 Гц, 3Н, Me), 1.74 (м, 4Н, 2СН₂), 2.39 (с, 3Н, Me), 2.60 (м, 2Н, СН₂), 2.71 (м, 2Н, СН₂), 4.32 (кв, J 7.2 Гц, 2Н, CH₂O), 6.51 (с, 1H, С=СН), 7.33 (м, J 7.8 Гц, 2Н, H_Ar), 7.90 (м, J 7.8 Гц, 2Н, H_Ar), 12.75 (с, 1Н, NH). Полученное соединение 1 представляет собой красное кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане.

Пример 2. Соединение 2 получают аналогично. Выход 86%. Т_разл.=186-188°С. Найдено, %: С 55.22, Н 3.66, N 2.79, S 6.39. C₂₃H₁₈BrNO₅S. Вычислено, %: С 55.21, Н 3.63, N 2.80, S 6.41. ИК спектр (ФСМ 1202, вазелиновое масло, v, см^-1): 1709 (COOEt), 3406 уш. (NH). Спектр ЯМР ¹Н, (Varian Mercury300, 300 МГц, DMSO_d6), δ, м.д.: 1.02 (т, J 7.1 Гц, 3Н, Me), 4.12 (кв, J 7.1 Гц, 2Н, CH₂O), 6.58 (с, 1Н, С=СН), 7.07 (с, 1H, H_Ar), 7.34 (м, 5Н, H_Ar), 7.73 (м, J 8.6 Гц, 2Н, H_Ar), 7.96 (м, J 8.6 Гц, 2Н, H_Ar), 12.70 (с, 1Н, NH). Полученное соединение 2 представляет собой красное кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане.

Пример 3. Соединение 3 получают аналогично. Выход 89%. Т_разл.=155-158°С. Найдено, %: С 55.97, Н 4.43, N 3.45, S 7.82. C₁₉H₁₈ClNO₅S. Вычислено, %: С 55.95, Н 4.45, N 3.43, S 7.86. ИК спектр (ФСМ 1202, вазелиновое масло, v, см^-1): 1732 (COOEt), 3397 (NH). Спектр ЯМР ¹Н, (Varian Mercury300, 300 МГц, DMSO_d6), δ, м.д.: 1.33 (т, J 7.1 Гц, 3Н, Me), 2.19 (с, 3Н, Me), 2.25 (с, 3Н, Me), 4.33 (кв, J 7.1 Гц, 2Н, CH₂O), 6.49 (с, 1Н С=СН), 7.63 (м, J 8.6 Гц, 2Н, H_Ar), 8.01 (м, J 8.6 Гц, 2Н, H_Ar), 12.71 (с, 1Н, NH). Полученное соединение 3 представляет собой красное кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане.

Пример 4. Определение антимикробной активности проводили методом двукратных серийных разведений [Першин Г.Н. «Методы экспериментальной химиотерапии, 1971, с. 109] на музейных тест - культурах: Staphylococcus aurous, штамм 906; Escherichia coli, штамм 1257 (ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», г. Москва). В опытах использовали 18 часовые агаровые тест - культуры (5*10⁵ микробных тел в 1 мл среды). Для исследования брали растворы соединений 1-3 в диметилформамиде (ДМФА). Максимальная из испытанных концентраций была 1000 мкг/мл. Пробирки инкубировали при 37°С с последующим высевом через 20 часов и 7 суток в пробирки со скошенным мясопептонным агаром. Учет результатов проводили по наличию и характерному росту культур микроорганизмов на питательной среде.

Пример 5. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединений 1-3 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 109-117 (1971)]. Соединения 1-3 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемых соединений 1-3 ЛД₅₀ составляет > 1500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов соединения 1-3 относятся к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977. - с. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Противомикробная активность соединений 1-3.

Как видно из таблицы, заявляемое соединения 1-3 превышает по противомикробной активности препарат сравнения (Фенилсалицилат) в 24 раз по отношению к St. aureus, а также воздействует на Е. coli. Таким образом, (Z)-2-((4-R¹-5-R²-3-(этоксикарбонил)тиофен-2-ил)амино)-4-оксо-4-R³-бут-2-еновые кислоты 1-3 проявляет более высокую активность по сравнению со структурным аналогом и эталоном сравнения, что делает возможным их использование для создания новых лекарственных средств, целенаправленного действия.