ПИРИДИНЫ, ПИРИМИДИНЫ И ПИРАЗИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ТИРОЗИНКИНАЗЫ БРУТОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к соединениям пиридина, пиримидина и пиразина, пригодным в качестве ингибиторов тирозинкиназы Брутона (BTK). Изобретение также относится к фармацевтически приемлемым композициям, содержащим соединения по настоящему изобретению, и способам применения указанных соединений в лечении различных расстройств.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Протеинкиназы составляют одно из самых больших семейств ферментов в организме человека и регулируют множество различных процессов сигнализации посредством добавления к белкам фосфатных групп (T. Hunter, Cell 1987 50:823-829). В частности, тирозинкиназы фосфорилируют белки по фенольному фрагменту остатков тирозина. Семейство тирозинкиназы включает членов, контролирующих клеточный рост, миграцию и дифференциацию. С аномальной активностью киназы связаны различные заболевания человека, включая рак, аутоиммунные и воспалительные заболевания. Ввиду того, что протеинкиназы входят в число ключевых регуляторов клеточной сигнализации, они представляют собой мишень для модуляции клеточной функции с помощью низкомолекулярных ингибиторов киназ, и таким образом, представляют собой хорошие мишени лекарственного средства. В дополнение к лечению киназа-опосредованных патологических процессов, селективные и эффективные ингибиторы активности киназы также пригодны для исследования процессов клеточной сигнализации и определения других клеточных мишеней, представляющих терапевтический интерес.

Существуют убедительные доказательсва того, что B-клетки играют ключевую роль в патогенезе аутоиммунного и/или воспалительного заболевания. Терапевтические средства на основе белков, уничтожающие B-клетки, такие как ритуксан, эффективны в отношении воспалительных заболеваний, обусловленных аутоантителом, таких как ревматоидный артрит (Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477). Таким образом, возможно, ингибиторы протеинкиназы, играющие роль в активации B-клеток, являются пригодными терапевтическими средствами для патологии заболеваний, опосредованных B-клетками, такой как продуцирование аутоантитела.

Передача сигнала через B-клеточный рецептор (BCR) контролирует ряд B-клеточных ответов, включая пролиферацию и дифференциацию в зрелых клетках, продуцирующих антитела. BCR являютется ключевым регулятором B-клеточной активности, и аберрантная сигнализация может вызвать нарушение B-клеточной пролиферации и образование патогенных аутоантител, приводящих к многочисленным аутоиммунным и/или воспалительным заболеваниям. Тирозинкиназа Брутона(BTK) является киназой, не связанной с BCR, то есть проксимальная к мембране и расположенная непосредственно после BCR. Как обнаружено, отсутствие BTK блокирует сигнализацию BCR, и, таким образом, ингибирование BTK может быть подходящим терапевтическим подходом для блокировки патологических процессов, опосредованных B-клетками. Кроме того, имеются сведения о том, что BTK играет роль в апоптозе (Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49) и, таким образом, ингибиторы тирозинкиназы Брутона могли бы быть применимы для лечения определенных B-клеточных лимфом и лейкемий (Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837).

BTK является членом Tec-семейства тирозинкиназ, и, как обнаружено, является решающим регулятором раннего развития B-клеток и активации и выживания зрелых B-клеток (Khan et al. Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611). Мутация BTK у людей приводит к состоянию агаммаглобулинемии, сцепленной с Х-хромосомой (XLA) (рассмотренном в Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431 и Lindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200). У этих пациентов ослаблена имунная система и выявлено нарушенное созревание B-клеток, пониженный уровень иммуноглобулина и B-клеток периферии, ослабленный T-независимый клеточный иммунный ответ, а также ослабленная мобилизация кальция после стимуляции BCR.

Доказательства роли BTK в аутоиммунных и воспалительных заболеваниях представлены в моделях мышей с дефицитом BTK. В предклинических моделях мышей с системной красной волчанкой (СКВ), у мышей с дефицитом BTK обнаружено выраженное снижение прогрессирования заболевания. В дополнение, мыши с дефицитом BTK устойчивы к коллаген-индуцированному артриту (Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459). Выбранный ингибитор BTK показал дозозависимую эффективность у моделей мышей с артритом (Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61).

BTK также экспрессируется клетками, за исключением B-клеток, которые могут участвовать в патологических процессах. BTK является ключевым компонентом сигнализации Fc-гамма в миелоидных клетках. Например, BTK экспрессируется тучными клетками, и тучные клетки, полученные из костного мозга с дефицитом BTK, демонстрируют нарушенную антиген-индуцированную дегрануляцию (Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261). Это свидетельствует о том, что BTK может быть пригоден для лечения патологических реакций тучных клеток, таких как аллергия и астма. Также моноциты у пациентов с XLA, у которых отсутствует активность BTK, показывают снижение производства TNF-альфа после стимуляции (Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003). Таким образом, TNF-альфа-опосредованное воспаление можно модулировать с помощью низкомолекулярных ингибиторов тирозинкиназы Брутона.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящее время обнаружено, что соединения по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые композиции эффективны в качестве ингибиторов BTK. Такие соединения имеют общую формулу I:

или их фармацевтически приемлемая соль, где каждый из X, X1, X2, Y, L и R1 является, как указано и описано в вариантах осуществления настоящего изобретения.

Соединения по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые композиции пригодны для лечения различных заболеваний, расстройств или состояний, связанных с BTK. Такие заболевания, расстройства или состояния включают те, которые описаны в настоящем документе.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ КОНКРЕТНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1.Общее описание соединений по изобретению

В определенных аспектах настоящее изобретение относится к ингибиторам BTK. В некоторых вариантах осуществления такие соединения включают те, которые имеют формулы, описываемые в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемую соль, где каждая переменная является, как указано и описано в настоящем документе.

2.Соединения и определения

Соединения по настоящему изобретению включают те, которые в целом описаны выше, и дополнительно проиллюстрированы по классам, подклассам и видам, описываемым в настоящем документе. В рамках изобретения применяются следующие определения, если не указано иначе. В целях настоящего изобретения химические элементы определены в соответствии с периодической системой элементов, версией CAS, Руковдством по химии и физике, 75^е изд. Дополнительно, общие принципы органической химии описаны в «Organic Chemistry», Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, и «March’s Advanced Organic Chemistry», 5^е изд., изд.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, Нью-Йорк: 2001, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки.

Термин «алифатический» или «алифатическая группа» в рамках изобретения означает линейную (т.е. неразветвленную) или разветвленную, замещенную или незамещенную углеводородную цепь, являющуюся полностью насыщенной или содержащую одну или несколько единиц ненасыщенности, или моноциклический углеводород или бициклический углеводород, являющийся полностью насыщенным или содержащий одну или несколько единиц ненасыщенности, но не являющийся ароматическим (также обозначенный в настоящем документе как «карбоциклический», «циклоалифатический» или «циклоалкильный»), с единственной точкой присоединения к остальной части молекулы. Если не указано иначе, алифатические группы содержат 1-6 атомов алифатического углерода. В некоторых вариантах осуществления изобретения алифатические группы содержат 1-5 атомов алифатического углерода. В других вариантах осуществления изобретения алифатические группы содержат 1-4 атомов алифатического углерода. В других вариантах осуществления изобретения алифатические группы содержат 1-3 атомов алифатического углерода, и еще в других вариантах осуществления изобретения алифатические группы содержат 1-2 атомов алифатического углерода. В некоторых вариантах осуществления изобретения «циклоалифатический» (или «карбоциклический» или «циклоалкильный») относится к моноциклическому C₃-C₆ углеводороду, являющемуся полностью насыщенным или содержащему одну или несколько единиц ненасыщенности, но не являющемуся ароматическим, с единственной точкой присоединения к остальной части молекулы. Примерами алифатических групп являются линейные или разветвленные, замещенные или незамещенные C₁-C₈ алкильные, C₂-C₈ алкенильные, C₂-C₈ алкинильные группы и их гибриды, такие как (циклоалкил)алкил, (циклоалкенил)алкил или (циклоалкил)алкенил.

Термин «низший алкил» относится к C_1-4 неразветвленной или разветвленной алкильной группе. Примерами низших алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил и трет-бутил.

Термин «низший галогеналкил» относится к C_1-4 неразветвленной или разветвленной алкильной группе, замещенной одним или несколькими атомами галогена.

Термин «гетероатом» означает один или несколько гетероатомов кислорода, серы, азота или фосфора (включая любую окисленную форму азота, серы или фосфора; кватернизированную форму любого основного азота или; замещаемый азот гетероциклического кольца, например, N (как в 3,4-дигидро-2H-пирролиле), NH (как в пирролидиниле) или NR⁺ (как в N-замещенном пирролидиниле)).

Термин «ненасыщенный» в рамках изобретения означает, что молекула имеет одну или несколько единиц ненасыщенности.

В рамках изобретения термин «двухвалентная C_1-8 (или C_1-6) насыщенная или ненасыщенная, неразветвленная или разветвленная углеводородная цепь» относится к двухвалентным алкиленовым, алкениленовым и алкиниленовым цепям, являющимся неразветвленными или разветвленными, как определено в настоящем документе.

Термин «алкилен» относится к двухвалентной алкильной группе. «Алкиленовая цепь» представляет собой полиметиленовую группу, т.е., -(CH₂)_n-, где n является положительным целым числом, предпочтительно от 1 до 6, от 1 до 4, от 1 до 3, от 1 до 2 или от 2 до 3. Замещенная алкиленовая цепь представляет собой полиметиленовую группу, в которой один или несколько метиленовых атомов водорода замещены заместителем. Подходящие заместители включают те, которые описаны ниже для замещенной алифатической группы.

Термин «алкенилен» относится к двухвалентной алкенильной группе. Замещенная алкениленовая цепь представляет собой полиметиленовую группу, содержащую по меньшей мере одну двойную связь, в которой один или несколько атомов водорода замещены заместителем. Подходящие заместители включают те, которые описаны ниже для замещенной алифатической группы.

Термин «галоген» означает F, Cl, Br или I.

Термин «арил», используемый по отдельности или в составе более крупной молекулы, как в «аралкиле», «аралкокси» или «арилоксиалкиле», относится к моноциклическим и бициклическим циклическим системам с общим количеством кольцевых членов от пяти до четырнадцати, где по меньшей мере одно кольцо в системе является ароматическим и где каждое кольцо в системе содержит от трех до семи кольцевых членов. Термин «арил» используют взаимозаменяемо с термином «арильное кольцо». В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения «арил» относится к ароматической циклической системе. Примерами арильных групп являются фенил, бифенил, нафтил, антрацил и т.п., которые необязательно включают один или несколько заместителей. Рамки термина «арил» при использовании в настоящем документе также включают группу, в которой ароматическое кольцо связано с одним или несколькими неароматическими кольцами, такими как инданил, фталимидил, нафтимидил, фенантридинил или тетрагидронафтил и т.п.

Термины «гетероарил» и «гетероар-», используемые по отдельности или в составе более крупной молекулы, например, «гетероаралкил» или «гетероаралкокси», относятся к группам, имеющим 5-10 кольцевых атомов, предпочтительно 5, 6 или 9 кольцевых атомов; имеющим 6, 10 или 14 π-электронов в циклической сопряженной системе; и имеющим в дополнение к атомам углерода один-пять гетероатомов. Термин «гетероатом» относится к азоту, кислороду или сере, и включает любую окисленную форму азота или серы, и любую кватернизированную форму основного азота. Гетероарильные группы в качестве неограничивающих примеров включают тиенил, фуранил, пирролил, имидазолил, пиразолил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, изотиазолил, тиадиазолил, пиридил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, индолизинил, пуринил, нафтиридинил и птеридинил. Термины «гетероарил» и «гетероар-» в рамках изобретения также включают группы, в которых гетероароматическое кольцо присоединено к одному или нескольким арильным, циклоалифатическим или гетероциклильным кольцам, где радикал или точка присоединения находится на гетероароматическом кольце. Неограничивающие примеры включают индолил, изоиндолил, бензотиенил, бензофуранил, дибензофуранил, индазолил, бензимидазолил, бензтиазолил, хинолил, изохинолил, ционнолинил, фталазинил, хиназолинил, хиноксалинил, 4H-хинолизинил, карбазолил, акридинил, феназинил, фенотиазинил, феноксазинил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил и пиридо[2,3-b]-1,4-оксазин-3(4H)-он. Гетероарильная группа является необязательно моно- или бициклической. Термин «гетероарил» используют взаимозаменяемо с терминами «гетероарильное кольцо», «гетероарильная группа» или «гетероароматический», любой из этих терминов включает кольца, являющиеся необязательно замещенными. Термин «гетероаралкил» относится к алкильной группе, замещенной гетероарилом, где части алкила и гетероарила независимо являются необязательно замещенными.

В рамках изобретения термины «гетероцикл», «гетероциклил», «гетероциклический радикал» и «гетероциклическое кольцо» используют взаимозаменяемо, и они обозначают стабильную 5-7-членную моноциклическую или 7-10-членную бициклическую гетероциклическую молекулу, которая является насыщенной или частично ненасыщенной, и имеет, в дополнение к атомам углерода, один или несколько, предпочтительно от одного до четырех, гетероатомов, как определено выше. При использовании по отношению к кольцевому атому гетероцикла, термин «азот» включает замещенный азот. В качестве примера, в насыщенном или частично ненасыщенном кольце с 0-3 гетероатомами, выбранными из кислорода, серы или азота, азот является N (как в 3,4-дигидро-2H-пирролиле), NH (как в пирролидинил) или ⁺NR (как в N-замещенном пирролидиниле).

Гетероциклическое кольцо может быть присоединено к его боковой группе по любому гетероатому или атому углерода, образуя в результате стабильную структуру, или любой из кольцевых атомов может быть необязательно замещенным. Примеры таких насыщенных или частично ненасыщенных гетероциклических радикалов в качестве неограничивающих примеров включают тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил пирролидинил, пиперидинил, пирролинил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, декагидрохинолинил, оксазолидинил, пиперазинил, диоксанил, диоксоланил, диазепинил, оксазепинил, тиазепинил, морфолинил и хинуклидинил. Термины «гетероцикл», «гетероциклил», «гетероциклильное кольцо», «гетероциклическая группа», «гетероциклическая молекула» и «гетероциклический радикал» используют взаимозаменяемо в настоящем документе, и они также включают группы, в которых гетероциклильное кольцо присоединено к одному или нескольким арильным, гетероарильным или циклоалифатическим кольцам, таким как индолинил, 3H-индолил, хроманил, фенантридинил или тетрагидрохинолинил, где радикал или точка присоединения находится на гетероциклильном кольце. Гетероциклильная группа является необязательно моно- или бициклической. Термин «гетероциклилалкил» относится к алкильной группе, замещенной гетероциклилом, где части алкила и гетероциклила независимо являются необязательно замещенными.

В рамках изобретения термин «частично ненасыщенный» относится к кольцевой молекуле, включающей по меньшей мере одну двойную или тройную связь. Термин «частично ненасыщенный» предназначен для включения колец с многочисленными участками ненасыщенности, но не предназначен для включения арильных или гетероарильных остатков, как указано в настоящем документе.

Как описано в настоящем документе, определенные соединения по изобретению содержат «необязательно замещенные» молекулы. В основном, термин «замещенный» независимо от предшествующего ему термина «необязательно» означает, что один или несколько атомов водорода указанной молекулы замещены подходящим заместителем. Термин «замещенный» применяется по отношению к одному или нескольким атомам водорода, которые явно или неявно определены в структуре (например, относится к по меньшей мере ; и относится к по меньшей мере , или . Если не указано иначе, «необязательно замещенная» группа имеет подходящий заместитель на каждом замещаемом положении группы, и когда более чем одно положение в любой данной структуре замещено более чем одним заместителем, выбранным из указанной группы, заместитель является или одинаковым, или различным в каждом положении. Предполагаемыми по настоящему изобретению комбинациями заместителей являются те, которые приводят к образованию стабильных или химически осуществимым соединениям. Термин «стабильный» в рамках изобретения относится к соединениям, которые в значительной степени не изменяются при условиях, обеспечивающих их получение, детектирование и в определенных вариантах осуществления изобретения восстановление, очистку и использование для одной или нескольких целей, описываемых в настоящем документе.

Подходящими одновалентными заместителями на замещаемом атоме углерода «необязательно замещенной» группы являются независимо дейтерий; галоген; -(CH₂)_0-4R°; -(CH₂)_0-4OR°; -O(CH₂)_0-4R^o, -O-(CH₂)_0-4C(O)OR°; -(CH₂)_0-4CH(OR°)₂; -(CH₂)_0-4SR°; -(CH₂)_0-4Ph, которые необязательно замещены R°; -(CH₂)_0-4O(CH₂)_0-1Ph, который необязательно замещен R°; -CH=CHPh, который необязательно замещен R°; -(CH₂)_0-4O(CH₂)_0-1-пиридил, который необязательно замещен R°; -NO₂; -CN; -N₃; -(CH₂)_0-4N(R°)₂; -(CH₂)_0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH₂)_0-4N(R°)C(O)NR°₂; -N(R°)C(S)NR°₂; -(CH₂)_0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°₂; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH₂)_0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH₂)_0-4C(O)OR°; -(CH₂)_0-4C(O)SR°; -(CH₂)_0-4C(O)OSiR°₃; -(CH₂)_0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH₂)_0-4SR°, SC(S)SR°; -(CH₂)_0-4SC(O)R°; -(CH₂)_0-4C(O)NR°₂; -C(S)NR°₂; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH₂)_0-4OC(O)NR°₂; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH₂C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH₂)_0-4SSR°; -(CH₂)_0-4S(O)₂R°; -(CH₂)_0-4S(O)₂OR°; -(CH₂)_0-4OS(O)₂R°; -S(O)₂NR°₂; -(CH₂)_0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)₂NR°₂; -N(R°)S(O)₂R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°₂; -P(O)₂R°; -P(O)R°₂; -OP(O)R°₂; -OP(O)(OR°)₂; SiR°₃; -(C_1-4 неразветвленный или разветвленный алкилен)O-N(R°)₂; или -(C_1-4 неразветвленный или разветвленный алкилен)C(O)O-N(R°)₂, где каждый из R° необязательно замещен, как указано ниже, и является независимо водородом, C_1-6 алифатическим углеводородом, -CH₂Ph, -O(CH₂)_0-1Ph, -CH₂-(5-6 членным гетероарильным кольцом) или 5-6-членным насыщенным, частично ненасыщенным или арильным кольцом с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или, несмотря на определение выше, два независимо присутствующих R°, взятые в совокупности с их промежуточным(и) атомом(ами), образуют 3-12-членное насыщенное, частично ненасыщенное или арильное моно- или бициклическое кольцо с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, которое является необязательно замещенными, как указано ниже.

Подходящими одновалентными заместителями на R° (или кольце, образованном совокупностью двух независимо присутствующих R° с их промежуточными атомами), являются независимо дейтерий, галоген, -(CH₂)_0-2R^•, -(галоR^•), -(CH₂)_0-2OH, -(CH₂)_0-2OR^•, -(CH₂)_0-2CH(OR^•)₂; -O(галоR^•), -CN, -N₃, -(CH₂)_0-2C(O)R^•, -(CH₂)_0-2C(O)OH, -(CH₂)_0-2C(O)OR^•, -(CH₂)_0-2SR^•, -(CH₂)_0-2SH, -(CH₂)_0-2NH₂, -(CH₂)_0-2NHR^•, -(CH₂)_0-2NR^•₂, -NO₂, -SiR^•₃, -OSiR^•₃, -C(O)SR^•_, -(C_1-4 неразветвленный или разветвленный алкилен)C(O)OR^• или -SSR^•, где каждый из R^• является незамещенным или, где ему предшествует «гало», замещен только одним или несколькими атомами галогена и независимо выбран из C_1-4 алифатического, -CH₂Ph, -O(CH₂)_0-1Ph или 5-6-членного насыщенного, частично ненасыщенного или арильного кольца с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы. Подходящие двухвалентные заместители на насыщенном атоме углерода R° включают =O и =S.

Подходящие двухвалентные заместители на насыщенном атоме углерода «необязательно замещенной» группы включают следующие: =O, =S, =NNR^*₂, =NNHC(O)R^*, =NNHC(O)OR^*, =NNHS(O)₂R^*, =NR^*, =NOR^*, -O(C(R^*₂))_2-3O- или -S(C(R^*₂))_2-3S-, где каждый независимо присутствующий R^* выбран из водорода, C_1-6 алифатического, замещенного, как указано ниже, или незамещенного 5-6-членного насыщенного, частично ненасыщенного или арильного кольца с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы. Подходящие двухвалентные заместители, связанные с соседними заменяемыми атомами углерода «необязательно замещенной» группы, включают: -O(CR^*₂)_2-3O-, где каждый независимо присутствующий R^* выбран из водорода, C_1-6 алифатического, необязательно замещенного, как указано ниже, или незамещенного 5-6-членного насыщенного, частично ненасыщенного или арильного кольца с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы.

Подходящие заместители на алифатической группе R^* включают галоген, -R^•, -(галоR^•), -OH, -OR^•, -O(галоR^•), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR^•, -NH₂, -NHR^•, -NR^•₂ или -NO₂, где каждый из R^• незамещен или, когда ему предшествует «гало», замещен только одним или несколькими атомами галогена, и является независимо C_1-4 алифатическим, -CH₂Ph, -O(CH₂)_0-1Ph или 5-6-членным насыщенным, частично ненасыщенным или арильным кольцом с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы.

Подходящие заместители на замещаемом атоме азота «необязательно замещенной» группы включают -R^†, -NR^†₂, -C(O)R^†, -C(O)OR^†, -C(O)C(O)R^†, -C(O)CH₂C(O)R^†, -S(O)₂R^†, -S(O)₂NR^†₂, -C(S)NR^†₂, -C(NH)NR^†₂ или -N(R^†)S(O)₂R^†; где каждый из R^† является независимо водородом, C_1-6 алифатическим, необязательно замещенным, как указано ниже, незамещенным -OPh или незамещенным 5-6-членным насыщенным, частично ненасыщенным или арильным кольцом с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или, несмотря на определение выше, два независимо присутствующих R^†, взятые в совокупости с промежуточным(и) атомом(ами), образуют незамещенное 3-12-членное насыщенное, частично ненасыщенное или арильное моно- или бициклическое кольцо с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы.

Подходящими заместителями на алифатической группе R^† являются независимо галоген, -R^•, -(галоR^•), -OH, -OR^•, -O(галоR^•), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR^•, -NH₂, -NHR^•, -NR^•₂ или -NO₂, где каждый из R^• незамещен или, когда ему предшествует «гало», замещен только одним или несколькими атомами галогена, и является независимо C_1-4 алифатическим, -CH₂Ph, -O(CH₂)_0-1Ph или 5-6-членным насыщенным, частично ненасыщенным или арильным кольцом с 0-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы.

В определенных вариантах осуществления изобретения термины «необязательно замещенный», «необязательно замещенный алкил», «необязательно замещенный «необязательно замещенный алкенил», «необязательно замещенный алкинил», «необязательно замещенный карбоциклический», «необязательно замещенный арил», «необязательно замещенный гетероарил», «необязательно замещенный гетероциклический» и любая другая необязательно замещенная группа в рамках изобретения относятся к группам, замещенным или незамещенным независимым замещением одного, двух или трех или более атомов водорода типичными заместителями, включающими в качестве неограничивающих примеров:

-F, -Cl, -Br, -I, дейтерий,

-OH, защищенный гидрокси, алкокси, оксо, тиооксо,

-NO₂, -CN, CF₃, N₃,

-NH₂, защищенный амино, -NH алкил, -NH алкенил, -NH алкинил, -NH циклоалкил, -NH -арил, -NH -гетероарил, -NH -гетероциклический, -диалкиламино, -диариламино, -дигетероариламино,

-O- алкил, -O- алкенил, -O- алкинил, -O- циклоалкил, -O-арил, -O-гетероарил, -O-гетероциклический,

-C(O)- алкил, -C(O)- алкенил, -C(O)- алкинил, -C(O)- карбоциклил, -C(O)-арил, -C(O)-гетероарил, -C(O)-гетероциклил,

-CONH₂, -CONH- алкил, -CONH- алкенил, -CONH- алкинил, -CONH- карбоциклил, -CONH-арил, -CONH-гетероарил, -CONH-гетероциклил,

-OCO₂- алкил, -OCO₂- алкенил, -OCO₂- алкинил, -OCO₂- карбоциклил, -OCO₂-арил, -OCO₂-гетероарил, -OCO₂-гетероциклил, -OCONH₂, -OCONH- алкил, -OCONH- алкенил, -OCONH- алкинил, -OCONH- карбоциклил, -OCONH- арил, -OCONH- гетероарил, -OCONH- гетероциклил,

-NHC(O)- алкил, -NHC(O)- алкенил, -NHC(O)- алкинил, -NHC(O)- карбоциклил, -NHC(O)-арил, -NHC(O)-гетероарил, -NHC(O)-гетероциклил, -NHCO₂- алкил, -NHCO₂- алкенил, -NHCO₂- алкинил, -NHCO₂ - карбоциклил, -NHCO₂- арил, -NHCO₂- гетероарил, -NHCO₂- гетероциклил, -NHC(O)NH₂, -NHC(O)NH- алкил, -NHC(O)NH- алкенил, -NHC(O)NH- алкенил, -NHC(O)NH- карбоциклил, -NHC(O)NH-арил, -NHC(O)NH-гетероарил, -NHC(O)NH-гетероциклил, NHC(S)NH₂, -NHC(S)NH- алкил, -NHC(S)NH- алкенил, -NHC(S)NH- алкинил, -NHC(S)NH- карбоциклил, -NHC(S)NH-арил, -NHC(S)NH-гетероарил, -NHC(S)NH-гетероциклил, -NHC(NH)NH₂, -NHC(NH)NH- алкил, -NHC(NH)NH- -алкенил, -NHC(NH)NH- алкенил, -NHC(NH)NH- карбоциклил, -NHC(NH)NH-арил, -NHC(NH)NH-гетероарил, -NHC(NH)NH-гетероциклил, -NHC(NH)- алкил, -NHC(NH)- алкенил, -NHC(NH)- алкенил, -NHC(NH)- карбоциклил, -NHC(NH)-арил, -NHC(NH)-гетероарил, -NHC(NH)-гетероциклил,

-C(NH)NH- алкил, -C(NH)NH- алкенил, -C(NH)NH- алкинил, -C(NH)NH- карбоциклил, -C(NH)NH-арил, -C(NH)NH-гетероарил, -C(NH)NH-гетероциклил,

-S(O)- алкил, - S(O)- алкенил, - S(O)- алкинил, - S(O)- карбоциклил, - S(O)-арил, - S(O)-гетероарил, - S(O)-гетероциклил -SO₂NH₂, -SO₂NH- алкил, -SO₂NH- алкенил, -SO₂NH- алкинил, -SO₂NH- карбоциклил, -SO₂NH- арил, -SO₂NH- гетероарил, -SO₂NH- гетероциклил,

-NHSO₂- алкил, -NHSO₂- алкенил, - NHSO₂- алкинил, -NHSO₂- карбоциклил, -NHSO₂-арил, -NHSO₂-гетероарил, -NHSO₂-гетероциклил,

-CH₂NH₂, -CH₂SO₂CH₃,

-моно-, ди- или три-алкилсилил,

-алкил, -алкенил, -алкинил, -арил, -арилалкил, -гетероарил, -гетероарилалкил, -гетероциклоалкил, -циклоалкил, -карбоциклический, -гетероциклический, полиалкоксиалкил, полиалкокси, -метоксиметокси, -метоксиэтокси, -SH, -S- алкил, -S- алкенил, -S- алкинил, -S- карбоциклил, -S-арил, -S-гетероарил, -S-гетероциклилилиметилтиометил.

В рамках изобретения термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к тем солям, которые по результатам тщательной медицинской оценки, пригодны для использования при контакте с тканями человека и низших животных без неспецифической токсичности, раздражения, аллергического ответа и т.п., и находятся в соответствии с подтвержденным соотношением риск/польза. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области. Например, в S. M. Berge et al. описаны фармацевтически приемлемые соли, подробно в J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, включенные в настоящий документ посредством ссылки. Фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению включают те, которые получены из подходящих неорганических и органических кислот и оснований. Примерами фармацевтически приемлемых, нетоксичных солей присоединения кислот являются соли аминогруппы, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и хлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или посредством использования других способов, используемых в данной области, таких как ионный обмен. Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептаноат, гексанoат, йодогидрат, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурил сульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, p-толуолсульфонат, ундеканoат, валерат и т.п.

Соли, полученные из соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов, аммония и N⁺(C_1-4алкил)₄. Примеры солей щелочных или щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п. Дополнительные фармацевтически приемлемые соли включают при необходимости катионы нетоксичного аммония, четвертичного аммония и амина, образованные с использованием противоионов, таких как галид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, сульфонат низшего алкила и сульфонат арила.

Если не указано иначе, подразумевается, что структуры, указанные в настоящем документе, также включают все изомерные (например, энантиомерические, диастереомерические и геометрические (или конформационные)) формы структуры; например, конфигурации R и S для каждого центра асимметрии, изомеры Z и E с двойной связью и конформационные изомеры Z и E. Таким образом, единичные стереохимические изомеры, а также энантиомерические, диастереомерические и геометрические (или конформационные) смеси соединений по настоящему изобретению находятся в рамках объема изобретения. Если не указано иначе, все таутомерные формы соединений по изобретению находятся в рамках объема изобретения.

Дополнительно, если не указано иначе, подразумевается, что структуры, указанные в настоящем документе, также включают соединения, отличающиеся только в присутствии одного или нескольких изотопно-обогащенных атомов. Например, соединения со структурами по настоящему изобретению, включая замещение водорода дейтерием или тритием или замещение углерода ¹³C- или ¹⁴C-обогащенным углеродом, находятся в объеме настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления изобретения группа содержит один или несколько атомов дейтерия.

Кроме того, предполагается, что соединение формулы I включает его изотопномеченые формы. Изотопномеченая форма соединения формулы I идентична этому соединению, за исключением того факта, что один или несколько атомов соединения замещены атомом или атомами с атомной массой или массовым числом, которые отличаются от атомной массы или массового числа атома, как правило, встречающихся в природе. Примеры изотопов, которые являются коммерчески легкодоступными и которые могут быть включены в соединение формулы I хорошо известными способами, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F и ³⁶CI, соответственно. Соединение формулы I, его пролекарственный препарат или фармацевтически приемлемая соль любого из них, содержащие один или несколько вышеуказанных изотопов и/или других изотопов других атомов, предназначенных для включения в состав настоящего изобретения. Изотопномеченое соединение формулы I можно использовать с практически значимой точки зрения. Например, изотопномеченое соединение формулы I, в которое включен, например, радиоактивный изотоп, такой как ³H или ¹⁴C, является подходящим для лекарственного средства и/или анализа распределения вещества в тканях. Эти радиоактивные изотопы, т.е. тритий (³H) и углерод-14 (¹⁴C), являются особенно предпочтительными вследствие простого получения и отличной выявляемости. Включение более тяжелых изотопов, например, дейтерия (²H), в соединение формулы I имеет терапевтические преимущества вследствие более высокой метаболической стабильности этого изотопномеченого соединения. Более высокая метаболическая стабильность определяет непосредственно увеличение in vivo времени полужизни или снижение дозировки, что при большинстве обстоятельств представляет собой предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения. Изотопномеченое соединение формулы I можно, как правило, получить посредством осуществления процессов, описанных в схемах синтеза и соответствующем описании, в разделе примеров «примеры» разделе «получение» настоящего текста, с замещением неизотопномеченого реагирующего вещества легкодоступным изотопномеченым реагирующим веществом.

Дейтерий (²H) может быть включен в состав соединения формулы I с целью контроля окислительного метаболизма соединения посредством первичного кинетического изотопного эффекта. Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции в результате обмена изотопных ядер, что, в свою очередь, вызвано изменением энергии основного состояния, необходимой для образования ковалентной связи после этого изотопного обмена. Обмен более тяжелого изотопа, как правило, приводит к снижению энергии основного состояния для химической связи, и, таким образом, вызывает уменьшение разрыва связи, ограничивающей скорость. Если разрыв связи возникает в или около области седловой точки вдоль координаты многопрофильной реакции, в сущности можно изменять скорость распределения продукта. Для пояснения: если дейтерий связан с атомом углерода в необменном положении, разница скорости k_M/k_D=2-7 является типичной. Если разница скорости успешно применяется по отношению к соединению формулы I, подверженному окислению, профиль соединения in vivo может существенно измениться и привести в результате к улучшению фармакокинетических свойств.

При открытии и разработке терапевтических средств специалист в данной области может оптимизировать фармакокинетические параметры при сохранении необходимых in vitro свойств. Разумно предположение о том, что многие соединения с плохими фармакокинетическими профилями подвержены окислительному метаболизму. Доступные в настоящее время in vitro анализы макросом печени обеспечивают ценную информацию о течении окислительного метаболизма этого типа, что, в свою очередь, обеспечивает рациональную разработку дейтерированных соединений формулы I с улучшенной стабильностью посредством устойчивости к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительно улучшенные фармакокинетические профили соединений формулы I, которые могут быть количественно выражены в виде увеличения in vivo времени полужизни (t/2), концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (C_max), площади под кривой доза-ответ (AUC) и F; и в виде снижения клиренса, дозы и стоимости материалов.

Далее следует содержание, предназначенное для иллюстрирования выше описанного: соединение формулы I, которое имеет множество потенциальных сайтов атаки на окислительный метаболизм, например, атомы водорода в бензиле и атомы водорода, связанные с атомом азота, получают в качестве группы аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода замещены атомами дейтерия таким образом, что большинство или все из этих атомов водорода замещены атомами дейтерия. Определение времени полужизни обеспечивает подходящее и точное определение степени улучшения устойчивости к окислительному метаболизму. Таким образом, определяют, что время полужизни исходного соединения может быть увеличено до 100% в результате такого обмена дейтерий-водород.

Обмен дейтерий-водород в соединении формулы I также можно использовать для достижения подходящей модификации метаболитного спектра исходного соединения с целью сокращения или устранения нежелательных токсических метаболитов. Например, если токсический метаболит возникает через окислительное расщепление связи углерод-водород (C-H), разумно предположить, что дейтерированный аналог в значительнйо степени снизит или исключит получение нежелательного метаболита, даже если конкретное окисление не является определяющей скорость стадией. Дополнительную информацию по существующему уровню техники в отношении обмена дейтерий-водород можно найти, например, в Hanzlik et al., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990, Reider et al., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987, Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985, Gillette et al, Biochemistry 33(10) 2927-2937, 1994, и Jarman et al. Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993.

В рамках изобретения, определение термина «модулятор» относится к соединению, связывающемуся с и/или ингибирующему мишень с измеримой аффинностью. В определенных вариантах осуществления изобретения IC₅₀ и/или константа связывания модулятора составляет менее чем приблизительно 50 мкM, менее чем приблизительно 1 мкM, менее чем приблизительно 500 нM, менее чем приблизительно 100 нM или менее чем приблизительно 10 нM.

Термины «измеримая аффинность» и «измеримо ингибирует» в рамках изобретения означает измеримое изменение активности BTK при сравнении образца, содержащего соединение по настоящему изобретению или его композицию и BTK, и эквивалентного образца, содержащего BTK, с отсутствием указанного соединения или его композиции.

Комбинациями заместителей и переменных, предполагаемыми по настоящему изобретению, являются только те, которые приводят к образованию стабильных соединений. Термин «стабильный» в рамках изобретения относится к соединениям, обладающим достаточной стабильностью для обеспечения производства с сохранением целостности соединения в течение достаточного периода времени, чтобы быть пригодным в целях, подробно описанных в настоящем документе (например, терапевтическое или профилактическое введение индивидууму).

Указание списка химических групп в любом определении переменной в настоящем документе включает определения этой переменной в качестве единичной группы или комбинации перечисленных групп. Изложение варианта осуществления для переменной в настоящем документе включает этот вариант осуществления как любой единичный вариант осуществления или в комбинации с любыми другими вариантами осуществления или их частями.

3.Описание примеров соединений

По одному из аспектов, настоящее изобретение относится к соединению формулы I,

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

X является N или CR²;

X¹ является N или CR²;

X² является N или CR²;

каждый из R² независимо выбран из -R, галогена, -галогеналкила, -OR, -SR, -CN, -NO₂, -SO₂R, -SOR, -C(O)R, -CO₂R, -C(O)N(R)₂, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)₂, -NRSO₂R или-N(R)₂;

каждый из R является независимо водородом, C_1-6 алифатическим, C_3-10 арилом, 3-8-членным насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим кольцом, 3-7-членным гетероциклическим кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или 5-6 членным моноциклическим гетероарильным кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждый из которых является необязательно замещенным; или

две группы R на одном и том же атоме взяты в совокупности с атомом, к которому они присоединены, для образования C_3-10 арильного, 3-8-членного насыщенного или частично ненасыщенного карбоциклического кольца, 3-7-членного гетероциклического кольца с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или 5-6-членного моноциклического гетероарильного кольца с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждая из которых является необязательно замещенной;

L является двухвалентной группой, выбранной из C_1-6 алифатического углеводорода, C_3-10 арила, 3-8-членного насыщенного или частично ненасыщенного карбоциклического кольца, 3-7-членного гетероциклического кольца с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, и 5-6-членного моноциклического гетероарильного кольца с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждый из которых является необязательно замещенным; или L является двухвалентной группой, выбранной из C_1-6 алифатического углеводорода-C_3-10 арила, C_1-6 алифатического углеводорода 3-8-членного насыщенного или частично ненасыщенного карбоциклического кольца, C_1-6 алифатического углеводорода 3-7-членного гетероциклического кольца с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, и C_1-6 алифатического углеводорода 5-6-членного моноциклического гетероарильного кольца с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждая из которых является необязательно замещенной;

Y является O, S, SO₂, SO, C(O), CO₂, C(O)N(R), -NRC(O), -NRC(O)N(R), -NRSO₂ или N(R); или Y отсутствует;

R¹ является C_1-6 алифатическим углеводородом, C_3-10 арилом, 3-8-членным насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим кольцом, 3-7-членным гетероциклическим кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или 5-6 членным моноциклическим гетероарильным кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждый из которых является необязательно замещенным; или R¹ является CN.

В определенных вариантах осуществления изобретения X является N. В определенных вариантах осуществления изобретения X является CR².

В определенных вариантах осуществления изобретения X¹ является N. В определенных вариантах осуществления изобретения X¹ является CR².

В определенных вариантах осуществления изобретения X² является N. В определенных вариантах осуществления изобретения X² является CR².

В определенных вариантах осуществления изобретения каждый из R² является независимо H.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждый из R² является независимо -R.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждый из R² является независимо C_3-10 арильным, 3-8-членным насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим кольцом, 3-7-членным гетероциклическим кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или 5-6-членным моноциклическим гетероарильным кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждый из которых является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо фенил, нафтил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, адамантил, циклооктил, [3.3.0]бициклооктанил, [4.3.0]бициклононанил, [4.4.0]бициклодеканил, [2.2.2]бициклооктанил, флуоренил, инданил, тетрагидронафтил, акридинил, азоцинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, NH-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, ционнолинил, декагидрохинолинил, 2H,6H-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3-b] тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, индолил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изоиндолинил, изоиндолил, изобензофуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил; -1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, оксазолидинил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатиинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазол, пиридоимидазол, пиридотиазол, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4H-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил, триазинил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,5-триазолил, 1,3,4-триазолил, оксетанил, азетидинил или ксантенил; каждый из которых является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо фенил, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, индолnил, изоксазолил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил;- 1,2,5оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, оксазолидинил, пиримидинил, пиперазинил, пиперидинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, тетрагидрофуранил, тиазолил, тиенил, тиофенил, оксетанилилиазетидинил, каждый из которых является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо фенил или пиразолил, каждый из которых является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо галоген, -галогеналкил, -OR, -SR, -CN, -NO₂, -SO₂R, -SOR, -C(O)R, -CO₂R, -C(O)N(R)₂, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)₂, -NRSO₂R или -N(R)₂.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR, -SR, -SO₂R, -SOR, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)₂, -NRSO₂R или -N(R)₂. В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR, -SR, -SO₂R или -SOR. В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)₂, -NRSO₂R или -N(R)₂.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR, -SR, -SO₂R, -SOR, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)₂, -NRSO₂R или -N(R)₂, и каждым из R является независимо водород, C_3-10 арильное, 3-8-членное насыщенное или частично ненасыщенное карбоциклическое кольцо, 3-7-членное гетероциклическое кольцо с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, или 5-6-членное моноциклическое гетероарильное кольцо с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы; каждый из которых является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR или -N(R)₂, и каждым R является независимо водород или C_3-10 арил, который необязательно замещен. В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR или -N(R)₂, и каждым R является независимо водород или 3-8-членное насыщенное или частично ненасыщенное карбоциклическое кольцо, которое необязательно замещено. В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR или -N(R)₂, и каждым из R является независимо водород или 3-7-членное гетероциклическое кольцо с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, которое является необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо -OR или -N(R)₂, и каждым из R является независимо водород или 5-6-членное моноциклическое гетероарильное кольцо с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, которое является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо водород,

В определенных вариантах осуществления изобретения каждым из R² является независимо водород,

В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_1-6 алифатическим углеводородом, необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_3-10 арилом, необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным 3-8-членным насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим кольцом, необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным 3-7-членным гетероциклическим кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным 5-6-членным моноциклическим гетероарильным кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, которое является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_1-6 алифатическим углеводородом -C_3-10 арилом, необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_1-6 алифатическим углеводородом -3-8-членным насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим кольцом, необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_1-6 алифатическим углеводородом -3-7-членным гетероциклическим кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, которое является необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_1-6 алифатическим углеводородом -5-6-членным моноциклическим гетероарильным кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы, которое является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения L является двухвалентным C_1-6 алифатическим углеводородом, выбранным из метилена, этилена, пропилена, изо-пропилена, бутилена, втор-бутилена, трет-бутилена, неразветвленного или разветвленного пентилена или неразветвленного или разветвленного гексилена; каждый из которых необязательно замещен.

В определенных вариантах осуществления изобретения L представляет собой двухвалентный фенил, нафтил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, адамантил, циклооктил, [3.3.0]бициклооктанил, [4.3.0]бициклононанил, [4.4.0]бициклодеканил, [2.2.2]бициклооктанил, флуоренил, инданил, тетрагидронафтил, акридинил, азоцинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, NH-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, ционнолинил, декагидрохинолинил, 2H,6H-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро [2,3-b] тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, индолnил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изоиндолинил, изоиндолнил, изобензофуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил; 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, оксазолидинил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатиинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазол, пиридоимидазол, пиридотиазол, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4H-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил, триазинил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,5-триазолил, 1,3,4-триазолил, оксетанил, азетидинилиликсантенил; каждый из которых необязательно замещен.

В определенных вариантах осуществления изобретения L является

В определенных вариантах осуществления изобретения L является

В определенных вариантах осуществления изобретения Y является -NRC(O), -NRC(O)N(R), -NRSO₂ или N(R).

В определенных вариантах осуществления изобретения Y является O, S, SO₂, SO, C(O), CO₂ или C(O)N(R).

В определенных вариантах осуществления изобретения Y отсутствует.

В определенных вариантах осуществления изобретения Y является N(R),

В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является необязательно замещенным C_1-6 алифатическим углеводородом. В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является необязательно замещенным C_3-10 арилом. В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является необязательно замещенным 3-8-членным насыщенным или частично ненасыщенным карбоциклическим кольцом. В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является необязательно замещенным 3-7-членным гетероциклическим кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы. В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является необязательно замещенным 5-6-членным моноциклическим гетероарильным кольцом с 1-4 гетероатомами, независимо выбранными из азота, кислорода или серы.

В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является C_1-6 алифатическим углеводородом. В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является метилом, этилом, пропилом, изо-пропилом, бутилом, втор-бутилом, трет-бутилом, неразветвленным или разветвленным пентилом или неразветвленным или разветвленным гексилом; каждый из которых является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является C_2-6 алкенил, который является необязательно замещенным. В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является C_2-6 алкинил, который является необязательно замещенным.

В определенных вариантах осуществления изобретения R¹ является -CN, -CH₂CN,

В определенных вариантах осуществления изобретения каждый из X, X¹, X², R, R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению формулы I-a

или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из X², R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению формулы I-a1

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению формулы I-a2

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению формулы I-b

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из X², R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению формулы I-b1

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹, R², L and Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению формулы I-b2

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения соединение относится к формуле I-c:

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из X², R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения соединение относится к формуле I-c1:

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретения соединение относится к формуле I-c2:

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹, R², L и Y является, как определено выше и описано в вариантах осуществления изобретения, вышеуказанных классах и подклассах и в настоящем документе по отдельности или в комбинации.

В определенных вариантах осуществления изобретение относится к соединению, выбранному из таблицы 1:

Как в целом указано выше, группа «L-R¹» является головной группой. Не желая быть связанным соответствием с какой-либо конкретной теории, авторы полагают, что такие головные группы в особенности подходят для ковалентного связывания с ключевым цистеиновым остатком в связывающем домене определенной протеинкиназы. Протеинкиназы с цистеиновым остатком в связывающем домене известны специалисту в данной области и включают BTK или ее мутант. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения L-R¹ характеризуется тем, что молекула L-R¹ способна к ковалентному связыванию с цистеиновым остатком, необратимо ингибируя таким образом фермент. В определенных вариантах осуществления изобретения цистеиновый остаток в киназном домене в АТФ-связывающем сайте. В определенных вариантах осуществления изобретения цистеиновым остатком является Цистеин-481.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к соединению, выбранному из тех, которые описаны выше, или его фармацевтически приемлемой соли.

На различных структурных изображениях может быть показан гетероатом без присоединенной группы, радикала, заряда или противоиона. Специалистам в данной области известно, что такие изображения предназначены для указания того, что гетероатом присоединен к водороду (например, под понимается ).

В определенных вариантах осуществления изобретения соединения по изобретению синтезировали в соответствии со схемой A ниже. Более конкретные примеры соединений, полученных с использованияем схемы A, представлены ниже в примерах.

Схема A

4. Применение, состав и введение

Фармацевтически приемлемые композиции

Согласно другому варианту осуществления изобретения изобретение относится к композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемое производное и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или основа. Количество соединения в композициях по настоящему изобретению такое, которое является эффективным для значительного ингибирования BTK или ее мутанта в биологическом образце или у пациента. В определенных вариантах осуществления изобретения количество соединения в композициях по настоящему изобретению такое, которое является эффективным для значительного ингибирования BTK или ее мутанта в биологическом образце или у пациента. В определенных вариантах осуществления изобретения композицию по настоящему изобретению составляют для введения пациенту, нуждающемуся в такой композиции.

Термин «пациент» или «индивидуум» в рамках изобретения означает животное, предпочтительно млекопитающее, и наиболее предпочтительно человека.

Термин «фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или основа» относится к нетоксическому носителю, адъюванту или основе, не разрушающему фармакологическую активность соединения, с которым его объединяют. Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты или основы, используемые в композициях по настоящему изобретению, в качестве неограничивающих примеров включают ионообменные вещества, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, частичные глицеридные смеси насыщенных растительных жирных кислот, воды, соли или электролитов, такие как протамин сульфат, двузамещенный фосфат натрия, вторичный кислый фосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидная двуокись кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, найтрий-карбоксиметилцеллюлоза, полиакрилаты, парафины, полиэтилен-полиоксипропилен-блок-полимеры, полиэтиленгликоль и ланолин.

«Фармацевтически приемлемое производное» означает любую нетоксическую соль, сложный эфир, соль сложного эфира или другое производное соединения по настоящему изобретению, которое при введении реципиенту способно обеспечить прямым или косвенным путем соединение по настоящему изобретению или ингибиторно активный метаболит или его остаток.

Композиции по настоящему изобретению вводят перорально, парентерально, распылением аэрозолем для ингаляций, местно, ректально, назально, буккально, вагинально или через имплантированный резервуар. Термин «парентеральный» в рамках изобретения включает подкожное, внутривенное, внутримышечное, внутрисуставное, внутрисуставное, интрастернальное, интратекальное, внутрипеченочное, внутриочаговое и интракраниальное введение или инфузионные методы. Предпочтительно композиции вводят перорально, интраперитонеально или внутривенно. Стерильные инъекционные формы композиций по настоящему изобретению включают водную или масляную суспензию. Составы этих суспензии создают в соответствии с методами, известными в данной области, с использованием подходящих средств для диспергирования или средств для смачивания и суспендирующих средств. Стерильным инъекционным препаратом может также быть стерильный инъекционный раствор или суспензия в нетоксическом парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, в качестве раствора в 1,3-бутандиоле. В числе приемлемых носителей и растворителей используется вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды общепринято используются стерильные жирные масла.

Для этой цели любое используемое мелкодисперсное жирное масло включает синтетические моно- или ди-глицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные пригодны в получении инъекционных составов, как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, в особенности в их полиоксиэтилированных вариантах. Эти масляные растворы или суспензии также содержат длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергирующее средство, такое как карбоксиметилцеллюлоза или подобные диспергирующие средства, широко используемые в составе фармацевтически приемлемых лекарственных форм, включая эмульсии и суспензии. Другие обычно применяемые поверхностно-активные вещества, такие как твины или спаны или другие эмульгаторы или усиливающие биодоступность агенты, которые широко используются при производстве фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других лекарственных форм, также могут применяться в целях рецептурирования.

Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению перорально вводятся в любой перорально приемлемой лекарственной форме. Примерами пероральных лекарственных форм являются капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. В случае таблеток для перорального применения, широко используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие средства, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсулы, пригодные разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Если для перорального введения требуются водные суспензии, активный ингредиент сочетают с эмульгирующими и суспендирующими средствами. При необходимости также необязательно добавляют определенные подсластители, вкусовые или окрашивающие агенты.

Альтернативно, фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению вводят в форме суппозиториев для ректального введения. Их можно получать посредством смешивания агента с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре, и, следовательно, будет растворяться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению также вводят местно, в особенности, когда мишень для лечения включает области или органы, легкодоступные для местного применения, включая заболевания глаз, кожи или нижнего отдела кишечника. Подходящие составы для местного применения легко получить для каждой из этих областей или органов.

Местное применение для нижнего отдела кишечника можно осуществлять с помощью ректального суппозиторного состава (см. выше) или состава, подходящего для применения клизмы. Также используют трансдермальные пластыри при местном применении.

Для местного применения состав представленных фармацевтически приемлемых композиций получают в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или нескольких носителях. Примерами носителей для местного применения соединений являются минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазилин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропиленовое соединение, эмульгирующий воск и вода. Альтернативно, состав представленных фармацевтически приемлемых композиций можно получать в виде соответствуюещго лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или нескольких носителях. Подходящие носители в качестве неограничивающих примеров включают минеральное масло, сорбитан моностеарат, полисорбат 60, воск на основе цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению необязательно вводят посредством назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции получают в соответствии с методами, хорошо известными в данной области технологии приготовления лекарственного средства, и получают в виде растворов в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, стимуляторов абсорбции для усиления биодоступности, фторуглероды и/или другие общепринятые солюбилизирующие или диспергирующие средства.

Наиболее предпочтительно, фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению составляют для перорального введения. Такие составы можно вводить с пищей или без нее. В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению вводят без пищи. В других вариантах осуществления изобретения фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению вводят с пищей.

Количество соединений по настоящему изобретению, которые необязательно сочетают с материалами носителя для получения композиции в единичной лекарственной форме, варьируется в зависимости от получающего лечение хозяина, конкретного способа введения. Предпочтительно, состав представленных композиций должен быть таким, чтобы пациенту, получающему эти композиции, можно было вводить дозу от 0,01 до 100 мг/кг массы тела/сутки соединения.

Также следует понимать, что конкретная дозировка и схема лечения для любого конкретного пациента будет зависеть от различных факторов, включая активность конкретного используемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, скорость экскреции, сочетание лекарственного средства, а также мнение лечащего врача и степень тяжести конкретного заболевания, подвергающегося лечению. Количество соединения по настоящему изобретению в композиции будет также зависеть от конкретного соединения в композиции.

Применение соединений и фармацевтически приемлемых композиций

В определенных вариантах осуществления изобретения изобретение относится к способу ингибирования BTK или ее мутанта у пациента или в биологическом образце, включающему стадию введения указанному пациенту или контактирования указанного биологического образца с соединением по изобретению.

В определенных вариантах осуществления изобретение относится к применению соединений по изобретению и/или их физиологически приемлемых солей для модуляции или ингибирования фермента BTK. Термин «модуляция» обозначает любое изменение в BTK-опосредованной передаче сигнала, основанное на действии конкретных соединений по изобретению, способных взаимодействовать с мишенью BTK таким образом, чтобы обеспечивать возможность распознавания, связывания и активации. Эти соединения характеризуются такой высокой аффинностью по отношению к BTK, которая обеспечивает надежное связывание BTK. В определенных вариантах осуществления изобретения вещества являются в высокой степени селективными для BTK по сравнению с большинством других киназ с целью обеспечения гарантии исключительного и направленного распознавания с помощью единичной мишени BTK. В контексте настоящего изобретения термин «распознавание» - не будучи ограниченным этим - относится к любому виду взаимодействия между конкретными соединениями и мишенью, в особенности ковалентному или нековалентному связыванию или связи, такой как ковалентная связь, гидрофобные/ гидрофильные взаимодействия, силы Ван-дер-Ваальса, ионные пары, водородные связи, взаимодействия лиганд-рецептор (фермент-ингибитор) и т.п. Такая связь может также включать присутствие других молекул, таких как пептиды, белки или нуклеотидные последовательности. Взаимодействие белок/лиганд (фермент-ингибитор) в настоящем документе характеризуется высокой аффинностью, высокой селективностью и минимальной или даже отсутствием перекрестной реактивности по отношению к другим молекулам-мишеням для исключения неблагоприятного и вредного воздействия на индивидуума, получающего лечение.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу ингибирования фермента BTK с помощью по меньшей мере одного из соединений формулы (I) по изобретению и/или их физиологически приемлемых солей в условиях, при которых ингибируют указанный фермент BTK. В определенных вариантах осуществления изобретения системой является клеточная система. В других вариантах осуществления изобретения системой является трансляция in-vitro, основанная на синтезе белка без живых клеток. Под клеточной системой понимается любой индивидуум, при условии, что индивидуум содержит клетки. Таким образом, клеточную систему можно выбирать из группы одиночных клеток, культур клеток, тканей, органов и животных. В определенных вариантах осуществления изобретения способ модуляции фермента BTK проводят in-vitro. Предыдущая теория описания настоящего изобретения, относящаяся к соединениям формулы (I), включая любые варианты его осуществления, действительна и применима без ограничений к соединениям формулы(I) и их солям при использовании в способе ингибирования BTK. Предыдущая теория описания настоящего изобретения, относящаяся к соединениям формулы (I), включая любые варианты его осуществления, действительна и применима без ограничений к соединениям формулы (I) и их солям при использовании в способе ингибирования BTK.

У пациентов с мутациями в BTK основательно заблокировано B-клеточное развитие, что приводит к почти полному отсутствию зрелых B-лимфоцитов и плазматических клеток, значительно сниженному уровню Ig и полному ингибированию гуморального ответа на «воскресшие» антигены (расммотрено в Vihinen et al. Frontiers in Bioscience 5: d917-928). Мыши с дефицитом BTK также имеют сниженное количество B-клеток периферии и значительно сниженные уровни IgM и IgG3 в сыворотке. Делеция BTK у мышей оказывает сильный эффект на B-клеточную пролиферацию, индуцированную анти-IgM и ингибирует иммунные ответы на тимуснезависимые антигены типа II (Ellmeier et al., J Exp Med 192: 1611-1623 (2000)). BTK также играет решающую роль в активации тучных клеток посредством высокоаффинного IgE-рецептора (Fc epsilon RI). В тучных клетках мышей с дефицитом BTK снижена дегрануляция и производство провоспалительных цитокинов после перекрестного связывания Fc эпсилон RI (Kawakami et al. Journal of Leukocyte Biology 65: 286-290).

Представленные соединения являются ингибиторами BTK и, таким образом, пригодны для лечения одного или нескольких расстройств, связанных с активностью BTK. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения BTK-опосредованного расстройства, включающему стадию введения нуждающемуся в этом пациенту соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой композиции.

В рамках изобретения термин «BTK-опосредованные» расстройства или состояния означает любое заболевание или другое разрушительное состояние, в котором, как известно, играет роль BTK или ее мутант. Таким образом, другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к лечению или снижению степени тяжести одного или нескольких заболеваний, в котором, как известно, играет роль BTK или ее мутант. В частности, настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести заболевания или состояния, выбранного из пролиферативного нарушения или аутоиммунного нарушения, где указанный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту соединения или композиции по настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболеванием или состоянием является аутоиммунное заболевание, например, воспалительное заболевание кишечника, артрит, системная красная волчанка (СКВ или волчанка), волчаночный нефрит, васкулит, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), ревматоидный артрит, псориатический артрит, остеоартрит, болезнь Стилла, юношеский артрит, диабет, миастения гравис, тиреоидит Хашимото, тиреоидит Орда, болезнь Грейвcа, аутоиммунный тиреоидит, синдром Шегрена, рассеянный склероз, системный склероз, лаймский нейроборрелиоз, синдром Гийена-Барре, острый рассеянный энцефаломиелит, болезнь Аддисона, опсо-миоклональный синдром, ревматоидный спондилит, антифосфолипидный синдром, апластическая анемия, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный гастрит, пернициозная анемия, глютеиновая болезнь, синдром Гудпасчера, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, неврит зрительного нерва, склеродермия, первичный биллиарный цирроз, синдром Рейтера, синдром Такаясу, височный артериит, аутоиммунная гемолитическая анемия с тепловыми агглютинами, гранулематоз Вегенера, псориаз, общая алопеция, болезнь Бехчета, хроническая усталость, вегетативная дистония, мембранозная гломерулонефропатия, эндометриоз, интерстициальный цистит, обыкновенная пузырчатка, буллезный пемфигоид, нейромиотония, склеродермия или вульводиния. В определенных вариантах осуществления изобретения заболеванием или состоянием является системная красная волчанка (СКВ или волчанка) или волчаночный нефрит.

В некоторых вариантах осуществления изобретения заболеванием или состоянием является гиперпролиферативное заболевание или иммунологически опосредованные заболевания, включая отторжение трансплантированных органов или тканей и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД, также известный как ВИЧ).

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, где заболевание или состояние выбрано из гетероиммунных состояний или заболеваний, которые в качестве неограничивающих примеров включают реакцию «трансплантат против хозяина», трансплантацию, трансфузию, анафилаксию, аллергии (например, аллергию на пыльцу растений, латекс, лекарственные средства, пищевые продукты, яд насекомых, мех животных, шерсть животных, пылевого клеща или таракана), гиперчувствительность I типа, аллергический конъюнктивит, аллергический ринитиатопический дерматит.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, где заболевание или состояние выбрано из воспалительного заболевания, например, астмы, аппендицита, атопического дерматита, астмы, аллергии, блефарита, бронхиолита, бронхита, бурсита, цервицита, холангита, холецистита, хронического отторжения трансплантата, колита, конъюнктивита, болезни Крона, цистита, дакриоаденита, дерматита, дерматомиозита, энцефалита, эндокартита, эндометрита, энтерита, энтероколита, эпикондилита, эпидидимита, фасцита, фиброзита, гастрита, настроэнтерита, пурпуры Шенлейна-Геноха, гепатита, гнойного гидраденита, иммуноглобулин-A-нефропатим, интерстициальной легочной болезни, ларингита, мастита, менингита, миелита, миокардита, миозита, нефрита, оофорита, орхита, остита, отита, панкреотита, паротита, перикардита, перитонита, фарингита, плеврита, флебита, пульмонита, пневмонии, полимиозита, проктита, простатита, пиелонефрита, ринита, сальпингита, синусита, стоматита, синовита, тендинита, тонзиллита, язвенного колита, увеита, вагинита, васкулита или вульвита.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, где заболевание или состояние выбрано из злокачественной опухоли. В одном из вариантов осуществления изобретения злокачественной опухолью является B-клеточное пролиферативное нарушение, например, диффузная В-крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, хроническая лимфоцитарная лимфома, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, лимфоплазмоцитарная лимфома /макроглобулинемия Вальденстрема, лимфома маргинальной зоны селезенки, множественная миелома (также известная как миелома плазматических клеток), неходжкинская лимфома, лимфома Ходжкина, плазмоцитома, экстранодальная B-клеточная лимфома из клеток маргинальной зоны, нодулярная лимфоузелковая B-клеточная лимфома из клеток маргинальной зоны, лимфома мантийных клеток, медиастинальная (тимусная) В-крупноклеточная лимфома, В-интраваскулярная крупноклеточная лимфома, первичная выпотная лимфома, лимфома/лейкемия Беркитта или лимфатоидный гранулематоз. В некоторых вариантах осуществления изобретения злокачественной опухолью является рак молочной железы, рак предстательной железы или тучноклеточная опухоль (например, мастоцитома, тучноклеточная леймемия, тучноклеточная саркома, системный мастоцитоз). В одном из вариантов осуществления изобретения злокачественной опухолью является рак костей. В другом варианте осуществления изобретения злокачественная опухоль имеет другое первичное происхождение и метастазы в кости. В определенных вариантах осуществления изобретения злокачественной опухолью является колоректальный рак или рак поджелудочной железы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, включая заболевания кости и суставов, включая, без ограничения, ревматоидный артрит, серонегативные спондилоартропатии (включая анкилозирующий спондилит, псориатический артрит и болезнь Рейтера), болезнь Бехчета, синдром Шегрена, системный склероз, остеопороз, рак кости и костный метастаз.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, где заболевание или состояние выбрано из тромбоэмболического осложнения или кардиоваскулярного расстройства, например, инфаркта миокарда, стенокардии, реокклюзии после ангиопластики, рестеноза после ангиопластики, реокклюзии после аортокоронарного шунтирования, рестеноза после аортокоронарного шунтирования, инсульта, транзиторной ищемии, окклюзионного расстройства периферических артерий, эмболии легких или тромбоза глубоких вен. В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к антитромботическому средству, так как BTK также участвует в активации тромбоцитов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, включая инфекционные и неинфекционные воспалительные процессы и аутоиммунные и другие воспалительные заболевания. Эти аутоиммунные и воспалительные заболевания, расстройства и синдромы включают тазовый воспалительный процесс, уретрит, солнечный ожог кожи, синусит, пульмонит, энцефалит, менингит, миокардит, нефрит, остеомиелит, миозит, гепатит, гастрит, энтерит, дерматит, гингивит, аппендицит, панкреатит, холецистит, агаммаглобулинемию, псориаз, аллергию, болезнь Крона, синдром раздраженного кишечника, язвенный колит, болезнь Шегрена, отторжение трансплантата тканей, сверхострое отторжение трансплантированных органов, астму, аллергический ринит, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), аутоиммунную полигландулярную болезнь (также известную как аутоиммунный полигландулярный синдром), аутоиммунную алопецию, пернициозную анемию, гломерулонефрит, дерматомиозит, рассеянный склероз, склеродермию, васкулит, аутоиммунные и тромбоцитопенические состояния, синдром Гудпасчера, атеросклероз, болезнь Аддисона, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, диабет, септический шок, системную красную волчанку (СКВ), ревматоидный артрит, псориатический артрит, юношеский артрит, остеоартрит, хроническую идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, макроглобулинемию Вальденстрема, миастению гравис, тиреоидит Хашимото, атопический дерматит, дегенеративное заболевание сустава, витилиго, аутоиммунный гипопитуитаризм, синдром Гийена-Барре, Болезнь Бехчета, склеродермию, фунгоидный микоз, острые воспалительные ответы (такие как острый респираторный дистресс-синдром и ишемия/реперфузионное повреждение) и болезнь Грейвcа. В определенных вариантах осуществления изобретения диабетом является диабет I типа.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения степени тяжести одного или нескольких заболеваний и состояний, связанных с BTK, выбранных из ревматоидного артрита, рассеянного склероза, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, острого лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, неходжкинской лимфомы, лимфомы Ходжкина, множественной миеломы, рака кости, костного метастаза, остеопороза, диабета (например, диабета I типа), синдрома раздраженного кишечника, болезни Крона, волчанки и почечного трансплантата.

Другой целью изобретения является обеспечение способа лечения заболеваний, вызванных, опосредованных и/или распространившихся в результате активности BTK, где по меньшей мере одно соединение формулы (I) по изобретению и/или его физиологически приемлемые соли вводят нуждающемуся в таком лечении млекопитающему. В определенных вариантах осуществления изобретения изобретение относится к способу лечения волчанки, где по меньшей мере одно соединение формулы (I) по изобретению и/или его физиологически приемлемые соли вводят нуждающемуся в таком лечении млекопитающему. В определенных вариантах осуществления изобретения соединение вводят в эффективном количестве, как определено выше. В определенных вариантах осуществления изобретения лечением является пероральное введение.

Способ по изобретению можно осуществлять или in-vitro, или in-vivo. Восприимчивость определенных клеток к лечению с помощью соединений по изобретению можно конкретно определить с помощью тестов in-vitro, как в процессе исследования, так и при применении в медицинской практике. Как правило, культуру клетки сочетают с соединением по изобретению в различных концентрациях в течение периода времени, которое является достаточным для обеспечения ингибирования активными средствами активности BTK, как правило, приблизительно от одного часа до одной недели. In-vitro лечение можно проводить с использованием культивированных клеток, взятых из биопсийного образца или линий клеток.

Хозяин или пациент может принадлежать к любому виду млекопитающего, например, виду приматов, в частности, к людям; грызунам, включая мышей, крыс и хомяков; кроликам; лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Модели животных представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для лечения заболевания человека.

С целью определения пути передачи сигнала и детектирования взаимодействий между различными путями передачи сигнала разными учеными были разработаны подходящие модели или модельные системы, например, модели культуры клеток и модели трансгенных животных. Для определения конкретных стадий сигнального каскада может быть использовано взаимодействие соединений с целью модуляции сигнала. Соединения по изобретению также можно использовать в качестве реактивов для тестирования BTK-зависимого пути передачи сигнала у животных и/или моделей культуры клеток или в клинических заболеваниях, указанных в этой области применения.

Кроме того, последующая теория описания настоящего изобретения касательно использования соединений формулы (I) и их производных для получения лекарственного средства для профилактического или терапевтического лечения и/или наблюдения считается обоснованной и применимой без ограничений к использованию соединения для ингибирования активности BTK, если это целесообразно.

Изобретение также относится к применению соединений формулы (I) и/или их физиологически приемлемых солей для профилактического или терапевтического лечения и/или контроля течения заболеваний, вызванных, опосредованных и/или распространившихся в результате активности BTK. Кроме того, изобретение относится к применению соединений формулы (I) и/или их физиологически приемлемых солей для получения лекарственного средства для профилактического или терапевтического лечения и/или контроля течения заболеваний, вызванных, опосредованных и/или распространившихся в результате активности BTK. В определенных вариантах осуществления изобретения изобретение относится к применению соединения формулы I или его физиологически приемлемой соли для получения лекарственного средства для профилактического или терапевтического лечения BTK-опосредованного расстройства.

Соединения формулы (I) и/или их физиологически приемлемую соль, кроме того, можно использовать в качестве промежуточного средства для получения дополнительных медикаментозно активных ингредиентов. Лекарственное средство предпочтительно получают нехимическим путем, например, посредством сочетания активного ингредиента с по меньшей мере одним твердым, жидким и/или полужидким носителем или эксципиентом и необязательно в сочетании с одним или несколькими другими активными веществами в соответствующей лекарственной форме.

Другой целью настоящего изобретения являются соединения формулы (I) по изобретению и/или их физиологически приемлемые соли для применения в профилактическом или терапевтическом лечении и/или контроле течения заболеваний, вызванных, опосредованных и/или распространившихся в результате активности BTK. Другая предпочтительная цель изобретения относится к соединениям формулы (I) по изобретению и/или их физиологически приемлемым солям для применения в профилактическом или терапевтическом лечении и/или контроле течения волчанки. Предшествующая теория описания настоящего изобретения касательно соединений формулы (I), включая любой предпочтительный вариант его осуществления, является обоснованной и применимой без ограничений к соединениям формулы (I) и их солям для применения в профилактическом или терапевтическом лечении и/или контроле течения волчанки.

Соединения формулы (I) по изобретению можно вводить до или после возникновения заболевания один или несколько раз в качестве терапии. Вышеуказанные соединения и медицинские продукты для применения по изобретению в особенности используются для терапевтического лечения. Терапевтически соответствующий эффект ослабляет до некоторой степени один или несколько симптомов расстройства или нормализует состояние, частично или полностью, один или несколько физиологических или биохимических параметров, связанных с или вызванных заболеванием или патологическим состоянием. Контроль считается видом лечения, при условии, что соединения вводят в определенных интервалах, например, с целью повышения ответной реакции или полного уничтожения патогенов и/или симптомов заболевания. Можно применять или идентичное соединение, или различные соединения. Способы по изобретению также можно использовать для снижения вероятности развития расстройства или даже заблаговременной профилактики возникновения расстройств, связанных с активностью BTK, или для лечения начинающихся и продолжающихся симптомов.

В значении по изобретению профилактическое лечение рекомендуется, если индивидуум имеет какие-либо предпосылки возникновения вышеуказанных физиологических или патологических состояний, таких как наследственная предрасположенность, генетический дефект или недолеченное ранее заболевание.

Кроме того, изобретение относится к лекарственному средству, содержащему по меньшей мере одно соединение по изобретению и/или его фармацевтически применимые производные, соли, сольваты и стереомеры, включая их смеси во всех соотношениях. В определенных вариантах осуществления изобретение относится к лекарственному средству, содержащему по меньшей мере одно соединение по изобретению и/или его физиологически приемлемые соли.

«Лекарственным средством» в значении по изобретению является любое вещество в области медицины, содержащее один или несколько соединений формулы (I) или их препаратов (например, фармацевтическая композиция или фармацевтический состав), которое можно использовать в профилактике, терапии, последующем врачебном наблюдении или последующем уходе за пациентами, страдающими заболеваниями, связанными с активностью BTK, таким образом, чтобы по меньшей мере временно установились патогенные изменения общего состояния или состояния определенных отделов организма.

В различных вариантах осуществления изобретения активный ингредиент можно вводить в отдельности или в комбинации с другим лечением. Синергическое действие может быть достигнуто посредством использования более чем одного соединения в фармацевтической композиции, т.е. соединение формулы (I) сочетают с по меньшей мере еще одним веществом в качестве активного ингредиента, которым является или другое соединение формулы (I), или соединение с различной каркасной структурой. Активные ингредиенты можно использовать или одномоментно, или последовательно.

В настоящем документе включены способы лечения, при которых по меньшей мере один химический структурный элемент, представленный в настоящем документе, вводят в комбинации с противовоспалительным средством. Противовоспалительные средства в качестве неограничивающих примеров включают НПВП, неспецифические и специфические ингибиторы ЦОГ-2 активности фермента циклооксигеназы, соединения золота, кортикостероиды, метотрексат, антагонисты фактора некроза опухоли (TNF), иммуносупрессанты и метотрексат.

Примеры НПВП в качестве неограничивающих примеров включают ибупрофен, флурбипрофен, напроксен и напроксен натрий, диклофенак, комбинации диклофенак-натрия и мизопростола, сулиндак, оксапрозин, дифлунисал, пироксикам, индометацин, этодолак, фенопрофен кальция, кетопрофен, набуметон натрия, сульфасалазин, толметин натрия и гидроксихлорхин. Примеры НПВП также включают специфические ингибиторы ЦОГ-2, такие как целекоксиб, валдекоксиб, люмиракоксиб и/или эторикоксиб.

В некоторых вариантах осуществления изобретения противовоспалительным средством является салицилат. Салицилаты включают, но не ограничиваются ими, ацетилсалициловую кислоту или аспирин, салицилат и холин натрия и салицилаты магния.

Противовоспалительным средством может также быть кортикостероид. Например, кортикостероидом может быть кортизон, дексаметазон, метилпреднизолон, преднизолон, преднизолона натрия фосфат или преднизон.

В дополнительных вариантах осуществления противовоспалительным средством является соединение золота, такое как тиомалат натрия или ауранофин.

Изобретение также включает варианты осуществления, при которых противовоспалительным средством является метаболический ингибитор, такой как ингибитор дигидрофолат редуктазы, такой как метотрексат, или ингибитор дигидрооротат дегидрогеназы, такой как лефлуномид.

Другие варианты осуществления по изобретению относятся к комбинациям, в которых по меньшей мере одним противовоспалительным соединением является моноклональное антитело (такое как экулизумаб или пекселизумаб), антагонист TNF, такой как этанерцепт или инфликсимаб, являющийся моноклональным антителом к TNF-альфа.

Другие варианты осуществления по изобретению относятся к комбинациям, в которых по меньшей мере одним активным средством является соединение-иммуносупрессант, такое как соединение-иммуносупрессант, выбранное из метотрексата, лефлуномида, циклоспорина, такролимуса, азатиоприна и мофетила микофенолата.

B-клетки и предшественники B-клеток, экспрессирующие BTK, непосредственно связаны с возникновением патологии B-клеточных злокачественных новообразований, включая в качестве неограничивающих примеров, B-клеточную лимфому, лимфому (включая лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому), волосатоклеточную лимфому, множественную миелому, хроническую и острую миелоцитарную лейкемию и хронический и острый лимфоцитарный лейкоз.

Было показано, что BTK является ингибитором сигнального комплекса, индуцирующего гибель Fas/APO-1 (CD-95) (DISC) в B-лимфоцитах. Судьба клеток лейкемии/лимфомы может заключаться в балансе между противоположными проапоптотическими эффектами каспаз, активированных DISC, и механизмом восходящей регуляции антиапоптотического действия, включающим BTK и/или ее вещества (Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656).

Также было обнаружено, что ингибиторы тирозинкиназы Брутона пригодны в качестве хемосинтезирующих веществ, и, следовательно, пригодны в комбинации с другими химиотерапевтическими лекарственными средствами, в частности, с лекарственными средствами, индуцирующими апоптоз. Примеры других химиотерапевтических лекарственных средств, которые можно использовать в комбинации с хемосинтезирующими ингибиторами тирозинкиназы Брутона, включают ингибиторы топоизомеразы I (камптотецин или топотекан), ингибиторы топоизомеразы II (например, дауномицин и этопозид), алкилирующие средства (например, циклофосфамид, мелфалан и БХНМ), тубулин-направленные средства (например, таксол и винбластин) и биологические средства (например, антитела, такие как антитело против CD20, IDEC 8, иммунотоксины и цитокины).

В другом аспекте изобретение относится к набору, состоящему из отдельных блоков с эффективным количеством соединения по изобретению и/или его фармацевтически приемлемых солей, производных, сольватов и стереомеров, включая их смеси по всех соотношениях, и необязательно, эффективное количество другого активного ингредиента. Набор содержит подходящие контейнеры, такие как коробки, индивидуальные флаконы, мягкие контейнеры и ампулы. Например, набор может содержать отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения по изобретению и/или его фармацевтически приемлемых солей, производных, сольватов и стереомеров, включая их смеси по всех соотношениях и эффективное количество другого активного ингредиента в растворенной или лиофилизированной форме.

В рамках изобретения термины «лечение», «лечить» и «лечения» относятся к инвертированию течения, облегчению, замедлению начала развития или ингибированию прогрессирования заболевания или расстройства или его одного или нескольких симптомов, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение осуществляют после развития одного или нескольких симптомов. В других вариантах осуществления изобретения лечение осуществляют при отсутствии симптомов. Например, лечение осуществляют по отношению к подверженному заболеванию индивидууму перед началом развития симптомов (например, в свете анамнеза симптомов и/или в свете генетических или других факторов подверженности). Лечение также продолжают после определения симптомов, например, для профилактики или отсрочки рецидива.

Соединения и композиции в соответствии со способом по настоящему изобретению вводят с использованием любого количества или любого способа введения, эффективного для лечения или ослабления степени тяжести вышеуказанного расстройства. Точное необходимое количество будет варьироваться в зависимости от индивидуума, в зависимости от вида, возраста и общего состояния индивидуума, степени тяжести инфекции, конкретного вещества, его способа введения и т.п. Состав соединений по изобретению предпочтительно представлен в стандартной дозированной форме для простоты введения и однородности дозировки. Выражение «стандартная дозированная форма» в рамках изобретения относится к физически дискретному компоненту вещества, подходящего для пациента, которому необходимо лечение. Следует понимать, однако, что общесуточную дозу соединений и композиций по настоящему изобретению должен определять лечащий врач по результатам тщательной медицинской оценки. Конкретный уровень эффективной дозы для любого конкретного пациента или организма будет зависеть от различных факторов, включая расстройство, подвергающееся лечению, и степень тяжести расстройства; активность конкретного используемого соединения; конкретную используемую композицию; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и питание пациента; время введения, способ введения и скорость экскреции конкретного используемого соединения; продолжительность лечения; лекарственных средств, используемых в комбинации или совмещаемых с конкретным используемым соединением и другие факторы, хорошо известные в области медицины.

Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению можно вводить людям и другим животным перорально, ректально, парентерально, интрaцистернально, интравагинально, интраперитонеально, местно (как с помощью порошка, мази или капель), буккально, как с помощью спрея для ротовой или носовой полости и т.п., в зависимости от степени тяжести инфекции, подвергающейся лечению. В определенных вариантах осуществления изобретения соединения по изобретению вводят перорально или парентерально при уровне дозирования приблизительно от 0,01 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг и предпочтительно приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг массы тела индивидуума в сутки, один или несколько раз в сутки, для достижения необходимого терапевтического эффекта.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения в качестве неограничивающих примеров включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активным соединениям, жидкие лекарственные формы необязательно содержат инертные разбавители, широко используемые в данной области, такие как, например, вода и другие растворители, солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил бензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, зародышевое, оливковое, касторовое и сезамовое масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные жирнокислотные эфиры сорбитана и их смеси. Помимо инертных разбавителей, композиции для перорального введения могут также включать адъюванты, такие как средства для смачивания, эмульгирующие и суспендирующие средства, подсластители, ароматизаторы и отдушки.

Составы инъекционных препаратов, например, стерильных инъекционных водных или масляных суспензий создают в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих средств или средств для смачивания и суспендирующих средств. Стерильным инъекционным препаратом являются также стерильный инъекционный раствор, суспензия или эмульсия в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. В число приемлемых носителей и растворителей, которые могут быть использованы, входят вода, раствор Рингера для инъекций (U.S.P.) и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла общепринято используют в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любое мелкодисперсное жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. В дополнение, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, используют в получении инъекционных лекарственных средств.

Инъекционные составы можно стерилизовать, например, посредством фильтрации через фильтр, задерживающий бактерии, или посредством включения стерилизующих веществ в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъекционной среде перед использованием.

С целью пролонгации эффекта соединения по настоящему изобретению часто необходимо замедление абсорбции соединения из подкожной или внутримышечной инъекции. Это проводят посредством использования жидкой суспензии кристаллического или аморфного материала с плохой растворимостью в воде. Затем скорость абсорбции соединения зависит от скорости его растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристаллов или кристаллической формы. Альтернативно, замедленную абсорбцию парентерально вводимой формы соединения осуществляют посредством растворения или суспендирования соединения в масляном носителе. Инъекционные депо-формы получают посредством формирования микроинкапсулированных матриц соединения в биоразлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения соединения к полимеру и природы конкретного используемого полимера можно контролировать скорость высвобождения соединения. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Инъекционные составы замедленного всасывания также получают посредством захвата соединения в липосомах или микроэмульсиях, совместимых с тканями организма.

Композициями для ректального или вагинального введения предпочтительно являются суппозитории, которые можно получать посредством смешивания соединений по настоящему изобретению с подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, такими как какао-масло, полиэтиленгликоль или суппозиторный воск, которые являются твердыми при температуре окружающей среды, но жидкими при температуре тела, и, следовательно, растворяются в прямой кишке или вагинальной области с высвобождением активного соединения.

Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение смешивают с по меньшей мере одним инертным, фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, таким как цитрат натрия или дифосфат кальция и/или a) наполнителями или разбавителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, b) связующими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидинон, сахароза и камедь, c) увлажнителями, такими как глицерин, d) дезинтегрирующими средствами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, определенные силикаты и карбонат натрия, e) замедляющие растворение добавки, такие как парафин, f) ускорителями всасывания, такими как соединения четвертичного аммония, g) средствами для смачивания, такими как, например, цетиловый спирт и глицерин моностеарат, h) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина и i) смазывающими средствами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль, лекарственная форма также необязательно содержит буферные средства.

Твердые композиции подобного типа также используют в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах с использованием таких эксципиентов, как лактоза или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой и т.п. Твердые лекарственные формы-таблетки, драже, капсулы, пилюли и гранулы - можно получать с покрытием или оболочкой, такой как кишечнорастворимая оболочка и другие оболочки, хорошо известные в области фармацевтического рецептурирования. Они необязательно содержат средства, снижающие прозрачность, и могут быть также в составе композиции с высвобождением только активного(ых) ингредиента(ов) или предпочтительно в определенном отделе желудочно-кишечного тракта необязательно замедленным образом. Примеры капсулирующих композиций, которые можно использовать, включают полимерные вещества и воски. Твердые композиции подобного типа также используют в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах с использованием таких эксципиентов, как лактоза или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой и т.п.

Активные соединения могут также быть представлены в микроинкапсулированной форме с одним или несколькими эксципиентами, как указано выше. Твердые лекарственные формы-таблетки, драже, капсулы, пилюли и гранулы можно получать с покрытием или оболочкой, такой как кишечнорастворимая оболочка и другие оболочки, хорошо известные в области фармацевтического рецептурирования. В таких твердых лекарственных формах активное соединение можно смешивать с по меньшей мере одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы также содержат, как в обычной практике, дополнительные вещества, за исключением инертных разбавителей, например, смазывающие вещества для таблетирования и другие вспомогательные средства для таблетирования, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль, лекарственные формы необязательно также содержат буферные средства. Они необязательно содержат средства, снижающие прозрачность, и могут также входить в состав композиции с высвобождением только активного(ых) ингредиента(ов) или предпочтительно в определенном отделе желудочно-кишечного тракта необязательно замедленным образом. Примеры капсулирующих композиций, которые можно использовать, включают полимерные вещества и воски.

Лекарственные формы для местного или трансдермального введения соединения по настоящему изобретению включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, средства для ингаляций или пластыри. Активный компонент смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необходимыми консервантами или буферами. Также предполагается включение в объем настоящего изобретения офтальмологического состава, капель для ушей и глазных капель. Дополнительно, настоящее изобретение относится к применению трансдермальных пластырей, имеющих дополнительное преимущество, заключающееся в обеспечении контроля доставки соединения в организм. Такие лекарственные формы можно получать посредством растворения или диспергирования соединения в соответствующей среде. Усилители всасывания также можно использовать для повышения распределения соединения на коже. Скорость можно контролировать или посредством обеспечения контролирующей скорость мембраны, или посредством диспергирования соединения в полимерной матрице или геле.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности BTK в биологическом образце, включающему стадию контактирования указанного биологического образца с соединением по настоящему изобретению или композицией, содержащей указанное соединение.

Согласно другому варианту осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности BTK в биологическом образце положительным образом, включающему стадию контактирования указанного биологического образца с соединением по настоящему изобретению или композицией, содержащей указанное соединение.

Соединения по изобретению пригодны in-vitro в качестве уникальных инструментов для понимания биологической роли BTK, включая оценку многих факторов, которые, как считается, оказывают влияние или подвержены влиянию производства BTK и взаимодействия BTK. Соединения по настоящему изобретению также пригодны в разработке других соединений, взаимодействующих с BTK, так как соединения по настоящему изобретению обеспечивают важную информацию о соотношении структура-активность (SAR), ускоряющей разработку. Соединения по настоящему изобретению, связывающиеся с BTK, можно использовать в качестве реактивных веществ для детектирования BTK в живых клетках, фиксированных клетках, в биологических жидкостях, в гомогенатах ткани, в очищенных природных биологических материалах и т.д. Например, посредством метки такого соединения можно определить клетки, экспрессирующие BTK. Кроме того, на основе их способности связывать BTK соединения по настоящему изобретению можно использовать в окрашивании in-situ, FACS (активируемой флуоресценцией сортировке клеток), электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE), ELISA (иммуносорбентном ферментном анализе) и т.д., ферментативной очистке или в очистке клеток, экспрессирующих BTK внутри клеток с нарушенной проницаемостью мембраны. Соединения по изобретению можно также использовать в качестве реактивных веществ для коммерческого исследования для различного применения в медицинских исследованиях и диагностике. Такие применения в качестве неограничивающих примеров включают: использование в качестве калибровочного стандарта для количественного измерения активности ингибиторов-кандидатов тирозинкиназы Брутона в различных функциональных анализах; использование в качестве блокирующих реактивных веществ при выборочном скрининге соединения, т.е. при поиске новых семейств лигандов BTK, соединения можно использовать для блокировки восстановления заявленных в настоящем изобретении соединений BTK; использование в сокристаллизации с ферментом BTK, т.е. соединения по настоящему изобретению обеспечивают образование кристаллов соединения, связанного с BTK, позволяя определить структуру фермент/соединение с помощью рентгеноструктурной кристаллографии; другие применения в исследованиях и диагностике, где BTK предпочтительно активирована или такую активацию общепринятым путем калибруют по известному количеству ингибитора BTK и т.д.; использование в анализах в качестве образцов для определения экспрессии BTK в клетках; и разработке анализов для детектирования соединения, связывающихся с таким же сайтом, как BTK-связывающие лиганды. Соединения по изобретению можно применять или сами по себе, и/или в комбинации с физическими измерениями для диагностики эффективности лечения. Фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения, и применение указанных соединений для лечения BTK-опосредованных состояний, является новым перспективным подходом для широкого спектра терапий, приводящих к непосредственному и незамедлительному улучшению состояния здоровья у человека или животного. Перорально биодоступные и активные новые химические структурные элементы по изобретению повышают удобство для пациентов и соответствие установленным требованиям для врачей.

Соединения формулы (I), их соли, изомеры, таутомеры, энантиомерные формы, диастереомеры, рацематы, производные, пролекарственные средства и/или метаболиты характеризуются высокой специфичностью и стабильностью, низкой себестоимостью и удобством в обращении. Эти характеристики составляют основу для воспроизводимого действия, где включено отсутствие перекрестной реактивности, и для надежного и безопасного взаимодействия с целевой структурой.

Термин «биологический образец» в рамках изобретения, в качестве неограничивающих примеров включает культуры клеток или их экстракты; биопсийный материал, полученный из млекопитающего, или его экстракты; и кровь, слюну, мочу, кал, семя, слезы или другие жидкости организма или их экстракты.

Модуляция активности BTK или ее мутанта в биологическом образце пригодна для различных целей, известных специалисту в данной области. Примеры таких целей в качестве неограничивающих примеров включают переливание крови, трансплантацию органа, хранение биологического образца и биологические анализы.

5. Соединения-зонды

В определенных аспектах соединение по настоящему изобретению связывается с детектируемой молекулой с образованием соединений-зондов. В одном из аспектов соединение-зонд по изобретению содержит необратимо действующий ингибитор протеинкиназы любой формулы, как описано в настоящем документе, детектируемую молекулу и связывающую молекулу, присоединяющую ингибитор к детектируемой молекуле.

В некоторых вариантах осуществления изобретения такие соединения-зонды по настоящему изобретению содержат представленное соединение любой формулы, как описано в настоящем документе, связанное с детектируемой молекулой, R^t, посредством двухвалентной связывающей молекулы, -T¹-. Связывающая молекула присоединяется к соединению по изобретению посредством R¹. Специалисту в данной области понятно, что при присоединении связывающей молекулы к R¹, R¹ является двухвалентной головной группой, обозначенной как R^1’. В определенных вариантах осуществления изобретения представленное соединение-зонд выбрано из формулы I-t:

где каждый из X, X¹, X², L и Y является, как определено выше и описано в классах и подклассах в настоящем документе, R^1’ является двухвалентной R¹; T¹ является двухвалентной связывающей молекулой; и R^t является детектируемой молекулой.

В некоторых вариантах осуществления изобретения такие соединения-зонды по настоящему изобретению содержат представленное соединение любой формулы, как описано в настоящем документе, связанное с детектируемой молекулой R^t, посредством двухвалентной связывающей молекулы -T¹-. В определенных вариантах осуществления изобретения представленное соединение-зонд выбрано из формулы I-s:

где каждый из X, X¹, R¹, L и Y, является, как определено выше, и описано в классах и подклассах в настоящем документе, T¹ является двухвалентной связывающей молекулой; и R^t является детектируемой молекулой.

В некоторых вариантах осуществления изобретения R^t является детектируемой молекулой, выбранной из первичной метки или вторичной метки. В определенных вариантах осуществления изобретения R^t является детектируемой молекулой, выбранной из флуоресцентной метки (например, флуоресцентного красителя или флуорофора), масс-метки, хемилюминесцентной группы, хромофора, электроноплотной группы или агента переноса энергии. В некоторых вариантах осуществления изобретения R^t является биотином, биотин сульфоксидом, радиоактивной изотопилифлуоресцентной меткой.

В рамках изобретения термин «детектируемая молекула» используют взаимозаменяемо с термином «метка» и «репортер», и он относится к любой молекуле, которую можно детектировать, например, первичные метки и вторичные метки. Присутствие детектируемой молекулы можно измерять с использованием способов для количественного определения (в абсолютном, приблизительном или относительном выражении) детектируемой молекулы в исследуемой системе. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие способы хорошо известны специалисту в данной области и включают любые способы количественного определения репортерной молекулы (например, метки, красителя, фотокросслинкера, цитотоксического соединения, лекарственного средства, аффинной метки, фотоаффинной метки, реактивного соединения, антитела или фрагмента антитела, биоматериала, наночастицы, спиновой метки, флуорофора, металл-содержащей частицы, радиоактивной молекулы, квантовая(ые) точка(и), новой функциональной группы, группы, взаимодействующей с другими группами за счет ковалентных или нековалентных связей, светоулавливающей молекулы, молекулы, возбуждаемой актиничным (фотографическим) излучением, лиганда, фотоизомеризуемой молекулы, биотина, аналога биотина (например, биотин сульфоксида), молекулы, содержащей тяжелый атом, группы, расщепляемой в процессе химической реакции, фоторасщепляемой группы, редокс-активного агента, изотопномеченной молекулы, биофизического зонда, фосфоресцентной группы, хемилюминесцентной группы, электронноплотной группы, магнитной группы, интеркалирующей группы, хромофора, агента-переносчика энергии, биологически активного агента, детектируемой метки или комбинации вышеперечисленного).

Первичными метками, такими как радиоактивные изотопы (например, тритий, ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁴C, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I или ¹³¹I), масс-метками являются стабильные изотопы (например, ¹³C, ²H, ¹⁷O, ¹⁸O, ¹⁵N, ¹⁹F и ¹²⁷I), позитронно-активные изотопы (например, ¹¹C, ¹⁸F, ¹³N, ¹²⁴I и ¹⁵O) и флуоресцентные метки, являющиеся передающими сигнал репортерными группами, которые можно детектировать без дополнительных модификаций. Детектируемые молекулы анализируют посредством способов. Примерами способов является флуоресценция, позитронно-эмиссионная томография, медицинская визуализация ОФЭКТ, хемилюминесценция, электронно-спиновый резонанс, спектроскопия поглощения в УФ/видимой области, масс-спектрометрия, ядерный магнитный резонанс, магнитный резонанс, проточная цитометрия, ауторадиография, сцинтилляционные измерения, формирование изображения на люминесцентном фосфорном покрытии и электрохимические способы.

Термин «вторичная метка» в рамках изобретения относится к молекулам, таким как биотин, и различным белковым антигенам, для которых необходимо присутствие вторичного промежуточного средства для генерации детектируемого сигнала. Для биотина вторичное промежуточное средство включает конъюгаты стрептавидин-фермент или конъюгаты стрептавидин-антитело. Для антигенных меток вторичные промежуточные средства включают конъюгаты антитело-фермент. Некоторые флуоресцентные группы выступают в качестве вторичной метки, так как они переносят заряд на другую группу в процессе безызлучательного резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET), и детектируемый сигнал генерируется второй группой.

Термины «флуоресцентная метка», «флуоресцентный краситель» и «флуорофор» в рамках изобретения относятся к молекулам, поглощающим световую энергию при указанной длине волны возбуждения и излучающим световую энергию при различной длине волны. Примеры флуоресцентных меток в качестве неограничивающих примеров включают: красители Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 и Alexa Fluor 680), AMCA, AMCA-S, красители BODIPY (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665), карбоксиродамин 6G, карбокси-X-родамин (ROX), Cascade Blue, Cascade Yellow, кумарин 343, цианиновые красители (Cy3, Cy5, Cy3,6, Cy5,6), дансил, дапоксил, диалкиламинокумарин, 4',5'-дихлор-2',7'-диметокси-флуоресцеин, DM-NERF, эозин, эритрозин, флуоресцеин, FAM, гидроксикумарин, IRDyes (IRD40, IRD 700, IRD 800), JOE, лиссамин-родамин B, Marina Blue, метоксикумарин, нафтофлуоресцеин, Oregon Green 488, Oregon Green 500, Oregon Green 514, Pacific Blue, PyMPO, пирен, родамин B, родамин 6G, родамин зеленый, родамин красный, родол зеленый, 2',4',5',7'-тетра-бромосульфон-флуоресцеин, тетраметил-родамин (TMR), карбокситетраметилродамин (TAMRA), Texas Red, Texas Red-X, 5(6)-карбоксифлуоресцеин, 2,7-дихлорфлуоресцеин, N,N-бис(2,4,6-триметилфенил)-3,4:9,10-периленбис(дикарбоксимид), HPTS, этил-эозин, DY-490XL MegaStokes, DY-485XL MegaStokes, Adirondack Green 520, ATTO 465, ATTO 488, ATTO 495, YOYO-1,5-FAM, BCECF, дихлорфлуоресцеин, родамин 110, родамин 123, YO-PRO-1, SYTOX Green, Sodium Green, SYBR Green I, Alexa Fluor 500, FITC, Fluo-3, Fluo-4, флуоресцентный изумрудный, YoYo-1 ssDNA, YoYo-1 dsDNA, YoYo-1, SYTO RNASelect, Diversa Green-FP, Dragon Green, EvaGreen, Surf Green EX, Spectrum Green, NeuroTrace 500525, NBD-X, MitoTracker Green FM, LysoTracker Green DND-26, CBQCA, PA-GFP (после активации), WEGFP (после активации), FlASH-CCXXCC, Azami Green мономерный, Azami Green, зеленый флюоресцирующий белок (GFP), EGFP (Campbell Tsien 2003), EGFP (Patterson 2001), Kaede Green, 7-бензиламино-4-нитробенз-2-окса-1,3-диазол, Bexl, доксорубицин, Lumio Green и SuperGlo GFP.

Термин «масс-метка» в рамках изобретения относится к любой молекуле, которую можно однозначно детектировать вследствие ее массы с использованием масс-спектрометрических (МС) методов детектирования. Примеры масс-меток включают метки с электрофорным высвобождением, такие как N-[3-[4’-[(п-метокситетрафторбензил)окси]фенил]-3-метилглицероил]изонипекотиновая кислота, 4’-[2,3,5,6-тетрафтор-4-(пентафторфеноксил)] метилацетофенон и их производные. Синтез и применение таких масс-меток описаны в патентах США 4,650,750, 4,709,016, 5,360,8191, 5,516,931, 5,602,273, 5,604,104, 5,610,020 и 5,650,270. Другие примеры масс-меток в качестве неограничивающих примеров включают нуклеотиды, дидезоксинуклеотиды, олигонуклеотиды различной длины и нуклеотидного состава, олигопептиды, олигосахариды и другие синтетические полимеры различной длины и мономерного состава. Также в качестве масс-меток можно применять большое разнообразие органических молекул, как незаряженных, так и несущих заряд (биомолекулы или синтетические соединения), масса которых находится в соответствующем диапазоне (100-2000 Дальтон). В качестве масс-меток можно также использовать стабильные изотопы (например, ¹³C, ²H, ¹⁷O, ¹⁸O и ¹⁵N).

Термин «хемилюминесцентная группа» в рамках изобретения относится к группе, излучающей свет в результате химической реакции без дополнительного нагревания. В качестве примера луминол (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион) вступает в реакцию с оксидантами, такими как пероксид водорода (H₂O₂), в присутствии основания и металла-катализатора для получения продукта возбужденного состояния (3-аминофталат, 3-APA).

Термин «хромофор» в рамках изобретения относится к молекуле, поглощающей свет видимой длины волны, длины волны УФ излучения или длины волны ИК излучения.

Термин «краситель» в рамках изобретения относится к растворимому, окрашивающему веществу, содержащему хромофор.

Термин «электроноплотная группа» в рамках изобретения относится к группе, которая при облучении пучком электронов рассеивает электроны. Такие группы в качестве неограничивающих примеров включают молибдат аммония, субнитрат висмута, иодид кадмия, карбогидразид, гексагидрат хлорида железа, гексаметилен тетрамин, безводный трихлорид индия, нитрат лантана, тригидрат цитрата свинца, нитрат свинца, периодную кислоту, фосфомолибденовую кислоту, фосфовольфрамовую кислоту, феррицианид калия, рутениевый красный, нитрат серебра, протеинат серебра (анализ на содержание Ag: 8,0-8,6%) «активный», тетрафенилпорфин серебра (S-TPPS), хлораурат натрия, вольфрамат натрия, нитрат таллия, тиосемикарбазид (TSC), уранилацетат, уранил сульфат и ванадил сульфат.

Термин «агент переноса энергии» в рамках изобретения относится к молекуле, или отдающей, или принимающей энергию от другой молекулы. Исключительно в качестве примера резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET) представляет собой процесс диполь-дипольного взаимодействия, в результате которого энергия возбужденного состояния флюоресцентной молекулы-донора нерадиоактивным путем переносится на невозбужденную молекулу-акцептор, которая затем излучает полученную энергию на более длинной волне.

Термин «молекула, содержащая тяжелый атом» в рамках изобретения относится к группе, имеющей в составе ион или атом, который, как правило, тяжелее углерода. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие ионы или атомы в качестве неограничивающих примеров включают кремний, вольфрам, золото, свинец и ураний.

Термин «фотоаффинная метка» в рамках изобретения относится к метке с группой, которая при воздействии света образует ковалентную связь с молекулой, для которой метка обладает аффинностью.

Термин «светоулавливающая молекула» в рамках изобретения относится к группе, которая при освещении при определенной длине волны ковалентно или нековалентно связывает другие ионы или молекулы.

Термин «фотоизомеризуемая молекула» в рамках изобретения, относится к группе, которая при освещении изменяется от одной изомерной формы к другой.

Термин «радиоактивная молекула» в рамках изобретения относится к группе, ядра которой спонтанно выдают ядерное излучение, такое как альфа-, бета-, или гамма-частицы; где альфа-частицы - это ядра гелия, бета-частицы - это электроны, а гамма-частицы - это фотоны с высокой энергией.

Термин «спиновая метка» в настоящем тексте относится к молекулам, которые содержат атом или группу атомов, демонстрирующих неспаренный электронный спин (т.е. стабильная парамагнитная группа), которую в некоторых вариантах осуществления детектируют путем электрон-спиновой резонансной спектроскопии, а в других вариантах реализации присоединяют к другой молекуле. Такие спин-меченые молекулы включают, но не ограничиваются перечисленными: нитрильные радикалы и нитроксиды, и в некоторых вариантах осуществления представляют собой отдельные спиновые метки или двойные спиновые метки.

Термин «квантовые точки» в рамках изобретения относится к коллоидным полупроводниковым нанокристаллам, которые в некоторых вариантах осуществления изобретения детектируют в ближнем инфракрасном свете и которые обладают исключительно высокими квантовыми выходами (т.е. очень ярко светятся при умеренном освещении).

Для специалиста в данной области очевидно, что детектируемая молекула может быть присоединена к предложенному соединению посредством подходящего заместителя. В настоящем тексте термин «подходящий заместитель» относится к группе, которая способна к ковалентному присоединению детектируемой группы. В рамках изобретения термин «подходящий заместитель» относится к молекуле, способной к ковалентному присоединению детектируемой молекулы. Такие молекулы хорошо известны специалисту в данной области и включают группы, содержащие, например, карбоксилатную молекулу, аминомолекулу, тиольную молекулу или гидроксильную молекулу, из числа многих других. Следует понимать, что такие молекулы присоединены к представленному соединению непосредственно или через связывающую молекулу, такую как двухвалентная насыщенная, или ненасыщенная углеводородная цепь.

В некоторых вариантах осуществления изобретения детектируемые молекулы присоединены к представленному соединению посредством «клик»-химии. В некоторых вариантах осуществления такие молекулы присоединены через 1,3-циклоприсоединение азида с алкином, возможно в присутствии медного катализатора. Способы использования клик-химии известны в данной области и включают те, которые описаны в Rostovtsev et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 2596-99 and Sun et al., Bioconjugate Chem., 2006, 17, 52-57. В некоторых вариантах осуществления изобретения представлена клик-доступная ингибиторная молекула, которую подвергают реакции с клик-доступной молекулой -T-Rt. В рамках изобретения «клик-доступный» относится к молекуле, содержащей азид или алкин для использования в реакции клик-химии. В некоторых вариантах осуществления изобретения клик-доступная ингибиторная молекула включает азид. В некоторых вариантах осуществления клик-доступная молекула -Т-Rt включает напряженный циклооктин для использования в реакции клик-химии без использования меди (например, с использованием способов, описанных в Baskin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2007, 104, 16793-16797).

В некоторых вариантах осуществления изобретения детектируемая молекула, R^t, выбрана из метки, красителя, фотокросслинкера, цитотоксического соединения, лекарственного средства, аффинной метки, фотоаффинной метки, реактивного соединения, антитела или фрагмента антитела, биоматериала, наночастицы, спиновые метки, флуорофора, металл-содержащей частицы, радиоактивной молекулы, квантовой(ых) точки(ек), новой функциональной группы, группы, взаимодействующей с другими молекулами за счет ковалентных или нековалентных связей, светоулавливающей молекулы, молекулы, возбуждаемой актиничным (фотографическим) излучением, лиганда, фотоизомеризуемой молекулы, биотина, аналога биотина (например, биотин сульфоксида), молекулы, содержащей тяжелый атом, группы, расщепляемой в процессе химической реакции, фоторасщепляемой группы, редокс-активного агента, изотопномеченой молекулы, биофизического зонда, фосфоресцентной группы, хемилюминесцентной группы, электронноплотной группы, магнитной группы, интеркалирующей группы, хромофора, агента-переносчика энергии, биологически активного агента, детектируемой метки или их сочетания.

В некоторых вариантах осуществления изобретения R^t является биотином или его аналогом. В определенных вариантах осуществления изобретения R^t является биотином. В определенных других вариантах осуществления изобретения Rt является биотин сульфоксидом.

В другом варианте осуществления изобретения R^t является флуорофором. В дополнительном варианте осуществления изобретения флуорофор выбран из красителей Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 и Alexa Fluor 680), AMCA, AMCA-S, красителей BODIPY (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665), карбоксиродамина 6G, карбокси-X-родамина (ROX), Cascade Blue, Cascade Yellow, кумарина 343, цианиновых красителей (Cy3, Cy5, Cy3,6, Cy5,6), дансила, дапоксила, диалкиламинокумарина, 4',5'-дихлор-2',7'-диметокси-флуоресцеина, DM-NERF, эозина, эритрозина, флуоресцеина, FAM, гидроксикумарина, IRDyes (IRD40, IRD 700, IRD 800), JOE, лиссаамин-родамина B, Marina Blue, метоксикумарина, нафтофлуоресцеина, Oregon Green 488, Oregon Green 500, Oregon Green 514, Pacific Blue, PyMPO, пирена, родамина B, родамин 6G, родамина зеленого, родамина красного, родола зеленого, 2',4',5',7'-тетра-бромосульфон-флуоресцеина, тетраметил-родамина (TMR), карбокситетраметилродамина (TAMRA), Texas Red, Texas Red-X, 5(6)-карбоксифлуоресцеина, 2,7-дихлорфлуоресцеина, N,N-бис(2,4,6-триметилфенил)-3,4:9,10-периленбис(дикарбоксимида), HPTS, этил-эозина, DY-490XL MegaStokes, DY-485XL MegaStokes, Adirondack Green 520, ATTO 465, ATTO 488, ATTO 495, YOYO-1,5-FAM, BCECF, дихлорфлуоресцеина, родамина 110, родамина 123, YO-PRO-1, SYTOX Green, Sodium Green, SYBR Green I, Alexa Fluor 500, FITC, Fluo-3, Fluo-4, флуоресцентного изумрудного, YoYo-1 ssDNA, YoYo-1 dsDNA, YoYo-1, SYTO RNASelect, Diversa Green-FP, Dragon Green, EvaGreen, Surf Green EX, Spectrum Green, NeuroTrace 500525, NBD-X, MitoTracker Green FM, LysoTracker Green DND-26, CBQCA, PA-GFP (после активации), WEGFP (после активации), FlASH-CCXXCC, Azami Green мономерного, Azami Green, зеленого флуоресцентного белка(GFP), EGFP (Campbell Tsien 2003), EGFP (Patterson 2001), Kaede Green, 7-бензиламино-4- нитробенз-2-окса-1,3-диазола, Bexl, доксорубицина, Lumio Green или SuperGlo GFP.

Как в целом описано выше, представленное соединение-зонд содержит связывающую молекулу, -T¹-, которая связывает необратимо действующий ингибитор с детектируемой молекулой. В рамках изобретения термин «связывание» или «связывающая молекула» относится к любому двухвалентному химическому спейсеру. Примерами связей являются ковалентная связь, полимер, водорастворимый полимер, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный гетероалкил, необязательно замещенный гетероциклоалкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный гетероциклил, необязательно замещенный гетероциклоалкилалкил, необязательно замещенный гетероциклоалкилалкенил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероарил, необязательно замещенный гетероциклоалкилалкенилалкил, молекула необязательно замещенного амида, молекула эфира, молекула кетона, молекула сложного эфира, молекула необязательно замещенного карбамата, молекула необязательно замещенного гидразона, молекула необязательно замещенного гидразина, молекула необязательно замещенного оксима, молекула дисульфида, молекула необязательно замещенного имина, молекула необязательно замещенного сульфонамида, молекула сульфона, молекула сульфоксида, молекула тиоэфира или любое их сочетание.

В некоторых вариантах осуществления изобретения связывающая молекула, - T¹-, выбрана из ковалентной связи, полимера, водорастворимого полимер, необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного гетероалкила, необязательно замещенного гетероциклоалкила, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного гетероциклоалкилалкила, необязательно замещенного гетероциклоалкилалкенила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного гетероциклоалкилалкенилалкила. В некоторых вариантах осуществления изобретения связывающей молекулой является необязательно замещенный гетероцикл. В других вариантах осуществления изобретения гетероцикл выбран из азиридина, оксирана, эписульфида, азетидина, оксетана, пирролина, тетрагидрофурана, тетрагидротиофена, пирролидина, пиразола, пиррола, имидазола, триазола, тетразола, оксазола, изоксазола, ксирена, тиазола, изотиазола, дитиолaна, фурана, тиофена, пиперидина, тетрагидропирана, тиана, пиридина, пирана, тиапирана, пиридазина, пиримидина, пиразина, пиперазина, оксазина, тиазина, дитиана и диоксана. В некоторых вариантах осуществления изобретения гетероциклом является пиперазин. В других вариантах осуществления изобретения связывающая молекула необязательно замещена галогеном, -CN, -OH, -NO₂, алкилом, S(O) и S(O)₂. В других вариантах осуществления изобретения водорастворимым полимером является PEG-группа.

В других вариантах осуществления изобретения связывающая молекула обеспечивает достаточное пространственное разделение между детектируемой молекулой и молекулой ингибитора протеинкиназы. В других вариантах осуществления изобретения связывающая молекула является стабильной. В еще одном дополнительном варианте осуществления изобретения связывающая молекула не оказывает существенного влияния на ответ детектируемой молекулы. В других вариантах осуществления изобретения связывающая молекула обеспечивает химическую стабильность соединения-зонда. В других вариантах осуществления изобретения связывающая молекула обеспечивает достаточную растворимость соединения-зонда.

В некоторых вариантах осуществления изобретения связывающая молекула, - T¹-, такая как водорастворимый полимер, одним концом присоединена к представленному необратимо действующему ингибитору и другим концом - к детектируемой молекуле, R^t. В других вариантах осуществления изобретения водорастворимый полимер присоединен посредством функциональной группы или заместителя представленного необратимо действующего ингибитора. В других вариантах осуществления изобретения водорастворимый полимер присоединен посредством функциональной группы или заместителя репортерной молекулы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения примеры гидрофильных полимеров для применения в связывающей молекуле - T¹-, в качестве неограничивающих примеров включают: полиалкиловые эфиры и их кэпированные по алкокси-концу аналоги (например, полиоксиэтиленгликоль, полиоксиэтилен/пропиленгликоль и метокси или его кэпированные по этокси-концу аналоги, полиоксиэтиленгликоль, последний также известен как полиэтиленгликоль или PEG); поливинилпирролидоны; поливинилалкиловые эфиры; полиоксазолины, полиалкил оксазолины и полигидроксиалкил оксазолины; полиакриламиды, полиалкил акриламиды и полигидроксиалкил акриламиды (например, полигидроксипропилметакриламид и его производные); полигидроксиалкил акрилаты; полисиаловые кислоты и их аналоги, гидрофильные пептидные последовательности; полисахариды и их производные, включая декстран и производные декстрана, например, карбоксиметилдекстран, декстран сульфаты, аминодекстран; целлюлоза и ее производные, например, карбоксиметил целлюлоза, гидроксиалкил целлюлоза; хитин и его производные, например, хитозан, сукцинил хитозан, карбоксиметилхитин, карбоксиметилхитозан; гиалуроновая кислота и ее производные; крахмалы; альгинаты; хондроитинсульфат; альбумин; пуллулан и карбоксиметил пуллулан; полиаминокислоты и их производные, например, полиглутаминовые кислоты, полилизины, полиаспарагиновые кислоты, полиаспартамиды; сополимеры малеинового ангидрида, такие как: сополимер стирола с малеиновым ангидридом, сополимер дивинилэтилового эфира с малеиновым ангидридом; поливиниловые спирты; их сополимеры, их терполимеры, их смеси и производные указанного. В других вариантах осуществления изобретения водорастворимый полимер представляет собой любую структурную форму. Примерами форм являются линейная, вилообразная или разветвленная. В других вариантах осуществления изобретения примеры многофункционального полимера в качестве неограничивающих примеров включают линейные полимеры с двумя концами, каждый конец связан с функциональной группой, которая является такой же или отличной.

В некоторых вариантах осуществления изобретения водный полимер содержит молекулу поли(этиленгликоля). В других вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера имеет широкий диапазон. Примерами диапазонов являются от приблизительно 100 Да до приблизительно 100000 Да или более. В дополнительных вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера составляет от приблизительно 100 Да до приблизительно 100000 Да, приблизительно 100000 Да, приблизительно 95000 Да, приблизительно 90000 Да, приблизительно 85000 Да, приблизительно 80000 Да, приблизительно 75000 Да, приблизительно 70000 Да, приблизительно 65000 Да, приблизительно 60000 Да, приблизительно 55000 Да, приблизительно 50000 Да, приблизительно 45000 Да, приблизительно 40000 Да, приблизительно 35000 Да, приблизительно 30000 Да, приблизительно 25000 Да, приблизительно 20000 Да, приблизительно 15000 Да, приблизительно 10000 Да, приблизительно 9000 Да, приблизительно 8000 Да, приблизительно 7000 Да, приблизительно 6000 Да, приблизительно 5000 Да, приблизительно 4000 Да, приблизительно 3000 Да, приблизительно 2000 Да, приблизительно 1000 Да, приблизительно 900 Да, приблизительно 800 Да, приблизительно 700 Да, приблизительно 600 Да, приблизительно 500 Да, приблизительно 400 Да, приблизительно 300 Да, приблизительно 200 Да и приблизительно 100 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера составляет приблизительно от 100 Да до 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера составляет приблизительно от 100 Да до 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера составляет приблизительно от 1000 Да до 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера составляет приблизительно от 5000 Да до 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса полимера составляет приблизительно от 10000 Да до 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекула поли(этилен гликоля) является разветвленным полимером. В других вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PEG с разветвленной цепью составляет от приблизительно 1000 Да до приблизительно 100000 Да. Примерами диапазонов являются приблизительно 100000 Да, приблизительно 95000 Да, приблизительно 90000 Да, приблизительно 85000 Да, приблизительно 80000 Да, приблизительно 75000 Да, приблизительно 70000 Да, приблизительно 65000 Да, приблизительно 60000 Да, приблизительно 55000 Да, приблизительно 50000 Да, приблизительно 45000 Да, приблизительно 40000 Да, приблизительно 35000 Да, приблизительно 30000 Да, приблизительно 25000 Да, приблизительно 20000 Да, приблизительно 15000 Да, приблизительно 10000 Да, приблизительно 9000 Да, приблизительно 8000 Да, приблизительно 7000 Да, приблизительно 6000 Да, приблизительно 5000 Да, приблизительно 4000 Да, приблизительно 3000 Да, приблизительно 2000 Да и приблизительно 1000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PEG с разветвленной цепью составляет от приблизительно 1000 Да дл приблизительно 50000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PEG с разветвленной цепью составляет от приблизительно 1000 Да до приблизительно 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PEG с разветвленной цепью составляет от приблизительно 5000 Да до приблизительно 40000 Да. В некоторых вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PEG с разветвленной цепью составляет от приблизительно 5000 Да до приблизительно 20000 Да. Вышеприведенный список для по существу водорастворимого каркаса никоим образом не является исчерпывающим и главным образом является иллюстративным и в некоторых вариантах осуществления изобретения полимерные материалы с вышеописанными качествами пригодны для использования в способах и композициях, описываемых в настоящем документе.

В определенных вариантах осуществления изобретения связывающая молекула, - T¹-, имеет следующую структуру:

.

В определенных вариантах осуществления изобретения связывающая молекула, - T¹-, имеет следующую структуру:

;

гдеM является 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.

В определенных вариантах осуществления изобретения -R^t представляет собой хинин, фенилаланин, тирозин, триптофан, NADH, FMN, EDANS, Lucifer Yellow, пирен, 4-MU, AMC, DAPI, Hoechst33342, NBD, биман, Cascade yellow, флуоресцеин, RH110, TMR, SRh101, нафтофлуоресцеин, SNARF-1, пропидий, BODIPY-FL, BODIPY-TR, Cy3, Cy5, Cy7, IRDye 700DX или резоруфин.

В некоторых вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

.

В некоторых вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В определенных вариантах осуществления изобретения - T¹-R^t имеет следующую структуру:

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение-зонд формулы I-t или формулы I-s получают из любого соединения, описываемого в настоящем документе.

В определенных вариантах осуществления изобретения соединение-зонд выбрано из соединения 31, 32, 53, 54, 73 или 74. В определенных вариантах осуществления изобретения соединением-зондом является соединение 31. В определенных вариантах осуществления изобретения соединением-зондом является соединение 32. В определенных вариантах осуществления изобретения соединением-зондом является соединение 53. В определенных вариантах осуществления изобретения соединением-зондом является соединение 54. В определенных вариантах осуществления изобретения соединением-зондом является соединение 73. В определенных вариантах осуществления изобретения соединением-зондом является соединение 74.

Следует понимать, что многие реактивные вещества- T¹-R^t коммерчески доступны.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу определения занятости протеинкиназы представленным необратимо действующим ингибитором (т.е. соединением любой формулы, представленной в настоящей документе) у пациента, включающему одно или несколько тканей, типов клеток или их лизатов, полученных от пациента, которому ввели по меньшей мере одну дозу соединения указанного необратимо действующего ингибитора, контактирование с указанной тканью, типом клеток или их лизатом соединения-зонда (т.е. соединения формулы I-t или формулы I-s) для ковалентной модификации по меньшей мере одной протеинкиназы, присутствующей в указанном лизате, и изменение количества указанной протеинкиназы, ковалентно модифицированной соединением-зондом для определения занятости указанной протеинкиназы указанным ингибитором по сравнению с занятостью указанной протеинкиназы указанным соединением-зондом. В определенных вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает стадию корректировки дозы соединения формулы, представленной в настоящем документе, для повышения занятости протеинкиназы. В определенных других вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает стадию корректировки дозы соединения формулы, представленной в настоящем документе, для снижения занятости протеинкиназы.

В рамках изобретения термины «занятость» или «занимать» применимы в той степени, в которой протеинкиназа модифицирована представленным ковалентным ингибитором-соединением. Специалисту в данной области будет понятно, что необходимо введение самой минимально низкой дозы для достижения необходимой эффективной занятости протеинкиназы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения протеинкиназой для модификации является BTK.

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение-зонд содержит необратимо действующий ингибитор, для которого определяют занятость.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу оценки эффективности представленного необратимо действующего ингибитора у млекопитающего, включающему введение представленного необратимо действующего ингибитора млекопитающему, введение представленного соединением-зонда в ткани или клетки, выделенные из млекопитающего, или их лизаты, измерение активности детектируемой молекулы соединения-зонда и сравнение активности детектируемой молекулы со стандартом.

В других вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу оценки фармакодинамики представленного необратимо действующего ингибитора, включающему введение представленного необратимо действующего ингибитора млекопитающему, введение представленного соединения-зонда в один или несколько типов клеток или их лизаты, выделенный из млекопитающего, и измерение активности детектируемой молекулы соединения-зонда в различные моменты времени после введения ингибитора.

В других вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу мечения in vitro протеинкиназы, включающему контактирование указанной протеинкиназы с соединением-зондом, описываемым в настоящем документе. В одном из вариантов осуществления изобретения стадия контактирования включает инкубацию протеинкиназы с соединением-зондом, представленным в настоящем документе.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу мечения in vitro протеинкиназы, включающему контактирование одной или нескольких клеток или тканей или их лизатов, экспрессирующих протеинкиназу с соединением-зондом, описываемым в настоящем документе.

В определенных других вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу детектирования меченой протеинкиназы, включающему отделение белков, содержащих протеинкиназу, меченную соединением-зондом, описываемым в настоящем документе, посредством электрофореза и детектирование соединения-зонда посредством флуоресценции.

В некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу оценки фармакодинамики представленного необратимо действующего ингибитора in vitro, включающему инкубацию представленного необратимо действующего ингибитора с протеинкиназой-мишенью, с добавлением соединения-зонда, представленного в настоящем документе, к протеинкиназе-мишени и определение количества мишени, модифицированной соединением-зондом.

В некоторых вариантах осуществления изобретения зонд определяют посредством электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE). В других вариантах осуществления изобретения зонд детектируют посредством ELISA. В определенных вариантах осуществления изобретения зонд детектируют посредством проточной цитометрии.

В других вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу зондирования кинома с необратимо действующими ингибиторами, включающему инкубацию одного или нескольких типов клеток или их лизатов, с биотинилированным соединением-зондом для сбора белков, модифицированных молекулой биотина, расщепления белков, захвата с помощью авидина или его аналога и осуществление многомерной ЖХ-МС-МС для определения протеинкиназ, модифицированных соединением-зондом, и сайтов присоединения указанных киназ.

В определенных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу измерения синтеза белка в клетках, включающему инкубацию клеток с необратимо действующим ингибитором белка-мишени, образование лизатов клеток в конкретные моменты времени и инкубацию указанных клеточных лизатов с соединением-зондом по изобретению для измерения присутствия свободного белка на протяжении длительного периода времени.

В других вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение относится к способу определения схемы дозирования у млекопитающего для максимальной занятости протеинкиназы, включающему анализ одного или нескольких типов клеток или их лизатов, выделенных из млекопитающего (полученного из, например, спленоцитов, B-клеток периферии, цельной крови, лимфоузлов, кишечной ткани или других тканей млекопитающего), из млекопитающего, которому ввели представленный необратимо действующий ингибитор любой из формул, приведенных в настоящем документе, где стадия анализа включает контактирование указанной одной или нескольких тканей, типов клеток или их лизатов, с представленным соединением-зондом и измерение количества протеинкиназы, ковалентно модифицированной соединением-зондом.

ПРИМЕРЫ

Как указано в примерах, приведенных ниже, в определенных иллюстративных вариантах осуществления изобретения соединения получают в соответствии со следующими общими процессами. Следует понимать, что, несмотря на то, что в общих способах показан синтез определенных соединений по настоящему изобретению, следующие общие способы и другие способы, известные специалисту в данной области, можно применять ко всем соединениям и подклассам и видами каждого из этих соединений, как описано в настоящем документе.

Номера соединений, используемые в примерах ниже, соответствуют номерам соединений, указанных supra.

¹H ЯМР записывали на спектрометре Bruker 400 MГц с использованием остаточного сигнала дейтерированного растворителя в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) представлены в м.д. относительно сигнала остаточного растворителя (δ=2,49 м.д. в течение 1 часа ЯМР в ДМСО-d6). Данные 1H ЯМР представлены следующим образом: химический сдвиг (мультиплетность, константы взаимодействия и количество атомов водорода). Мультиплетности соответствуют следующие сокращения: с (синглет), д (дублет), т (триплет), к (квартет), м (мультиплет), уш (уширенный).

Схема 1

Схема 2

Схема 3

Пример 1

4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (способ A)

В сосуд объемом 20 мл помещали 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (250,00 мг; 1,63 ммоль), (4-феноксифенил)бороновую кислоту (522,64 мг: 2,44 ммоль), ацетат палладия (18,27 мг; 0,08 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенил (66,83 мг; 0,16 ммоль), карбонат калия (674,97 мг; 0,16 ммоль), суспендированный в диоксане (3,00 мл), и воду (0,30 мл). Реакционную смесь нагревали при 150°C в течение 3 часов. Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Неочищенную смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем продукт лиофилизировали в течение ночи для получения 4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина (422,40 мг, с выходом 90%) в виде твердого вещества желтого цвета. МС: масса/заряд = 288 [M+H]⁺.

Пример 2

4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (способ B)

В сосуд объемом 20 мл помещали 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (500,00 мг; 3,26 ммоль), карбонат цезия (3,18 г: 9,77 ммоль) и 4-феноксифенол (909,40 мг; 4,88 ммоль), суспендированный в ДМФ (6,00 мл). Реакционную смесь нагревали при 160°C в течение 3 часов. Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем продукт лиофилизировали в течение ночи для получения 4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина (611,4 мг, с выход 62%) в виде твердого вещества желтого цвета. МС: масса/заряд = 288 [M+H]⁺.

Пример 3

Трет-бутил-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-карбоксилат (способ C)

В сосуд объемом 20 мл помещали 4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (200,00 мг; 0,66 ммоль), трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилат (456,85 мг; 2,64 ммоль), трифенилфосфин (1,04 г; 3,96 ммоль) и диизопропил- азодикарбоксилат (800,00 мг; 3,96 ммоль), суспендированный в ТГФ (4,00 мл). Реакционную смесь нагревали при 40°C в течение ночи. Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Неочищенную смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем смесь очищали с использованием препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и лиофилизировали в течение ночи для получения трет-бутил-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-карбоксилата (соль трифторуксусной кислоты, 188,00 мг, с выходом 50%) в виде твердого вещества желтого цвета. МС: масса/заряд = 459 [M+H]⁺.

Пример 4

Трет-бутил-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-карбоксилат (способ D)

В сосуд объемом 20 мл помещали 4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (600,00 мг; 1,98 ммоль), трет-бутил-3-бромоазетидин-1-карбоксилат (934,10 мг, 3,96 ммоль) и трет-бутоксид натрия (760,42 мг, 7,91 ммоль), суспендированный суспендированный в ДМФ (8,00 мл). Реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 2 суток. Реакционную смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем продукт лиофилизировали в течение ночи для получения трет-бутил-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-карбоксилата (918,00 мг, с выходом 100%) в виде вязкой жидкости желтого цвета. МС: масса/заряд = 459 [M+H]⁺.

Пример 5

5-(азетидин-3-ил)-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (способ E)

В сосуд объемом 20 мл помещали трет-бутил-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-карбоксилат (910,00 мг; 1,98 ммоль), растворенный в метаноле (5,00 мл). К смеси добавляли соляную кислоту (2,0M раствора в Et₂O) (4,96 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем лиофилизировали в течение ночи для получения 5-(азетидин-3-ил)-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина в виде твердого неочищенного вещества желтого цвета. МС: масса/заряд = 359 [M+H]⁺.

Пример 6

1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он (3) (способ F)

В сосуд объемом 20 мл добавляли 5-(азетидин-3-ил)-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (15,00 мг; 0,04 ммоль), бикарбонат натрия (10,55 мг; 0,13 ммоль) суспендированный в ТГФ (2,00 мл), и воду (0,20 мл). Добавляли акрилoил хлорид (0,01 мл; 0,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем материал очищали с использованием препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и лиофилизировали в течение ночи для получения 1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (соль трифторуксусной кислоты, 12,00 мг, с выходом 55%) в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ: 85%, время удерживания= 3,749 минут. МС: масса/заряд = 413 [M+H]⁺, время удерживания = 2,653 минут. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,38 (с, 1H), 8,20 (д, 1H), 7,42 (т, 2H), 7,34 (д, 2H), 7,15 (т, 1H), 7,09 (д, 2H), 7,05 (д, 2H), 6,74 (д, 1H), 6,32 (дд, 1H), 6,06 (д, 1H), 5,79 (м, 1H), 5,65(д, 1H), 4,78 (т, 1H), 4,08 (м, 1H), 4,50-4,40 (м, 2H).

Пример 7

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(19) (Способ G)

В сосуд объемом 20 мл добавляли (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольную кислоту (78,50 мг; 0,61 ммоль) и бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфиновый хлорид (232,09 мг; 0,91 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,21 мл; 1,22 ммоль), суспендированный в диоксане (3,00 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли 5-(азетидин-3-ил)-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (120,00 мг; 0,30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем остаток очищали с использованием препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и лиофилизировали в течение ночи для получения (E)-4-(диметиламино)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-она (69,00 мг, с выходом 48%) в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ: 95%, время удерживания = 2,879 минут. МС: масса/заряд = 470 [M+H]⁺, время удерживания = 2,016 минут. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,37 (с, 1H), 8,18 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,34 (д, 2H), 7,19-7,04 (м, 5H), 6,74 (д, 1H), 6,54 (дт, 1H), 6,11 (д, 1H), 5,78 (м, 1H), 4,79-4,66 (м, 2H), 4,49-4,38 (м, 2H), 2,98 (д, 2H), 2,12 (с, 6H).

Пример 8

2-метил-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(51) (способ H)

В сосуд объемом 20 мл добавляли 5-(азетидин-3-ил)-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (70,00 мг, 0,18 ммоль), метакриловую кислоту (30,52 мг, 0,35 ммоль), 2,4,6-трипропил-1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфинан 2,4,6-триоксид (338,44 мг, 0,53 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0,09 мл, 0,53 ммоль), суспендированный в ДХМ (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Неочищенную смесь очищали с использованием колоночной флэш-хроматографии. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем материал очищали с использованием препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие необходимый продукт, объединяли и лиофилизировали в течение ночи для получения 2-метил-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (20,00 мг, с выходом 26%) в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ: 93%, время удерживания = 3,838 минут. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺, время удерживания = 2,732 минут.

Пример 9

N-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин (способ I)

В сосуд объемом 20 мл помещали 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (250,00 мг; 1,63 ммоль) и 4-феноксианилин (452,29 мг: 2,44 ммоль), суспендированный в ацетонитриле (3,00 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение ночи. Мутную реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Твердое вещество фильтровали и промывали с помощью ацетонитрила. Твердое вещество сушили в вакууме для получения N-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (580,00 мг, с выходом 100%) в виде твердого вещества желтого цвета. МС: масса/заряд = 303 [M+H]⁺.

Пример 10

1-(4-((4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(47)

1-(4-((4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-4-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 96%. МС: масса/заряд = 439 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,91 (с, 1H), 8,00 (д, 1H), 7,70 (д, 2H), 7,48 (т, 2H), 7,25-7,19 (м, 3H), 7,11 (д, 1H), 6,77-6,69 (м, 2H), 6,04 (д, 1H), 5,62 (д, 1H), 4,25 (д, 1H), 3,93-3,87 (м, 3H), 2,68 (м, 1H), 2,30 (м, 1H), 1,34 (м, 1H), 0,92-0,75 (м, 4H).

Пример 11

1-(3-((4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(46)

1-(3-((4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 96%. МС: масса/заряд = 425 [M+H]⁺.

Пример 12

1-(3-((4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(48)

1-(3-((4-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 94%. МС: масса/заряд = 439 [M+H]⁺.

Пример 13

1-(4-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(37)

1-(4-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-4-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 455 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,40 (с, 1H), 7,89 (д, 1H), 7,44 (т, 2H), 7,36 (д, 2H), 7,22-7,07 (м, 5H), 6,78 (дд, 1H), 6,67 (д, 1H), 6,07 (д, 1H), 5,64 (д, 1H), 4,43-4,36 (м, 3H), 4,05 (д, 1H), 3,00 (т, 1H), 2,59 (т, 1H), 2,21 (м, 1H), 1,59-1,47 (м, 2H), 1,26-1,09 (м, 2H).

Пример 14

1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(29)

1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 94%. МС: масса/заряд = 441 [M+H]⁺.

Пример 15

1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(15)

1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 86%. МС: масса/заряд = 455 [M+H]⁺.

Пример 16

1-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(2)

1-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 441 [M+H]⁺.

Пример 17

1-(4-((4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(45)

1-(4-((4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (3-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-4-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 439 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,92 (с, 1H), 8,03 (д, 1H), 7,61 (т, 1H), 7,47-7,42 (м, 3H), 7,27-7,24 (м, 2H), 7,20 (т, 1H), 7,09 (д, 2H), 6,78 (д, 1H), 6,72 (дд, 1H), 6,05 (д, 1H), 5,63 (д, 1H), 4,26 (д, 1H), 3,95-3,85 (м, 3H), 2,70 (м, 1H), 2,30 (м, 1H), 1,40 (м, 1H), 0,94-0,75 (м, 4H).

Пример 18

1-(3-((4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он (40)

1-(3-((4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (3-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 90%. МС: масса/заряд = 425 [M+H]⁺.

Пример 19

1-(4-(4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(50)

1-(4-(4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (3-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 425 [M+H]⁺.

Пример 20

1-(3-((4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(44)

1-(3-((4-(3-феноксифенил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, (3-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 439 [M+H]⁺.

Пример 21

1-(6-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)-2-азаспиро[3.3]гептан-2-ил)проп-2-ен-1-он(28)

1-(6-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)-2-азаспиро[3.3]гептан-2-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-6-гидрокси-2-азаспиро[3.3]гептан-2-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 92%. МС: масса/заряд = 453 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,35 (с, 1H), 8,09 (д, 1H), 7,44 (т, 2H), 7,36 (д, 2H), 7,19-7,07 (м, 5H), 6,69 (д, 1H), 6,33-6,23 (м, 1H), 6,08 (д, 1H), 5,66 (д, 1H), 5,27 (м, 1H), 4,38 (с, 1H), 4,22 (с, 1H), 4,08 (с, 1H), 3,92 (с, 1H), 2,90-2,77 (м, 4H).

Пример 22

(S)-1-(2-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(25)

(S)-1-(2-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, (S)-трет-бутил-2-(гидроксиметил)азетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 80%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺.

Пример 23

(R)-1-(2-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(9)

(R)-1-(2-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, (R)-трет-бутил-2-(гидроксиметил)азетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 84%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺.

Пример 24

(E)-4-(диметиламино)-1-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(1)

(E)-4-(диметиламино)-1-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата и (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и G. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 498 [M+H]⁺.

Пример 25

N-(цис-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклобутил)акриламид (10)

N-(цис-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклобутил)акриламид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-(транс-3-гидроксициклобутил)карбамата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺.

Пример 26

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(30)

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилата и (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и G. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 512 [M+H]⁺.

Пример 27

1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(20)

1-(3-((4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)метил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-(гидроксиметил)азетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 74%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺.

Пример 28

N-(транс-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклобутил)акриламид (8)

N-(транс-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклобутил)акриламид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-(цис-3-гидроксициклобутил)карбамата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 97%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,66 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 8,21 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,35 (д, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,72 (д, 1H), 6,23 (дд, 1H), 6,10 (д, 1H), 5,62-5,56 (м, 2H), 4,39 (м, 1H), 2,97-2,90 (м, 2H), 2,64-2,56 (м, 2H).

Пример 29

N-(транс-4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклогексил)акриламид (39)

N-(транс-4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклогексил)акриламид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-(цис-4-гидроксициклогексил)карбамата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 455 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,35 (с, 1H), 8,04-7,99 (м, 2H), 7,43 (т, 2H), 7,37 (д, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,68 (д, 1H), 6,21-6,06 (м, 2H), 5,58 (д, 1H), 4,83 (м, 1H), 3,77 (м, 1H), 2,22-2,14 (м, 2H), 2,05-1,96 (м, 4H), 1,50-1,38 (м, 2H).

Пример 30

(R)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(34)

(R)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, (S)-трет-бутил-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺.

Пример 31

1-(3-(4-(4-(4-фторфенокси)фенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(27)

1-(3-(4-(4-(4-фторфенокси)фенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-(4-фторфенокси)фенола, трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 431 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,37 (с, 1H), 8,19 (д, 1H), 7,35-7,24 (м, 4H), 7,14-7,06 (м, 4H), 6,74 (д, 1H), 6,32 (дд, 1H), 6,07 (д, 1H), 5,79 (м, 1H), 5,66 (д, 1H), 4,78 (т, 1H), 4,69 (м, 1H), 4,51-4,41 (м, 2H).

Пример 32

(S)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(5)

(S)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, (R)-трет-бутил-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺.

Пример 33

1-(3-(6-(4-феноксифенил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиразин-1-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(23)

1-(3-(6-(4-феноксифенил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиразин-1-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 6-хлор-1H-пиразоло[3,4-b]пиразина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 398 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 9,32 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,32 (д, 2H), 7,47 (т, 2H), 7,26-7,12 (м, 5H), 6,43 (дд, 1H), 6,19 (д, 1H), 5,91 (м, 1H), 5,74 (д, 1H), 4,86 (т, 1H), 4,73 (м, 1H), 4,55 (т, 1H), 4,46 (м, 1H).

Пример 34

1-(3-(4-((4-феноксифенил)амино)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(6)

1-(3-(4-((4-феноксифенил)амино)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксианилина, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способа хI, D, E и F. ВЭЖХ: 87%. МС: масса/заряд = 412 [M+H]⁺.

Пример 35

(E)-4-(диметиламино)-N-(транс-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклобутил)бут-2-енамид (33)

(E)-4-(диметиламино)-N-(транс-3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)циклобутил)бут-2-енамид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-(цис-3-гидроксициклобутил)карбамата и (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и G. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 484 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,57 (д, 1H), 8,33 (с, 1H), 8,18 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,34 (д, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,70 (д, 1H), 6,57 (дт, 1H), 6,06 (д, 1H), 5,57 (pentet, 1H), 4,37 (м, 1H), 3,08-2,99 (м, 2H), 2,97-2,87 (м, 2H), 2,63-2,55 (м, 2H), 2,17 (с, 6H).

Пример 36

1-(3-(4-(4-бензилфенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(17)

1-(3-(4-(4-бензилфенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-бензилфенола, трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 411 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,32 (с, 1H), 8,19 (д, 1H), 7,33-7,28 (м, 6H), 7,23-7,20 (м, 3H), 6,73 (д, 1H), 6,31 (дд, 1H), 6,05 (д, 1H), 5,78 (м, 1H), 5,63 (д, 1H), 4,77 (м, 1H), 4,67 (м, 1H), 4,50-4,38 (м, 2H), 3,99 (с, 2H).

Пример 37

1-(3-(4-(4-(бензилокси)фенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(16)

1-(3-(4-(4-(бензилокси)фенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-(бензилокси)фенола, трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,33 (с, 1H), 8,18 (д, 1H), 7,51-7,32 (м, 5H), 7,24 (д, 2H), 7,08 (д, 2H), 6,73 (д, 1H), 6,32 (дд, 1H), 6,06 (д, 1H), 5,79 (м, 1H), 5,65 (д, 1H), 5,15 (с, 2H), 4,78 (т, 1H), 4,68 (м, 1H), 4,52-4,38 (м, 2H).

Пример 38

1-(3-(3-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[2,3-b]пиразин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(7)

1-(3-(3-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[2,3-b]пиразин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 3-бромо-5H-пирроло[2,3-b]пиразина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, D, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 397 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 9,08 (с, 1H), 8,22-8,16 (м, 3H), 7,45 (т, 2H), 7,21 (т, 1H), 7,13-7,07 (м, 4H), 6,76 (д, 1H), 6,43 (дд, 1H), 6,19 (д, 1H), 5,76-5,63 (м, 2H), 4,81 (д, 2H), 4,51 (д, 2H).

Пример 39

N-(4-((5-(1-акроилазетидин-3-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-ил)окси)фенил)бензамид (35)

N-(4-((5-(1-акроилазетидин-3-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-ил)окси)фенил)бензамид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, N-(4-гидроксифенил)бензамида, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E и F. ВЭЖХ: 94%. МС: масса/заряд = 440 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 10,34 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 8,20 (д, 1H), 7,99 (д, 2H), 7,85 (д, 2H), 7,65-7,52 (м, 3H), 7,31 (д, 2H), 6,75 (д, 1H), 6,34 (дд, 1H), 6,08 (д, 1H), 5,81 (м, 1H), 5,67 (д, 1H), 4,85-4,66 (м, 2H), 4,55-4,40 (м, 2H).

Пример 40

1-(3-(4-(4-(фениламино)фенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(22)

1-(3-(4-(4-(фениламино)фенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-(фениламино)фенола, трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 412 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,35 (с, 1H), 8,20-8,16 (м, 2H), 7,28-7,05 (м, 8H), 6,83 (т, 1H), 6,73 (д, 1H), 6,34 (дд, 1H), 6,08 (д, 1H), 5,80 (м, 1H), 5,67 (д, 1H), 4,79 (т, 1H), 4,69 (м, 1H), 4,54-4,38 (м, 2H).

Пример 41

1-(3-(6-(4-феноксифенил)-1H-пирроло[3,2-b]пиридин-1-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он (4)

1-(3-(6-(4-феноксифенил)-1H-пирроло[3,2-b]пиридин-1-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 6-хлор-1H-пирроло[3,2-b]пиридина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, D, E и F. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 396 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,69 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,11 (д, 1H), 7,79 (д, 2H), 7,43 (т, 3H), 7,21-7,05 (м, 5H), 6,72 (д, 1H), 6,42 (дд, 1H), 6,19 (д, 1H), 5,78-5,62 (м, 2H), 4,81 (т, 1H), 4,66-4,49 (м, 2H), 4,32 (м, 1H).

Пример 42

(E)-5,5-дифтор-1,3-диметил-7-(3-оксо-3-((2-(4-(4-оксо-4-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)амино)пропил)-5H-дипирроло[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]диазаборинин-4-ий-5-уид (32)

(E)-5,5-дифтор-1,3-диметил-7-(3-оксо-3-((2-(4-(4-оксо-4-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)амино)пропил)-5H-дипирроло[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]диазаборинин-4-ий-5-уид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата, (E)-4-(4-(2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)пиперазин-1-ил)бут-2-енольной кислоты и 7-(2-карбоксиэтил)-5,5-дифтор-1,3-диметил-5H-дипирроло[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]диазаборинин-4-ий-5-уида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E, G, E и G. ВЭЖХ: 95%. МС: масса/заряд = 829 [M+H]⁺.

Пример 43

(E)-6-((7-нитробензо[c][1,2,5]оксадиазол-4-ил)амино)-N-(2-(4-(4-оксо-4-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)гексанамид (31)

(E)-6-((7-нитробензо[c][1,2,5]оксадиазол-4-ил)амино)-N-(2-(4-(4-оксо-4-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)гексанамид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил 3-йодоазетидин-1-карбоксилата, (E)-4-(4-(2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)пиперазин-1-ил)бут-2-енольной кислоты и 6-((7-нитробензо[c][1,2,5]оксадиазол-4-ил)амино)гексановой кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E, G, E и H. ВЭЖХ: 95%. МС: масса/заряд = 830 [M+H]⁺.

Пример 44

3-метил-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(49)

3-метил-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-бромоазетидин-1-карбоксилата и 3-метилбут-2-енoилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E и F. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 441 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,36 (с, 1H), 8,16 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,33 (д, 2H), 7,20-7,04 (м, 5H), 6,73 (д, 1H), 5,78-5,67 (м, 2H), 4,70-4,55 (м, 2H), 4,45-4,31 (м, 2H), 2,00 (с, 3H), 1,81 (с, 3H).

Пример 45

(E)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(38)

(E)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-3-бромоазетидин-1-карбоксилата и (E)-бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E и H. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 427 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,37 (с, 1H), 8,18 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,34 (д, 2H), 7,17 (т, 1H), 7,12-7,04 (м, 4H), 6,74 (д, 1H), 6,61 (м, 1H), 6,02 (д, 1H), 5,78 (м, 1H), 4,78-4,61 (м, 2H), 4,50-4,34 (м, 2H), 1,81 (д, 3H).

Пример 46

N-(2-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)этил)акриламид (42)

N-(2-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)этил)акриламид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-(2-йодоэтил)карбамата и акриловой кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E и H. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 401 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,32 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,74 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,34 (д, 2H), 7,20-7,04 (м, 5H), 6,62 (д, 1H), 6,13 (дд, 1H), 6,02 (д, 1H), 5,56 (д, 1H), 4,54 (т, 2H), 3,65 (кв, 2H).

Пример 47

N-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пропил)акриламид (26)

N-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пропил)акриламид получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-(3-йодопропил)карбамата, акриловой кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E и H. ВЭЖХ: 97%. МС: масса/заряд = 415 [M+H]⁺. пентет, 2H). ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,32 (с, 1H), 8,14 (т, 1H), 7,89 (д, 1H), 7,43 (т, 2H), 7,34 (д, 2H), 7,21-7,04 (м, 5H), 6,63 (д, 1H), 6,19-6,00 (м, 2H), 5,54 (д, 1H), 4,48 (т, 2H), 3,20-3,09 (м, 2H), 2,05 (пентет, 2H).

Пример 48

1-(3-(4-((1-бензил-1H-пиразол-4-ил)окси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(43)

1-(3-(4-((1-бензил-1H-пиразол-4-ил)окси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 1-бензил-1H-пиразол-4-ола, трет-бутил-3-бромоазетидин-1-карбоксилата, акриловой кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, D, E и H. ВЭЖХ: 88%. МС: масса/заряд = 401 [M+H]⁺.

Пример 49

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-(6-(4-феноксифенил)-1H-пирроло[3,2-b]пиридин-1-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(13)

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-(6-(4-феноксифенил)-1H-пирроло[3,2-b]пиридин-1-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 6-хлор-1H-пирроло[3,2-b]пиридина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, D, E и H. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 453 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,69 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 8,10 (д, 1H), 7,78 (пентет, 1H), 4,79 (т, 1H), 4,64-4,47 (м, 2H), 4,29 (м, 1H), 3,19 (д, 2H), 2,25 (с, 6H).

Пример 50

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-(3-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[2,3-b]пиразин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(24)

(E)-4-(диметиламино)-1-(3-(3-(4-феноксифенил)-5H-пирроло[2,3-b]пиразин-5-ил)азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 3-бромо-5H-пирроло[2,3-b]пиразина, (4-феноксифенил)бороновой кислоты, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, D, E и H. ВЭЖХ: 95%. МС: масса/заряд = 454 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 9,07 (с, 1H), 8,23-8,13 (м, 3H), 7,45 (т, 2H), 7,21 (т, 1H), 7,10 (т, 4H), 6,78-6,62 (м, 2H), 6,23 (д, 1H), 5,64 (пентет, 1H), 4,79 (д, 2H), 4,48 (д, 2H), 3,08 (д, 2H), 2,16 (с, 6H).

Пример 51

(S,E)-4-(диметиламино)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(18)

(S,E)-4-(диметиламино)-1-(3-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, 4-феноксифенола, (R)-трет-бутил-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата и (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах B, C, E и H. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 484 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 10,20 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,75-7,29 (м, 8H), 6,93-6,58 (м, 3H), 6,42 (дд, 1H), 6,25 (д, 1H), 5,77 (д, 1H), 5,49 (с, 2H).

Пример 52

1-(3-(3-(1-бензил-1H-пиразол-4-ил)-5H-пирроло[2,3-b]пиразин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(52)

1-(3-(3-(1-бензил-1H-пиразол-4-ил)-5H-пирроло[2,3-b]пиразин-5-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он получали из 3-бромо-5H-пирроло[2,3-b]пиразина, 1-бензил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола, трет-бутил-3-йодоазетидин-1-карбоксилата и акроилхлорида с использованием процессов, подобных тем, которые описаны в способах A, D, E и F. ВЭЖХ: 98%. МС: масса/заряд = 385 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,83 (с, 1H), 8,48 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 8,08 (д, 1H), 7,40-7,29 (м, 5H), 6,70 (д, 1H), 6,42 (дд, 1H), 6,20 (д, 1H), 5,72 (д, 1H), 5,61 (кв, 1H), 5,40 (с, 2H), 4,81-4,70 (м, 2H), 4,49 (д, 2H).

Пример 53

7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин (способ J)

В сосуд для микроволнового реактора, содержащий 7-хлор-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин (1,00 г; 6,47 ммоль; 1,00 экв.), 4-фенокси-фенол (1807,17 мг; 9,71 ммоль; 1,50 экв.), карбонат цезия (4216,18 мг; 12,94 ммоль; 2,00 экв.) добавляли ДМФ (15,00 мл; 194,54 ммоль; 30,07 экв.). Смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов перед концентрированием и очищением с помощью колонки с 50 г KPNH (с градиентом 65-100% EtOAc в EOAc/гексане) для получения необходимого продукта в виде твердого вещества желтого цвета (830,7 мг, 42%). ¹H-ЯМР (CD₃OD) δ 8,49 (с, 1H), 8,27 (с, 1H), 7,27-7,46 (м, 4H), 7,04-7,23 (м, 5H), ВЭЖХ: 98%, МС: масса/заряд = 305 [М+H]⁺

Трет-бутил 4-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (способ K)

В сосуд для микроволнового реактора объемом 10 мл, содержащий 7-(4-фенокси-фенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин (20,00 мг; 0,07 ммоль; 1,00 экв.), трифенилфосфин (51,72 мг; 0,20 ммоль; 3,00 экв.) и трет-бутиловый эфир 4-гидрокси-пиперидин-1-карбоновой кислоты (26,46 мг; 0,13 ммоль; 2,00 экв.) добавляли ТГФ (1,00 мл; 37,03 ммоль; 563,40 экв.), а затем диизопропил (E)-диазен-1,2-дикарбоксилат (0,04 мл; 0,20 ммоль; 3,00 экв.). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа перед концентрированием и переносом на следующую стадию без очистки.

Гидрохлорид 7-(4-феноксифенокси)-1-(пиперидин-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина (способ L)

В сосуд для микроволнового реактора объемом 10 мл, содержащий трет-бутиловый эфир 4-[7-(4-Фенокси-фенокси)-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты (1360,26 мг; 2,79 ммоль; 1,00 экв.) в метаноле (5,00 мл) добавляли хлороводород (4,0н в диоксане, 3,00 мл; 13,95 ммоль; 5,00 экв.). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа перед концентрированием и переносом на следующую стадию без очистки.

1-(4-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он(12) (способ M)

В реакционную пробирку объемом 10 мл добавляли гидрохлорид 7-(4-фенокси-фенокси)-1-пиперидин-4-ил-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина (80,00 мг; 0,19 ммоль; 1,00 экв.), aкриловую кислоту (12,04 мкл; 0,19 ммоль; 1,00 экв.), этил-диизопропил-амин (0,16 мл; 0,94 ммоль; 5,00 экв.) и 1,2-дихлорэтан (2,00 мл; 25,26 ммоль; 133,86 экв.). Смесь перемешивали в течение 5 минут перед медленным добавлением 2,4,6-трипропил-[1,3,5,2,4,6]триоксатрифосфинан-2,4,6-триоксида (75,00 мкл; 0,19 ммоль; 1,00 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа перед концентрированием и очищением с использованием препаративной ВЭЖХ (с элюированием из 50-80% CH₃CN в 0,1% NH₄OH/H₂O) для получения необходимого продукта в виде белого твердого вещества после лиофилизации (2,8 мг, 3,2%). ВЭЖХ: 96%. МС: масса/заряд = 442[M+H]⁺. ¹H-ЯМР (МeOH-d4) δ 8,31 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,25 (м, 4H), 7,0 (м, 5H), 6,76 (д, 1H), 6,12 (д, 1H), 5,64 (д, 1H), 5,25 (с, 1H), 4,61 (д, 1H), 4,23 (д, 1H), 3,28 (м, 1H), 2,99 (т, 1H), 2,19 (м, 4H).

Пример 54

N -((1s,3s)-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)акриламид (11) (относительная конфигурация)

N-((1s,3s)-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)акриламид получали из 7-хлор-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил ((1s,3s)-3-аминоциклобутил)карбамата и акриловой кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые представлены в способах J, K, L и M. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 428 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,56 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,11-7,41 (м, 11H), 6,36 (д, 1H), 6,08 (м, 2H), 5,73 (м, 1H), 5,47 (м, 1H), 4,56 (м, 1H), 3,17 (м, 2H), 2,79 (м, 2H).

Пример 55

( E )-4-(диметиламино)-N-((1 s ,3 s )-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)бут-2-енамид (36)

(относительная конфигурация)

(E)-4-(диметиламино)-N-((1s,3s)-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)бут-2-енамид получали из 7-хлор-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил((1s,3s)-3-аминоциклобутил)карбамата и гидрохлорида (E)-4-(диметиламино)бут-2-енoльной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые представлены в способах J, K, L и M. ВЭЖХ: 93%. МС: масса/заряд = 485[M+H]⁺. ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,56 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,11-7,41 (м, 11H), 6,40 (м, 1H), 5,48 (м, 1H), 5,02 (м, 2H), 4,47 (м, 1H), 3,86 (м, 1H), 3,17 (м, 2H), 2,94 (м, 8H).

Пример 56

N -((1 r ,3 r )-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)акриламид (21)

(относительная конфигурация)

N-((1r,3r)-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)-3-(пиперидин-1-ил)пропанамид получали из 7-хлор-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил((1r,3r)-3-аминоциклобутил)карбамата и акриловой кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые представлены в способах J, K, L и M. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 428 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,54 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,11-7,41 (м, 11H), 6,33 (д, 1H), 6,15 (м, 1H), 5,92 (м, 1H), 5,72 (м, 1H), 3,27 (м, 2H), 2,80 (м, 2H).

Пример 57

( E )-4-(диметиламино)- N -((1 r ,3 r )-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)бут-2-енамид (41)

(относительная конфигурация)

(E)-4-(диметиламино)-N-((1r,3r)-3-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)циклобутил)бут-2-енамид получали из 7-хлор-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил ((1r,3r)-3-аминоциклобутил)карбамата и гидрохлорида (E)-4-(диметиламино)бут-2-енoльной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые представлены в способах J, K, L и M. ВЭЖХ: 99%. МС: масса/заряд = 485 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,55 (с, 1H), 8,29 (с, 1H), 7,11-7,41 (м, 11H), 6,79 (д, 1H), 6,43 (м, 2H), 5,81 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 4,75(м, 1H), 3,75 (м, 2H), 3,19 (м, 2H), 2,89 (с, 6H).

Пример 58

( E )-4-(диметиламино)-1-(4-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он(14)

(E)-4-(диметиламино)-1-(4-(7-(4-феноксифенокси)-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидин-1-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он получали из 7-хлор-1H-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 4-феноксифенола, трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата и гидрохлорида (E)-4-(диметиламино)бут-2-енольной кислоты с использованием процессов, подобных тем, которые представлены в способах J, K, L и M. ВЭЖХ: 95%. МС: масса/заряд = 499 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,50 (с, 1H), 8,43 (с, 1H), 7,46 (м, 4H), 7,11 (м, 5H), 6,79 (м, 1H), 6,59 (м, 1H), 5,23 (м, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,25 (м,1H), 2,96 (т, 1H), 2,47 (с, 6H), 2,22 (м, 2H), 2,04 (м, 2H).

Пример 59

3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]азетидин-1-карбонитрил (68)

К раствору (3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]азетидина (700 мг, 1,95 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 10 мл) добавляли бикарбонат натрия (657 мг, 7,82 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (249 мг, 2,35 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 40,0% до 50,0% за 11 минут. 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]азетидин-1-карбонитрил получали в виде твердого вещества желтого цвета (30 мг, 10% для 3 стадий). ВЭЖХ: 99,0%, время удерживания = 1,805 минут. МС: масса/заряд = 384,3 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,37 (с, 1H), 8,25 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,36-7,45 (м, 4H), 7,05-7,18 (м, 5H), 6,77 (д, J=3,2 Гц, 1H), 5,79-5,87 (м, 1H), 4,65-4,72 (м, 4H).

Пример 60

3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пирролидин-1-карбонитрил (58)

При комнатной температуре к раствору 3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пирролидина (780 мг, 2,02 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (10:4, 14 мл) добавляли бикарбонат натрия (679 мг, 8,08 ммоль, 4,00 экв.) и цианистый бром (254 мг, 2,40 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали с помощью 3×10 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 35,0% до 70,0% за 10 минут. 3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пирролидин-1-карбонитрил получали в виде твердого вещества белого цвета с желтоватым оттенком (230 мг, 28%). ВЭЖХ: 97,3%, время удерживания = 2,027 минут. МС: масса/заряд = 412,4 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,33 (с, 1H), 7,90 (д, J=4 Гц, 1H), 7,45-7,35 (м, 4H), 7,18-7,06 (м, 5H), 6,67-6,66 (д, J=4 Гц, 1H), 4,53-4,42 (м, 2H), 3,52-3,49 (м, 1H), 3,48-3,37 (м, 2H), 3,35-3,18 (м, 1H), 2,91-2,84 (м, 1H), 1,91-1,83 (м, 1H), 1,72-1,65 (м, 1H).

Пример 61

2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пирролидин-1-карбонитрил (61)

К раствору 2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пирролидина (382 мг, 0,99 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 8 мл) добавляли бикарбонат натрия (333 мг, 3,96 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (126 мг, 1,19 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующем условии: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH4HCO3), с градиентом от 40% до 65% за 10 минут. 2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пирролидин-1-карбонитрил получали в виде твердого вещества желтого цвета (34 мг, 10% для 3 стадий). ВЭЖХ: 99,4%, время удерживания = 2,009 минут. МС: масса/заряд = 412,2 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,33 (с, 1H), 7,88 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,40 (м, 2H), 7,36-7,33 (м, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,68 (д, J=3,2 Гц, 1H), 4,59-4,53 (м, 1H), 4,49-4,43 (м, 1H), 4,16-4,13.

Пример 62

4-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидин-1- карбонитрил (59)

К раствору 4-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидина (80 мг, 0,20 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде(10:4, 5 мл) добавляли бикарбонат натрия (67 мг, 0,80 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (25 мг, 0,24 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную в результате смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 35,0% до 70,0% за 10 минут. 4-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидин-1-карбонитрил получали в виде белого твердого вещества (30 мг, 35%). ВЭЖХ: 97,7%, время удерживания = 2,028 минут. МС: масса/заряд = 426,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,32 (с, 1H), 7,85 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,41 (м, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,64 (с, 1H), 4,35 (д, J=7,2 Гц, 2H), 3,37-3,30 (м, 2H), 2,96 (м, 2H), 2,10-2,05 (м, 1H), 1,46-1,37 (м, 4H).

Пример 63

3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидин-1-карбонитрил (60)

К раствору 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидина (74 мг, 0,20 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (10:4, 3 мл) добавляли бикарбонат натрия (67 мг, 0,80 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (25 мг, 0,24 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 um; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 35,0% до 70,0% за 10 минут. 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидин-1-карбонитрил получали в виде белого твердого вещества (30 мг, 38%). ВЭЖХ: 98,9%, время удерживания = 1,922 минут. МС: масса/заряд = 398,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,35 (с, 1H), 7,96 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,35 (м, 4H), 7,18-7,05 (м, 5H), 6,70 (д, J=3,2 Гц, 1H), 5,63 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,94-3,83 (м, 2H), 3,68-3,60 (м, 2H), 3,32-3,30 (м, 2H).

Пример 64

(3R)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидин-1-карбонитрил (71)

К раствору (3R)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидина (340 мг, 0,91 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде(10:4, 3 мл) добавляли бикарбонат натрия (368 мг, 4,38 ммоль, 4,80 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (116 мг, 1,10 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 30,0% до 65,0% за 10 минут. 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидин-1-карбонитрил получали в виде белого твердого вещества (300 мг, 46% для 3 стадий). ВЭЖХ: 95,0%, время удерживания = 3,061 минут. МС: масса/заряд = 398,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,60-8,40 (с, 1H), 7,60-7,45 (с, 1H), 7,40-7,30 (м, 2H), 7,20-7,00 (м, 7H), 6,90-6,75 (с, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 4,10-3,95 (м, 1H), 3,90-3,75 (м, 1H), 3,75-3,55 (м, 2H), 2,70-2,50 (м, 1H), 2,50-2,30 (м, 1H).

Пример 65

(3S)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидин-1-карбонитрил (72)

К раствору (3S)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидина (340 мг, 0,91 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 10 мл) добавляли бикарбонат натрия (368 мг, 4,38 ммоль, 4,80 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (116 мг, 1,10 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 30,0% до 65,0% за 10 минут. 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пирролидин-1-карбонитрил получали в виде белого твердого вещества (80мг, 13% для 3 стадий). ВЭЖХ: 95,0%, время удерживания = 2,835 минут. МС: масса/заряд = 398,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,65-8,55 (с, 1H), 7,75-7,55 (с, 1H), 7,45-7,30 (м, 2H), 7,25-7,00 (м, 7H), 6,95-6,80 (с, 1H), 5,85-5,70 (м, 1H), 4,10-3,98 (м, 1H), 3,90-3,80 (м, 1H), 3,80-3,55 (м, 2H), 2,70-2,55 (м, 1H), 2,55-2,30 (м, 1H).

Пример 66

2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидин-1-карбонитрил (62)

К раствору 2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил] пирролидина (382 мг, 0,99 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде(3:1, 8 мл) добавляли бикарбонат натрия (333 мг, 3,96 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (126 мг, 1,19 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 40% до 65% за 10 минут. 2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидин-1-карбонитрил получали в виде твердого вещества желтого цвета (34 мг, 10% для 3 стадий). ВЭЖХ: 96,8%, время удерживания = 1,615 минут. МС: масса/заряд = 426,2 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,34 (с, 1H), 7,87 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,40 (м, 2H), 7,39-7,34 (м, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,68 (д, J=3,2 Гц, 1H), 4,78-4,72 (м, 1H), 4,61-4,55 (м, 1H), 3,76-3,73 (м, 1H), 3,45-3,40 (м, 1H), 3,13-3,08 (м, 1H), 1,72-1,70 (м, 1H), 1,61-1,54 (м, 3H), 1,48-1,41 (м, 2H).

Пример 67

3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидин-1-карбонитрил (63)

К раствору 3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидина (380 мг, 0,99 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 8 мл) добавляли бикарбонат натрия (333 мг, 3,96 ммоль, 4,00 экв.). Затем добавляли цианистый бром (126 мг, 1,19 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде(с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 35% до 70% за 12 минут. Получали 3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]пиперидин-1-карбонитрил (32 мг, 12% для 3 стадий). ВЭЖХ: 99,2%, время удерживания = 2,116 минут. МС: масса/заряд = 426,2 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,33 (с, 1H), 7,85 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,40 (м, 2H), 7,37-7,33 (м, 2H), 7,19-7,06 (м, 5H), 6,66 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,40-4,35 (м, 2H), 3,34-3,16 (м, 2H).

Пример 68

3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пиперидин-1-карбонитрил (64)

К раствору 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пиперидина (275 мг, 0,71 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде(3:1, 8 мл) добавляли бикарбонат натрия (239 мг, 2,85 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (91 мг, 0,86 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт (100 мг) очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 30% до 75% за 8 минут. Получали 3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]пиперидин-1-карбонитрил (31 мг, 15% для 3 стадий). ВЭЖХ: 98,9%, время удерживания = 2,251 минут. МС: масса/заряд = 412,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,34 (с, 1H), 7,98 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,35 (м, 4H), 7,18-7,06 (м, 5H), 6,70 (д, J=3,2 Гц, 1H), 5,05-5,01 (м, 1H), 3,86-3,81 (м, 1H), 3,42-3,362 (м, 2H), 3,13-3,06 (м, 1H), 2,23-2,11 (м, 2H), 1,91-1,88 (м, 2H).

Пример 69

6-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-2-азаспиро[3.3]гептан-2-карбонитрил (69)

К раствору (6-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-2-азаспиро[3.3]гептана (382 мг, 0,96 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 10 мл) добавляли бикарбонат натрия (322,6 мг, 3,84 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (122 мг, 1,15 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 0,1% ТФУК), с градиентом от 40,0% до 50,0% за 11 минут. 6-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-2-азаспиро[3.3]гептан-2-карбонитрил получали в виде твердого вещества желтого цвета (30 мг, 15% для 3 стадий). ВЭЖХ: 98,2%, время удерживания = 1,802 минут. МС: масса/заряд = 424,4 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,31 (с, 1H), 8,05 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,41-7,45 (м, 2H), 7,32-7,34 (м, 2H), 7,14-7,18 (м, 1H), 7,06-7,12 (м, 4H), 6,67 (д, J=3,2 Гц, 1H), 5,17-5,26 (м, 1H), 4,3 (с, 2H), 4,15 (с, 2H), 2,84-2,89 (м, 2H), 2,74-2,80 (м, 2H).

Пример 70

2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]азетидин-1-карбонитрил (65)

К раствору 2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]азетидина (491 мг, 1,32 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 8 мл) добавляли бикарбонат натрия (443,6 мг, 5,28 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (168 мг, 1,69 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мк; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 46,0% до 48,0% за 10 минут. Получали 2-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]азетидин-1-карбонитрил (31 мг, 8% для 3 стадий). ВЭЖХ: 98,6%, время удерживания = 1,255 минут. МС: масса/заряд = 398,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,34 (с, 1H), 7,88 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,45-7,35 (м, 4H), 7,18-7,05 (м, 5H), 6,68 (д, J=3,2 Гц, 1H), 4,91-4,87 (м, 1H), 4,72 (д, J=6 Гц, 2H), 4,08-4,01 (м, 1H), 3,85-3,79 (м, 1H), 2,37-2,29 (м, 1H), 2,18-2,15 (м, 1H).

Пример 71

3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]азетидин-1-карбонитрил (66)

При комнатной температуре к раствору 3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]азетидина (510 мг, 1,37 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 10 мл) добавляли бикарбонат натрия (460 мг, 5,48 ммоль, 4,00 экв.). Затем добавляли цианистый бром (173 мг, 1,63 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 30% до 70% за 10 минут. 3-[[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]метил]азетидин-1-карбонитрил получали в виде белого твердого вещества (30 мг, 15% для 3 стадий). ВЭЖХ: 99,6%, время удерживания = 1,917 минут. МС: масса/заряд = 398,3 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) δ 8,33 (с, 1H), 7,91 (д, J=4 Гц, 1H), 7,45-7,35 (м, 4H), 7,18-7,06 (м, 5H), 6,67 (д, J=4 Гц, 1H), 4,53-4,42 (м, 2H), 3,52-3,49 (м, 1H), 3,48-3,37 (м, 2H), 3,35-3,18 (м, 1H), 2,91-2,84 (м, 1H), 1,91-1,83 (м, 1H), 1,72-1,65 (м, 1H).

Пример 72

Трет-бутил N-[(1R,3R)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутил]карбамат

При 0°C к раствору 4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина (607,0 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.) в ТГФ (20 мл) добавляли трет-бутил-N-[(1S,3S)-3-гидроксициклобутил]карбамат (374,70 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.) и PPh₃ (524,89 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.). Затем медленно добавляли диизопропил азодикарбоксилат (404,66 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.) при 0°C. Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при 50°C в масляной бане. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикалегем с в условиях градиентного элюирования с 10-40% EtOAC в гексане для получения трет-бутил-N-[(1R,3R)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутил]карбамата в виде бесцветного сиропа (1,3 г).

(1R,3R)-N-метил-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутан-1-амин

При комнатной температуре трет-бутил-N-[(1R,3R)-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутил]карбамат (940 мг, 1,99 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в ТГФ (15 мл). Затем по частям добавляли LiAlH₄ (150 мг, 3,95 ммоль, 2,00 экв.) в течение 1 минуты. Полученный в результате раствор перемешивали в течение 3 часов при 60°C. Затем реакцию гасили с помощью 20 мл воды. Значение pH смеси корректировали до 3 с помощью раствора HCl (2M). Затем смесь экстрагировали с помощью 3×50 мл этилацетата. Значение pH водной фазы снова корректировали до 10 с помощью раствора гидроксида натрия (2M). Затем водный раствор экстрагировали с помощью 2×30 мл ДХМ/MeOH=30:1. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении для получения (1R,3R)-N-метил-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутан-1-амина в виде оранжевого сиропа (280 мг, 36% для двух стадий).

(1R,3R)-N-циано-N-метил-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутан-1-амин (67)

К раствору (1R,3R)-N-метил-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутан-1-амина (250,00 мг, 0,65 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде (3:1, 10 мл) добавляли бикарбонат натрия (217,38 мг, 2,69 ммоль, 4,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли цианистый бром (82,23 мг, 0,78 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт (250 мг) очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 10 мМ NH₄HCO₃), с градиентом от 25% до 75% за 12 минут. (1R,3R)-N-циано-N-метил-3-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклобутан-1-амин получали в виде твердого вещества желтого цвета (40 мг, 15%). ВЭЖХ: 99,0%, время удерживания = 1,948 минут. МС: масса/заряд = 412,3 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,51 (c, 1H), 7,58 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,58 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,38 (т, J=8,0 Гц, 2H), 7,28-7,21 (м, 2H), 7,17-7,09 (м, 5H), 6,75 (д, J=3,2 Гц, 1H), 5,65-5,57 (м, 1H), 3,84-3,78 (м, 1H), 2,97-2,85 (м, 7H).

Пример 73

1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-ол

При комнатной температуре, 1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-он (5,00 г, 32,01 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в ТГФ (50 мл). Затем по частям добавляли LiAlH₄ (1,22 г, 32,14 ммоль, 1,00 экв.) при 0°C в течение 5-минут. Затем смесь перемешивали в течение 2 часов при 0°C. Затем реакцию гасили посредством добавления 10 мл воды. Значение pH смеси корректировали до 1,0 с помощью раствора HCl (2M), который экстрагировали с помощью 3×100 мл этилацетата. Органические фазы объединяли и промывали с помощью 2×50 мл раствора соли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении для получения 1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-ола в виде бесцветного масла (3,2 г, 63%).

5-[1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-ил]-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин

При 0°C к раствору 4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина (607,0 мг, 2,0 ммоль, 1,0 экв.) в ТГФ (25 мл) добавляли 1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-ол (949,75 мг, 6,00 ммоль, 3,00 экв.) и PPh₃ (1,67 мг, 6,00 ммоль, 3,00 экв.). Затем капельно добавляли диизопропил азодикарбоксилат (1,21 г, 6,00 ммоль, 3,00 экв.) в тетрагидрофуране (5 мл) при 0°C. Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для получения 5-[1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-ил]-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (1,7 г, неочищенного).

4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-он

При комнатной температуре к раствору 5-[1,4-диоксаспиро[4.6]декан-8-ил]-4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина (1,4 г, 3,16 ммоль, 1,00 экв.) в ТГФ/воде (1:1, 30 мл) добавляли раствор соляной кислоты (2 мл, 12 N). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при 50°C. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли с помощью 10 мл H₂O, значение pH которого корректировали до 10 с использованием раствора гидроксида натрия (2M). Смесь экстрагировали с помощью 2×30 мл дихлорметана, и органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикалегем в условиях градиентного элюирования с 5% - 30% EtOAC в гексане для получения 4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-она в виде белого твердого вещества (1,6 г).

N-метил-4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-амин

При комнатной температуре к раствору 4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-она (400,00 мг, 1,00 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (10 мл) добавляли AcOH (30 мг, 0,60 ммоль, 0,60 экв.), затем добавляли метанамин (124 мг, 3,99 ммоль, 4,00 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Затем добавляли NaBH₄ (75,77 мг, 2,00 ммоль, 2,00 экв.), и смесь оставляли при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикалегем в условиях градиентного элюирования с 5% - 35% метанолом в дихлорметане для получения N-метил-4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-амина в виде белого твердого вещества (300 мг, 36% для 3 стадий).

(1R,4R)-N-циано-N-метил-4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-амин (70): К раствору (N-метил-4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-амина (290,00 мг, 0,70 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане/воде(3:1, 8 мл) добавляли бикарбонат натрия (117,65 мг, 1,40 ммоль, 2,00 экв.) при комнатной температуре. Затем добавляли циано-бромид (88,93 мг, 0,84 ммоль, 1,20 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью 10 мл воды и экстрагировали с помощью 3×20 мл дихлорметана. Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной ВЭЖХ при следующих условиях: препаративная колонка XBridge C18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; MeCN в воде (с 0,05% ТФУК), с градиентом от 30% до 70% за 10 минут. Получали неочищенный продукт (120 мг), который снова очищали посредством прераративной хиральной ВЭЖХ при следующих условиях: насадочная колонка Phenomenex Lux 5u Cellulose-4AXIA, 250×21,2 мм, 5 мкм; этанол в гексане (50,0% изократический за 30 минут). Получали (1R,4R)-N-циано-N-метил-4-[4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]циклогексан-1-амин (14 мг, 5%). ВЭЖХ: 99,6%, время удерживания = 3,382 минут. МС: масса/заряд = 440,1 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,37 (шир., 1H), 7,93 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,36-7,40 (м, 2H), 7,05-7,16 (м, 5H), 6,69 (с, 1H), 4,99-4,92 (м, 1H), 3,34-3,31 (м, 1H), 2,90 (с, 3H), 2,29-2,21 (м, 4H), 2,13-2,11 (м, 2H), 1,93-1,85 (м, 2H).

Пример 74

4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-карбонитрил (56) (способ N)

В сосуд для микроволнового реактора, содержащий 4-(4-Фенокси-фенокси)-5-пиперидин-4-ил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин (110,00 мг; 0,28 ммоль; 1,00 экв.), бромистый циан (83,68 мкл; 1,14 ммоль; 4,00 экв.) в ДХМ (5,00 мл; 78,00 ммоль; 274,04 экв.) добавляли диизопропилэтиламин (0,28 мл; 1,71 ммоль; 6,00 экв.). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов перед концентрированием, разбавляли с помощью 5мл EtOH и фильтровали. Собранный отфильтрованный осадок сушили для получения 4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-карбонитрила ( 80,0 мг, 68,3%) в виде твердого вещества белого цвета с желтоватым оттенком. ВЭЖХ: 100%. МС: масса/заряд = 412 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (ДМСО-д₆) δ 8,34 (с, 1H), 8,08 (д, 1H), 7,30-7,44 (м, 4H), 7,07-7,22 (м, 5H), 6,69 (д, 1H), 4,95 (м, 1H), 3,54 (д, 2H), 3,25 (м, 2H), 2,20 (м, 4H).

Пример 75

3-оксо-3-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)пропаннитрил

Именованное соединение получали с использованием 4-(4-Фенокси-фенокси)-5-пиперидин-4-ил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина, цианоуксусной кислоты, триэтиламина и 2,4,6-трипропил-[1,3,5,2,4,6]триоксатрифосфинана при условиях, подобных тем, которые использованы в способах A, C, E и G, описанных выше. МС: масса/заряд = 454[M+H]⁺.

Пример 76

(E)-2-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-карбонил)гекс-2-ен-нитрил (55)

К перемешиваемому раствору 3-оксо-3-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-пропионитрила (0,60 г; 0,67 ммоль; 1,00 экв.) в сухом ДХМ (6,65 г; 5,00 мл; 10,00 V) добавляли бутиральдегид (0,06 г; 0,86 ммоль; 1,60 экв.), а затем - пиперазин (0,00 г; 0,06 ммоль; 0,10 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов. Контроль реакции осуществляли посредством ТСХ. По завершении реакционную смесь разбавляли с помощью воды, органический слой промывали с помощью раствора соли и сушили над безводным сульфатом натрия. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (с силикалегем 60-120) с использованием петролейного эфира и этилацетата в качестве элюента (50-60%) для получения (E)-2-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-карбонил}-гекс-2-ен-нитрила (70,00 мг; 0,10 ммоль; 16,6%; бледно-желтая клейкая масса; очищенный продукт). МС: масса/заряд = 508[M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆): δ 8,52 (с, 1H), 7,55-7,54 (м, 1H), 7,40-7,36 (м, 2H), 7,27-7,20 (м, 3H), 7,19-7,13 (м, 4H), 6,80 (т, J=8,00 Гц, 1H), 5,13 (т, J=4,00 Гц, 1H), 5,90-5,80 (м, 1H), 4,20-4,10 (м, 1H), 3,30-3,10 (м, 1H), 2,90-2,80 (м, 1H), 2,55-2,50 (м, 2H), 2,38-2,31 (м, 2H), 2,11-2,08 (м, 2H), 1,64-1,55 (м, 2H), 1,03-0,92 (м, 3H).

Пример 77

(E)-4-(4-(2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)пиперазин-1-ил)бут-2-енoльная кислота

К перемешиваемому раствору 1-2-N-Boc-(аминоэтил)-пиперазина (2,00 г; 8,63 ммоль; 1,00 экв.) и триэтиламина (2,65 г; 3,65 мл; 25,90 ммоль; 3,00 экв.) в сухом ДХМ (17,80 г; 20,00 мл; 10,00 V) добавляли (E)-4-бромо-бут-2-енольную кислоту (1,74 г; 10,36 ммоль; 1,20 экв.) при 0°C в азотной атмосфере. После добавления реакционную смесь перемешивали при такой же температуре в течение дополнительных 2 часов. Реакционную смесь медленно доводили до комнатной температуры в течение 18 часов. По завершении выпавшее в осадок твердое вещество фильтровали, твердое вещество промывали с помощью ТГФ (25 мл), и фильтрат выпаривали под высоким вакуумом. Неочищенный продукт непосредственно вылили на колонку (с силикагелем 60-120) с использованием ДХМ и метанола в качестве элиента (12-15%) для получения (E)-4-[4-(2-трет-бутоксикарбониламино-этил)-пиперазин-1-ил]-бут-2-енольной кислоты (1,20 г; 3,48 ммоль; 40,4%). МС: масса/заряд = 314[M+H]⁺(TIC).

Трет-бутил (E)-(2-(4-(4-оксо-4-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)карбамат

К перемешиваемому раствору 4-(4-фенокси-фенокси)-5-пиперидин-4-ил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина (0,80 г; 1,80 ммоль; 1,00 экв.) в сухом ДХМ (10,64 г; 8,00 мл; 10,00 V) добавляли (E)-4-[4-(2-трет-бутоксикарбониламино-этил)-пиперазин-1-ил]-бут-2-енольной кислоты (0,67 г; 1,98 ммоль; 1,10 экв.), а затем - триэтиламин (0,65 г; 5,40 ммоль; 3,00 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали до 0^oC и добавляли T3P (50% в этилацетате) (1,72 г; 1,70 мл; 2,70 ммоль; 1,60 экв.) в азотной атмосфере. Реакционную смесь оставляли для медленного нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 6 часов. Контроль реакции осуществляли посредством ТСХ. По завершении реакционную смесь разбавляли с помощью 10% раствора NaHCO₃. Органический слой разделяли и промывали водой, раствором соли и сушили над безводным сульфатом натрия для получения трет-бутилового эфира {2-[4-((E)-4-оксо-4-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-енил)-пиперазин-1-ил]-этил}-карбаминовой кислоты (1,47 g; 1,47 ммоль; 81,4%; бесцветная пена; неочищенный продукт). МС: масса/заряд = 682 [M+H]⁺.

(E)-4-(4-(2-аминоэтил)пиперазин-1-ил)-1-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он

Смесь 4н HCl в 1,4-диоксане и трет-бутиловый эфир {2-[4-((E)-4-оксо-4-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-енил)-пиперазин-1-ил]-этил}-карбаминовой кислоты (1,00 г; 0,00 моль; 1,00 экв.) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Контроль реакции осуществляли посредством ТСХ. По завершении реакционную смесь концентрировали в высоком вакууме. Остаток растворяли с помощью воды (25 мл), и водный слой промывали с помощью этилацетата (25 мл × 3). Водный слой превращали в основание (~pH=8) с помощью NaHCO₃ (твердым) и экстрагировали с помощью этилацетата (25 мл × 3). Объединенный органический слой промывали с помощью раствора соли и выпаривали в высоком вакууме для получения (E)-4-[4-(2-амино-этил)-пиперазин-1-ил]-1-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-ен-1-она (0,60 г; 0,77 ммоль; 79,9%) МС: масса/заряд = 582[M+H]⁺.

Трет-бутил (E)-(15-оксо-18-(4-(4-оксо-4-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)-3,6,9,12-тетраокса-16-азаоктадецил)карбамат

К перемешиваемому раствору (E)-4-[4-(2-амино-этил)-пиперазин-1-ил]-1-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-ен-1-она (1,00 г; 1,29 ммоль; 1,00 экв.) в сухом ДХМ (13,30 г; 10,00 мл; 10,00 V) добавляли 3-(2-{2-[2-(2-трет-бутоксикарбониламино-этокси)-этокси]-этокси}-этокси)-пропионовую кислоту (0,68 г; 1,65 ммоль; 1,20 экв.), затем - триэтиламин (0,40 г; 0,65 мл; 3,87 ммоль; 3,00 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали до 0-5°C и добавляли T3P (50% в этилацетате) (1,23 г; 1,22 мл; 1,93 ммоль; 1,60 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Контроль реакции осуществляли посредством ТСХ. Реакционную смесь разбавляли с помощью 10% раствора NaHCO₃ и экстрагировали с помощью ДХМ. Органический слой промывали с помощью воды (25мл), раствора соли (25 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (60-120 кварцевой) с использованием хлороформа и метанола в качестве элюента (2-5%) для получения трет-бутилового эфира [2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-((E)-4-оксо-4-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-енил)-пиперазин-1-ил]-этилкарбамоил}-этокси)-этокси]-этокси}-этокси)-этил]-карбаминовой кислоты(0,43 г; 0,43 ммоль; 33,4%; бесцветная клейкая масса). МС: масса/заряд = 930[M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆): 8,31 (с, 1H), 8,02 (д, J=4,00 Гц, 1H), 7,74 (т, J=4,00 Гц, 1H), 7,39-7,35 (м, 2H), 7,34-7,33 (м, 2H), 7,17-7,10 (м, 1H), 7,10-7,04 (м, 4H), 6,75-6,70 (м, 1H), 6,66-6,55 (м, 3H), 5,04-5,00 (м, 1H), 4,55-4,53 (м, 1H), 4,30-4,20 (м, 1H), 3,58-3,50 (м, 2H), 3,48-3,47 (м, 12H), 3,46-3,37 (м, 2H), 3,35-3,32 (м, 1H), 3,32-3,30 (м, 2H), 3,15-3,12 (м, 4H), 2,55-2,50 (м, 1H), 2,49-2,48 (м, 10H), 2,28-2,20 (м, 2H), 1,98-1,90 (м, 2H), 1,35 (с, 9H).

(E)-1-амино-N-(2-(4-(4-оксо-4-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)-3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (73)

Трет-бутиловый эфир [2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-((E)-4-оксо-4-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-енил)-пиперазин-1-ил]-этилкарбамоил}-этокси)-этокси]-этокси}-этокси)-этил]-карбаминовой кислоты (0,38 ммоль; 1,00 экв.; 350,00 мг) объединяли с 4н HCl в диоксане (10,00 мл) и метаноле (74,06 ммоль; 196,60 экв.; 2373,00 мг; 3,00 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем удаляли весь растворитель, и неочищенный продукт сушили в высоком вакууме в течение ночи для получения 3-(2-{2-[2-(2-Амино-этокси)-этокси]-этокси}-этокси)-N-{2-[4-((E)-4-оксо-4-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-енил)-пиперазин-1-ил]-этил}-пропионамида (314,00 мг; 0,38 ммоль), который использовали без очистки. МС: масса/заряд = 830 [M+H]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆): 8,45 (с, 1H), 8,22 (с, 2H), 8,15–8,04 (м, 2H), 7,88 (с, 4H), 7,58–7,30 (м, 1H), 7,30–6,93 (м, 2H), 6,80–6,51 (м, 2H), 5,12 (с, 2H), 4,65 (д, J=13,8 Гц, 2H), 4,28 (с, 1H), 4,00–3,15 (м, 16H), 3,07-2,71 (м, 6H), 2,44–2,15 (м, 5H), 2,02 (д, J=13,4 Гц, 1H).

Пример 78

(E)-1-((4-(5,5-дифтор-1,3,7,9-тетраметил-5H-4l4,5l4-дипирроло[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]диазаборинин-10-ил)фенил)амино)-N-(2-(4-(4-оксо-4-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)-1-тиоxo-5,8,11,14-тетраокса-2-азагептадекан-17-амид (74)

3-(2-{2-[2-(2-амино-этокси)-этокси]-этокси}-этокси)-N-{2-[4-((E)-4-оксо-4-{4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-ил}-бут-2-енил)-пиперазин-1-ил]-этил}-пропионамид (0,07 ммоль; 1,00 экв.; 59,00 мг) объединяли с 5,5-дифтор-10-(4-изотиоцианатофенил)-1,3,7,9-тетраметил-5H-4l4,5l4-дипирроло[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]диазаборинином (0,08 ммоль; 1,10 экв.; 29,85 мг), N-этилдиизопропиламином (0,21 ммоль; 3,00 экв.; 27,60 мг; 0,04 мл) и MeCN (38,29 ммоль; 538,03 экв.; 1572,00 мг; 2,00 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Неочищенную реакционную массу очищали непосредственно на обращенно-фазовой препаративной колонке с использованием градиента 20-80% CH3CN/H20 (0,1% муравьиная кислота) для получения (E)-1-((4-(5,5-дифтор-1,3,7,9-тетраметил-5H-4l4,5l4-дипирроло[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]диазаборинин-10-ил)фенил)амино)-N-(2-(4-(4-оксо-4-(4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-ил)пиперазин-1-ил)этил)-1-тиоxo-5,8,11,14-тетраокса-2-азагептадекан-17-амида (22,10 мг, 0,02 ммоль, 23,8%) в виде твердого вещества желтого цвета. МС: масса/заряд = 605[M+H/2]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆): 8,31 (с, 1H), 8,02 (д, J=4,00 Гц, 1H), 7,74 (т, J=4,00 Гц, 1H), 7,39-7,35 (м, 4H), 7,34-7,33 (м, 6H), 7,17-7,10 (м, 1H), 7,10-7,04 (м, 4H), 6,75-6,70 (м, 1H), 6,66-6,55 (м, 3H), 5,04-5,00 (м, 1H), 4,55-4,53 (м, 1H), 4,30-4,20 (м, 1H), 3,58-3,50 (м, 2H), 3,48-3,47 (м, 12H), 3,46-3,37 (м, 2H), 3,35-3,32 (м, 1H), 3,32-3,30 (м, 2H), 3,15-3,12 (м, 4H), 2,55-2,50 (м, 1H), 2,49-2,48 (м, 23H), 2,28-2,20 (м, 2H), 1,98-1,90 (м, 2H).

Пример 79

N-циано-4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-карбоксамид (57)

Цианамид (0,69 ммоль; 2,10 экв.; 28,81 мг) растворяли в ТГФ, затем охлаждали до 0^oC на масляной бане. Затем в один прием добавляли NaH (60%) (0,82 ммоль; 2,60 экв.; 32,63 мг), и смесь перемешивали на масляной бане под азотом в течение 30 минут. Затем к перемешиваемому раствору добавляли 4-нитрофениловый эфир 4-[4-(4-фенокси-фенокси)-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты (0,33 ммоль; 1,00 экв.; 179,98 мг), и масляную баню удаляли. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем неочищенную реакцию гасили с помощью насыщенного бикарбоната натрия и экстрагировали три раза с помощью EtOAC. Добавляли насыщенный раствор NaCl и экстрагировали дополнительно еще 3 раза с помощью EtOAC. Органические вещества объединяли, а затем концентрировали досуха и очищали посредством обращенно-фазовой хроматографии с использованием 10-100% CH₃CN/H₂O (0,1% гидроксида аммония) для получения N-циано-4-(4-(4-феноксифенокси)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-5-ил)пиперидин-1-карбоксамида. МС: масса/заряд = 455[M+H]⁺. ¹H-ЯМР (МeOH-d4) δ 8,31 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,25 (м, 5H), 7,0 (м, 5H), 6,76 (д, 1H), 6,12 (д, 1H), 5,64 (д, 1H), 5,25 (с, 1H), 4,61 (д, 1H), 4,23 (д, 1H), 3,28 (м, 1H), 2,99 (т, 1H), 2,19 (м, 4H).

Пример 80

Ферментный анализ IC50 BTK (анализ A)

Далее описан микрожидкостный off-chip анализ сдвига мобильности киназы, используемый для оценки присущей соединениям активности по отношению к ферменту BTK.

2,6X сырье полноразмерной BTK человека (08-080) от CarnaBio USA, Inc., Natick, MA, 1,6X ATP и соответствующий пептидный субстрат kinKDR (FITC-AHA-EEPLYWSFPAKKK10NH2) получали в буфере для киназной реакции, состоящем из 25 мМ МgCl2, 0,015% Brij-35 (30%), 100 мМ Hepes, pH 7,6 и 10 мМ дитиотреитола.

5 мкл ферментного буфера и 7,6 мкл смеси пептидного субстрата АТФ/kinKDR добавляли в 384-луночные, стерильные, полипропиленовые планшеты Matrix (#115304) (Thermo Fisher Scientific, 15 Hudson, NH) с 125 нл серийно разведенными соединениями, полученными в 100% ДМСО, и инкубировали в течение 90 минут при 27°C. После инкубационного периода реакции останавливали посредством добавления 60 мкл останавливающего буфера, состоящего из 100 мМ Hepes, pH 7,6, 0,015% Brij-35 (30%), 0,277% покрывающего реагента #3 (Caliper Life Sciences, Mountain View, CA), 5% ДМСО.

Остановленные реакции наблюдали при -2 PSI, -3000 V/-700 V на планшетном ридере LabChip 3000 20 от Caliper Life Sciences, компании PerkinElmer Company (Hopkinton, MA), и активность измеряли посредством микрожидкостного off-chip анализа сдвига мобильности с измерением разницы заряд/масса между субстратом и продуктом, получившимся в результате пептидного фосфорилирования. IC50 и эффективность определяли путем составления графика показателей [ингибитора] относительно % активности в GeneData Screener (Базель, Швейцария).

Анализ B: Btk играет ключевую роль в опосредовании передачи сигнала B-клеточного рецептора антигена (BCR) после анти-IgM стимуляции. На сущности этого принципа был основан функциональный анализ на основе клеток для определения потенциальной способности соединений при ингибировании анти-IgM-индуцированной экспрессии CD69, в прямом направлении от события передачи сигнала BCR, в свежевыделенных мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC) человека. При анализе 90 мкл суспензии PBMC, содержащей 2,6×10⁵ клеток, предварительно обрабатывали 10 мкл тестируемого соединения при различных концентрациях в течение часа, а затем инкубировали в течение ночи (приблизительно 16-18 часов) с 5 мкл 420 мкг/мл F(ab')₂-фрагментом козьего специфического против Fc-фрагмента IgM человека affiniPure на лунку (Dianova, Cat.No.: 109-006-129). После инкубации клетки промывали иммуноокрашивали с помощью APC-меченного мышиного антитела против CD69 человека (BD Biosciences; клон: FN50), PerCP-Cy5,6-меченного мышиного антитела против CD19 человека (BD Biosciences; клон: SJ25C1) и FITC-меченного мышиного антитела против CD3 человека (BD Biosciences; клон: HIT3a) и фиксировали для проточного цитометрического анализа экспрессии CD69 на положительных клетках CD19 (B-клетках). Процент CD69, экспрессирущих CD19 положительные клетки, наносили в зависимости от концентрации тестируемых соединений для получения кривой концентрация-эффект и расчета величины IC₅₀ в качестве меры измерения активности тестируемых соединений в анализе.

Данные представлены следующим образом:

+ > 5 мкM;

++ > 1-5 кмM;

+++ > 0,1-1 мкM;

++++ < 0,1 мкM.

Пример 81

Фармацевтические препараты

(A) ампулы для инъекций: раствор 100 г активного ингредиента по изобретению и 5 г двузамещенного фосфата натрия в 3 л бидистиллированной воды доводят до уровня pH 6,6 с использованием 2 н соляной кислоты, стерилизуют фильтрованием, переносят в ампулы для инъекций, лиофилизируют в стерильных условиях и герметизируют в стерильных условиях. Каждая ампула для инъекций содержит 5 мг активного ингредиента.

(B) Суппозитории: смесь 20 г активного ингредиента по изобретению растворяют с 100 г соевого лецитина и 1400 г масло какао, заливают в формы и оставляют для охлаждения. Каждый суппозиторий содержит 20 мг активного ингредиента.

(C) Раствор: раствор получают из 1 г активного ингредиента по изобретению, 9,38 г NaH₂PO₄ ⋅ 2 H₂O, 28,48 г Na₂HPO₄ ⋅ 12 H₂O и 0,1 г хлорида бензалкония в 940 мл бидистиллированной воды. Уровень pH корректируют до 6,8 и раствор доводят до 1 л и стерилизуют излучением. Такой раствор можно использовать в форме глазных капель.

(D) Мазь: 500 мг активного ингредиента по изобретению смешивают с 99,6 г вазелина при асептических условиях.

(E) Таблетки: смесь 1 кг активного ингредиента по изобретению, 4 кг лактозы, 1,2 кг картофельного крахмала, 0,2 кг талька и 0,1 кг стеарата магния прессуют для получения таблеток общепринятым способом таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного ингредиента.

(F) Покрытые оболочкой таблетки: таблетки прессуют аналогичным образом, как в примере E, и затем покрывают общепринятым способом оболочкой, состоящей из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.

(G) Капсулы: 2 кг активного ингредиента по изобретению наполняют твердые желатиновые капсулы общепринятым способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного ингредиента.

(H) Ампулы: раствор 1 кг активного ингредиента по изобретению в 60 л бидистиллированной воды стерилизуют фильтрованием, переносят в ампулы, лиофилизируют в стерильных условиях и герметизируют в стерильных условиях. Каждая ампула содержит 10 мг активного ингредиента.

(I) Спрей для ингаляций: 14 г активного ингредиента по изобретению растворяют в 10 л изотонического раствора NaCl и раствор переносят в коммерчески доступный контейнер с распылителем с насосным механизмом. Раствор можно применять для ротовой или носовой полости. Одно впрыскивание (приблизительно 0,1 мл) соответствует одной дозе, составляющей приблизительно 0,14 мг.

Несмотря на то что некоторые варианты осуществления настоящего изобретения описаны в настоящем документе, очевидно, что основные примеры можно изменять для получения других вариантов осуществления с использованием соединений и способов по настоящему изобретению. Таким образом, следует понимать, что объем настоящего изобретения следует определять согласно приложенной формуле изобретения, нежели по конкретным вариантам осуществления изобретения, представленным в качестве примера.