Результат интеллектуальной деятельности: Способ определения содержания в крови редкоземельных элементов: иттрия, лантана, церия, празеодима, неодима, самария, европия, гадолиния, тербия, диспрозия, гольмия, эрбия, тулия, иттербия и лютеция, методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в санитарно-гигиенических, экологических, лечебных и научных организациях, осуществляющих деятельность в области профпатологии и экологии человека при измерении массовых концентраций РЗЭ (иттрий, лантан, церий, празеодим, неодим, самарий, европий, гадолиний, тербий, диспрозий, гольмий, эрбий, тулий, иттербий, лютеций) в крови.

Интенсивное развитие промышленности приводит к усилению негативного влияния на здоровье населения, способствует возникновению профессионально обусловленных и экологически зависимых заболеваний. В настоящее время теме производства и потребления редкоземельных элементов уделяется большое внимание. Редкоземельные элементы используются в основных сферах производства: в энергетике - добавки в урановое топливо, ветровая энергетика, катализаторы крекинга нефти; в космической промышленности; лазеры и оптоэлектроника; автопром - автокатализаторы, аккумуляторы, двигатели гибридных автомобилей; электроника; оборонные отрасли промышленности. В 2013 г.подписано распоряжение Правительства РФ №91-Р «Развитие промышленности редких и редкоземельных металлов» на период до 2020 г. Для повышения производственной безопасности, соблюдения гигиены труда необходимо получение точных данных при изучении профессионального риска. Для этого нужны современные высокочувствительные методы элементного анализа, позволяющие осуществлять контроль за содержанием вредных веществ не только на рабочем месте, но и в биологических средах работающих. По аналитическим возможностям одним из ведущих методов определения элементов в различных объектах является масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (далее - ИСП-МС).

В настоящее время в РФ нет утвержденной методики определения РЗЭ в биологических жидкостях методом ИСП-МС.С учетом вышесказанного, разработка методики определения РЗЭ в биологических средах методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой является актуальной задачей.

Из уровня техники известны следующие способы определения редкоземельных элементов (РЗЭ) в крови, а именно:

- Методические указания МУК 4.1.3230-14 «Методика измерений массовых концентраций химических элементов в биосредах (кровь, моча) методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой» (в крови: ванадия, хрома, марганца, никеля, меди, цинка, селена, стронция, таллия (метод 1).

- Методические указания МУК 4.1.1483-03 «Определение содержания химических элементов в диагностируемых биосубстратах, препаратах и биологически активных добавках методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой» (в крови: серебра, алюминия, мышьяка, золота, бария, бериллия, висмута, бора, кальция, кадмия, кобальта, хрома, меди, железа, галлия, германия, ртути, калия, лития, магния, марганца, молибдена, натрия, никеля, свинца, платины, рубидия, фосфора, сурьмы, селена, олова, стронция, титана, таллия, ванадия, вольфрама, цинка, циркония) (метод 2).

- Также известен способ определения содержания 14-ти РЗЭ в цельной крови (метод 3), описанный в статье «Li X., Chen Z. Distribution and fractionation of rare earth elements in soil-water system and human blood and hair from a mining area in southwest Fujian Province, China // Environmental Earth Sciences. 2014. V. 72. P. 3599-3608», согласно которому обрабатывают исследуемую пробу крови азотной кислотой и перекисью водорода, проводят последующее нагревание ее в сушильном шкафу 1 час при 120°С, охлаждение полученного раствора, введение фонового раствора, и определение содержания металлов с помощью инструментального метода, при этом в качестве кислоты для обработки исследуемой пробы используют 70% азотную кислоту и 30% перекись водорода. В качестве фонового раствора используют 5,0%-ный водный раствор азотной кислоты при объемном соотношении проба: кислота, как 1:50, перекись водорода 1:1, фоновый раствор 1:50, при этом пробу нагревают в сушильном шкафу 1 час при температуре 120°С, для обработки крови используют концентрированную азотную кислоту (1:2) и концентрированную перекись водорода (1:1), а в качестве инструментального метода используют ICP-MS, т.е. ИСП-МС (метод 3). Недостатком этого известного способа является то, что:

- нет точного описания проведения определения РЗЭ, т.е. не описана методика;

- не указано использование реакционно-столкновительной ячейки;

- не указано точное применение внутреннего стандарта;

- использование перекиси водорода может привести к вспениванию пробы, потере аналита, а значит к снижению точности определения.

Недостатками указанных известных методов являются следующие: не указаны условия для определения РЗЭ (методы 1 и 2), не указана возможность определения РЗЭ (методы 1 и 2); не указаны точные требования к проведению анализа РЗЭ (метод 3).

Также из уровня техники известны следующие спектрофотометрические способы определения РЗЭ:

- Патент РФ №2577823 от 26.02.80 г. относится к фотометрическому методу, сложен в воспроизведении, используется большое количество реактивов, необходимо точно выдерживать время от начала реакции (30 с);

- Патент США №2739118 от 20.04.81 г. описывает фотометрический способ определения РЗЭ в сплавах металлов;

- Патент США №3861490 от 07.01.87 г. - описан фотометрический способ определения РЗЭ при анализе сплавов металлов, стали, чугуна, руд;

- Патент РФ №2511375 от 10.04.14 г. - описан фотометрический способ определения РЗЭ при анализе природных объектов и технических материалов.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ, описанный в статье «Rodushkin I. et al. Multi-element analysis of body fluids by double-focusing ICP-MS // Recent Research Developments in Pure & Applied Analytical Chemistry. 2001. Vol. 5. P. 51-66». Известный способ, охарактеризованный в указанной статье, предназначен для определения 16-ти химических элементов, в том числе иттрия, лантана, церия, празеодима, самария, европия, гадолиния, тербия, диспрозия, гольмия, эрбия, тулия, иттербия, лютеция в крови методом ICP-MS. Объем отобранной крови должен составлять не менее 1 мл. Далее производят ее пробоподготовку путем добавления к ней 1,5 мл азотной кислоты, разбавленной бидистиллированной водой 1:2, и последующего помещения смеси в микроволновую систему подготовки проб при давлении 300 Вт. Смесь выдерживают в микроволновой системе подготовки проб в течение 30 мин. до гомогенизации пробы. Далее образец охлаждают, разбавляют до 10 мл бидистиллированной водой. Далее в пробы добавляют раствор внутреннего стандарта (индий) в концентрации 20 мкг/л. Далее производят введение подготовленной пробы в пробоотборное устройство масс-спектрометра с индуктивно связанной плазмой, проводят измерения и определяют содержание конкретного металла с использованием ранее построенного градуировочного графика.

Однако указанный известный способ предполагает использование сложного в применении оборудования - микроволновой системы подготовки проб, да еще и при высоком давлении. Кроме того, необходим значительный объем пробы крови - не менее 1 мл, что вызывает сложности при отборе пробы крови у детей.

Кроме того, в известном способе нет точного описания проведения определения РЗЭ, не указаны требования к метрологическим характеристикам (повторяемости, воспроизводимости, точности измерений), достигнутым указанным методом.

Технический результат, достигаемый предлагаемым способом, заключается в повышении чувствительности и точности определения содержания РЗЭ в крови на уровне от 0,0015 мкг/дм³, при одновременном уменьшении объема необходимой для анализа пробы крови.

Дополнительно на повышение точности влияет и то, что подготовка пробы проходит в «одной пробирке», что снижает риск ее загрязнения или потери аналита.

Проведена аттестация метрологических характеристик для концентраций в диапазонах, характерных/возможных именно для цельной крови.

Поставленный технический результат достигается предлагаемым способом определения содержания в крови редкоземельных элементов: иттрия, лантана, церия, празеодима, неодима, самария, европия, гадолиния, тербия, диспрозия, гольмия, эрбия, тулия, иттербия и лютеция, методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой, включающим отбор пробы крови, проведение пробоподготовки путем добавления к пробе раствора азотной кислоты, нагрева смеси, введение в пробу раствора внутреннего стандарта индия, проведение измерений и определение содержания конкретного редкоземельного металла с использованием градуировочного графика, при этом новым является то, что в качестве раствора азотной кислоты используют концентрированную азотную кислоту плотностью 1,415 г/см³, которую непосредственно вводят в пробу крови в объемном соотношении 5:1 соответственно, последующий нагрев смеси производят в течение 25-30 мин при температуре 65-70°С, после нагрева готовый для анализа раствор пробы объемом 0,5 см³ переносят в пробирку автоматического пробоотборника, добавляют 0,05 см³ раствора внутреннего стандарта с массовой концентрацией элемента сравнения индий 1000 мкг/дм и 4,45 см³ 1%-ного раствора азотной кислоты, а проведение измерений в подготовленной пробе содержания конкретного редкоземельного металла в масс-спектрометре проводят с использованием реакционно/столкновительной ячейки при пропускании через нее гелия в качестве газа-реактанта со скоростью 4,4 см³/мин.

Указанный технический результат достигается за счет следующего.

Предлагаемый способ отличается от прототипа условиями пробоподготовки, концентрацией внутреннего стандарта и объемными соотношениями используемых реагентов.

Благодаря тому, что нагрев смеси пробы с концентрированной азотной кислотой производят в пробирочном нагревателе при температуре 65-70°С до гомогенизации (25-30 мин.), обеспечивается извлечение аналита из крови («раскрытие пробы»). Позволяет провести подготовку одновременно 96 проб крови.

Благодаря тому, что разбавление пробы в соотношении 1:50 путем добавления внутреннего стандарта с массовой концентрацией элемента сравнения индий 1000 мкг/дм³ (далее - ВС) и 1%-ного раствора азотной кислоты происходит снижение влияния матричных помех.

Благодаря тому, что в растворенную концентрированной азотной кислотой пробу крови вводят раствор внутреннего стандарта индия в деионизованной воде с массовой концентрацией индия 1000 мкг/дм, обеспечивается повышение точности и правильности анализа, учитывая возможные матричные влияния, транспортные помехи, дрейф чувствительности масс-спектрометра.

Использование при проведении измерений реакционно/столкновительной ячейки при пропускании через нее гелия в качестве газа-реактанта со скоростью 4,4 см /мин., обеспечивает разделение ионов аналита и мешающих спектральных наложений полиатомных ионов с сохранением высокой чувствительности способа.

А благодаря тому, что вносят 0,05 см³ раствора внутреннего стандарта, содержащий индий в концентрации 1000 мкг/дм³, то найденные значения этих химических элементов в реальной пробе крови будут совпадать с аттестованными средними значениями их в сертифицированных пробах крови SERONORM с добавками анализируемых РЗЭ.

Таким образом, заявляемый технический результат обеспечивается за счет совокупности определенных операций, их последовательности и режимов в заявляемом способе, а также за счет совокупности реагентов, используемых при пробоподготовке.

Предлагаемый способ был опробован в лабораторных условиях. Для его реализации были использованы следующие вещества и оборудование:

- Многоэлементный калибровочный стандарт с концентрацией 10 мг/л иттрия, лантана, церия, празеодима, неодима, самария, европия, гадолиния, тербия, диспрозия, гольмия, эрбия, тулия, иттербия, лютеция в 5% азотной кислоте. Относительная погрешность аттестованных значений δ=±0,5%;

- Кислота азотная плотностью 1,415 г/см³ особо чистая по ГОСТ 701-89;

- Деионизованная вода, ГОСТ Р 52501;

- Комплексный раствор внутреннего стандарта с содержанием элемента сравнения индия 10 мг/дм³;

- Раствор настройки чувствительности масс-спектрометра с содержанием лития, магния, иттрия, церия, таллия, кобальта 1 мкг/дм³;

- Аргон жидкий высокой чистоты (99,998%), ТУ-2114-005-00204760-99;

- Гелий газообразный высокой чистоты (99,995%), ТУ0271-135-31323949;

- Масс-спектрометр с индуктивно связанной плазмой с октопольной реакционно/столкновительной ячейкой Agilent 7500 с_х со следующими характеристиками:

диапазон сканирования масс, а.е.м.: 2-260;

пределы обнаружения: бериллий ≤1,5 нг/дм³, индий≤0,5 нг/дм³, висмут≤0,5нг/дм³;

чувствительность (имп./с на 1 мг/дм³): литий(7) ≥30⋅10⁶, стронций(88) ≥80⋅10⁶, таллий(205) ≥40⋅10⁶;

кратковременная стабильность, СКО: ≤3%;

долговременная стабильность, СКО: ≤4%;

двузарядные ионы, (церий²⁺/церий⁺): ≤3%;

оксидные ионы, (оксид церия II /церий): ≤1,5%;

уровень фона на массе 9: <5 имп./с;

скорость сканирования детектора:≥100 мкс на 1 ион;

относительное СКО случайной составляющей погрешности измерений аналитического сигнала: ≤3%

концентрический кварцевый распылитель MicroMist;

3-канальный перистальтический насос для подачи образца;

2-проходная кварцевая камера Скотта с электронным Пельтье-элементом;

диаметр инжектора 2,5 мм.

- Аттестованные образцы крови с известной концентрацией РЗЭ SERONORM^R (Норвегия).

- Система разложения проб (Пробирочный нагреватель) HotBlock™

При проведении процессов приготовления растворов и подготовки

проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20±5)°С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;

- влажность воздуха от 30 до 80%.

Приготовление растворов

1. Основной раствор многоэлементный градуировочный стандарт с массовыми концентрациями анализируемых элементов (Се, Dy, Er, Eu, Gd, Ho, La, Lu, Nd, Pr, Sc, Sm, Tb, Th, Tm, Y, Yb) 10 мг/дм³.

2. Раствор №1 с массовыми концентрациями ионов анализируемых элементов 100 мкг/дм³.

Готовят из исходного раствора - многоэлементного градуировочного стандарта с массовыми концентрациями анализируемых элементов 10 мг/дм³.

В мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят автоматическим дозатором или пипеткой 0,5 см³ исходного раствора с массовыми концентрациями анализируемых элементов 10 мг/дм³ и доводят объем в колбе до метки 1%-ым раствором азотной кислоты. Хранят 2-3 дня при комнатной температуре.

3. Раствор №2 с массовыми концентрациями ионов анализируемых элементов 1 мкг/дм³.

Готовят из раствора №1 с массовыми концентрациями анализируемых элементов 100 мкг/дм³.

В мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят автоматическим дозатором или пипеткой 0,5 см³ раствора №1 с массовыми концентрациями ионов анализируемых элементов 100 мкг/дм³ и доводят объем в колбе до метки 1%-ым раствором азотной кислоты. Хранят 2-3 дня при комнатной температуре.

4. Раствор №3 с массовыми концентрациями ионов анализируемых элементов 0,01 мкг/дм³.

Готовят из раствора №2 с массовыми концентрациями анализируемых элементов 1 мкг/дм³.

В мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят автоматическим дозатором или пипеткой 0,5 см³ раствора №2 с массовыми концентрациями ионов анализируемых элементов 1 мкг/дм³ и доводят объем в колбе до метки 1%-ым раствором азотной кислоты. Хранят 2-3 дня при комнатной температуре.

5. Раствор внутреннего стандарта с массовой концентрацией элемента сравнения индий 1000 мкг/дм³.

Готовят из основного раствора с массовой концентрацией элемента сравнения индий 10 мг/дм³.

В мерную колбу вместимостью 50 см вносят дозатором или пипеткой 5 см³ основного раствора с массовой концентрацией элемента сравнения индий 10 мг/дм³ и доводят объем в колбе до метки 1%-ым раствором азотной кислоты. Раствор хранят в полипропиленовой пробирке с винтовой крышкой вместимостью 50 см³ 5-7 дней при комнатной температуре.

6. Раствор азотной кислоты 1%-ый.

Отмеренные дозатором или пипеткой 5,0 см³ концентрированной азотной кислоты плотностью 1,415 г/см³ смешивают с 495 см³ деионизованной воды. Хранят 5-7 дней в полиэтиленовой посуде.

7. Настроечный раствор с массовыми концентрациями лития, магния, кобальта, иттрия, церия, таллия 1 мкг/дм³ применяют без дополнительных процедур подготовки.

8. Построение градуировочного графика производят с использованием растворов №1, №2, №3, раствора внутреннего стандарта с массовой концентрацией элемента сравнения индий 1000 мкг/дм³ и раствора 1%-ной азотной кислоты (таблица 1).

Градуировочную характеристику устанавливают ежедневно на приготовленных градуировочных растворах. Рабочую серию, состоящую из 4-5 растворов, готовят непосредственно перед использованием, путем разведения основных растворов определяемых элементов и раствора, содержащего элемент сравнения индий (внутренний стандарт) (таблица 1). Измерение градуировочных растворов проводят при соблюдении условий, указанных в таблице 6.

Определение градуировочной зависимости, обработка и хранение результатов градуировки выполняются программным обеспечением спектрометра.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом:

- производят отбор проб крови в вакуумные пробирки с внесенным антикоагулянтом (литий-гепарин или натрий-гепарин) или в полипропиленовые пробирки с добавлением антикоагулянта;

- далее проводят подготовку проб крови способом кислотного растворения с применением пробирочного нагревателя, как наиболее оптимальным при проведении рутинного клинического анализа. Для этого пробу крови объемом 0,1 (0,2) см³ дозатором вносят в конические градуированные пробирки из полипропилена вместимостью 15 см³, добавляют 0,5 (1,0) см³ концентрированной азотной кислоты плотностью 1,415 г/см³, закрывают крышкой, пробирку с содержимым взбалтывают, нагревают в пробирочном нагревателе при температуре (65-70)°С до гомогенизации (25-30) мин. Готовый для анализа раствор объемом 0,5 см³ переносят в пробирку автоматического пробоотборника, добавляют 0,05 см³ раствора внутреннего стандарта с массовой концентрацией элемента сравнения индий 1000 мкг/дм³ и 4,45 см³ 1%-ного раствора азотной кислоты. Пробы накрывают герметизирующей лабораторной пленкой, перемешивают. На этом этап пробоподготовки закончен.

- подготовленную для анализа пробирку с пробой устанавливают в ячейку автоматического пробоотборника масс-спектрометра для проведения измерений массовых концентраций РЗЭ (иттрий, лантан, церий, празеодим, неодим, самарий, европий, гадолиний, тербий, диспрозий, гольмий, эрбий, тулий, иттербий, лютеций). Причем проведение измерений в подготовленной пробе содержания конкретного металла в масс-спектрометре проводят с использованием реакционно/столкновительной ячейки при пропускании через нее гелия в качестве газа-реактанта со скоростью 4,4 см³/мин.

При реализации предлагаемого способа готовят две параллельные пробы крови, одновременно готовят холостую пробу. Можно еще приготовить и контрольную (проверочную) пробу. В качестве указанной контрольной пробы могут служить пробы крови с известной концентрацией (например, аттестованные образцы крови SERONORM (Норвегия) или пробы с добавкой известного количества определяемого элемента.

Для каждой серии измерений готовят не менее двух холостых проб, повторяя процедуру подготовки проб, содержащих все компоненты, кроме исследуемой пробы. При этом используют посуду из той же партии, которая используется для анализа, и добавляют реактивы, что и в анализируемых пробах.

Массовая концентрация внутреннего стандарта в комплексном растворе должна быть одинаковой в градуировочных растворах, в анализируемых и в холостых пробах. В качестве внутреннего стандарта рекомендуется использовать раствор с содержанием элемента сравнения индия 10 мг/дм³.

Концентрацию химических элементов в пробе крови определяют с использованием градуировочного графика.

Результат определения представляется как среднее из измерений двух параллельных проб.

Массовую концентрацию определяемого элемента в крови рассчитывают по формуле:

где

С - массовая концентрация определяемого элемента в крови, мкг/дм³;

- среднее значение массовой концентрации элемента в растворе пробы, мкг/дм³;

- среднее значение массовой концентрации элемента в растворе холостой пробы, мкг/дм³;

V₁ - объем минерализованной пробы (п. 10.2.2) дм³, V₁=0,005 дм³;

V₀ - объем пробы крови, взятой для анализа (п. 10.2.2), дм³, V₀=0,0001 (0,0002) дм³.

Полученные результаты, на примере измерений гольмия и эрбия в крови (рабочая проба и проба с добавкой анализируемого металла) предлагаемым способом, приведены в таблицах 2 и 3. По результатам измерения рабочих проб рассчитывают показатели повторяемости и воспроизводимости результатов. Одновременно по результатам определений (X_n) у указанных металлов, приведенным в таблицах 2 и 3 соответственно, можно судить о чувствительности метода (получены значения вблизи нижней границы диапазона).

Для расчета относительной погрешности предлагаемого способа использовали способ «введено - найдено».

Для этого проводят анализ проб крови с добавлением в них определенного количества анализируемого компонента (добавка составляет 50-150% от найденной концентрации редкоземельного металла в рабочей пробе), в данном примере гольмия и эрбия, для выяснения правильности и точности заявляемого способа (относительная погрешность). Величина добавки гольмия и эрбия в пробу крови была равна 0,025 мкг/дм³. Среднее обнаруженное значение внесенной добавки гольмия составило 0,026 мкг/дм³ (104% от введенного значения), добавки эрбия - 0,0258 мкг/дм³ (103% от введенного значения).

Данные, приведенные в таблицах 2 и 3, показывают, что предлагаемый способ характеризуется высокой точностью и правильностью анализа.

Также в ходе лабораторных испытаний предлагаемого способа были установлены следующие его характеристики: диапазон измерений 15-ти редкоземельных элементов в крови, значения показателей точности, правильности, повторяемости и воспроизводимости. Полученные данные приведены в таблице 4.

Приведенные в таблице 4 данные показывают, что предлагаемый способ позволяет с высокой точностью определять в крови пятнадцать РЗЭ в диапазоне концентраций 0,015-50 мкг/дм³. Чувствительность заявляемого способа позволяет обнаружить низкие концентрации, а также высокие концентрации, связанные с интоксикацией организма РЗЭ.

В ходе лабораторных испытаний также проводили контроль результатов анализа реальных проб крови путем сопоставления со стандартными образцами крови SERONORM® L2, L3 (Норвегия) с внесенными к ним добавками анализируемых РЗЭ. Погрешность определения РЗЭ в стандартных образцах крови Seronorm L2 с добавками составляет от 4 до 30%. Погрешность определения РЗЭ в стандартных образцах крови Seronorm L3 с добавками не превышает 25%. Данные представлены в таблицах 5-6.

Данные, приведенные в таблице 7, показывают значение выбранного внутреннего стандарта (элемента сравнения) на результат анализа аттестованного образца крови. Установлено, что погрешности определения без внутреннего стандарта для добавки 0,1 мкг/л достигают 59%, а с индием In в качестве внутреннего стандарта (ВС) не превышают 2-3%. Результаты определения добавок имеют хорошую сходимость при ВС In 10,0 мкг/л и 20 мкг/л. Использование большей концентрации ВС считаем нецелесообразным, так как подобный эксперимент с содержанием ВС 20,0 мкг/л не выявил значительного расхождения в погрешности определения.

Метод масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой ICP-MS обладает высокой селективностью, однако, при анализе биообъектов сложного состава могут возникнуть интерференционные влияния (полиатомные наложения) хлорид-ионов, кальция при естественном их содержании в крови. Плазмообразующие газы также могут вызывать полиатомные помехи. Такие помехи и устраняются предлагаемым способом с помощью реакционно-столкновительной обработки экстрагируемой плазмы. В таблице 8 приведены условия реализации предлагаемого способа в реакционном режиме с применением гелия в качестве газа-реактанта с использованием реакционно/столкновительной ячейки. При этом перед проведением анализа, необходимо чтобы газ-реактант заполнил все подающие пути и реакционную ячейку, установить скорость потока гелия 10 мл/мин и оставить прибор на 30 минут для стабилизации, после чего можно проводить измерение аналитического сигнала.

Таким образом, заявляемый способ характеризуется следующими преимуществами перед известным:

- применением реакционной ячейки для эффективного устранения полиатомных и изобарных наложений;

- применением «внутреннего стандарта» в меньших концентрациях для снижения влияния матричного эффекта, транспортных помех, дрейфа чувствительности масс-спектрометра;

- более простым способом подготовки проб, проходящим практически в одной пробирке, что снижает риск загрязнения пробы от посуды и возможные потери при необходимости переноса пробы, что также влияет на точность определения;

- большим разбавлением крови для уменьшения матричных влияний;

- проведена метрологическая аттестация для концентраций в диапазонах, характерных/возможных именно для цельной крови.