×
17.07.2019
219.017.b578

Способ приготовления посевных культур в технологии сибиреязвенных вакцин

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ приготовления посевных культур сибиреязвенного микроба. Способ включает культивирование эталонной культуры штамма Bacillus anthracis СТИ-1 глубинным способом при температуре 32-34°С в течение 36-40 ч при аэрировании и перемешивании с использованием питательных сред на основе гидролизатов рыбной муки. При достижении в культуре 70-75% свободно расположенных спор и проспор содержимое ферментера подогревают до 36-37°С и выдерживают без аэрации в течение 3-5 ч до достижения 90% спор, окрашенных по Цилю-Нильсену, далее проводят концентрирование и отмывку нативной культуры. Способ обеспечивает увеличение количества посевного материала. 1 ил., 2 табл., 2 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к технологии медицинских иммунобиологических препаратов и предназначено для получения сибиреязвенных вакцин, содержащих живые споры вакцинных штаммов Bacillus anthracis.

В технологии производства вакцинных препаратов против сибирской язвы (авторское свидетельство СССР №125875, 30h, 6, 1960) традиционно применяют посевные культуры, приготовленные «поверхностным» способом. Этот способ состоит из двух основных этапов:

- получение вегетативной формы сибиреязвенного микроба в жидкой питательной среде;

- получение споровой формы на плотной питательной среде (Воронин Е.С. Биотехнология. - М.: ГИОРД, 2005. - 762 с., регламент ПР 08461522-12-14).

Недостатками традиционного способа получения посевных культур при производстве сибиреязвенных вакцин являются трудоемкость и длительность процесса культивирования, низкая продуктивность и необходимость использования большого числа инокуляторов, что существенно повышает риск контаминации посевных культур посторонней микрофлорой, а также использование достаточно большого количества питательной среды.

Основные недостатки обусловлены тем, что для выращивания посевных культур сибиреязвенного микроба используется большое количество емкостей из стекла (матрацев), выражена многоэтапность процесса с большим количеством манипуляций при засеве и смыве споровой культуры с матрацев, приводящая довольно часто к появлению посторонней микрофлоры, а также использованием достаточно большого количества питательной среды.

Большей части изложенных недостатков традиционного способа лишен глубинный способ приготовления посевных культур в ферментерах, который успешно используется при получении различных биотехнологических продуктов.

Известны способы глубинного выращивания посевного материала мицелия съедобных грибов рода Azospirillum и бактерий рода Brucella (см., например, патент РФ RU 2361610 С1, 20.03.2008, патент РФ RU 2249614 С2, 21.03.2003).

Данные способы не могут быть применены для выращивания B. anthracis в силу различия питательных потребностей и родовой принадлежности указанных микроорганизмов.

Задачами изобретения являются увеличение концентрации спор штамма B. anthracis СТИ-1 в посевных культурах, снижение риска контаминации посевных культур посторонней микрофлорой, сокращение продолжительности процесса ее приготовления с использованием меньшего количества питательной среды, увеличение количества посевных доз, а также снижение брака за счет меньшего количества инокуляторов и манипуляций в предлагаемом для внедрения способе.

Решение задач достигается использованием глубинного способа приготовления посевных культур в лабораторном ферментере с последующим концентрированием на установке микрофильтрации и отмывкой спор дистиллированной водой.

Технический результат, который может быть достигнут при использовании предполагаемого способа, позволяет:

- сократить продолжительность приготовления посевных культур;

- увеличить количество спор в 1 см3 концентрированием нативной культуры на установке микрофильтрации;

- уменьшить брак снижением риска контаминации посевных культур посторонней микрофлорой на этапах ее приготовления;

увеличить количество посевных доз и, соответственно, циклов культивирования в промышленном ферментере;

- сократить расход питательной среды.

Возможность осуществления заявленного изобретения показана следующими примерами:

Пример 1. Приготовление посевных культур для сибиреязвенных вакцин (существующий способ).

Для приготовления одной серии посевной культуры сибиреязвенного микроба «поверхностным» способом эталонную культуру засевают в две бутыли с бульоном Хоттингера не менее чем на одни сутки, затем осуществляют пересев на агаризированную среду на основе перевара Хоттингера. Причем для этого используют не менее 100 матрацев, содержащих не менее 30 дм3 плотной питательной среды. На 4-5 сутки выращивания микробную культуру проверяют на полноту спорообразования, и при наличии 90% нормально окрашенных по Цилю-Нильсену спор осуществляют смыв культуры с поверхности плотной питательной среды. В итоге максимально получают примерно 800 см3 споровой культуры с общей концентрацией порядка 3,5 млрд спор в 1 см3, что соответствует 135-220 посевным дозам для аппарата-культиватора объемом 100 дм3.

Пример 2. Приготовление посевных культур для сибиреязвенных вакцин (предлагаемый способ).

Для получения серии посевных культур используют лабораторный ферментер АК-0,012. В аппарат вводят 6 дм3 стерильной жидкой питательной среды на основе 1% солянокислотного гидролизата рыбной кормовой муки (с содержанием общего азота (1,36±0,20) г/л и аминного азота (0,45±0,15) г/л. Аппарат засевают эталонной культурой штамма B.anthracis СТИ-1, полученной из ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Для этого эталонную культуру ресуспендируют в дистиллированной воде и прогревают при температуре (70±1)°С в течение 30 минут для активации прорастания спор. Процесс культивирования осуществляют при температуре (33±1)°С в течение 36-40 часов, при аэрировании 0,2-0,4 объемов атмосферного стерильного воздуха на единицу объема питательной среды в минуту и перемешивании культуральной жидкости с частотой, равной 300-320 об./мин.

Полноту спорообразования оценивают микроскопически в мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену. При наличии в культуре 70-75% свободно расположенных спор и проспор содержимое ферментера подогревают до температуры 36-37°С и выдерживают при этой температуре без аэрации в течение (4±1) ч.

При наличии не менее 90% спор, нормально окрашенных по Цилю-Нильсену, проводят концентрирование нативной культуры с отмывкой дистиллированной водой на установке микрофильтрации «Сартокон-мини» с использованием полипропиленовых модулей с диаметром пор 0,2 мкм.

Сравнительная характеристика споровых суспензий штамма B. anthracis СТИ-1 для приготовления посевных культур, полученных существующим и заявленным способами, представлена в таблице 1.

Споровую суспензию смешивают с дистиллированной водой и глицеролом и разливают в ампулы. Полученные таким образом посевные культуры обладают характерными для бескапсульного вакцинного штамма B. anthracis СТИ-1 культурально-морфологическими иммунобиологическими и биохимическими свойствами с высокой иммуногенностью (не менее 25000 усл. ед. для морских свинок) и низкой реактогенностью при отсутствии протеолитической активности.

В результате дополнительно проведенных электронно-микроскопических сравнительных исследований ультратонких срезов спор посевных культур производственного штамма B.anthracis СТИ-1, приготовленных различными способами выращивания, показано, что экзоспориум, споровые оболочки, кортекс, спороплазма и нуклеоид спор, полученных путем глубинного выращивания в аппарате-культиваторе и на поверхности агаризованной питательной среды, не различаются по ультраструктурной организации (фиг. 1).

При использовании посевных культур, приготовленных по заявленному способу, получены экспериментальные серии сибиреязвенной вакцины, не отличающиеся по показателям качества от производимых по существующей технологии (таблица 2). Живая сибиреязвенная вакцина представляет собой пористую массу желтовато-белого цвета с коричневым оттенком, растворяющуюся в течение пяти минут. После растворения - непрозрачная гомогенная суспензия серовато-белого цвета без посторонних включений.

Заявляемый глубинный способ приготовления посевных культур позволяет получить сибиреязвенные вакцины, удовлетворяющие требованиям фармакопейной статьи предприятия Р №001273/01-230911 «Вакцина сибиреязвенная живая» и регламента производства ПР 08461522-12-14 «Вакцина сибиреязвенная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения и накожного скарификационного нанесения».

Способ приготовления посевных культур сибиреязвенного микроба с использованием питательных сред на основе гидролизатов рыбной муки, отличающийся тем, что эталонную культуру штамма Bacillus anthracis СТИ-1 ресуспендируют в дистиллированной воде и прогревают при температуре 69-71°С в течение 30 минут и культивируют глубинным способом в лабораторном ферментере емкостью 12 дм при температуре 32-34°С в течение 36-40 ч при аэрировании 0,2-0,4 объемов атмосферного стерильного воздуха на единицу объема питательной среды в минуту и перемешивании 300-320 об/мин, затем при достижении в культуре 70-75% свободно расположенных спор и проспор содержимое ферментера подогревают до 36-37°С и выдерживают без аэрации в течение 3-5 ч до достижения 90% спор, окрашенных по Цилю-Нильсену, далее проводят концентрирование и отмывку дистиллированной водой на установке микрофильтрации «Сартокон-мини» с использованием полипропиленовых модулей с диаметром пор 0,2 мкм.
Способ приготовления посевных культур в технологии сибиреязвенных вакцин
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 20.
25.08.2017
№217.015.a2dd

Устройство для приготовления сухих термолабильных биологических материалов

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению биомассы для приготовления сухих порошкообразных форм иммунобиологических препаратов, в частности высушиванию (обезвоживанию) жидких термолабильных биологически активных материалов в многокомпонентной смеси, их измельчению и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002607148
Дата охранного документа: 10.01.2017
20.01.2018
№218.016.1588

Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний

Изобретение относится к области вирусологии. Предложен состав агарового покрытия для выявления вируса Мачупо. Первичное агаровое покрытие содержит: аминокислотный витаминный комплекс (АВК), раствор Эрла, фетальную телячью сыворотку, 5%-ный раствор бикарбоната натрия, деминерализованную воду,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634868
Дата охранного документа: 07.11.2017
04.04.2018
№218.016.36d5

Устройство для смешения сыворотки иммунной крови с этиловым спиртом на холоде

Изобретение относится к области биотехнологии иммунобиологических препаратов для медицинского применения, в частности к выделению гамма-глобулиновой фракции белков сыворотки иммунной крови. Устройство для смешения сыворотки иммунной крови с этиловым спиртом на холоде, включает емкость для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646458
Дата охранного документа: 05.03.2018
10.05.2018
№218.016.4919

Вакцина оспенная инактивированная эмбриональная сухая таблетированная для орального применения "тэовин" и способ ее получения

Изобретение относится к области медицины, а именно к биотехнологии, и может быть использовано для получения вакцины оспенной сухой таблетированной для орального применения. Вакцина оспенная эмбриональная инактивированная содержит в одной таблетке биомассу вируса вакцины, штамм Б-51, а также...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002651040
Дата охранного документа: 18.04.2018
05.07.2018
№218.016.6b66

Способ сорбционно-вакуумного высушивания жидких термолабильных биологически активных материалов

Изобретение относится к области сушки различных веществ, в частности к высушиванию жидких термолабильных биологически активных материалов (далее по тексту - БМ), качество которых определяется достижением требуемого значения показателя остаточной массы при высушивании и сохранением специфической...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002659685
Дата охранного документа: 03.07.2018
30.11.2018
№218.016.a1e5

Способ получения иммуноглобулина против лихорадки эбола из сыворотки крови лошадей, жидкого

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к разработке технологий производства защитных иммунобиологических препаратов, и касается получения иммуноглобулина Эбола из сыворотки крови лошадей, иммунизированных вирусом Эбола, методом спиртового осаждения по Кону. Сущность изобретения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002673546
Дата охранного документа: 28.11.2018
14.05.2019
№219.017.51b3

Способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов при глубинном выращивании с использованием жидкой питательной среды минимизированного состава

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов. Способ включает глубинное выращивание культуры бруцелл на минимизированной по содержанию белкового компонента жидкой питательной среде в условиях регуляции парциального давления...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002687373
Дата охранного документа: 13.05.2019
07.09.2019
№219.017.c830

Штамм с/2014 вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки, предназначенный для лабораторной оценки эффективности медицинских средств защиты в отношении данного возбудителя

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм С/2014 вируса Мачупо - возбудителя Боливийской геморрагической лихорадки (БГЛ), вариант природного штамма Carvallo, адаптированный к морским свинкам и вызывающий у них зависимую от вводимой дозы вируса гибель....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002699525
Дата охранного документа: 05.09.2019
12.10.2019
№219.017.d565

Способ видовой дифференциации патогенных буркхольдерий с использованием моноклональных антител

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ видовой дифференциации патогенных буркхольдерий методом твердофазного иммуноферментного анализа. Способ включает сенсибилизацию планшета смесью антител, специфичных одновременно к возбудителям сапа и мелиоидоза, использование пары...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002702723
Дата охранного документа: 09.10.2019
27.01.2020
№220.017.fa93

Пероральный способ вакцинопрофилактики сибирской язвы

Изобретение относится к медицине и предназначено для вакцинопрофилактики сибирской язвы. Вакцинопрофилактика проводится пероральным применением эффективного количества живой сухой лиофилизированной сибиреязвенной вакцины, содержащей споры штамма B. anthracis СТИ-1 и заключенной в твердые...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002712133
Дата охранного документа: 24.01.2020
Показаны записи 1-2 из 2.
20.06.2015
№216.013.5642

Способ управления плавающим средством

Изобретение относится к военной технике и касается способа управления плавающим средством (ПС), предназначенным для использования в боевых действиях. Снаружи ПС устанавливают кожухи, соединенные с его корпусом с возможностью образования открытых снизу полостей и подачи в эти полости выхлопных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553612
Дата охранного документа: 20.06.2015
27.01.2020
№220.017.fa93

Пероральный способ вакцинопрофилактики сибирской язвы

Изобретение относится к медицине и предназначено для вакцинопрофилактики сибирской язвы. Вакцинопрофилактика проводится пероральным применением эффективного количества живой сухой лиофилизированной сибиреязвенной вакцины, содержащей споры штамма B. anthracis СТИ-1 и заключенной в твердые...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002712133
Дата охранного документа: 24.01.2020
+ добавить свой РИД