×
10.07.2019
219.017.aa81

ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬСИОННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) птиц, инактивант димер этиленимина и масляный адъювант в эффективном соотношении. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером «К-58 №122-ДЕП». Штамм репродуцируется на 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью 5,25-7,0 lg ЭИД . Вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета, состоящую из инактивированного антигена вируса ИББ птиц, эмульгированного в масляном адъюванте. Вакцину применяют клинически здоровой птице в возрасте 110-120 суток. Препарат вводят в объеме 0,5 см однократно. Вакцина индуцирует высокий уровень антител против ИББ птиц родительской стаи и обеспечивает надежный пассивный иммунитет у молодняка до 15-25-суточного возраста, безвредна. 7 з.п. ф-лы, 5 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении средств специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни (ИББ) птиц.

ИББ птиц (инфекционный бурсит, болезнь Гамборо) - широко распространенная высококонтагиозная вирусная болезнь цыплят, преимущественно в возрасте 15-80 суток, характеризующаяся поражением фабрициевой сумки, почек, внутримышечными геморрагиями и диареей. ИББ поражает, в основном, (3-лимфоциты фабрициевой сумки, вызывая атрофию ее лимфоидных фолликулов.

ИББ протекает остро, с характерной клиникой заболевания, и субклинически. Субклиническая форма имеет широкое распространение.

При острой форме болезни на первый план выступают клинические и патологоанатомические признаки, свойственные вторичным инфекциям, что создает затруднение при постановке диагноза. Поэтому проведение лабораторных исследований имеет решающее значение при постановке диагноза заболевания.

ИББ птиц зарегистрирована во всех странах мира. В последние годы ИББ получила широкое распространение в большинстве крупных птицеводческих хозяйств России. Применение отечественных и импортных биопрепаратов в очагах инфекции не обеспечило ожидаемого эффекта. Это объясняется тем, что их применению не предшествовало изучение антигенных свойств циркулирующих изолятов вируса, не определялись специфические антитела птицы до и после вакцинации, а также уровень пассивного материнского иммунитета у цыплят. Не учитывалась известная особенность возбудителя ИББ - его антигенная изменчивость в пределах одного серотипа, происходящая в различные временные промежутки и на разных территориях и зависящая от видового и породного состава птичьего поголовья, его иммунного статуса, и множество других факторов.

В связи с этим выбор вакцинного штамма вируса ИББ птиц должен проводиться с учетом антигенной структуры эпизоотического изолята и для приготовления вакцинных препаратов необходимо использовать производственные штаммы, обладающие наибольшей степенью гомологии в области антигенной детерминанты с эпизоотическими изолятами вируса ИББ.

Экономический ущерб от ИББ, обусловленный гибелью до 20-70% поголовья цыплят при остром течении заболевания, значительной выбраковкой птицы, снижением продуктивности, а также в результате возникновения вторичных инфекций, очень велик.

В настоящее время общепризнано, что единственно правильным и надежным направлением в борьбе с инфекцией является вакцинопрофилактика. Для специфической профилактики ИББ используют живые и инактивированные вакцины из гомологичных штаммов возбудителя инфекции, выращенных в различных чувствительных биологических системах.

В большинстве птицехозяйств цыплят прививают 2-кратно живыми вакцинами, а ревакцинируют в 16-20-недельном возрасте инактивированной вакциной. Это обусловлено тем, что при ИББ введение живых вакцин взрослой птице не формирует у нее напряженный иммунитет, что связано с ее возрастными особенностями. По этой причине для специфической профилактики ИББ у взрослой птицы широко используют инактивированные вакцины как сорбированные, так и эмульсионные (1).

При изготовлении инактивированной вакцины используют вирулентные штаммы вируса ИББ птиц.

Известна инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма BIA 52/70, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и масляный адъювант в эффективном соотношении. В качестве чувствительной биологической системы использовали ткань фабрициевых сумок 30-40-суточных цыплят (2).

Известна инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма BIA 52/70, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и масляный адъювант в эффективном соотношении. В качестве чувствительной биологической системы использовали аллантоисные мембраны куриных эмбрионов (3).

Известна инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма D78, ATCC №VR-2041, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и масляный адъювант в эффективном соотношении.

В качестве чувствительной биологической системы использовали 9-11-суточные эмбрионы SPF-кур (4).

Известна инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма GP/82, NCAIM №V(Р)-001033, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и масляный адъювант в эффективном соотношении. В качестве чувствительной биологической системы использовали 10-суточные эмбрионы SPF-кур (5).

Известна инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма BIA 52/70, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и масляный адъювант в эффективном соотношении. В качестве чувствительной биологической системы использовали ткань фабрициевых сумок SPF-цыплят 30-40-суточного возраста (6).

Основной недостаток известных вакцин состоит том, что они являются импортными препаратами и не обеспечивают удовлетворительной защиты против вируса ИББ, циркулирующего на поголовье птицы на территории Российской Федерации.

Известна также инактивированная сорбированная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма «БГ» №102-ДЕП», полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и адъюванты гидроокись алюминия и сапонин в эффективном соотношении.

В качестве чувствительной биологической системы использовали 10-суточные эмбрионы SPF-кур (7).

Недостаток данной вакцины состоит в ее низкой антигенной и иммуногенной активности.

Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, содержащая антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма D78, АТСС №VR-2041, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, инактивант и масляный адъювант в эффективном соотношении. В качестве чувствительной биологической системы использовали 9-11-суточные эмбрионы SPF-кур (4).

Недостаток вакцины-прототипа состоит в том, что она обладает низкой антигенной и иммуногенной активностью

В задачу создания настоящего изобретения входила разработка инактивированной эмульсионной вакцины на основе нового штамма вируса ИББ птиц, обладающего более высокой антигенной и иммуногенной активностью и безвредностью в нативном виде и после инактивации.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в повышении антигенной и имуногенной активности и безвредности предлагаемой вакцины.

Указанный технический результат достигнут созданием инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.

1. Инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц.

2. Антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации, в эффективном количестве.

3. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц.

4. В качестве чувствительной биологической системы используют 9-11-суточные эмбрионы SPF-кур.

5. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации.

6. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации, в количестве 29,9-49,7 мас.%.

7. Инактивант.

7.1. Из активантов димер этиленимина (ДЭИ).

7.2. ДЭИ в виде 15% водного раствора.

7.3. ДЭИ в количестве 0,1-0,3 мас.%.

8. Масляный адъювант.

8.1. Из масляных адъювантов масляный адъювант ВНИИЗЖ.

8.2. Масляный адъювант ВНИИЗЖ в количестве 50,0-70,0 мас.%.

8.3. Из масляных адъювантов масляный адъювант Montanide ISA-70.

8.4. Масляный адъювант Montanide ISA-70 в количестве 50,0-70,0 мас.%.

8.5. Из масляных адъювантов масляный адъювант Montanide ISA-206.

8.6. Масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве 50,0-70,0 мас.%.

9. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации, инактивантДЭИ и масляный адъювант в соотношении, мас.%:

Антигенный материал29,9-49,7
ДЭИ0,1-0,3
Масляный адъювант50,0-70,0

Предлагаемое изобретение содержит следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана.

1. Инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц.

2. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации в эффективном количестве.

3. Инактивант.

4. Масляный адъювант.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.

1. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,2 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации.

2. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации, в количестве 29,9-49,7 мас.%.

3. Из инактивантов ДЭИ.

4. ДЭИ в виде 15% водного раствора.

5. ДЭИ в количестве 0,1-0,3 мас.%.

6. Из масляных адъювантов масляный адъювант ВНИИЗЖ.

7. Масляный адъювант ВНИИЗЖ в количестве 50,0-70,0 мас.%.

8. Из масляных адъювантов масляный адъювант Montanide ISA-70.

9. Масляный адъювант Montanide ISA-70 в количестве 50,0-70,0 мас.%.

10. Из масляных адъювантов масляный адъювант Montanide ISA-206.

11. Масляный адъювант Montanide-206 в количестве 50,0-70,0 мас.%.

12. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации, инактивант ДЭИ и масляный адъювант в соотношении, мас.%:

Антигенный материал29,9-49,7
ДЭИ0,1-0,3
Масляный адъювант50,0-70,0

Признаки изобретения, характеризующие предлагаемую вакцину и совпадающие с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение:

1. Инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц.

2. Антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма, полученный в чувствительной биологической системе и подвергнутый инактивации.

3. Инактивант.

4. Масляный адъювант.

По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что она содержит эффективное количество антигенного материала из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования

1. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации.

2. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 lg ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации, в количестве 29,9-49,7 мас.%.

3. Из инактивантов ДЭИ.

4. ДЭИ в виде 15% водного раствора.

5. ДЭИ в количестве 0,1-0,3 мас.%.

6. Масляный адъювант в количестве 50,0-70,0 мас.%.

7. Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3 и подвергнутый инактивации, инактивант ДЭИ и масляный адъювант в соотношении, мас.%:

Антигенный материал29,9-49,7
ДЭИ0,1-0,3
Масляный адъювант50,0-70,0

По сравнению с вакциной-прототипом инактивированная эмульсионная вакцина на основе штамма «К-58 №122-ДЕП» обладает более высокой антигенной и иммуногенной активностью и является безвредной.

Достижение технического результата от использования предлагаемой вакцины объясняется тем, что в ее состав введен вирусный материал из нового аттенуированного штамма «К-58 №122-ДЕП», гомологичного возбудителю инфекции и не вызывающего иммуносупрессии у привитой птицы.

Исходный вирус (авторское наименование изолята «К-58») для получения штамма «К-58 №122-ДЕП» выделен из фабрициевых сумок больных бройлеров на птицефабрике «Васильевская» Пензенской области в 1994 году. Вакцинный штамм «К-58 №122-ДЕП» получен путем многократных последовательных пассажей исходного изолята на 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур и SPF-цыплятах.

Штамм «К-58» депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ) МСХ РФ 1 июня 2004 года под регистрационным номером - штамм «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц.

Штамм «К-58 №122-ДЕП» не вызывает иммунодепрессии и обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации. Экспериментально подтверждена возможность его использования для приготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц.

Штамм «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства

Штамм «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц относится к семейству Birnavindae, роду Avibirnavirus, серотипу I и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ИББ: форма вириона икосаэдрическая, размер вириона 58-60 нм. Капсид Т13, оболочка отсутствует.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм «К-58 №122-ДЕП» относится к сероварианту I. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител, выявляемых РДП в разведении 1:4-1:64, в ИФА - 1:400-1:10000 и более, при гипериммуннизации в РДП до 1:4096 и выше, в ИФА>1:10000. Для определения генотаксономической гомологии вакцинного штамма «К-58 №122-ДЕП» и полевых изолятов вируса ИББ сравнили вариабельные области VP2 полевых изолятов (37 образцов, выделенных в 1993-1996 гг. на территории РФ и странах СНГ) и вакцинных штаммов (7 образцов коммерческих живых вакцин). Для этого в ПЦР амплифицировали, используя специфические олигонуклеотидные праймеры и термостабильную Tag-ДНК-полимеразу, вариабельную область гена VP2, кодирующую основной конформационный эпитоп. Методом прямого секвенирования определяли нуклеотидную последовательность этого наиболее важного в проявлении антигенных свойств участка генома полевых изолятов и вакцинного штамма ИББ. Установлено, что большинство полевых изолятов вируса ИББ, выделенных на птицефабриках России, антигенно отличаются от импортных вакцинных штаммов фирм «Рон-Мерье» (Франция), «Интервет» (Голландия), «Солвей-Дюфар» (США), «Сафит» (Израиль) на 5-8% и имеют структуру, близкую к вакцинному штамму «К-58 №122-ДЕП».

Биотехнологические характеристики

Штамм «К-58 №122-ДЕП» предназначен для изготовления живой и инактивированной вакцин и диагностических биопрепаратов. Штамм «К-58 №122-ДЕП» репродуцируется в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур при температуре 37,7°С и влажности 55-64%. В течение 72-96 часов инкубирования вирус накапливается до 5,25-7,0 lg ЭИД50/2,0см3.

Хемо- и генотаксономическая характеристика

Штамм «К-58 №122-ДЕП» является РНК-содержащим вирусом с мол. массой РНК 2,16×106 Da. Нуклеотидная кислота является 2-нитевой, 2-сегментной (А и В). Вирус имеет белковую оболочку, образованную 5 видами белков (VP1, VP2, VP3, VP4 И VP5):

VP1 - РНК-зависимая РНК-полимераза;

VP2, VP3 - структурные белки;

VP4 - протеаза;

VP5 - не идентифицирован.

Липиды отсутствуют.

Штамм «К-58 №122-ДЕП» проявляет генетическую стабильность. Основная масса мутаций сосредоточена в области РНК, кодирующей VP2. Мутации, ведущие к замене аминокислот, определяют антигенную вариабельность VP2.

Штамм «К-58 №122-ДЕП» проявляет высокую степень гомологии (98%) по сравнению с многочисленной группой изолятов (30), выделенных на территории РФ в 1993-1996 гг.

Физические свойства

Масса вириона составляет 55,0×106 Da. Коэффициент седиментации 460S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,33-1,34 г/см3 в градиенте CsCl. Устойчивость к внешним факторам

Штамм «К-58 №122-ДЕП» устойчив к растворителям (эфиру, хлороформу) и детергентам, чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению и высыханию.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность -100%.

Реактогенность - отсутствует.

Патогенность - отсутствует.

Вирулентность - отсутствует.

Онкогенность - отсутствует.

Контагиозность - отсутствует.

Штамм «К-58 №122-ДЕП» является стабильным и не вызывает иммуносупрессии.

По безопасности и иммуногенности штамм «К-58 №122-ДЕП» полностью отвечает требованиям О.I.E. (МЭБ).

Комиссионные испытания подтвердили полное соответствие штамма «К-58 №122-ДЕП» предъявляемым требованиям и явились основанием для его депонирования во Всероссийской государственной коллекции микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ) МСХ РФ 1 июня 2004 года под регистрационным номером штамм «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц.

На основании приведенных сведений можно утверждать, что штамм «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц по антигенному и иммуногенному спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса птиц.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источник, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем признакам заявленного изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности существенных признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы изобретения.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «новизна».

Для проверки соответствия предлагаемой вакцины условию патентоспособности «изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемая вакцина не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1

Матровую расплодку вируса штамма «К-58 №122-ДЕП» в эмбрионах SPF-кур получают следующим образом. На границе подскорлупной оболочки и хориоаллантоисной оболочки (ХАО) делают насечку, не повреждая ХАО, и затем с помощью шприца вводят вируссодержащий материал в количестве 0,2 см3 на ХАО. Отверстие в скорлупе заклеивают лейкопластырем. Инфицированные эмбрионы инкубируют при температуре 37,7°С в течение 48-120 часов. Павшие эмбрионы разделывают, замораживают при температуре минус 40°С. Вирусосдержащий материал размораживают, измельчают, экстрагируют при температуре 4°С в течение 45 минут, дважды промораживают - оттаивают, добавляют фосфатный буфер рН 7,5, центрифугируют в течение 20 минут при 3000 об/мин. Полученную вируссодержащую жидкость с инфекционной активностью 5,25-7,0 Ig ЭИД50/0,2см3 используют в качестве матровой расплодки.

Пример 2

На первом этапе готовят матровой материал из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц так, как описано в примере 1. Полученную вируссодержащую жидкость используют для массового заражения 9-11-суточных эмбрионов SPF-кур. Вирусный материал в количестве 0,2 см3 вводят на ХАО и инкубируют при температуре 37,7°С в течение 48-120 часов. Павшие эмбрионы разделывают, замораживают при температуре минус 40°С и полученное сырье используют для изготовления вакцины. Вируссодержащий материал размораживают, измельчают на коллоидной мельнице, экстрагируют в течение 45 минут при температуре 4°С, дважды промораживают - оттаивают, добавляют фосфатный буфер рН 7,5 и центрифугируют в течение 20 минут при 3000 об/мин, очищая его таким образом от балластных примесей. Очищенную суспензию подают в стерильный реактор для инактивации вируса. Из инактивантов используют ДЭИ в виде 15% водного раствора, рН 7,9-8,0. В подогретую до 27°С вируссодержащую суспензию с инфекционной активностью 5,25-7,0 Ig ЭИД50/0,3см3 вносят ДЭИ в количестве, соответствующем его 0,1-0,3, мас.% содержанию в готовом препарате. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают при 27°С в течение 24 часов. По окончании инактивации антигенный материал охлаждают до 2-8°С. Полученный антиген смешивают с масляным адъювантом, который берут в количестве, соответствующем его 50,0-70,0 мас.% содержанию в готовом препарате. Из масляных адъювантов можно использовать масляный адъювант ВНИИЗЖ (пат. РФ №2108111; А 61 К 39/39, А 61 К 39/00, А 61 К 39/102, А 61 К 39/12, А 61 К 39/135; 10.04.98г.), а также масляные адъюванты марок Montanide ISA-70 и Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция).

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета. Вакцину контролируют на авирулентность и стерильность и фасуют в стерильные флаконы.

Авирулентность препарата определяют методом трехкратных «слепых» пассажей вакцины на 10-суточных эмбрионах SPF-кур.

Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТом 28085-89.

Безвредность препарата определяют путем введения 10-кратной иммунизирующей дозы (5,0 см3) полученной вакцины 100-110-суточным цыплятам.

Иммуногенную активность препарата определяют путем внутримышечного введения 0,5 см3 полученной вакцины 30-40-суточным цыплятам.

Стабильность вакцины определяют путем выдерживания образцов вакцины в термостате при температуре 37°С в течение месяца и сравнивают с исходными образцами. Вакцину применяют клинически здоровой птице для создания высокого уровня иммунитета. Птиц вакцинируют в возрасте 110-120 суток однократно. Препарат вводят внутримышечно в объеме 0,5 см3.

Иммунитет у вакцинированной птицы наступает на 21 сутки после вакцинации и сохраняется до 12 месяцев. Вакцина индуцирует высокий уровень антител против ИББ у птиц родительской стаи и обеспечивает надежный пассивный иммунитет у молодняка до 15-25-дневного возраста, что позволяет защитить его от полевого вирулентного вируса ИББ в ранний период жизни.

Полученная вакцина против ИББ птиц имеет оптимальный компонентный состав (мас.%), представленный в таблице 1.

Содержание антигена в предлагаемой вакцине в указанных выше пределах является его эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.

Пример 3

Определена иммуногенная активность инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:

Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП»
вируса ИББ птиц, полученный в 10-суточных эмбрионах
SPF-кур с инфекционной активностью 5,25 Ig ЭИД50/0,2см3
и подвергнутый инактивации29,9
ДЭИ0,1
Масляный адъювант70,0

Иммуногенную активность определяли на цыплятах 30-суточного возраста, свободных от антител к вирусу ИББ птиц. Вакцину вводили внутримышечно в область бедра по 0,5 см3. Через 21 сутки у птиц отбирали кровь, получали сыворотки и исследовали их в РДП и ИФА. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Результаты, представленные в таблице 2, свидетельствуют о высокой иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц из штамма «К-58 №122-ДЕП» вируса ИББ птиц.

Пример 4

Определена иммуногенная активность инактивированой эмульсионной вакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:

Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП»
вируса ИББ птиц, полученный в 10-суточных эмбрионах
SPF-кур с инфекционной активностью 6,0 Ig ЭИД50/0,2см3
и подвергнутый инактивации39,8
ДЭИ0,2
Масляный адъювант60,0

Определение иммуногенной активности проводили на цыплятах 30-суточного возраста, свободных от антител к вирусу ИББ птиц. Вакцину вводили по 0,5 см3 в мышцу бедра. Через 21 сутки после вакцинации у птиц отбирали кровь, получали сыворотки и исследовали их в РДП и ИФА на наличие антител против ИББ. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Результаты, представленные в таблице 3, свидетельствуют о высокой иммуногенной активности инактивированной вакцины против ИББ птиц из штамма «К-58№122-ДЕП».

Пример 5

Определена иммуногенная активность инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:

Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП»
вируса ИББ птиц, полученный в 10-суточных эмбрионах
SPF-кур с инфекционной активностью 6,0 Ig ЭИД50/0,2см3
и подвергнутый инактивации49,7
ДЭИ0,3
Масляный адъювант50,0

Иммуногенную активность определяли на цыплятах 30-суточного возраста, свободных от антител к вирусу ИББ птиц. Вакцину вводили внутримышечно в область бедра по 0,5 см3. Через 21 сутки у птиц отбирали кровь, получали сыворотки и исследовали их в РДП и ИФА. Результаты исследований представлены в таблице 4.

Результаты, представленные в таблице 4, свидетельствуют о высокой иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц из штамма «К-58 №122-ДЕП».

Пример 6

Проведена сравнительная оценка иммуногенной активности вакцины-прототипа и инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, содержащей, мас.%:

Антигенный материал из штамма «К-58 №122-ДЕП»
вируса ИББ птиц, полученный в 10-суточных эмбрионах
SPF-кур с инфекционной активностью 6,5 Ig ЭИД50/0,2см3
и подвергнутый инактивации39,8
ДЭИ0,2
Масляный адъювант60,0

Иммуногенную активность вакцин определяли на цыплятах 30-суточного возраста, свободных от антител к вирусу ИББ птиц. Вакцины вводили внутримышечно в область бедра по 0,5 см3. Через 21 сутки у птиц отбирали кровь, получали сыворотки и исследовали их в РДП и ИФА на наличие антител.

Результаты исследований представлены в таблице 5.

Данные таблицы 5 свидетельствуют о том, что инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ, изготовленная из аттенуированного штамма «К-58 №122-ДЕП», значительно превосходит вакцину против ИББ (титр антител выше в 1,88 раза), изготовленную из штамма D78, АТСС №VR-2041, и обеспечивает надежный пассивный материнский иммунитет у молодняка до 15-25-суточного возраста, что позволяет защитить его от заболевания ИББ в ранний период жизни.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:

- инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;

- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;

- инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ птиц, приготовленная из штамма «К-58 №122-ДЕП» в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью, является безвредной и стабильной при хранении. Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».

Источники информации, принятые во внимание

1. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных. - М., ВНИТИБП, 1998, 64-84.

2. Wyeth P.J. The veterinary Record,1979, 104, 188-193.

3. Lucia B.e.a. Avian Diseases. 1979, 23, 2, 466-478.

4. Пат. США №4530831, 425-89, 23.07.85 г.

5. Пат. Венгрии №203781; С 12 N 7/00 А 61 К 39/12; 28.08.90 г.

6. Пат. Румынии №100319, А 61 К 39/12, 29.10.90 г.

7. Пат РФ №2127603; А 61 К 39/12, C 12 N 7/00; 20.03.99 г.

8. Пат. США №4530831, 425-89, 23.07.85 г. (прототип).

Таблица 1
Оптимальный компонентный состав (мас.%) инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц, изготовленной на основе штамма «К-58 №122-ДЕП»
ИнгредиентыМинимумСреднийМаксимум
Антигенный материал29,939,849,7
ДЭИ0,10,20,3
Масляный адъювант70,060,050,0
Таблица 2
Определение иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц из штамма «К-58 №122-ДЕП»
№№ п/пНаименование материалаТитр антител
РДПИФА
1Сыворотка вакцинированных птиц1:161:4850
2-«-1:321:5200
3--«-1:641:5500
4-«-1:641:5850
5-«-1:641:7200
6-«-1:641:7370
7-«-1:641:7600
8-«-1:641:8100
9-«-1:641:8500
10-«-1:1281:9220
Таблица 3
Определение иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц из штамма «К-58 №122-ДЕП»
№№ п/пНаименование материалаТитр антител
РДПИФА
1Сыворотка вакцинированных птиц1:321:4500
2-«-1:321:4800
3-«-1:641:5000
4-«-1:641:6200
5-«-1:641:6800
6-«-1:641:7200
7-«-1:641:7550
8-«-1:1281:8000
9-«-1:1281:8500
10-«-1:1281:9800

Таблица 4
Определение иммуногенной активности «Инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ птиц из штамма «К-58 №122-ДЕП»
№№ п/пНаименование материалаТитр антител
РДПИФА
1Сыворотка вакцинированных птиц1 321:5500
2-«-1:321:5100
3-«-1:321:5650
4-«-1:641:6800
5-«-1:641:7200
6-«-1:641:7420
7-«-1:641:8550
8-«-1:2561:9100
9-«-1:2561:9210
10-«-1:2561:10520
Таблица 5
Сравнительная оценка иммуногенной активности инактивированных эмульсионных вакцин из штамма D 78 и штамма «К-58 №122-ДЕП»
№ п/пНаименование штаммов
D78«К-58 №122-ДЕП»
Титр антителТитр антител
11:16001:2700
21:17501:3320
31:20501:4000
41:35001:4360
51:32001:4800
61:25001:5850
71:18001:5950
81:42001:5500
91:20001:6480
101:28801:5020
Средний1:25481:4798

Антигенныйматериал29,4-47,7ДЭИ0,1-0,3Масляныйадъювант50,0-70,0c0c1211none191811.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапротивинфекционнойбурсальнойболезни(ИББ)птиц,содержащаяантигенныйматериализгомологичноговозбудителюинфекцииштамма,полученныйвчувствительнойбиологическойсистемеиподвергнутыйинактивации,инактивантимасляныйадъювант,отличающаясятем,чтовкачествеантигенногоматериалаонасодержитантигенныйматериализштамма«К-58№122-ДЕП»вирусаИББптиц(Bursitisinfectiosagallinae),семействаBirnaviridae,родаAvibirnavirus,серотипа1,коллекцияФГУВГНКИ«К-58№122-ДЕП»,вэффективномколичестве.12.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапоп.1,отличающаясятем,чтоонасодержитантигенныйматериализштамма«К-58№122-ДЕП»вирусаИББптиц,полученныйв9-11-суточныхэмбрионахSPF-курсинфекционнойактивностью,поменьшеймере,5,25lgЭИД иподвергнутыйинактивации.23.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапоп.2,отличающаясятем,чтоонасодержитантигенныйматериализштамма«К-58№122-ДЕП»вирусаИББптиц,полученныйв9-11-суточныхэмбрионахSPF-курсинфекционнойактивностью,поменьшеймере,5,25lgЭИД иподвергнутыйинактивации,вколичестве29,9-49,7мас.%.34.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапоп.1,отличающаясятем,чтоизинактивантовонасодержитдимерэтиленимина(ДЭИ).45.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапоп.4,отличающаясятем,чтоонасодержитДЭИввиде15%-ноговодногораствора.56.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапоп.5,отличающаясятем,чтоонасодержитДЭИвколичестве0,1-0,3мас.%.67.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинапоп.1,отличающаясятем,чтоонасодержитмасляныйадъювантвколичестве50,0-70,0мас.%.78.Инактивированнаяэмульсионнаявакцинаполюбомуизпп.1-7,отличающаясятем,чтосодержитантигенныйматериализштамма«К-58№122-ДЕП»вирусаИББптиц,полученныйв9-11-суточныхэмбрионахSPF-курсинфекционнойактивностью,поменьшеймере,5,25lgЭИД иподвергнутыйинактивации,инактивантДЭИимасляныйадъювантвсоотношении,мас.%:8
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 11.
29.04.2019
№219.017.3e63

Вирусвакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вирусвакцина содержит вирусный материал из аттенуированного штамма, депонированного в коллекции ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером "К-58 №122-ДЕП", и стабилизатор в соотношении, мас.%: 85-95; 5-15 соответственно. Штамм...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002272649
Дата охранного документа: 27.03.2006
29.04.2019
№219.017.3e70

Вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит антигенный материал из штамма "ВНИИЗЖ-ДЕП" вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток, взятой из ряда, состоящего из перевиваемых культур клеток...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002271220
Дата охранного документа: 10.03.2006
29.04.2019
№219.017.3ea2

Штамм "вниизж" коронавируса крупного рогатого скота для изготовления диагностических, вакцинных и лечебных препаратов

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Штамм обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью. Штамм депонирован в коллекции штаммов микроорганизмов ФГУ ВГНКИ под регистрационным наименованием "ВНИИЗЖ-ДЕП". Коронавирус штамма репродуцируется в перевиваемых...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002268937
Дата охранного документа: 27.01.2006
29.04.2019
№219.017.3ea3

Вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота сорбированная инактивированная

Изобретение относится к ветеринарии, вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит антигенный материал из штамма "ВНИИЗЖ-ДЕП" вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток, взятой из ряда, состоящего из перевиваемых культур клеток...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002268747
Дата охранного документа: 27.01.2006
29.04.2019
№219.017.3ea4

Штамм "к-58" вируса инфекционной бурсальной болезни птиц для изготовления диагностических и вакцинных препаратов

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Штамм "К-58" депонирован в коллекции ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером "К-58 №122-ДЕП". Штамм репродуцируется на 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с титром биологической активности 5,5-7,0 Ig ЭИД . Штамм является стабильным и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002268936
Дата охранного документа: 27.01.2006
29.04.2019
№219.017.429e

Вакцина против коронавирусной инфекции крупного рогатого скота сорбированная инактивированная

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» (авторское наименование) коронавируса крупного рогатого скота (KPC), полученный в чувствительной биологической системе (перевиваемые культуры клеток...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002301079
Дата охранного документа: 20.06.2007
10.07.2019
№219.017.aa7e

Инактивированная сорбированная вакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит антигенный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) птиц, инактивант димер этиленимина, адъюванты гидроокись алюминия и сапонин в эффективных соотношениях. Штамм (авторское...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002283136
Дата охранного документа: 10.09.2006
10.07.2019
№219.017.ab30

Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А (Грузия) 1999/№1721-ДЕП, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002294760
Дата охранного документа: 10.03.2007
10.07.2019
№219.017.ab63

Инактивированная сорбированная вакцина против инфекционного ларинготрахеита птиц

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит авирулентный антигенный материал из штамма «О №112-ДЕП» гомологичного вируса, защитную среду и адъювант в эффективном соотношении. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ под регистрационным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002259845
Дата охранного документа: 10.09.2005
10.07.2019
№219.017.ab6e

Инактивированная эмульсионная вакцина против инфекционного ларинготрахеита птиц

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит авирулентный антигенный материал из штамма "О №112-ДЕП" гомологичного вируса и масляный адъювант в эффективном соотношении. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ под регистрационным наименованием "О...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002257225
Дата охранного документа: 27.07.2005
Показаны записи 1-10 из 11.
20.12.2013
№216.012.8c2d

Рекомбинантная вакцина для профилактики вирусного гепатита е у животных

Изобретение относится к биотехнологии, а именно генной инженерии. Предложена рекомбинантная вакцина для профилактики вирусного гепатита E у животных. Вакцина включает капсидный белок (rtHEV-ORF2), полученный путем культивирования рекомбинантного штамма дрожжей Hansenula polymorpha...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002501568
Дата охранного документа: 20.12.2013
10.06.2014
№216.012.d00b

Устройство для получения, хранения и транспортировки сухих образцов жидкостных объектов, предназначенных для последующего проведения лабораторного анализа

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для взятия, хранения и транспортировки проб биологических жидкостей с целью последующего проведения анализа материала на содержание биологически активных веществ. Устройство для получения, хранения и транспортировки высушенных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519030
Дата охранного документа: 10.06.2014
27.08.2014
№216.012.ed4f

Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526570
Дата охранного документа: 27.08.2014
27.09.2014
№216.012.f77f

Способ получения хлоридов 2,3-дигидро [1,3] теллуразоло [3,2-α] пиримидиния

Изобретение относится к способу получения хлоридов 2,3-дигидро[1,3]теллуразоло[3,2-α]пиримидиния общей формулы где R - алкил или фенил; R - алкил, фенил или водород; R+R - циклоалкил. Способ включает взаимодействие соответствующего олефина с гидрохлоридом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529196
Дата охранного документа: 27.09.2014
10.12.2015
№216.013.98da

Набор для получения, хранения и транспортировки сухих образцов крови для последующего проведения лабораторного анализа

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии применительно к взятию, хранению и транспортировке проб крови или сыворотки с целью последующего проведения анализа материала на содержание биологически активных веществ. Набор содержит упаковочную коробку, одно устройство для прокалывания...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570750
Дата охранного документа: 10.12.2015
20.03.2019
№219.016.e623

Способ изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против гриппа птиц и вакцина инактивированная эмульгированная против гриппа птиц

Группа изобретений относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Способ включает приготовление антигенного материала из штамма вируса гриппа птиц, очистку антигенного материала от балластных примесей, инактивацию вируса, соединение антигенного материала с масляным адъювантом и контроль...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002358760
Дата охранного документа: 20.06.2009
29.04.2019
№219.017.3e63

Вирусвакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вирусвакцина содержит вирусный материал из аттенуированного штамма, депонированного в коллекции ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером "К-58 №122-ДЕП", и стабилизатор в соотношении, мас.%: 85-95; 5-15 соответственно. Штамм...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002272649
Дата охранного документа: 27.03.2006
29.04.2019
№219.017.3ea4

Штамм "к-58" вируса инфекционной бурсальной болезни птиц для изготовления диагностических и вакцинных препаратов

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Штамм "К-58" депонирован в коллекции ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером "К-58 №122-ДЕП". Штамм репродуцируется на 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с титром биологической активности 5,5-7,0 Ig ЭИД . Штамм является стабильным и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002268936
Дата охранного документа: 27.01.2006
29.04.2019
№219.017.4324

Штамм "новосибирский" вируса гриппа птиц influenzae virus avicum для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Получен новый производственный штамм вируса гриппа птиц типа А, подтипа H5N1, депонированный в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером ВНИИЗЖ №125-ДЕП «Новосибирский». Предложенный штамм расширяет арсенал...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002323740
Дата охранного документа: 10.05.2008
31.05.2019
№219.017.717c

Способ кормления сельскохозяйственной птицы, способствующий увеличению экспрессии бета-дефензинов

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биохимии, а также может быть использовано в птицеводстве при кормлении птицы. Способ кормления сельскохозяйственной птицы заключается в том, что в корм вносят смесь эфирных масел эвкалипта, чеснока и лимона, взятых при соотношении 1:3:1, нанесенных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002689709
Дата охранного документа: 28.05.2019
+ добавить свой РИД