ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ СЕКСТАФАГА (ПИОБАКТЕРИОФАГА ПОЛИВАЛЕНТНОГО) ИЛИ БАКТЕРИОФАГА САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ

Группа изобретений относится к биотехнологии, медицине и фармации, а именно к лекарственным формам медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) с бактериофагами в качестве активного начала, и может использоваться для лечения и профилактики гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных стафилококками, стрептококками, протеями, клебсиеллами, синегнойной и кишечной палочками или лечения и профилактики сальмонеллезов.

Рост дисбактериозов и кишечных заболеваний, вызванных ассоциациями условно-патогенных бактерий, требует создания препаратов с широким спектром антибактериальной активности. Таким требованиям отвечают комплексные препараты бактериофагов.

Традиционная форма выпуска бактериофагов - жидкий препарат во флаконах и желудочно-резистентные таблетки с оболочкой. Жидкая лекарственная форма бактериофагов не полностью обеспечивает современные потребительские и товарные свойства препарата, а также значительно снижает их эффективность при пероральном применении в связи с инактивацией бактериофагов в кислой среде желудочного сока (Решетников В.И. Проблемы обеспечения кислотоустойчивости таблеток бактериофагов / В.И.Решетников, М.А.Каменева, Н.П.Ефимова // Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке: Матер. конф. - Пермь, 2003. - С.228-232). Таблетированные бактериофаги с желудочно-резистентным покрытием имеют более высокую себестоимость производства и не рациональны при назначении маленьким детям (нарушение защитного покрытия при необходимости дробления таблеток).

Известны желудочно-резистентные таблеточные составы бактериофагов без оболочки с пектином, пригодные только для стабильных видов бактериофагов (брюшнотифозный, дизентерийный (Пат. SU 653786, МПК⁷ А61К 35/76, «Лечебно-профилактический дизентерийный бактериофаг и способ его получения», опубл. 10.10.1999), но не обеспечивающие стабильность компонентов «Секстафага» из-за кислой среды пектина (Ковязина Н.А. Разработка состава и технологии желудочно-резистентных таблеток «Секстафаг» /Н.А.Ковязина, В.И.Решетников, Е.В.Функнер // Фармация. - 2008. - №7. - С.36-39).

В качестве прототипа группы изобретений принято описание изобретения к патенту №2241446, МПК⁷ А61К 35/76, А61К 9/20 «Фармацевтическая композиция, содержащая бактериофаги, и способ ее получения», опубл. 10.12.04.

В упомянутом описании фармацевтическая композиция включает бактериофаги, высушенные с наполнителями без лиофилизации, в виде таблеток с желудочно-резистентным покрытием, содержит на одну таблетку массой 0,1 г бактериофаги с титром по Аппельману не менее 10^-4 и компоненты в следующем соотношении, мас.%:

Способ получения указанной фармацевтической композиции, содержащей бактериофаги, высушенные с наполнителями без лиофилизации, состоит в том, что в фаголизат до сушки дополнительно вводят синтетические водорастворимые полимеры, а в наполнитель или в фаголизат вводят сахара (лактозу и/или манит), причем сушку проводят в вакууме до влажности 1-2%.

Признаки, общие с прототипом по составу, - синтетический водорастворимый полимер (производное целлюлозы); лактоза; кальция карбонат; кальция или магния стеарат.

Признаки, общие с прототипом по способу, - стабилизация фаголизата сахарами (лактозу и/или манит) и синтетическим водорастворимым полимером.

Недостатком известного технического решения является использование дорогостоящего оборудования и сырья для покрытия ядер желудочно-резистентной оболочкой.

В предлагаемой группе изобретений решается задача создания желудочно-резистентных таблеток бактериофагов без оболочки с высокой литической активностью (для комплексного препарата Секстафаг® (Пиобактериофаг поливалентный) и бактериофага сальмонеллезного гр. A, B, C, D, E).

Технический результат по составу, опосредствующий решение задачи, состоит в повышении желудочной резистентности таблеток и стабилизации бактериофагов.

Технический результат по составу достигается тем, что в фармацевтической композиции, содержащей Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный) или сальмонеллезный бактериофаг, высушенные с наполнителями (метилцеллюлоза, лактоза, кальция карбонат, кальция или магния стеарат), в виде желудочно-резистентных таблеток без оболочки, согласно изобретению соотношение бактериофага и наполнителей составляет от 1:1 до 1,25:1, а композиция содержит дополнительно сорбит и натрия альгинат, при этом одна таблетка массой 0,16-0,2 г содержит бактериофаги с титром по Аппельману не менее 10^-3 и компоненты в следующем соотношении массовых %:

Технический результат по способу, опосредствующий решение задачи, заключается в получении гомогенной пастообразной массы (к стерильному бактериофагу с титром по Аппельману не менее 10^-7, добавляют стабилизатор, вымешивают до гелеобразного раствора, вмешивают наполнители, обеспечивающие каркас таблетки), массу подвергают сублимационному высушиванию, гранулируют, опудривают и прессуют таблетки.

Отличительными признаками заявляемой композиции от прототипа является то, что данная желудочно-резистентная фармацевтическая композиция, содержащая Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный) или бактериофаг сальмонеллезный, высушенные с наполнителями в виде желудочно-резистентных таблеток без оболочки, отличающаяся тем, что соотношение бактериофага и наполнителей составляет от 1:1 до 1,25:1, а композиция содержит дополнительно сорбит и натрия альгинат, при этом одна таблетка массой 0,16-0,2 г содержит бактериофаги с титром по Аппельману не менее 10^-3 и компоненты в следующем соотношении массовых %:

Отличительными признаками предлагаемого способа по отношению к прототипу являются следующие:

- массу высушивают в сублимационной установке;

- желудочную резистентность таблеток придают с помощью наполнителей, обеспечивающих каркас избирательной распадаемости.

Предлагаемую фармацевтическую композицию получают следующим образом.

К стерильным фаголизатам бактерий с титром по Аппельману не менее 10^-3 добавляют стабилизатор (метилцеллюлозу, сорбит и лактозу) до полного растворения. В этот гелеобразный раствор вносят смесь кальция карбоната с натрия альгинатом, тщательно перемешивают до состояния гомогенной пастообразной массы. Сушат в сублимационной установке до влажности 2-4%. Сухую массу гранулируют через сито с размером отверстий 1 мм, опудривают кальция или магния стеаратом и прессуют в таблетки массой 0,16-0,2 г (в зависимости от соотношения наполнителей и бактериофага).

В качестве положительных примеров представлены варианты составов и способов получения таблеток бактериофагов, обеспечивающих сохранение литической активности готовых препаратов на уровне исходных жидких в течение не менее одного года.

Пример 1. Получение таблетированного Секстафага (Пиобактериофага поливалентного) или бактериофага сальмонеллезного.

1. Комбинированный препарат Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный) представляет собой смесь стерильных очищенных фильтратов фаголизатов бактерий Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli.

2. Жидкий бактериофаг сальмонеллезный гр. А, В, С, D, Е представляет собой стерильный очищенный фильтрат фаголизатов сальмонелл: гр. А - Salmonella paratyphi А; гр. В - S. paratyphi В, S.typhimurium, S. heidelberg; гр. C-S. newport, S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis; гр. D-S. dublin, S. enteritidis; гр. E-S. anatum, S. newlands. Получение концентрированного бактериофага:

- Стерильные фильтраты фаголизатов с титром не менее 10^-5 концентрируют в 50-100 раз с помощью мембранной ультрафильтрации до титра по Аппельману 10^-7. Затем полученные концентраты подвергают стерилизующей фильтрации через микропористые мембраны с размером пор 0,22 мкм. После этого концентрированные бактериофаги сводят в один объем и в дальнейшем используют для приготовления таблеток.

- Стерильные фильтраты фаголизатов с титром не менее 10^-5 сводят в один объем, концентрируют в 50-100 раз с помощью мембранной ультрафильтрации до титра по Аппельману 10^-7. Затем полученные концентраты подвергают стерилизующей фильтрации через микропористые мембраны с размером пор 0,22 мкм и в дальнейшем используют для приготовления таблеток.

- К 100 мл концентрированного бактериофага добавляют стабилизатор (полусинтетическое высокомолекулярное соединение - метилцеллюлозу 0,5 г и смесь сахаров - сорбит 15,0 г, лактозу 24,5 г). После растворения ингредиентов стабилизированную гелеобразную массу вымешивают наполнителями - кальция карбонатом 55,0 г и натрия альгинатом 5,0 г (обеспечивающим каркас избирательной распадаемости таблетированных фагов (потенциальную желудочную резистентность). Соотношение бактериофага и наполнителей составляет 1:1. Все наполнители перед сушкой предварительно стерилизуют в сушильно-стерилизационном шкафу дважды с суточным интервалом в течение 4-х часов при температуре 110°С. После тщательного перемешивания полученную гомогенную пастообразную массу выкладывают тонким слоем на дно кассеты, накрывают стерильной тканью и вакуумно или сублимационно высушивают в сублимационной установке до влажности 2-4%. Технологические потери при сушке и измельчении компенсируются за счет сухого остатка бактериофага, поэтому реальный выход полуфабриката соответствует регламентной суммарной загрузке компонентов. Сухую массу протирают через сито с размером отверстий 1 мм, соединяют со стерильной массой целевых добавок (вспомогательных антифрикционных веществ - 1,0 г магния стеарата), тщательно перемешивают и прессуют в таблетки массой 0,2 г, эквивалентные по объему 20 мл коммерческого препарата.

Пример 2. Получение таблетированного Секстафага (Пиобактериофага поливалентного) или бактериофага сальмонеллезного.

Проводят подготовку бактериофагов и наполнителей для сушки, как описано в примере 1. К 120 мл концентрированного бактериофага добавляют стабилизатор - метилцеллюлозу 2,0 г и смесь сахаров - сорбит 10,0 г, лактозу 25,0 г). После растворения ингридиентов стабилизированную гелеобразную массу вымешивают наполнителями - кальция карбонатом 55,0 г и натрия альгинатом 8,0 г (обеспечивающим каркас избирательной распадаемости таблетированных бактериофагов - потенциальную желудочную резистентность). Соотношение бактериофага и наполнителей составляет 1,2:1,0. Последующий технологический процесс аналогичен примеру 1. Прессуют в таблетки массой 0,167 г, эквивалентные по объему 20 мл коммерческого препарата.

Пример 3. Получение таблетированного Секстафага (Пиобактериофага поливалентного) и бактериофага сальмонеллезного.

Проводят подготовку бактериофагов и наполнителей для сушки, как описано в примере 1. К 125 мл концентрированного бактериофага добавляли стабилизатор (полусинтетическое высокомолекулярное соединение - метилцеллюлозу 4,0 г и смесь сахаров - сорбит 5,0 г, лактозу 5,0 г). После растворения ингредиентов стабилизированную гелеобразную массу вымешивают наполнителями - кальция карбонатом 75,0 г и натрия альгинатом 11,0 г. Соотношение бактериофага и наполнителей составляет 1,25:1,0. Последующий технологический процесс аналогичен примеру 1.

Прессуют в таблетки массой 0,16 г, эквивалентные по объему 20 мл коммерческого препарата.

Технологическая загрузка компонентов предполагает получение 3000 таблеток (без учета потерь), содержащих концентрированные бактериофаги в количестве 0,2 мл. Литическую активность бактериофагов определяют при растворении 5 таблеток в 100 мл питательной среды (1 таблетка в 20 мл). Данное разведение при расчете титра не учитывают. Приготовлено 12 экспериментально-производственных серий бактериофага Секстафага (Пиобактериофага поливалентного) или бактериофага сальмонеллезного в таблетках без оболочки. Активность бактериофагов в таблетках была не ниже 10^-3 в течение 1 года наблюдения.

Кроме положительных примеров реализации составов и способа получения фармацевтической композиции, содержащей бактериофаги, приводим обобщенные данные по факторам, ограничивающим качественный состав, количественные интервалы и технологические режимы получения таблетированных препаратов бактериофагов, при которых титр по Аппельману был ниже 10^-3 (неудовлетворительная стабильность).

При добавлении в полуфабрикат метилцеллюлозы более 4% наблюдали уменьшение насыпной плотности, что негативно влияло на однородность дозирования при таблетировании.

При добавлении в полуфабрикат сорбита более 15% таблетируемая масса плохо высушивалась, имела повышенную влажность, наблюдали прилипание гранулята к пресс-инструменту. Полученные таблетки имели низкую прочность.

При введении натрия альгината непосредственно в фаголизат бактериофагов для обеспечения потенциальной желудочной резистентности наблюдали инактивацию бактериофагов в таблетках (снижение литической активности). При наличии натрия альгината менее 5% полученные таблетки не выдерживали тест на распадаемость согласно ГФ XI для кишечно-растворимых таблеток. При наличии натрия альгината более 15% у полученных таблеток наблюдали снижение литической активности компонентов комплексного бактериофага.

При введении бактериофагов непосредственно в полуфабрикат (смесь метилцеллюлозы, лактозы, сорбита, кальция карбоната и натрия альгината) для упрощения технологического процесса наблюдали снижение активности бактериофагов в сравнении с составами, полуфабрикат в которых разделен на 2 составные части, как описано в примерах 1-3.

При высушивании полуфабрикатов при соотношении наполнителей и бактериофагов от 1,25:1,0 до 3,0:1,0 и от 1,0:1,5 до 1,0:2,0 наблюдали снижение активности таблетированных бактериофагов.