×
29.05.2019
219.017.634c

СПОСОБ РЕГИСТРАЦИИ ИЗМЕНЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО ЗАРЯДА ЭРИТРОЦИТОВ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения изменения поверхностного заряда эритроцитов у пациентов. Для этого отбирают образец крови у здоровых доноров и больных. После чего из крови выделяют эритроциты и проводят их инкубирование с катионным красителем. В качестве красителя используют акридиновый оранжевый. При этом краситель инкубируют с эритроцитами при 37°С в течение 30 минут. Определяют оптическую плотность раствора при 412 нм до и после инкубации с эритроцитами. Поверхностный заряд рассчитывают по количеству связанного красителя. Определяют изменение поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров. Изобретение позволяет определить изменение поверхностного заряда эритроцитов у пациентов. 3 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследований.

Известен способ определения поверхностного отрицательного заряда эритроцитов путем измерения их электрофоретической подвижности.

К недостаткам известного способа следует отнести сравнительную трудоемкость определения изменения поверхностного заряда эритроцитов, труднодоступность специальных приборов.

Известен также способ определения изменения поверхностного заряда эритроцитов (Шереметьев Ю.А., Макин Г.И., Суслов Ф.Ю. Способ регистрации изменения поверхностного заряда эритроцитов №2027188, 1995) путем их выделения из крови и регистрации агрегации, индуцированной лантаном.

В качестве прототипа выбран способ определения изменения поверхностного заряда эритроцитов, включающий забор крови, выделение эритроцитов из крови, и их инкубирование с катионным красителем - альциановым голубым, при этом краситель инкубируют с эритроцитами при 37°С в течение 30 минут, определяют оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами, а изменение поверхностного заряда рассчитывают по количеству связанного красителя эритроцитами больных по сравнению с эритроцитами здоровых доноров (Klinger М., Kramarz S., Wendycz D., Kopec W. Different erythrocyte and platelet surface electric charge in various types of glomerulonephritis. Nephrol. Dial.Transplant. 1997.12.707-712).

Принцип метода основан на том, что положительно заряженный краситель связывается с отрицательно заряженной поверхностью эритроцитов. Чем меньше связалось красителя с эритроцитами, тем ниже их отрицательный заряд.

Однако альциановый голубой является дорогим и дефицитным препаратом.

Известно, что другой положительно заряженный краситель акридиновый оранжевый используется для определения нуклеиновых кислот в различных клетках. При этом окрашивание акридиновым оранжевым клеток нельзя наблюдать в световом микроскопе. Для этого требуются специальные приборы (люминисцентный микроскоп).

Задача предлагаемого изобретения - использование нового, катионного красителя, обеспечивающего определение поверхностного заряда эритроцитов.

Технический результат - определение изменения поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови у здоровых доноров и больных, выделение эритроцитов из крови и их инкубируют с акридиновым оранжевым при 37°С в течение 30 минут, определяют оптическую плотность раствора при 412 нм до и после инкубации с эритроцитами, поверхностный заряд рассчитывают по количеству связанного красителя, определяют изменение поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты после забора крови трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCI, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов и инкубируют при 37°С в течение 30 минут. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Рассчитывают количество связанного красителя с анионными участками поверхности эритроцитов по формуле:

А(%)=100-(С⋅100)/В, где А - количество связанного эритроцитами красителя (%);

В - оптическая плотность исходного раствора (в ед. экстинкции); С - оптическая плотность раствора красителя после инкубации с эритроцитами (в ед. экстинкции). По разнице между количеством связанного красителя эритроцитами здорового донора и клетками больных судят об изменении поверхностного заряда эритроцитов.

Пример 1. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов здорового донора и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Количество связанного с эритроцитами акридинового оранжевого составило 61.5%.

Пример 2. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов больного болезнью Крона и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Количество связанного с эритроцитами акридинового оранжевого составило 46.2%. Поверхностный заряд эритроцитов больного с болезнью Крона снижен на 15.3%.

Пример 3. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом и инкубируют при 37°С в течение 30 минут. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Количество связанного с эритроцитами акридинового оранжевого составило 51.7%. Поверхностный заряд эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом снижен на 9.8%.

Способ определения изменения поверхностного заряда эритроцитов, включающий забор крови у здоровых доноров и больных, выделение эритроцитов из крови и их инкубирование с катионным красителем, отличающийся тем, что в качестве красителя используют акридиновый оранжевый, при этом краситель инкубируют с эритроцитами при 37°С в течение 30 минут, определяют оптическую плотность раствора при 412 нм до и после инкубации с эритроцитами, поверхностный заряд рассчитывают по количеству связанного красителя, определяют изменение поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-1 из 1.
19.01.2018
№218.015.ff4d

Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов

Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к прижизненной оценке действия реагентов на образование стоматоцитов. Способ прижизненной оценки действия реагентов на образование стоматоцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и изучение их формы с помощью светового микроскопа,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002629609
Дата охранного документа: 30.08.2017
Показаны записи 1-10 из 32.
20.06.2014
№216.012.d2c8

Способ покрытия предметных стекол для микроскопии

Изобретение относится к области биологии и медицины, а именно к лабораторным методам исследования эритроцитов. Сущность способа: предметное стекло покрывают адгезивным веществом, в качестве которого используют хлористый лантан, при этом стекла помещают в сосуд с 0.03% раствором хлористого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519731
Дата охранного документа: 20.06.2014
10.04.2015
№216.013.38a8

Способ повышения проницаемости мембраны эритроцитов для депонирования ими лекарственных веществ

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и описывает способ повышения проницаемости мембраны клеток крови для депонирования ими лекарственных средств, включающий добавление к клеточной массе, полученной путем центрифугирования крови, лекарственных препаратов и последующее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545992
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.3ed5

Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Для оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов клетки фиксируют глутаровым альдегидом, отмывают дистиллированной водой и помещают на предметное стекло, обработанное хлористым...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547573
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.08.2015
№216.013.6a57

Способ выделения микровезикул эритроцитов

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу выделения микровезикул эритроцитов. Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающих забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, далее к полученному...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558776
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.01.2016
№216.013.9efa

Способ оценки состояния цитоскелета эритроцитов

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования изменения состояния цитоскелета эритроцитов. Для этого эритроциты отмывают от плазмы крови, помещают на водяную баню при 49,2°C и прогревают в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксируют с помощью глутарового...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002572335
Дата охранного документа: 10.01.2016
20.08.2016
№216.015.4cce

Теплогенератор

Изобретение относится к теплогенераторам кавитационного типа для разогрева жидкостей в гидросистемах различного назначения, а также может быть использовано в качестве смесителей различных жидкостей. Сущность изобретения в том, что в теплогенераторе, содержащем цилиндрический корпус, циклон в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002594394
Дата охранного документа: 20.08.2016
13.01.2017
№217.015.7573

Способ приготовления котлет "энержи"

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к производству котлет. Способ предусматривает приготовлении мясного, или куриного, или рыбного, или овощного фарша, который нарезают кусочками и пропускают через электормясорубку с диаметром отверстий решетки 4,5…5,0 мм, добавляя при этом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002598634
Дата охранного документа: 27.09.2016
13.01.2017
№217.015.914c

Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме

Изобретение относится к медицине, а именно к способу микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме. Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме заключается в заборе крови с антикоагулянтом, выделении эритроцитов, далее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605843
Дата охранного документа: 27.12.2016
25.08.2017
№217.015.9fd0

Способ оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов

Изобретение относится к области медицины и фармации и описывает способ оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов, которую определяют по ацетилхолинэстеразной активности везикул. Способ включает хранение промытых эритроцитов при 4°C в течение 7 дней в присутствии...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606042
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.c01d

Способ оценки степени апоптоза эритроцитов in vitro

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтике для определения степени апоптоза эритроцитов in vitro. Для этого эритроциты отмывают в 10-кратном объеме физиологического раствора, а полученный супернатант инкубируют с хлористым гадолинием до конечной концентрации 400-600 мкМ. После...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616498
Дата охранного документа: 17.04.2017
+ добавить свой РИД