×
25.08.2017
217.015.c01d

СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ АПОПТОЗА ЭРИТРОЦИТОВ IN VITRO

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтике для определения степени апоптоза эритроцитов in vitro. Для этого эритроциты отмывают в 10-кратном объеме физиологического раствора, а полученный супернатант инкубируют с хлористым гадолинием до конечной концентрации 400-600 мкМ. После интенсивного перемешивания смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. В полученном осадке, содержащем микрочастицы, определяют активность ацетилхолинэстеразы. По активности ацетилхолинэстеразы судят о степени апоптоза эритроцитов. Изобретение обеспечивает простой и быстрый способ определения степени апоптоза эритроцитов при скрининге лекарственный препаратов. 3 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине и может использоваться в опытах in vitro для оценки степени апоптоза эритроцитов.

Важнейшим признаком апоптоза эритроцитов является образование микрочастиц, несущих на своей поверхности большое количество фосфатидилсерина (Lang K.S et al. Mechanisms of suicidal erythrocyte death. Cell Physiol. Biochem. 2005. Vol. 15. P. 195-202). По появлению микрочастиц в инкубационной среде судят об апоптозе эритроцитов.

В качестве прототипа выбран способ оценки степени апоптоза эритроцитов in vitro по образованию количества микрочастиц, включающий отмывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, ультрацентрифугирование супернатанта и определение в осадке количества микрочастиц (Vader P. et al. Taxol - induced phosphatidylserine exposure and microvesicle formation in red blood cells is mediated by its vehicle cremophor. Nanomedicine. 2013. Vol. 8. P. 1127-1135).

Однако способ требует длительного ультрацентрифугирования супернатанта при 100000 g в течение 60 мин и дорогого специального оборудования (анализатор микрочастиц).

Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - упрощение и ускорение способа оценки степени апоптоза эритроцитов in vitro.

Принцип метода основан на том, что трехвалентный катион гадолиний избирательно взаимодействует с отрицательно заряженным фосфатидилсерином микрочастиц. В результате этого происходит агрегация микрочастиц и последующее выпадение их в осадок. В осадке, содержащем микрочастицы, определяют активность маркерного фермента микрочастиц ацетилхолинэстеразы (Greenwalt T.J. Tranfusion. - 2005. - V. 46. - P. 143-152).Чем выше активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц, тем выше степень апоптоза эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток крови центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. После инкубации эритроциты центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. К супернатанту добавляют хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, интенсивно перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, получают осадок, содержащий микрочастицы, и в нем определяют ацетилхолинэстеразную активность, по активности ацетилхолинэстеразы микрочастиц судят о степени апоптоза эритроцитов.

Пример 1. Отмытые эритроциты инкубировали в среде, содержащей 1 мкМ ионофора А 23187 и 1 мМ кальция, в течение 3 ч. После инкубации эритроциты центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. К супернатанту добавляли хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, интенсивно перемешивали и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке определяли активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц. Активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц составила 6.2±0.5 мкмоль/мин/мг белка.

Пример 2. Отмытые эритроциты инкубировали в среде, содержащей 400 мМ сахарозы и 1 мМ кальция, при 37°C в течение 24 ч. После инкубации эритроциты центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. К супернатанту добавляли хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, интенсивно перемешивали и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке определяли активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц. Активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц составила 36.31±1.82 мкмоль/мин/мг белка.

Пример 3. Отмытые эритроциты инкубировали в среде, содержащей 5 мкМ хлористого лантана, при 37°C в течение 24 ч. После инкубации эритроциты центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. К супернатанту добавляли хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, интенсивно перемешивали и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке определяли активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц. Активность ацетилхолинэстеразы микрочастиц составила 29.7±1.14 мкмоль/мин/мг белка.

Таким образом, с помощью предлагаемого способа можно выяснить степень апоптоза эритроцитов in vitro. Так наибольшая степень апоптоза эритроцитов наблюдается в опытах с сахарозой.

Преимуществом предлагаемого способа является быстрота, простота, доступность, отсутствие необходимости в сложном дорогостоящем оборудовании. Способ позволяет проводить скрининг лекарственных препаратов на апоптоз эритроцитов.

Способ оценки степени апоптоза эритроцитов in vitro, включающий отмывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, отличающийся тем, что к супернатанту добавляют хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, интенсивно перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, получают осадок, содержащий микрочастицы, и в нем определяют активность ацетилхолинэстеразы, по активности ацетилхолинэстеразы микрочастиц судят о степени апоптоза эритроцитов.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 14.
20.04.2014
№216.012.b9c3

Способ прогнозирования рецидива желудочно-кишечного кровотечения

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике. Определяют показатели коэффициента резерва кровообращения и коэффициента дыхательных изменений ударного объема. При значениях коэффициента резерва кровообращения выше 130% и коэффициента дыхательных изменений ударного объема выше...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002513283
Дата охранного документа: 20.04.2014
10.06.2014
№216.012.cd5d

Способ определения годности консервированной эритроцитарной массы к трансфузии

Изобретение относится к трансфузиологии, а именно к физико-химическим способам исследования биологического материала, и предназначено для определения годности и/или готовности консервированной эритроцитарной массы к переливанию. Для осуществления способа пробу консервированной крови - 2 мл...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002518344
Дата охранного документа: 10.06.2014
20.06.2014
№216.012.d2c8

Способ покрытия предметных стекол для микроскопии

Изобретение относится к области биологии и медицины, а именно к лабораторным методам исследования эритроцитов. Сущность способа: предметное стекло покрывают адгезивным веществом, в качестве которого используют хлористый лантан, при этом стекла помещают в сосуд с 0.03% раствором хлористого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519731
Дата охранного документа: 20.06.2014
20.02.2015
№216.013.2b2a

Способ определения тактики трансфузионной терапии у больных с постгеморрагическими анемиями

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией. Сущность способа оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией состоит в том, что в периферической крови определяют показатель...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542507
Дата охранного документа: 20.02.2015
10.04.2015
№216.013.38a8

Способ повышения проницаемости мембраны эритроцитов для депонирования ими лекарственных веществ

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и описывает способ повышения проницаемости мембраны клеток крови для депонирования ими лекарственных средств, включающий добавление к клеточной массе, полученной путем центрифугирования крови, лекарственных препаратов и последующее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545992
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.3ed5

Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Для оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов клетки фиксируют глутаровым альдегидом, отмывают дистиллированной водой и помещают на предметное стекло, обработанное хлористым...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547573
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.08.2015
№216.013.6a57

Способ выделения микровезикул эритроцитов

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу выделения микровезикул эритроцитов. Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающих забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, далее к полученному...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558776
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.01.2016
№216.013.9efa

Способ оценки состояния цитоскелета эритроцитов

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования изменения состояния цитоскелета эритроцитов. Для этого эритроциты отмывают от плазмы крови, помещают на водяную баню при 49,2°C и прогревают в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксируют с помощью глутарового...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002572335
Дата охранного документа: 10.01.2016
20.08.2016
№216.015.4cce

Теплогенератор

Изобретение относится к теплогенераторам кавитационного типа для разогрева жидкостей в гидросистемах различного назначения, а также может быть использовано в качестве смесителей различных жидкостей. Сущность изобретения в том, что в теплогенераторе, содержащем цилиндрический корпус, циклон в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002594394
Дата охранного документа: 20.08.2016
12.01.2017
№217.015.5d73

Способ оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови. Сущность способа оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови заключается в выделении эритроцитов из крови, их...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002590985
Дата охранного документа: 10.07.2016
Показаны записи 1-10 из 29.
20.04.2014
№216.012.b9c3

Способ прогнозирования рецидива желудочно-кишечного кровотечения

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике. Определяют показатели коэффициента резерва кровообращения и коэффициента дыхательных изменений ударного объема. При значениях коэффициента резерва кровообращения выше 130% и коэффициента дыхательных изменений ударного объема выше...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002513283
Дата охранного документа: 20.04.2014
20.06.2014
№216.012.d2c8

Способ покрытия предметных стекол для микроскопии

Изобретение относится к области биологии и медицины, а именно к лабораторным методам исследования эритроцитов. Сущность способа: предметное стекло покрывают адгезивным веществом, в качестве которого используют хлористый лантан, при этом стекла помещают в сосуд с 0.03% раствором хлористого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519731
Дата охранного документа: 20.06.2014
20.02.2015
№216.013.2b2a

Способ определения тактики трансфузионной терапии у больных с постгеморрагическими анемиями

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией. Сущность способа оценки эффективности лечения больных с постгеморрагической анемией состоит в том, что в периферической крови определяют показатель...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542507
Дата охранного документа: 20.02.2015
10.04.2015
№216.013.38a8

Способ повышения проницаемости мембраны эритроцитов для депонирования ими лекарственных веществ

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и описывает способ повышения проницаемости мембраны клеток крови для депонирования ими лекарственных средств, включающий добавление к клеточной массе, полученной путем центрифугирования крови, лекарственных препаратов и последующее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545992
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.3ed5

Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Для оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов клетки фиксируют глутаровым альдегидом, отмывают дистиллированной водой и помещают на предметное стекло, обработанное хлористым...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547573
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.08.2015
№216.013.6a57

Способ выделения микровезикул эритроцитов

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу выделения микровезикул эритроцитов. Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающих забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, далее к полученному...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558776
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.01.2016
№216.013.9efa

Способ оценки состояния цитоскелета эритроцитов

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования изменения состояния цитоскелета эритроцитов. Для этого эритроциты отмывают от плазмы крови, помещают на водяную баню при 49,2°C и прогревают в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксируют с помощью глутарового...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002572335
Дата охранного документа: 10.01.2016
20.08.2016
№216.015.4cce

Теплогенератор

Изобретение относится к теплогенераторам кавитационного типа для разогрева жидкостей в гидросистемах различного назначения, а также может быть использовано в качестве смесителей различных жидкостей. Сущность изобретения в том, что в теплогенераторе, содержащем цилиндрический корпус, циклон в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002594394
Дата охранного документа: 20.08.2016
12.01.2017
№217.015.5d73

Способ оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови. Сущность способа оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови заключается в выделении эритроцитов из крови, их...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002590985
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.914c

Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме

Изобретение относится к медицине, а именно к способу микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме. Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме заключается в заборе крови с антикоагулянтом, выделении эритроцитов, далее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605843
Дата охранного документа: 27.12.2016
+ добавить свой РИД