Результат интеллектуальной деятельности: Штамм лактобактерий Enterococcus hirae - продуцент молочной кислоты и антибиотических веществ

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, может быть использовано в пищевой промышленности.

Известен штамм Enterococcus hirae ВКПМ В-10088 (патент №2476591 от 27.02.2013 г.), полученный на доступных питательных средах и применяемый в качестве бактериальной закваски при приготовлении молочнокислых продуктов, характеризуемый высокой скоростью сквашивания молока.

Однако данный штамм обладает более низкой антагонистической активностью, по сравнению с предлагаемым штаммом.

Техническое решение - выделение высокопродуктивного нового местного штамма лактобактерий путем селекции.

Технический результат - получение чистой культуры молочнокислого микроорганизма Enterococcus hirae ВКПМ В-13054, выделенный из толстого отдела кишечника подсосного теленка в РСО-Алания путем многократных перевивок на питательных средах.

Идентификацию штамма проводили по методике Банниковой Л.А. и методом ПЦР-диагностики.

Этапы и результаты генетических исследований.

а) Секвенирование участков последовательности, кодирующей ген 16S рРНК.

б) Анализ последовательностей гена, кодирующего 16S рРНК.

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК и анализа филогенетического родства, построенного с использованием типовых штаммов близкородственных бактерий тестируемый штамм наиболее близок к виду Enterococcus hirae (99%) и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ГосНИИГенетика под номером ВКПМ В-13054.

Свойства штамма Enterococcus hirae ВКПМ В-13054:

- диплококки, короткими цепочками;

- образуют мелкие колонии на MRS-агаре.

- скорость сквашивания молока 6 часов.

- предел кислотообразования - 97°Т.

- продукты, синтезируемые штаммом - молочная кислота и антибиотические вещества.

- диаметр зоны подавления роста Staphylococcus aureus - 26 мм;

- диаметр зоны подавления роста Escherichia coli - 28 мм.

Определение антибиотической активности штамма Enterococcus hirae ВКПМ В-13054 проводили на плотной питательной среде (МПА) методом диффузии в агар.

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; хранение при температуре 4-6°С; питательные среды: MRS; Rogosa et.al.; молоко с мелом; молоко с дрожжевым автолизатом, глюкозой, лакмусом, печеночным экстрактом и СаСО₃.

Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°С - среды: MRS; обезжиренное молоко, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.

Оптимальные условия и состав среды для ферментации - температура 37°С; среды: MRS, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара; молоко коровье.

Предлагаемый новый штамм Enterococcus hirae ВКПМ В-13054, выделенный из толстого отдела кишечника подсосного теленка в РСО-Алания, хорошо приспособлен к местным условиям. Неприхотлив в культивировании и хранении, обладает низкой предельной кислотностью и высокой скоростью свертывания молока, что позволяет повысить экономическую эффективность при производстве (за счет ускорения производственного процесса и увеличения срока годности готовой продукции).

Штамм проявляет высокую антагонистическую способность по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.

Предлагаемый новый штамм лактобактерий Enterococcus hirae ВКПМ В-13054 обладает высокой биологической активностью и является основой для получения кисломолочных напитков.