ИНГИБИТОРЫ ТЕЛОМЕРАЗЫ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

Область техники

Изобретение относится к области органической и медицинской химии, молекулярной биологии и касается способа получения нового класса соединений, ингибирующих теломеразу, которые могут быть использованы для изучения теломераз и каталитических субъединиц теломераз, обратных транскриптаз, для изучения и лечения опухолевых и вирусных заболеваний.

Уровень техники

Теломераза - это фермент, необходимый для компенсации укорочения длины теломер в клетках эукариот. Теломеры состоят из характерных тандемных повторов (например TTAGGG у человека), найденных на концах большинства эукариотических хромосом (Blackburn, "Structure and Function of Telomeres,"Nature, 350: 569-573, 1991). Количество повторов определяет длину теломер. Пролиферативный потенциал клетки связывают с длиной теломер, так как стабильность и целостность эукариотических хромосом зависят от динамической структурной организации теломер (Baird DM. "Mechanisms of telomeric instability", Cytogenet Genome Res. 2008; 122(3-4): 308-14, 2009), при их укорочении меньше критической длины стабильность нарушается, затем клетка гибнет. Теломеры играют важную роль в контроле разделения хромосом и вовлечены в регулирование клеточного цикла. С каждым клеточным делением у соматической клетки теряются приблизительно 60-100 оснований с концов хромосом. Теломеры сокращаются, клетка, в конечном счете, достигает кризиса, и в клетке запускается апоптоз. В организме существуют клетки с неограниченным потенциалом деления. Именно в них (в половых, стволовых клетках, а так же в клетках опухоли) существует процесс компенсации укорочения теломер. За этот процесс отвечает фермент-теломераза. Теломераза активна в таких клетках и поддерживает длину теломер выше кризисного уровня. Теломераза - это специализированная обратная транскриптаза (для человека hTERT), работающая в комплексе с собственной рибонуклеиновой кислотой (РНК). Эта РНК называется теломеразной (для человека hTERC) и содержит участок для синтеза теломерных повторов ДНК (матричный участок). Другими словами, для приобретения способности к неограниченному делению клетка должна активировать механизм, поддерживающий длину теломер выше критического уровня, а именно теломеразу. Так, существенный уровень теломеразной активности был обнаружен в более чем 85% опухолей (Kim et al., "Specific Association of Human Telomerase Activity with Immortal Cells and Cancer," Science, 266: 2011-2015, 1994). Теломеразная активность также присутствует в стволовых сумках нормальных тканей, но на более низком уровне (Morin, "Is Telomerase a Universal Cancer Target?", J. Natl. Cancer Inst, 87: 859-861, 1995). Таким образом, присутствие активной теломеразы в опухоли обеспечивает наличие мишени, дающей потенциально хорошую селективность к опухолевым клеткам по отношению к здоровой ткани. Ингибирование теломеразы было предложено в качестве нового подхода к терапии рака (первые работы Morin, "Is Telomerase a Universal Cancer Target?", J. Natl. Cancer Inst., 87: 859-861, 1995; Parkinson, "Do Telomerase Antagonists Represent a Novel Anti-Cancer Strategy?" Brit. J. Cancer, 73: 1-4, 1996; Raymond et al., "Agents that target telomerase and telomeres," Curr Opinion Biotech., 7: 583-591, 1996, более современное состояние в обзоре Shay JW, Wright WE. Telomerase therapeutics for cancer: challenges and new directions. Nat Rev Drug Discov. 5(7): 577-84, 2006).

Третичная структура белка каталитической субъединицы теломеразы человека остается на настоящий момент неразрешенной, но на основе анализа первичной структуры показано, что этот белок сходен с другими обратными транскриптазами (Lingner et al., "Reverse Transcriptase Motifs in the Catalytic Subunit of Telomerase," Sci., 276: 561-567, 1997), поэтому ее активность подавляется при использовании ингибиторов обратных транскриптаз, например: AZT (Strahl and Blackburn, "Effects of Reverse Transcriptase Inhibitors on Telomere Length and Telomerase Activity in Two Immortalized Human Cell Lines, "Mol. Cell. Biol., 16; 53-65, 1996) и других нуклеозидов (Fletcher et al., "Human Telomerase Inhibition by 7-Deaza 2'-deoxypurine Nucleoside Triphosphates," Biochem, 35: 15611-15617, 1996). Также была показана возможность ингибирования любой теломеразной активности при использовании антисмысловой последовательности к матричному участку теломеразной РНК, например нуклеиновых кислот, слитых с пептидом (Norton et al., "Inhibition of Human Telomerase Activity by Peptide Nucleic Acids," Nature Biotechnol., 14: 615-619, 1996) и фосфотиоатных олигонуклеотидов (Mata et al., "A Hexameric Phosphorothioate Oligonucleotide Telomerase Inhibitor Arrests Growth of Burkitt's Lymphoma Cells in Vitro and in Vivo, "Toxicol Appl. Pharmacol., 144: 189-197, 1997). Антисмысловый дезоксирибонуклеотид, содержащий 185 нуклеотидов hTERC, был в состоянии сократить теломеры в клетках HeLa за 23-26 клеточных делений до критического уровня и вызвал апоптоз. Другой дезоксирибонуклеотид, содержащий 2'-5'-аденилат (2-5А) с тем, чтобы не только связать, но и расщепить hTERC, вызвал апоптоз в глиоме, раке простаты, раке шейки матки, мочевого пузыря и яичников в течение 4-5 дней. Чтобы увеличить сродство к hTERC-последовательности и стабильность олигонуклеотида были использованы 2'-O-метил-РНК-олигонуклеотиды. Самым эффективным оказался олигонуклеотид GRN163 (Asai et al. A novel telomerase template antagonist (GRN163) as a potential anticancer agent. Cancer Research, 63: 3931-3939, 2003). Клетки, культивируемые с этим соединением, гибли в течение 100 дней, GRN163 ингибировал теломеразную активность при очень низких, по сравнению с другими олигонуклеотидами, концентрациях, GRN163L является первым ингибитором теломеразы, который вошел в клиническую практику. Доклинические исследования показали безопасность и эффективность такого ингибирования. Безопасность и определение дозы для пациентов, невосприимчивых к другой терапии, находятся в стадии изучения. Эти исследования не закончены (США, ClinicalTrials.gov, NCT00310895), однако уже показанная эффективность GRN163L -однозначное подтверждение того, что ингибирование теломеразы - это основа антираковой терапии.

Из WO 99/01560 от 14.01.1999 (RU 2000102361, дата приоритета 01.07.1998) также известны ингибиторы теломеразной активности олигонуклеотидной природы.

Известны примеры использования координационных соединений железа (III), цинка (II), никеля (II), марганца (III) и платины (II) (Monchaud et al., "A hitchhiker's guide to G-quadruplex ligands", Org. Biomol. Chem., 6, 627, 2008). Большинство координационных соединений содержит производные порфирина или конденсированные пиридиновые системы. Ингибирование теломеразы наблюдается при значениях IC₅₀-TRAP (IC₅₀ - концентрация ингибитора, при которой активность фермента подавляется на 50%) от 0,12 до 30 мкМ.

Наиболее близким аналогом изобретения является ингибитор теломеразы, который представляет собой координационное соединение меди (II), содержащее лиганд на основе производного порфирина [S.Е.Evans, M.A.Mendez, К.В.Turner, L.R.Keating, R.Т.Grimes, S.Melchoir and V.A.Szalai, J. Biol. Inorg. Chem., 2007, 12(8), 1235-1249]. Это соединение селективно взаимодействует с квадруплексом ДНК, значение IC₅₀-ТRАР в экспериментах по ингибированию теломеразы составляет 26 мкМ. К недостаткам этого ингибитора теломеразы следует отнести сложность синтеза органического лиганда и координационного соединения, а также низкое значение IC₅₀.

Указанные недостатки известных ингибиторов теломеразы могут быть преодолены при использовании координационных соединений производных имидазол-4-она, более подробно описанных далее со ссылками на прилагаемые иллюстративные материалы.

Описание иллюстративных материалов

Фиг.1. Структурные формулы заместителей А в заявленных производных имидазол-4-она.

Фиг.2. Структурные формулы заместителей В в заявленных производных имидазол-4-она.

Фиг.3. Структурные формулы заместителей С в заявленных производных имидазол-4-она.

Фиг.4. Метод амплификации теломерных повторов (TRAP-анализ).

Фиг.5. Тестирование теломеразной активности для различных концентраций комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с хлоридом меди.

Раскрытие изобретения

В качестве ингибиторов теломеразы согласно изобретению могут быть использованы координационные соединения производных имидазол-4-она общей формулы

где заместитель А выбран из группы, включающей арильные заместители, конденсированные арильные заместители, циклопентил, циклогексил, алифатические заместители, алифатические заместители с двойной связью, алифатические заместители с тройной связью, метиламиновый заместитель CH₃NH-, карбэтокси-группу C₂H₅O(O)C-, пятичленные гетероциклические заместители с одним атомом азота, пятичленные гетероциклические заместители с двумя атомами азота, шестичленные гетероциклические заместители, заместитель В отсутствует или является алифатическим заместителем, заместитель С представляет собой гетероарильный заместитель, присоединяемый к производному имидазол-4-она через атом углерода и выбран из группы, включающей 5-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 6-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 8-, 9- и 10-членные ненасыщенные бициклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, X представляет собой хлорид Cl или нитрат NO₃.

В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным арильным заместителем, при этом заместители R в арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.

В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным конденсированным арильным заместителем, при этом заместители R в конденсированной арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.

В предпочтительном варианте выполнения заместитель А выбран из группы, включающей фенил С₆Н₅-, 3-хлор-4-фторфенил 3-Cl-4-F-С₆Н₃-, 4-карбэтоксифенил 4-C₂H₅O(O)СС₆Н₄-, метил СН₃-, аллил СН₂=СНСН₂-, 2-антрил, пропил С₃Н₇- (фиг.1).

В предпочтительном варианте выполнения заместитель В выбран из группы, включающей 1,2-этандиил -(СН₂)₂-, 1,3-пропандиил -(CH₂)₃-, 1,4-бутандиил -(СН₂)₄-, 1,6-гександиил -(СН₂)₆-, 1,10-декандиил -(СН₂)₁₀- (фиг.2).

В предпочтительном варианте выполнения заместитель С выбран из группы, включающей 2-хинолил, 2-пиридил, 1-метил-2-имидазолил, 4-метил-5-имидазолил, 5-имидазолил, 2-имидазолил, 1,5-диметил-3-пиразолинил, 1,5-дифенил-3-пиразолинил (фиг.3).

В способе получения координационных соединений производных имидазол-4-она согласно изобретению осуществляют следующие стадии: смешивают раствор производного имидазол-4-она в дихлорметане с метанолом, медленно приливают к смеси раствор соли меди в метаноле или ацетонитриле, реакционную смесь выдерживают до выпадения осадка координационного соединения производного имидазол-4-она.

В качестве соли меди могут быть использованы хлорид меди и нитрат меди.

В качестве производных имидазол-4-она могут быть использованы соединения общей формулы

где заместитель А выбран из группы, включающей арильные заместители, конденсированные арильные заместители, циклопентил, циклогексил, алифатические заместители, алифатические заместители с двойной связью, алифатические заместители с тройной связью, метиламиновый заместитель CH₃NH-, карбэтокси-группу C₂H₅O(O)С-, пятичленные гетероциклические заместители с одним атомом азота, пятичленные гетероциклические заместители с двумя атомами азота, шестичленные гетероциклические заместители, заместитель В отсутствует или является алифатическим заместителем, заместитель С представляет собой гетероарильный заместитель, присоединяемый к производному имидазол-4-она через атом углерода и выбран из группы, включающей 5-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 6-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 8-, 9- и 10-членные ненасыщенные бициклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S.

В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным арильным заместителем, при этом заместители R в арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.

В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным конденсированным арильным заместителем, при этом заместители R в конденсированной арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.

В предпочтительном варианте выполнения заместитель А выбран из группы, включающей фенил С₆Н₅-, 3-хлор-4-фторфенил 3-Cl-4-F-С₆Н₃-, 4-карбэтоксифенил 4-C₂H₅O(O)СС₆Н₄-, метил СН₃-, аллил СН₂=СНСН₂-, 2-антрил, пропил С₃Н₇- (фиг.1).

В предпочтительном варианте выполнения заместитель В выбран из группы, включающей 1,2-этандиил -(СН₂)₂-, 1,3-пропандиил -(CH₂)₃-, 1,4-бутандиил -(CH₂)₄-, 1,6-гександиил -(СН₂)₆-, 1,10-декандиил -(СН₂)₁₀- (фиг.2).

В предпочтительном варианте выполнения заместитель С выбран из группы, включающей 2-хинолил, 2-пиридил, 1-метил-2-имидазолил, 4-метил-5-имидазолил, 5-имидазолил, 2-имидазолил, 1,5-диметил-3-пиразолинил, 1,5-дифенил-3-пиразолинил (фиг.3).

Заявленные производные имидазол-4-она могут быть получены алкилированием замещенных в 3-положении 2-тиогидантоинов α,ω-дибромалканами. Для этого к смеси производных 2-тиогидантоинов (2 эквивалента) и сухого К₂СО₃ (3 эквивалента) в диметилформамиде при температуре 0°С при перемешивании добавляют α,ω-дибромалкан (1 эквивалент). Реакционную смесь перемешивают в течение двух часов при температуре 0°С, а затем 2 часа при комнатной температуре. После этого к смеси добавляют 50 мл воды. Образовавшийся осадок отфильтровывают и промывают водой, а затем диэтиловым эфиром.

Изобретение иллюстрируется примерами альтернативных вариантов его выполнения.

Пример 1. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0025 моль) 2-тиоксо-3-метил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,21 г (0,0013 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,40 г (76%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=215°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,82 (д, 1Н, Н_α-Ру, J=7,9 Гц), 8,59 (д, 1Н, Н_β'-Ру, J=4,0 Гц), 7,71 (тд, 1Н, Н_β-Ру, J₁=7,3 Гц, J₂=2,3 Гц), 7,23 (с, 1Н, СН=), 7,13 (дд, 1Н, Н_γ-Ру, J₁=7,5 Гц, J₂=0,9 Гц), 3,41 (т, 2Н, S-CH₂, J=7,5 Гц), 3,08 (с, 3Н, N-СН₃).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Элементный анализ: C₂₂H₂₀N₆O₂S₂ вычислено С 56,88% Н 4,34% N 18,09%; найдено С 56,74% Н 4,27% N 17,82%.

Пример 2. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-пропил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,19 г (0,001 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,43 г (82%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=152°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,69 (д, J=8,0 Гц, 1Н, Н_α-Ру,), 8,65 (д, J=4,7 Гц, 1Н, Н_β'-Ру,), 7,63 (тд, J₁=7,4 Гц, J₂=2,0 Гц, 1Н, Н_β-Ру,), 7,19 (дд, J₁=7,5 Гц, J₂=0,9 Гц, 1Н, Н_γ-Ру,), 7,12 (с, 1Н, СН=), 7,12 (с, 1Н, СН=), 3,93 (с, 2Н, S-CH₂), 3,60 (т, J=7,5 Гц, 2Н, CH₂N), 1,72 (м, 2Н, CH₂), 0,96 (т, J=7,5, 3H, СН₃).

ИК-спектр (см^-1): 1705 (С=O), 1675 (C=N), 1640 (C=C).

Элементный анализ: C₂₆H₂₈N₆O₂S₂ вычислено С 59,98% Н 5,42% N 16,14%; найдено С 59,34% Н 5,17% N 15,88%.

Пример 3. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,19 г (0,001 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,46 г (92%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=187°C.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,65 (м, 2Н, Н_α-Ру+Н_β'-Ру,), 7,62 (т, J=7,5 Гц, 1Н, Н_β-Ру,), 7,19 (м, 1Н, Н_γ-Ру,), 7,14 (с, 1Н, СН=), 7,12 (с, 1Н, СН=), 5,82 (м, 1Н, СН=), 5,23 (м., 2Н, СН₂=), 4,23 (м, 2Н, CH₂N) 3,89 (с, 2Н, S-CH₂).

ИК-спектр (см^-1): 1720 (С=O), 1680 (С=N), 1640 (С=С).

Элементный анализ: C₂₆H₂₆N₆O₂S₂ вычислено С 60,44% Н 4,68% N 16,27%; найдено С 60,14% Н 4,48% N 16,03%.

Пример 4. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,1 г (0,0005 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,23 г (73%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=259°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,75 (д, 2Н, Н_α-Ру, J=7,9 Гц), 8,66 (д, 2Н, Н_β'-Ру, J=4,0 Гц), 7,81 (тд, 2Н, Н_β-Ру, J₁=7,3 Гц, J₂=2,3 Гц), 7,42 (м, 6Н, H-Ph), 7,29 (м, 4Н, H-Ph), 7,11 (тд, 2Н, Н_γ-Ру, J₁=7,5 Гц, J₂=1,0 Гц), 7,18 (с, 2Н, СН=), 3,11 (т, 4Н, S-CH₂-, J=7,5 Гц).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Элементный анализ: C₃₂H₂₄N₆S₂O₂ вычислено С% 65,31, Н% 4,08, N% 14,29; найдено С% 65,28, Н% 4,10, N% 14,11.

Пример 5. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1-нафтил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-(1-нафтил)-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,1 г (0,0005 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,19 г (68%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1-нафтил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=267°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 9,12 (д, J=8,8 Гц, 1Н, HetAr), 8,30 (д, J=8,7 Гц, 1Н, HetAr), 8,20 (д, J=8,3 Гц, 1Н, HetAr), 8,15 (д, J=8,3 Гц, 1Н, Ar), 7,95 (м, 1Н, Ar), 7,78 (д, J=8,1 Гц, 1Н, HetAr), 7,69 (т, J=7,1 Гц, 1Н, HetAr), 7,61 (м, 1Н, Ar), 7,53 (м, 6Н, HetAr+СН=+Ar), 6,91 (с, 2Н, СН=), 3,76 (с, 4Н, CH₂-S).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Пример 6. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-антрил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,4 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-(2-антрил)-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,1 г (0,0005 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,21 г (81%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-антрил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=249°C.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,73 (д, J=7,9 Гц, 2Н, Ar), 8,69 (д, J=5,1 Гц, 1Н, Н_α'-Ру), 8,45 (м, 4Н, Ar), 8,13 (д, J=8,8 Гц, 2Н, Н_β-Ру), 8,01 (м, 3Н, Ar), 7,76 (т, J=7,6 Гц, 1Н, Н_β'-Ру), 7,51 (м, 4Н, Ar), 7,47 (дд, J₁=6,8 Гц, J₂=1,4 Гц, 2Н, Н_γ-Ру)), 7,25 (м, 2Н, Ar), 6,94 (с, 2Н, СН=), 3,83 (с, 4Н, CH₂-S).

ИК-спектр (см^-1): 1730 (С=O), 1680 (C=N), 1620 (C=C).

Элементный анализ: C₄₈H₃₂N₆O₂S₂ вычислено С 73,08% Н 4,09% N 10,65%; найдено С 73,35% Н 4,82% N 10,13%.

Пример 7. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,22 г (0,001 моль) 1,4-дибромбутана получено 0,40 г (76%) (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=198°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,72 (д, J=8,1 Гц, 2Н, Н_α'-Ру), 8,65 (д, J=3,8 Гц, 2Н, Н_β-Ру), 7,63 (тд, J₁=8,3 Гц, J₂=4,6 Гц, 2Н, Н_γ-Ру), 7,05 (дд, J₁=4,7 Гц, J₂=1,2 Гц, 2Н, Н_β'-Ру,), 7,12 (с, 2Н, СН=), 5,80 (м, 2Н, =СН-) 5,25 (м, 4Н, СН₂=), 4,22 (д, J=7,1 Гц, 4Н, -CH₂-N), 3,45 (т, J=6,7 Гц, 4Н, -CH₂-S), 2,07 (м, 4Н, -СН₂-).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Элементный анализ: C₂₈H₂₈N₆O₂S₂ вычислено С 61,74% Н 5,18% N 15,43%; найдено С 61,74% Н 5,18% N 15,43%.

Пример 8. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она

Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,12 г (0,0005 моль) 1,4-дибромбутана получено 0,18 г (78%) (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=249°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,75 (д, J=7,9 Гц, 2Н, Н_α-Ру), 8,66 (д, J=4,0 Гц, 1Н, Н_β'-Ру), 7,81 (тд, J₁=7,3 Гц, J₂=2,3 Гц, 2Н, Н_β-Ру), 7,42 (м, 6Н, H-Ph), 7,29 (м, 4Н, H-Ph), 7,11 (тд, J₁=7,5 Гц, J₂=1,0 Гц, 2Н, Н_γ-Ру), 7,18 (с, 2Н, СН=), 3,11 (т, J=7,5 Гц, 4Н, S-CH₂-), 1,86 (кв, J=7,6 Гц, 4Н, -СН₂-).

ИК-спектр (см^-1): 1720 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Элементный анализ: C₃₄H₂₈N₆O₂S₂ вычислено С 66,21% Н 4,58% N 13,63%; найдено С 66,12% Н 4,76% N 13,20%.

Пример 9. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,22 г (0,001 моль) 1,6-дибромгексана получено 0,40 г (81%) (5Z,5'Z)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=171°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,75 (д, J=8,2 Гц, 2Н, Н_α'-Ру), 8,67 (д, J=4,1 Гц, 2Н, Н_β-Ру), 7,68 (т, J=7,8 Гц, 21Н, Н_γ-Ру), 7,16 (м, 2Н, Н_β'-Ру), 7,13 (с, 2Н, СН=), 5,83 (м, 2Н, -СН=), 5,25 (м, 4Н, СН₂=), 4,15 (д, J=5,9, 4Н, -CH₂-N), 3,38 (т, J=7,0 Гц, 4Н, CH₂-S), 1,91 (м, 4Н, -СН₂-), 1,60 (м, 4Н, -СН₂-).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Элементный анализ: C₃₀H₃₂N₆O₂S₂ вычислено С 62,91% Н 5,63% N 14,67%; найдено С 62,91% Н 5,63% N 14,67%.

Пример 10. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,13 г (0,0005 моль) 1,6-дибромгексана получают 0,19 г (64%) (5Z,5'Z)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=240°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,77 (д, J=7,9 Гц, 2Н, Н_α-Ру,), 8,66 (д, J=3,9 Гц, 1Н, Н_β'-Ру), 7,75 (тд, J₁=7,3 Гц, J₂=2,3 Гц, 2Н, Н_β-Ру), 7,45 (м, 6Н, H-Ph), 7,30 (м, 4Н, H-Ph), 7,17 (с, 2Н, СН=), 7,13 (дд, J₁=7,5 Гц, J₂=0,9 Гц, 2Н, Н_γ-Ру), 3,32 (т-, J=7,5 Гц, 4Н, S-CH₂), 1,86 (м, 4Н, -СН₂-), 1,54 (м, 4Н, -СН₂-).

ИК-спектр (см^-1): 1700 (C=O), 1670 (C=N), 1630 (C=C).

Элементный анализ: C₃₆H₃₂N₆S₂O₂ вычислено С% 67,06, Н% 5,00, N% 13,03; найдено С% 66,71, Н% 5,04, N% 12,65.

Пример 11. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0015 моль) 2-тиоксо-3-пропил-5((Z)-2-хинолилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,15 г (0,0008 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,75 г (81%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=140°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,82 (д, J=9,1 Гц, 2Н, HetAr), 8,05 (м, 4Н, HetAr), 7,72 (м, 4Н, HetAr), 7,53 (м, 2Н, HetAr), 7,29 (с, 2Н, СН=), 4,00 (с, 4Н, -СН₂-S), 3,64 (т, J=7,4 Гц, 4Н, CH₂-N), 1,75 (м, 4Н, СН₂), 1,01 (т, J=7,3, СН₃-).

ИК-спектр (см^-1): 1715 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Пример 12. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0015 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5((Z)-2-хинолилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,15 г (0,0008 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,70 г (78%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=180°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,82 (д, J=9,0 Гц, 2Н, HetAr), 8,05 (м, 4Н, HetAr), 7,73 (м, 4Н, HetAr), 7,57 (м, 2Н, HetAr), 7,32 (с, 2Н, СН=), 5,88 (м, 2Н, СН=), 5,30 (м, 4Н, СН₂=), 4,30 (д, J=5,6 Гц, 4Н, -CH₂-N), 3,97 (с, 4Н, CH₂-S).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C=N), 1640 (C=C).

Пример 13. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0015 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((Z)-2-хинолилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,14 г (0,0007 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,41 г (81%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Т_пл=239°С.

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 8,84 (д, J=8,6 Гц, 2Н, HetAr), 8,05 (д, J=8,8 Гц, 2Н, HetAr), 7,97 (д, J=8,3 Гц, 2Н, HetAr), 7,73 (м, 4Н, HetAr), 7,45 (м, 14Н, Ar+СН=+HetAr), 3,93 (с, 4Н, -CH₂-S).

ИК-спектр (см^-1): 1710 (С=O), 1670 (C-N), 1640 (C=C).

Пример 14. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклопентил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0018 моль) 2-тиоксо-3-циклопентил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,17 г (0,0009 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,42 г (81%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклопентил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₃₀H₃₂N₆O₂S₂ вычислено С 62,91% Н 5,63% N 14,67%; найдено С 62,76% Н 5,57% N 14,53%.

Пример 15. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклогексил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0017 моль) 2-тиоксо-3-циклогексил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,17 г (0,0009 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,45 г (86%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклогексил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₃₂H₃₆N₆O₂S₂ вычислено С 63,97% Н 6,04% N 13,99%; найдено С 63,78% Н 5,97% N 13,81%.

Пример 16. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(бут-2-инил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0019 моль) 2-тиоксо-3-(бут-2-инил)-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,18 г (0,0010 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,36 г (69%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(бут-2-инил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₈H₂₄N₆O₂S₂ вычислено С 62,20% Н 4,47% N 15,54%; найдено С 62,07% Н 4,43% N 15,40%.

Пример 17. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метиламино-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0021 моль) 2-тиоксо-3-метиламино-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,20 г (0,0011 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,38 г (72%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метиламино-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₂H₂₂N₈O₂S₂ вычислено С 53,42% Н 4,48% N 22,66%; найдено С 53,25% Н 4,42% N 22,50%.

Пример 18. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-карбэтокси-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0018 моль) 2-тиоксо-3-карбэтокси-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,17 г (0,0009 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,41 г (78%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-карбэтокси-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₆H₂₄N₆O₆S₂ вычислено С 53,78% Н 4,17% N 14,47%; найдено С 53,62% Н 4,11% N 14,32%.

Пример 19. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-оксопирролидин-3-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0017 моль) 2-тиоксо-3-(2-оксопирролидин-3-ил)-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,16 г (0,0009 моль) 1,2-дибром-этана получено 0,38 г (73%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-оксопирролидин-3-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₈H₂₆N₈O₄S₂ вычислено С 55,80% Н 4,35% N 18,59%; найдено С 55,68% Н 4,31% N 18,46%.

Пример 20. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0018 моль) 2-тиоксо-3-(1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,16 г (0,0009 моль) 1,2-дибром-этана получено 0,39 г (75%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₈H₂₄N₁₀O₂S₂ вычислено С 56,36% Н 4,05% N 23,47%; найдено С 56,19% Н 4,00% N 23,33%.

Пример 21. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-пиридил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0018 моль) 2-тиоксо-3-(2-пиридил)-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,17 г (0,0009 моль) 1,2-дибром-этана получено 0,38 г (73%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-пиридил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₃₀H₂₂N₈O₂S₂ вычислено С 61,00% Н 3,75% N 18,97%; найдено С 60,86% Н 3,69% N 18,79%.

Пример 22. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-дисульфанилбис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

К 0,5 г (0,0023 моль) 2-тиоксо-3-метил-5((Z)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она при температуре 0°С при перемешивании добавили 5 мл 30%-ного раствора пероксида водорода. Реакционную смесь перемешивали в течение двух часов при температуре 0°С, после этого к смеси добавили 50 мл воды. Образовавшийся осадок отфильтровали и промыли водой, а затем диэтиловым эфиром. Получено 0,34 г (68%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-пиридил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₀H₁₆N₆O₂S₂ вычислено С 55,03% Н 3,69% N 19,25%; найдено С 54,84% Н 3,61% N 19,07%.

Пример 23. Синтез (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(1-метил-1Н-имидазол-2-илметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)

Из 0,5 г (0,0022 моль) 2-тиоксо-3-метил-5((Z)-1-метил-1Н-имидазол-2-илметилен)-тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,21 г (0,0011 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,41 г (77%) (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(1-метил-1Н-имидазол-2-илметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она).

Элементный анализ: C₂₀H₂₂N₈O₂S₂ вычислено С 51,05% Н 4,71% N 23,81%; найдено С 50,91% Н 4,65% N 23,68%.

Пример 24. Получение координационных соединений производных имидазол-4-она

К раствору 0,0001 моль алкилированных производных 2-тиогидантоина (производных имидазол-4-она) в 2-3 мл хлористого метилена добавляют 2 мл метанола для достижения расслоения. Затем медленно, по каплям, в течение не менее чем 2 минут приливают раствор 0,0002 моль соли меди в 2-3 мл метанола. Реакционную смесь плотно закрывают и оставляют до выпадения осадка.

В случае получения комплексов (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с нитратом меди в качестве растворителя соли используют ацетонитрил, при этом реакционную смесь закрывают от света и оставляют до выпадения осадка.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (54%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₂H₂₀N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl С 37,86% Н 2,89% N 12,04%; найдено С 37,04% Н 2,57% N 12,22%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (45%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₆H₂₈N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 41,41% Н 3,74% N 11,14%; найдено С 41,63% Н 3,87% N 11,86%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (40%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₆H₂₄N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 41,63% Н 3,23% N 11,15%; найдено С 41,36% Н 3,23% N 11,85%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (55%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₃₂H₂₄N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 46,75% Н 2,94% N 10,22%; найдено С 46,67% Н 2,14% N 10,77%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (59%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₈H₂₈N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 43,22% Н 3,63% N 10,80%; найдено С 43,45% Н 3,33% N 10,30%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (49%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₃₄H₂₈N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 48,03% Н 3,32% N 9,88%; найдено С 48,49% Н 2,60% N 9,10%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклопентил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклопентил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (43%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₃₀H₃₂N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 44,69% Н 4,00% N 10,42%; найдено С 44,46% Н 3,88% N 10,16%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклогексил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклогексил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (58%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₃₂H₃₆N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 46,07% Н 4,35% N 10,07%; найдено С 45,89% Н 4,27% N 9,93%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(бут-2-инил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(бут-2-инил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (56%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₈H₂₄N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 43,44% Н 3,12% N 10,86%; найдено С 43,23% Н 3,01% N 10,62%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метиламино-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метиламино-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (54%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₂H₂₂N₈O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 36,29% Н 3,05% N 15,39%; найдено С 36,12% Н 2,96% N 15,20%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-карбэтокси-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-карбэтокси-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (57%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₆H₂₄N₆O₆S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 38,36% Н 2,97% N 10,32%; найдено С 38,23% Н 2,92% N 10,19%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-оксопирролидин-3-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-оксопирролидин-3-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (58%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₈H₂₆N₈O₄S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 40,22% Н 3,13% N 13,40%; найдено С 40,04% Н 3,02% N 13,23%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметипен)-3-(1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (43%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₈H₂₄N₁₀O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 40,51% Н 2,91% N 16,87%; найдено С 40,29% Н 2,81% N 16,68%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-пиридил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-пиридил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (57%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₃₀H₂₂N₈O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 43,72% Н 2,69% N 13,60%; найдено С 43,56% Н 2,62% N 13,46%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-дисулъфанилбис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-дисульфанилбис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,04 г (52%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₀H₁₆N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 35,85% Н 2,41% N 12,54%; найдено С 35,71% Н 2,35% N 12,39%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисулъфанилдиил)бис(5-(1-метил-1Н-имидазол-2-илметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(1-метил-1Н-имидазол-2-илметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (40%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₀H₂₂N₈O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 34,12% Н 3,15% N 15,92%; найдено С 33,94% Н 3,06% N 15,71%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl₂·2Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г CuCl₂·2Н₂О получают 0,03 г (44%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₃₄H₃₂N₆O₂S₂*CuCl₂*CuCl вычислено С 47,80% Н 3,78% N 9,84%; найдено С 47,67% Н 3,74% N 9,67%.

Получение комплекса (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с Cu(NO₃)₂·6Н₂О

Из 0,05 г (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,05 г Cu(NO₃)₂·6H₂O получают 0,05 г (38%) комплекса коричневого цвета.

Элементный анализ: C₂₂H₂₀N₆O₂S₂*Cu(NO₃)₂*CuNO₃ вычислено С 33,98% Н 2,59% N 16,21%; найдено С 33,76% Н 2,49% N 15,98%.

Для тестирования ингибирования теломеразы полученными соединениями был использован метод амплификации добавленных теломерных повторов (TRAP-анализ). TRAP-анализ является стандартным методом определения активности теломеразы, благодаря некоторым модификациям получивший возможности полуколичественного метода. Выбор метода детекции теломеразной активности определялся его широкой освещенностью в мировой литературе, практически чувствительностью, а также доступностью оборудования и реагентов.

Протокол амплификации теломерных повторов можно подразделить на 3 основных шага: удлинение праймера, амплификация получившегося продукта (продуктов) и детекция. На шаге удлинения теломерные повторы прибавляются присутствующей в клеточном экстракте теломеразой к олигонуклеотиду, узнаваемому ею как субстрат (TS). При амплификации продуктов удлинения олигонуклеотида TS теломеразой могут появляться ложные сигналы с теломер хромосом, содержащихся в клеточном экстракте. Чтобы избежать этого, 5'-конец олигонуклеотида TS имеет нетеломерную последовательность, мешающую ему связываться с теломерами, однако узнается теломеразой как субстрат. Поскольку человеческая теломераза добавляет серию повторов по шесть нуклеотидов, то в результате удлинения олигонуклеотида TS теломеразой получается набор фрагментов ДНК, различающихся по длине. Затем следует шаг увеличения количества продукта с помощью специфических праймеров методом ПЦР с нуклеотидами, содержащими радиоактивную или флуоресцентную метку для детекции. Далее осуществляется детекция (фиг.4), как правило, с помощью электрофоретического разделения и последующего сканирования.

Праймеры TS и АСХ (таблица 1) были использованы в TRAP-анализе, АСХ имеет на 5'-конце нетеломерный довесок из 6 нуклеотидов, за счет этого не образует димеров с теломеразным субстратом. При использовании этих праймеров количество встроенной метки пропорционально числу добавленных теломеразой повторов.

Количество ПЦР-продукта слабо зависит от того, сколько в реакции было исходной матрицы, поэтому нельзя оценить количество теломеразного продукта по интенсивности его сигнала на фотографии. При введении в ПЦР набора теломеразных продуктов они все амплифицируются. Поэтому мы можем использовать количество добавленных теломеразой повторов как критерий ее активности.

Первым этапом было культивирование раковых клеточных линий человека для выделения активных экстрактов, необходимых для проверки. Для этого перевиваемые клетки карциномы шейки матки человека линий SiHa, C33A, CaSki и HeLa выращивали на стандартной среде DMEM, содержащей 10% эмбриональной сыворотки (FCS), 4 мМ L-глутамина, 1 мМ пирувата натрия, стрептомицин/пенициллин в концентрации 100 мкг/мл и 100 ед/мл, соответственно, при температуре 37°С в атмосфере 5% CO₂. Для пересева клеток клеточный монослой промывали PBS (10 мМ Na₂HPO₄, 2 мМ KH₂PO₄, 137 мМ NaCl, 2 мМ KCl), добавляли стандартный раствор трипсин:EDTA (Sigma) и помещали в CO₂-инкубатор на 3-5 минут, добавляли среду с FCS и суспендировали пипетированием, клетки рассевали в необходимое количество культуральных флаконов. После образования монослоя клетки линий смывали с подложки раствором трипсина и осаждали центрифугированием (10 мин., 2000 g). Дважды промывали буфером PBS. Ресуспендировали в лизирующем буфере (10 мМ Tris-HCl или 10 мМ HEPES-KOH, рН 7,5, 1,0 мМ MgCl₂, 1 мМ EGTA, 5 мM β-меркаптоэтанола, 5% глицерина, 0,5% CHAPS, 0,1 мМ PMSF), 1 мл на 0,3-10 млн. клеток, в зависимости от необходимой концентрации. Инкубировали 30 минут во льду. Центрифугировали 10 минут при 4°С на 15000 об/мин и отбирали надосадочный раствор. Экстракт делили на аликвоты по 10 мкл и замораживали в жидком азоте. После этого проводили анализ теломеразной активности методом TRAP-теста. На первом шаге готовили смесь N1: 49 мкл смеси TRAP, содержащей 1х TRAP-буфер (1х TRAP-буфер: 20 мМ HEPES-KOH рН 8,3, 1,5 мМ MgCl₂, 63 мМ KCl, 1 мМ EGTA, 0,1 мг/мл BSA, 0,005% v/v Tween-20), 20 мкМ dNTP, 1,6 мкМ олигонуклеотида TS, 1 мкл раствора тестируемого препарата в ДМСО и экстракт клеток клеточных линий или тканей. Реакционную смесь инкубировали 30 минут при 30°С. На втором шаге к смеси добавляли 2 ед. Taq -ДНК-полимеразы ("Хеликон"), 0,1 мкг олигонуклеотида АСХ и проводили ПЦР по следующей схеме: 35 с 94°С, 35 с 50°С 90 с 72°С (30 циклов, амплификатор Mastercycler ("Eppendorf", Германия)). 15 мкл раствора и 2,5 мкл буфера для нанесения 6xDNA loading dye ("Fermentas", 10 мМ Tris-HCl, рН 7,6, 0,03% бромфенолового голубого, 0,03% ксиленоцианола, 60% глицерина, 60 мМ ЭДТА) наносили на полиакриламидный 20% гель (акриламид: BIS-акриламид 1:19 10%, TBElx, TEMED 0,1%, персульфат аммония 0,1%). В качестве электродного буфера использовали ТВЕ 1х (0,1 М Tris, 0,1 M Н₃ВО₃, 2 мМ Na₂ЭДTA). Проводили электрофорез пока ксиленцианол не пройдет 10-20 см. Гель окрашивали раствором SYBR Green (10000 × концентрат в ДМСО фирмы Sigma-Aldrich, разведенный в 10000 раз 0,1М буфером Tris-HCl с рН 8,5). Окраску детектировали с помощью сканирования флуоресценции в геле.

В качестве контроля действия препарата именно на РНК-зависимую ДНК-полимеразу (обратную транскриптазу) теломеразы, а не на ДНК-полимеразу, которая используется в данном анализе на втором шаге для амплификации сигнала 1 мкл раствора препарата приливали не к смеси для работы теломеразы, а вместе с олигонуклеотидом АСХ перед ПЦР на втором шаге. Такая контрольная реакция проводилась одновременно с тестом для каждого проверяемого соединения.

Для определения IC₅₀ (концентрация вещества при которой происходит ингибирование теломеразной активности на 50%) проводили реакции для различных концентраций препаратов. Значение IC₅₀ приведено в таблице 2.

Для более точного определения IC₅₀ проводилось отдельное повторное измерение ингибирования веществами с использованием дополнительных разведений. Пример такого анализа для препарата с наибольшей ингибирующей активностью представлен на фиг.5. Экспериментальное изображение анализировали с помощью программы Image Qvant, сравнивая интенсивность полос, соответствующих одинаковому удлинению теломер-подобного субстрата TS теломеразой, в дорожках Т и П для каждой концентрации препарата.

Таблица 2. Тестирование теломеразной активности методом TRAP для серии препаратов Номер Соединение Ингибирование теломеразы, IC50 1 7 мкМ* Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О

2 14 мкМ* Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(декан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 3 2 мкМ Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 4 4 мкМ Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О

5 4 мкМ Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 6 20 мкМ Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 7 20 мкМ Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 8 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 4 мкМ 9 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклопентил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 10 мкМ* 10 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-циклогексил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 9 мкМ* 11 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(бут-2-инил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 3 мкМ 12 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метиламино-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 2 мкМ 13 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-карбэтокси-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 4 мкМ 14 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-оксопирролидин-3-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 3 мкМ 15 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 4 мкМ 16 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2-пиридил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 4 мкМ 17 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-дисульфанилбис(5-(2-пиридил-метилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 2 мкМ 18 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(1-метил-1Н-имидазол-2-илметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с CuCl2·2Н2О 2 мкМ 19 Комплекс (5Z,5'Z)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с Cu(NO3)2·6H2O 4 мкМ *Для данных препаратов данное значение соответствует ингибирующему эффекту 15% для насыщенного раствора (IC50 неизмеримо в силу низкой растворимости исходных препаратов).