ПРОИЗВОДНЫЕ ХИНОЛИНА

Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к новым производным хинолина, способам их получения, к содержащим их композициям, а также к способам и применению этих производных для клинического лечения заболеваний, возникающих вследствие аутоиммунных реакций, таких как рассеянный склероз, инсулинзависимый сахарный диабет, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника и псориаз, и, кроме этого, заболеваний, при которых главную роль играет патологическое воспаление, таких как астма, атеросклероз, припадки и болезнь Альцгеймера. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым производным хинолина, пригодным для лечения, например, рассеянного склероза и его симптомов.

Уровень техники.

Аутоиммунные заболевания, например рассеянный склероз (MS), инсулинзависимый сахарный диабет (IDDM), системная красная волчанка (SLE), ревматоидный артрит (RA), воспалительное заболевание кишечника (IBD) и псориаз, представляют собой разрушения, наносимые иммунной системой организма, которые могут иметь системную природу, или с другой стороны направлены на отдельные органы тела. Считается, что при таких заболеваниях иммунная система ошибается и вместо того, чтобы выполнять защитные функции, действует как агрессор ( Talal N.: Autoimmune diseases, In: Roitt I.M. and Delves P.J. (eds.) Encyclopedia of Immunology, pp. 195-198, Academic Press, 1992).

MS представляет собой наиболее часто встречающееся неврологическое заболевание молодых людей в Западной Европе и Северной Америке. Он приводит к большим потерям трудоспособности и финансов, как из-за потери дохода, так и расходов на медицинское обслуживание, чем любое другое неврологическое заболевание этой возрастной группы. В Соединенных Штатах насчитывается приблизительно 250000 случаев MS.

Хотя причина возникновения MS неизвестна, достижения в области получения изображения мозга, иммунологии и молекулярной биологии, расширили знания ученых об этом заболевании. В настоящее время для лечения MS используют несколько видов терапии, но ни один отдельный вид лечения не обеспечивает достаточной эффективности лечения. Известные в настоящее время способы лечения MS подразделяются на три категории: лечение резких обострений, регулирование прогрессирующего заболевания и лечение характерных симптомов. MS воздействует на центральную нервную систему и включает процесс демиелинизации, т. е. миелиновые оболочки разрушаются, тогда как аксоны сохраняются. Миелин создает изолирующий материал, который обеспечивает быструю передачу нервного импульса. Очевидно, что при демиелинизации это свойство утрачивается. Хотя механизмы патогенеза, ответственные за развитие MS, еще не поняты, некоторые группы признаков указывают на то, что демиелинизация имеет иммунопатологическую основу. Очаги поражения, бляшки, характеризуются инфильтрацией иммунологически активных клеток, таких как макрофаги и активированные Т-клетки (Prineas J. W.: The neuropathology of multiple sclerosis. In: Koetsier J.C. (ed. ) Handbook of Clinical Neurology, pp. 213-257. Elsevier Science Publ, Amsterdam, 1985).

В патентах US 4547511 и US 4738971, а также в ЕР 59698 заявлены некоторые производные N-арил-1,2-дигидро-4-замещенного-1-алкил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамида в качестве усилителей клеточно-опосредованного имунитета.

Соединение

известное как рохинимекс (roquinimex) (Merck Index 12^th Ed., No. 8418; Linomide^®, LS2616, N-метил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид), принадлежит к этому ряду соединений. Сообщалось, что рохинимекс обладает множественной иммуномодулирующей активностью, не сопровождающейся общей иммуносупрессией (Tarkowski A., Gunnarsson К., Nilsson L. -A. , Lindholm L. and Stalhandske Т. Successful treatment of autoimmunity in MRL/1 mice with LS2616, a new immunomodulator. Arthritis Rheum. 29(11): 1405-1409, 1986;
Larsson E.-L., Joki A.-L. and Stalhandske T. Mechanism of action of the new immunomodulator LS2616 on T-cell responses. Int J. Immunopharmacol 9(4): 425-31, 1987;
Wanders A., Larsson E., Gerdin В. and Tufveson G. Abolition of the effect of cyclosporine on rat cardiac allograft rejection by the new immunomodulator LS-2616 (Linomide). Transplantation 47(2): 216-217, 1989;
Kalland T. Regulation of natural killer progenitors: studies with a novel immunomodulator with distinct effects at the precursor level. J. Immunol. 144(11): 4472-4476, 1990;
Gonzalo J. A. , Gonzalez-Garcia A., Kalland Т., Hedlund G., Martinez C. and Kroemer G. Linomide, a novel immunomodulator that prevents death in four models of septic shock. Eur J. Immunol 23: 2372-2374, 1993;
Karussis D. M. , Lehmann D., Slavin S. et al. Treatment of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis with the syntethic immunomodulator Linomide (quinoline-3-carboxamide). Proc Nati Acad Sci USA 90: 6400-6404, 1993;
Gonzalo J. A. , Gonzalez-Garcia A., Kalland T. et al. Linomide inhibits programmed cell death of peripheral T cells in vivo. Eur J. Immunol. 24: 48-52, 1994;
Gross D. J. , Sidi H., Weiss I., Kalland Т., Rosenmann E. and Slavin S. Prevention of diabetes mellitus in non-obese diabetic mice by Linomide, a novel immunomodulating drug. Diabetologia 37:1195-1201, 1994;
Karussis D. M. , Lehmann D, Brenner T. et al. Immunomodulation of experimental autoimmune myasthenia gravis with Linomide. J. Neuroimmunol 55(2): 187-193, 1994;
Bai X. F. , Shi F.D., Zhu J., Xiao B.G., Hedlund G. and Link H. Linomide-induced suppression of experimental autoimmune neuritis is associated with down-regulated macrophage functions. J. Neuroimmunol. 76:177-184, 1997).

Кроме этого, в патенте US 5580882 заявлены производные хинолин-3-карбоксамида, применимые для лечения состояний, связанных с MS. Особенно предпочтительным соединением является рохинимекс. В патенте US 5594005 заявлены производные хинолин-3-карбоксамида, используемые для лечения диабетов типа I. Особенно предпочтительным соединением является рохинимекс. В WO 95/24195 заявлены производные хинолин-3-карбоксамида: используемые для лечения IBD. Особенно предпочтительными соединениями являются рохинимекс или его соль. В WO 95/24196 заявлены производные хинолин-3-карбоксамида, используемые для лечения псориаза. Особенно предпочтительными соединениями являются рохинимекс или его соль.

В клинических испытаниях при сравнении рохинимекса с плацебо сообщалось, что на рохинимекс возлагают надежды в отношении лечения состояний, связанных с MS (Karussis D. M, Meiner Z., Lehmann D. et al. Treatment of secondary progressive multiple sclerosis with the immunomoduiator Linomide. Neurology 47: 341-346, 1996;
Andersen O. , Lycke J., Tollesson P.O. et al. Linomide reduces the rate of active lesions in relapsing-remitting multiple sclerosis. Neurology 47: 895-900, 1996). Однако существует несколько серьезных помех, связанных с использованием рохинимекса. Например, было обнаружено, что он является тератогенным для крыс и вызывает ограничивающие дозу эффекты у человека, в частности гриппоподобный синдром, которые не позволяют полностью использовать клинический потенциал этого соединения.

Далее, в WO 92/18483 заявлены производные хинолина, замещенные в 6-положении группой R_AS(O)_n (R_A-низший алкил или арил, n=0-2), обладающие иммуномодулирующим, противовоспалительным и противоопухолевым действием.

Замещение, т. е. тип и расположение, у приведенных выше, специально упомянутых соединений выводит их за рамки настоящего изобретения.

Сущность изобретения.

Главной задачей настоящего изобретения является обеспечение получения хинолиновых соединений новой структуры с высокой активностью на экспериментальных моделях и низким уровнем побочных эффектов, которые в силу их фармакологических свойств считаются эффективными для лечения заболеваний, возникающих вследствие аутоиммунных реакций и патологического воспаления. Примерами таких заболеваний являются рассеянный склероз, инсулинзависимый сахарный диабет, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника и псориаз, а также другие заболевания, когда главную роль играет патологическое воспаление, такие как астма, атеросклероз, удар и болезнь Альцгеймера. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым производным хинолина, пригодным для лечения, например, рассеянного склероза и его симптомов.

В настоящий момент внезапно обнаружено, что новые соединения общей формулы

где R выбран из этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила и аллила;
R₄ выбран из водорода и фармацевтически приемлемых неорганических катионов, таких как натрий, калий и кальций, и органических катионов, таких как моноэтаноламин, диэтаноламин, диметиламиноэтанол, морфолин и тому подобных;
R₅ выбран из метила, этила, н-пропила, изопропила, метокси, этокси, хлора, брома, СF₃ и OCH_xF_y,
где х=0-2,
у=1-3 при условии, что
х+у=3;
R₆ представляет собой водород или
R₅ и R₆, взятые вместе, представляют собой метилендиоксигруппу;
оказались неожиданно эффективными и специфическими для лечения пациентов, страдающих от аутоиммунных и воспалительных заболеваний.

Соединения общей формулы (I) могут существовать в различных таутомерных формах, и все эти формы включены в объем настоящего изобретения.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения R₄ представляет собой водород или натрий, R₅ представляет собой этил, метокси, хлор или бром, R₅ и R₆, взятые вместе, представляют собой метилендиокси группу и R представляет собой этил или н-пропил, предпочтительно этил.

Некоторым аутоиммунным заболеваниям человека соответствуют экспериментальные модели, которые самопроизвольно возникают у определенных линий лабораторных животных или могут быть индуцированы у лабораторных животных путем их иммунизации специфическим(и) антигеном(ами) из целевого органа.

Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ), как модель аутоиммунных воспалительных заболеваний центральной нервной системы (CNS), наиболее широко используется в качестве модели такого заболевания человека, как рассеянный склероз.

Аутоиммунная реакция на коллаген типа II может быть экспериментально индуцирована у определенных линий мышей и крыс и привести к развитию полиартрита. Индуцированный коллагеном артрит имеет несколько общих черт с таким заболеванием человека, как ревматоидный артрит.

Отличительным признаком астмы человека является повышенная возбудимость дыхательных путей при действии ряда химических и физических факторов. Сейчас широко признано, что продукты, высвобождающиеся из воспалительных клеток, например активированных эозинофилов, нарушают целостность эпителия и способствуют повышенной восприимчивости бронхов. В мышиной модели индуцированного овальбумином (ОА) воспаления легких преобладает временный регулируемый приток лимфоцитов и эозинофилов в бронхиальную полость.

Было обнаружено, что рохинимекс индуцирует болевой синдром гончих (Beagle Pain Syndrome) (BPS) ( Kelly D.F., Grimsell C.S.G. and Kenyon C.J. Polyarteritis in the dog: A case report. Vet Record 92: 363-366, 1973;
Harcourt R. A. Polyarterites in a colony of beagles. Vet Record 102: 519-522, 1978) у различных пород гончих собак. Заболевание сопровождается клиническими и лабораторньми симптомами, характеризующими BPS как модель гриппоподобного синдрома, индуцируемого рохинимексом у человека.

Соединения общей формулы (I) были исследованы в отношении ингибирования ЕАЕ у мышей. Рохинимекс используют в качестве лечебного контроля и он обеспечивал 70% ингибирование при 5 мг/кг. При введении подходящего заместителя в 5-положение хинолинового кольца, например 5-хлора, были получены удивительные неожиданные результаты. По сравнению с рохинимексом активность увеличилась в 100 раз. Введение заместителей в положения 6-, 7- и 8- привело к получению менее активных соединений. В целом активность в отношении ЕАЕ, представленная как ингибирование ЕАЕ, выглядела следующим образом в порядке убывания в зависимости от расположения заместителя: 5>6>>7=8. Эффект замещения в пятое положение мог бы быть лучше объяснен с физико-химической точки зрения. Кроме этого, замена метильной группы у атома азота в составе карбоксамида на этильную группу или дальнейшее удлинение алкильной группы до пропильной или бутильной группы приводит к исчезновению тератогенного эффекта рохинимекса у крыс и значительному снижению BPS. С другой стороны, замена R-группы с алкила на водород более чем в 10⁵ раз понижает растворимость в воде при физиологических значениях рН. Замена алкильной группы также влияет на фармакокинетические свойства. Например, по сравнению с рохинимексом клиренс (С1) соединения А у собак был в 800 раз выше.

Проблемы растворимости и фармакокинетических свойств значительно снижают полезную активность этого класса соединений (R= Н). Таким образом, было внезапно обнаружено, что соединения формулы (I) как химически, так и фармакологически отличаются от тех лекарственных средств, которые до настоящего времени предлагалось использовать для лечения MS и его симптомов.

Соединения общей формулы (I) получают следующими способами:

Соединения формулы (I) можно получить известными способами, например путем взаимодействия сложноэфирного производного хинолинкарбоновой кислоты (II) с анилином (III) в подходящем растворителе, таком как толуол, ксилол и тому подобнoм. Подходящими сложными эфирами являются метиловый и этиловый эфиры.

Соединения формулы (I) также можно получить при помощи взаимодействия изатинового ангидрида (IV) с алкиловым эфиром N-алкил-N-фенилкарбамоилуксусной кислоты (V) с использованием сильного основания, например гидрида натрия, в подходящем растворителе, таком как N,N-диметилацетамид. Подходящими сложными эфирами являются метиловый и этиловый эфиры.

Соединения формулы (I) также можно получить путем взаимодействия хинолинкарбоновой кислоты формулы (VI) с анилином формулы (III). Могут быть использованы разнообразные конденсирующие реагенты, известные из уровня техники, например карбодиимиды, описанные в патенте US 4547511. В одном из подходящих способов конденсации используют тионилхлорид в присутствии триэтиламина и подходящий растворитель, такой как дихлорметан. Этот способ может быть использован в случаях, когда нельзя осуществить непосредственную конденсацию сложного эфира и анилина. Хинолинкарбоновые кислоты формулы (VI) можно получить из соответствующих сложных эфиров формулы (II) путем кислотного гидролиза, как описано ниже.

Эфиры хинолинкарбоновых кислот (II) можно получить пособами, приведенными в примерах 5-8 ниже. Хинолинкарбоновые кислоты формулы (VI) могут быть получены способом, приведенном в примере 9 ниже.

Все воплощения изобретения, как они раскрыты в формуле изобретения, включены в настоящее описание.

Следующие примеры направлены на иллюстрацию изобретения, но не ограничивают его.

Пример 1.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид (способ А).

N-Этиланилин (3,0 г, 25 ммоль) растворяют в 80 мл толуола, после чего отгоняют около 30 мл растворителя для того, чтобы получить безводный раствор. К указанному кипящему раствору добавляют этиловый эфир 1,2-дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоновой кислоты (2,7 г, 10 ммоль). Этанол, образующийся во время реакции, отгоняют вместе с некоторым количеством толуола, примерно в течение 4 часов. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры. Выпавший осадок собирают, промывают холодными толуолом и гексаном, а затем сушат, что дает названное соединение (2,8 г), выход 80%.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 1.26 (3Н, т), 3.50 (3Н, с), 3.97 (2Н, кв), 4.03 (3Н, с), 6.67 (1Н, д), 6.87 (1Н, д), 7.12-7.25 (3Н, м), 7.36-7.44 (3Н, м).

¹³С ЯМР (СDСl₃): δ 13.0 (СН₃), 29,6 (СН₃), 43.8 (СН₂), 56.8 (СН₃), 103.2 (СН), 104.2 (С), 108.3 (СН), 110.5 (С), 127.3 (2СН), 127.4 (СН), 128.5 (2СН), 131.2 (СН), 141.1 (С), 141.9 (С), 156.9 (С), 157.1 (С), 160.2 (С), 164.4 (С).

ESI MS/MS [М+Н]⁺ 353, фрагменты 232 и 122.

Следующие соединения получают по существу по аналогичной методике, используя соответствующие исходные продукты.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-1,5-диметил-4-гидрокси-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 1.21 (3Н,т), 2.83 (3Н, с), 3.23 (3Н, с), 3.98 (2Н, кв), 6.97 (1Н, д), 7.02 (1Н, д), 7.10-7.25 (5Н, м), 7.39 (1Н, т), 13.08 (1Н, с).

¹³С ЯМР (CDCl₃): δ 12.9 (СН₃), 24.4 (СН₃), 29.5 (СН₃), 45.9 (СН₂), 102.8 (С), 112.2 (СН). 114.3 (С), 125.5 (СН), 126.4 (2СН), 126.4 (СН), 128.4 (2СН), 131.7 (СН), 139.6 (С), 142.0 (С), 142.4 (С), 158.1 (С), 169.7 (С), 170.1 (С).

ESI MS/MS [М+Н]⁺ 337, фрагменты 216 и 122.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 1.20 (3Н, т), 3.28 (3Н, с), 3.97 (2Н, кв), 7.08-7.25 (7Н, м), 7.39 (1Н, т), 12.6 (1Н, с).

¹³С ЯМР (СDСl₃): δ 12.9 (СН₃), 29.8 (СН₃), 45.7 (СН₂), 105,0 (С), 112.7 (С), 113.3 (СН), 125.4 (СН), 126.7 (2СН), 126.8 (СН), 128.5 (2СН), 131.6 (СН), 132.7 (С), 142.0 (С), 142,6 (С), 157.9 (С), 165.6 (С), 168.7 (С).

ESI MS/MS [M+H]⁺ 357, фрагменты 236 и 122.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-фтор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDС1₃ + трифторуксусная кислота): δ 1.28 (3Н, т), 3.66 (3Н, с), 3.93-4.05 (2Н, м), 7.11 (1Н, кв), 7.26-7.37 (6Н, м), 7.68 (1Н, кв), 11.42 (1Н, с).

¹³С ЯМР (СDСl₃ + трифторуксусная кислота): δ 12.6 (СН₃), 31.4 (CH₃), 46.4 (CH₂), 104.4+104.5 (С), 108.7 (С), 110.4+110.5 (CH), 112.7+112,8 (CH), 126.8 (2СН), 129.7 (CH), 129.8 (2СН), 134.1+134.2 (CH), 139.9 (С), 141.0 (С), 158.0 (С), 159.3+161.3 (С), 161.4 (С), 166.8 (С) (некоторые пики являются дуплетами из-за F-сочетания).

ESI MS/MS [М+Н]⁺ 341, фрагменты 220 и 122.

N- Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-трифторметил-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDС1₃ + трифторуксусная кислота): δ 1.21 (3Н, т), 3.30 (3Н, с), 3.99 (2Н, кв), 7.10-7.25 (5Н, м), 7.42 (1Н, д), 7.60 (1Н, т), 7.67 (1Н, д), 13.05 (1Н, с).

¹³С ЯМР (СDСl₃ + трифторуксусная кислота): δ 12.5 (CH,), 31.1 (СН₃), 46.2 (CH₂), 106,4 (С), 113.0 (С), 119.5 (CH), 120+122.2+124.4 (СF₃), 123.4 (CH), 126.6 (2CH), 128.1 (CH), 128.1+128.3 (С), 129.1 (2СН), 132.1 (CH), 140.5 (С), 141.4 (С), 159.3 (С), 163.7 (С), 167.8 (С).

ESI MS/MS [M+H]⁺ 391, фрагменты 270 и 122.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-трифторметокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

N-Аллил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 3.33 (3Н, с), 4.57 (2Н, м), 5.22 (1Н, д), 5.38 (1Н, д), 6.0 (1Н, м), 7.13-7.30 (7Н, м), 7.44 (1Н, т), 12.45 (1Н, с).

N-Аллил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (CDCl₃): δ 3.52 (3Н, с), 4.04 (3Н, с), 4.52 (2Н, м), 5.20 (1Н, д), 5.37 (1Н, д), 6.02 (1Н, м), 6.67 (1Н, д), 6.88 (1Н, д), 7.10-7.23 (3Н, м), 7.38-7.45 (3Н, м), 9.82 (1Н, с).

N-Фенил-N-н-пропил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (CDCl₃): 1.0 (3Н, т), 1.65 (2Н. м), 3.48 (3Н, с), 3.9 (2Н, т), 4.01 (3Н, с), 6.65 (1Н, д), 6.83 (1H, д), 7.1-7.25 (3Н, м), 7.3-7.45 (3Н, м), 9.8 (1Н, с).

Пример 2.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид (способ В).

5-Хлоризатиновый ангидрид (5 г, 25 ммоль) растворяют в 50 мл N,N-диметилацетамида и охлаждают до 0^oС. Добавляют гидрид натрия (75%) (0,94 г, 1,1 экв. ), а затем иодистый метил (1,89 мл, 1,2 экв.) с такой скоростью, чтобы поддерживалась температура ниже 5^oС. Реакционную массу перемешивают при 20^oС в течение 5 часов, после чего избыток иодистого метила удаляют под вакуумом. Добавляют гидрид натрия (0,94 г, 1,1 экв.) вместе с этиловым эфиром N-этил-N-фенилкарбамоилуксусной кислоты (6,3 г, 1,1 экв.). Смесь нагревают при 85^oС 5 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляют последовательно 50 мл метанола и 50 мл 1М соляной кислоты, а затем 250 мл воды. Образуется эмульсия, которая кристаллизуется при стоянии в холодильнике в течение 72 часов. Кристаллическую массу собирают фильтрованием, промывают водой, водой/метанолом (1:1) и гептаном, а затем сушат, что позволяет получить названное соединение (6,12 г). Полученное соединение перекристаллизовывают из метанола, чистота >95 %.

Пример 3.

N-Этил-N-фенил-1.2-дигидро-4-гидрокси-5-бром-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид (способ С).

К охлажденному с помощью льда раствору 1,2-дигидро-4-гидрокси-5-бром-1-метил-2-оксо-хинолин-3- карбоновой кислоты (9,6 г, 0,032 моль), триэтиламина (15,5 мл, 0,11 моль) и N-этиланилина (4,2 г, 0,035 моль) в 150 мл дихлорметана добавляют по каплям в течение 0,5 часа раствор тионилхлорида (3,0 мл, 0,042 моль) в 10 мл дихлорметана. Перемешивание продолжают 24 часа при 4^oС. Растворители упаривают. Остаток растворяют в этилацетате, фильтруют через целит и экстрагируют 2 М раствором гидроксида натрия. Водную фазу промывают этилацетатом и затем подкисляют соляной кислотой до рН 5. При стоянии образуется кристаллический осадок, который отфильтровывают, промывают водой и сушат, что приводит к названному соединению (8,5 г), выход 69 %.

¹Н ЯМР (CDCl₃): δ 1.15-1.22 (3Н, широкий сигнал), 3.25 (3Н, с), 3.95 (2Н, широкий с), 7.08-7.31 (7Н, м), 7.43-7.50 (1H, м).

Следующие соединения получают по существу по аналогичной методике, используя соответствующие исходные продукты.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5,6-метилендиокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDСl₃ + трифторуксусная кислота): δ 1.27 (3Н, т), 3.57 (3Н, с), 3.98 (2Н, кв), 6.23 (2Н, с), 6.86 (1Н, д), 7.19 (1H, д), 7.25-7.35 (5Н, м), 10.3 (1Н, с широкий).

¹³С ЯМР (СDС1₃ + трифторуксусная кислота): δ 12.4 (СН₃), 30.9 (СН₃), 46.0 (СН₂), 101.6 (С), 103.7 (СН₂), 107.4 (С), 108.4 (СН), 113.7 (СН), 126.7 (2СН), 128.8 (СН), 129.3 (2СН), 134.1 (С), 140.1 (С), 143.1+143.2 (2С), 157.3 (С), 160.9 (С), 166.3 (С).

ESI MS/MS [M+H]⁺ 367, фрагменты 246 и 122.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-этил-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDС1₃): δ 1.26 (3Н, т), 1.31 (3Н, т), 3.20-3.34 (5Н, м), 4.0 (2Н, кв), 7.02-7.07 (2Н, м), 7.13-7.28 (5Н, м), 7.44 (1Н, т), 13.2 (1H, с широкий).

¹³С ЯМР (СDСl₃): δ 13.2 (СН₃), 16.8 (СН₃), 29.8+30.2 (СН₃+СН₂), 46.1 (СН₂), 103.3 (С), 112.5 (СН), 113.9 (С), 124.6 (СН), 126.7+126.7 (3СН), 128.6 (2СН), 132.1 (СН), 142.3 (С), 142.6 (С), 146.2 (С), 158.3 (С), 169.3 (С), 170.4.

ESI MS/MS [М+Н]⁺ 351, фрагменты 230 и 122.

N-Фенил-N-изопропил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 1.24 (6Н, д), 3.38 (3Н, с широкий), 5.09 (1Н, широкий сигнал ), 7.08 (1Н, д), 7.15 (1Н, д), 7.15-7.34 (5Н, м), 7.34 (1Н, т), 11.1 (1Н, с широкий).

¹³С ЯМР (СDСl₃): δ 21.0 (2СН₃), 29.9 (СН₃), 48.2 (СН), 109.4 (С), 112.4 (С), 113.5 (СН), 125.1 (СН), 127.9 (2СН), 127.9 (СН), 129.6 (2СН), 131.1 (СН), 131.6 (С), 137.9 (с широкий), 142.1 (С), 158.6 (С), 160.6 (С), 167.5 (С).

N-Фенил-N-(н-пропил)-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 0.95 (3Н, т), 1.58-1.69 (2Н, м), 3.29 (3Н, с широкий), 3.88 (2Н, широкий), 7.08-7.26 (7Н, м), 7.41 (1Н, т), 12.5 (1Н, с широкий).

Пример 4.

N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамида натриевая соль.

Раствор 5М гидроксида натрия получают путем разбавления 50 мас.% раствора гидроксида натрия (10 г) стерилизованной водой до общего объема 25 мл. N-Этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид (10.0 г) суспендируют в этаноле (150 мл), после чего добавляют предварительно приготовленный 5 М раствор гидроксида натрия, доводя значение рН до 8-12 (5,6 мл). Реакционную массу перемешивают дополнительно 30 минут при комнатной температуре. Образовавшийся осадок отфильтровывают и быстро промывают дважды этанолом (2•150 мл). Затем осадок высушивают в вакууме над Р₂О₅, что дает названное соединение (9,5 г), выход 90%.

¹Н ЯМР (D₂О) (два изомера в соотношении 1:4): δ 0.90 (3Н, т, минорная форма), 1.10 (3Н, т, основная форма), 3.21 (3Н, с, основная форма), 3.50 (3Н, с, минорная форма), 3.50-3.70 (2Н, м, минорная форма), 3.70-3.85 (2Н, м, основная форма), 6.92-7.51 (8Н, м, обе формы).

Пример 5.

1,2-Дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир.

Фосген (51 г, 0,52 моль), растворенный в диоксане (150 мл), добавляют порциями в механически перемешиваемую суспензию бикарбоната натрия (44 г, 0,52 моль) и 2-амино-6-хлорбензойной кислоты (30 г, 0,175 моль) в диоксане (300 мл). Происходит бурная реакция с выделением газа и реакционную массу охлаждают, поддерживая температуру ниже 50^oС. Через 30 минут реакционную массу выдерживают при температуре 50^oС в течение 1 часа. После охлаждения до 15^oС образовавшийся осадок собирают, перемешивают с 50 мл ледяной уксусной кислоты в 500 мл воды, вновь собирают и сушат, что приводит к изатиновому ангидриду (30,3 г, 0,15 моль).

Ангидрид медленно порциями добавляют к смеси гидрида натрия (5.5 г, 0,18 моль) в 300 мл N,N-диметилформамида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа добавляют по каплям иодистый метил (26 г, 0,18 моль), после чего перемешивание продолжается в течение 2,5 часов. Затем смесь добавляют к 3 л взвеси воды со льдом, после чего собирают осадок и сушат его, что приводит к N-метилированному изатиновому ангидриду (24,9 г, 0,118 моль).

N-Метилированный ангидрид нагревают до 65^oС с метилатом натрия (6,3 г, 0,117 моль) в 130 мл метанола в течение 1 часа. Растворители упаривают. Добавляют воду и дихлорметан и отделяют органический слой, сушат его и концентрируют, что приводит к получению маслянистого остатка (22,7 г, 0,114 моль).

Полученный выше осадок растворяют в 300 мл дихлорметана вместе с 4-аминопиридином (0,2 г) и триэтиламином (7,1 мл). Раствор охлаждают и медленно добавляют этилмалонилхлорид (18,9 г, 0,125 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре 4 часа и обрабатывают с образованием сиропа. К указанному сиропу добавляют 450 мл этанола и метилата натрия (18,5 г, 0,342 моль), после чего смесь перемешивают 3 часа. Растворители упаривают и остаток растворяют в 750 мл воды, промывают последовательно этилацетатом и толуолом и подкисляют 5 М соляной кислотой. Полученный остаток собирают и сушат, что приводит к образованию названного соединения в виде белого порошка (30 г, 0,106 моль) с общим выходом 60%.

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 1.46 (3Н, т), 3.63 (3Н, с), 4.49 (2Н, кв), 7.23 (1Н, д), 7.27 (1Н, д), 7.49 (1Н, т), 15.0 (1Н, с).

Следующие соединения получают по методике, по существу аналогичной описанной, используя соответствующие исходные продукты:
1,2-дигидро-4-гидрокси-5-фтор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир,
1,2-дигидро-4-гидрокси-1,5-диметил-2-оксо-хинолин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир.

Пример 6.

1,2-Дигидро-4-гидрокси-5-трифторметил-1-метил-2-оксо-хинолин-3-кислоты этиловый эфир.

2-Фтор-6-(трифторметил)бензонитрил (10 г, 53 ммоль) нагревают при 40^oС в автоклаве в безводном метиламине (200 мл) в течение 2 дней. Избытку метиламина дают упариться и полученное твердое вещество серого цвета растворяют в дихлорметане (200 мл) вместе с 4-аминопиридином (0,1 г) и триэтиламином (3,3 мл, 26 ммоль). К указанному охлажденному раствору медленно добавляют этилмалонилхлорид (8,8 г, 60 ммоль). Раствор перемешивают 4 часа и затем обрабатывают, что дает сироп желтоватого цвета. Сироп растворяют в 100 мл абсолютного этанола и добавляют метилат натрия (5,4 г, 0,1 моль). Через 1 час растворитель удаляют и остаток обрабатывают с помощью дихлорметана и воды. Образовавшееся хинолиновое производное осторожно сушат и затем суспендируют в охлажденном безводном тетрагидрофуране (250 мл). Медленно добавляют гидрид натрия (4 г, 0,125 моль) и затем иодистый метил (10 мл, 0,15 моль). Смесь нагревают с обратным холодильником 6 часов, гасят водой и обрабатывают диэтиловым эфиром. Растворители удаляют и остаток (17,3 г) растворяют в смеси этанола (50 мл) и конц. соляной кислоты (10 мл). Раствор нагревают при 45^oС в течение ночи, охлаждают и собирают осадок, что дает 8 г названного соединения.

¹Н ЯМР (CDCl₃): δ 1.46 (3Н, т), 3.68 (3Н, с), 4.50 (2Н, кв), 7.58 (1Н, м), 7.71 (2Н, м), 15.0 (1Н, с).

Пример 7.

1,2-Дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир.

К раствору 2,6-дифторбензонитрила (42 г, 0,3 моль) в 150 мл сухого метанола медленно добавляют при 30^oС метилат натрия (17,9 г, 0,33 моль). После того как его нагревают с обратным холодильником 1 час, добавляют 40%-ный водный раствор метиламина (133 мл, 1,2 моль) и полученный раствор нагревают с обратным холодильником 4 дня. При охлаждении выпадает в осадок твердое вещество белого цвета, которое собирают фильтрованием. Твердое вещество, 2-метокси-6-(метиламино)бензонитрил, растворяют в водном растворе этиленгликоля (500 мл) и гидроксида калия (14 г). Раствор нагревают с обратным холодильником при 150^oС в течение ночи, охлаждают до комнатной температуры и доводят значение рН до 4 с помощью конц. соляной кислоты. Осадок собирают фильтрованием, промывают водой (50 мл) и сушат под вакуумом. Твердое вещество белого цвета, 5-метоксиантраниловую кислоту (32 г, 0,18 моль), и бикарбонат натрия (38 г, 0,45 моль) суспендируют в 1,4-диоксане (500 мл) и затем медленно добавляют фосген (25 мл, 0,45 моль) при охлаждении на бане со льдом. Смесь нагревают при 40^oС 1 час, охлаждают до 15^oС, добавляют воду (150 мл) и собирают твердое вещество белого цвета фильтрованием. После того как его осторожно высушивают, твердый продукт (20,7 г, 0,1 моль) добавляют к раствору диэтилмалоната натрия (0,17 моль) в сухом N,N-диметилформамиде (250 мл) при комнатной температуре. Раствор нагревают при 100^oС 3 часа, охлаждают до комнатной температуры, добавляют воду (250 мл) и доводят значение рН до 4 с помощью концентрированной соляной кислоты. Осадок собирают фильтрованием, сушат под вакуумом, что дает названное соединение в виде чистых белых кристаллов (22 г).

¹Н ЯМР (СDС1₃): δ 1.43 (т, 3Н), 3.62(с, 3Н), 3.96(с, 3Н), 4.45(кв, 2Н), 6.70 (д, 1Н), 6.92 (д, 1Н), 7.55 (т, 1Н), 13.5 (с, 1Н).

Пример 8.

1,2-Дигидро-4-гидрокси-1-метил-2-оксо-5,6-метилендиокси-хинолин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир.

Ди-трет-бутилдикарбонат (36 г, 0,17 моль) добавляют порциями к раствору 3,4-(метилендиокси)анилина (20,6 г, 0,15 моль) в сухом тетрагидрофуране (150 мл). Раствор нагревают с обратным холодильником в течение 2 часов, затем концентрируют под вакуумом, что приводит к твердому остатку черного цвета. Остаток растворяют в сухом тетрагидрофуране (600 мл) и охлаждают до -40^oС. По каплям добавляют раствор 1,3 М втор-бутиллития в гексане (265 мл, 0,35 моль). После перемешивания раствора в течение 0,5 часа при -40^oС добавляют гранулы (приблизительно 40 г) сухого льда. Смеси дают нагреться до 0^oС и добавляют воду (приблизительно 700 мл). Водный раствор подкисляют соляной кислотой до рН 3 и экстрагируют эфиром. Экстракты сушат и концентрируют, что дает N-t Вос-защищенную 5,6-(метилендиокси) антраниловую кислоту в виде твердого вещества (45 г). Указанную кислоту добавляют к охлажденной льдом суспензии гидрида натрия (80% в масле, 9,0 г, 0,30 моль) в N,N-диметилформамиде (200 мл). Смесь перемешивают 0,5 часа и добавляют иодистый метил (22 мл, 0,35 моль). Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, гасят водой (600 мл) и экстрагируют три раза диэтиловым эфиром. Органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат и концентрируют под вакуумом, что дает масло темно-коричневого цвета. Масло растворяют в метаноле (400 мл) и добавляют концентрированную соляную кислоту (80 мл). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, нейтрализуют 5 М гидроксидом натрия и экстрагируют три раза диэтиловым эфиром. Объединенные экстракты фильтруют через колонку с SiO₂ и элюат концентрируют под вакуумом с образованием метилированного сложного антранилового эфира (20 г). Эфир растворяют в дихлорметане (400 мл) и охлаждают на бане со льдом. Добавляют этилмалонилхлорид (21 г, 0,14 моль) и затем, через 30 минут, триэтиламин (22 мл, 0,16 моль). После того как осуществляют перемешивание в течение 1 часа при комнатной температуре, полученную мутную смесь промывают с помощью 0,5 М соляной кислоты, а затем бикарбонатом. Органическую фазу осторожно сушат и концентрируют под вакуумом. Остаток растворяют в сухом этаноле (200 мл) и добавляют метилат натрия (17 г, 0,32 моль). Смесь перемешивают 1 час и добавляют воду (300 мл). Раствор промывают этилацетатом и затем водный раствор подкисляют конц. соляной кислотой. Осадок собирают фильтрованием и сушат под вакуумом, что дает названное соединение в виде кристаллов серого цвета (17 г, общий выход 41%).

¹Н ЯМР (СDСl₃): δ 1.45 (3Н, т), 3.58 (3Н, с), 4.48 (2Н, кв), 6.17 (2Н, с), 6.71 (1Н, д), 7,14 (1Н, д).

Пример 9.

1,2-Дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоновая кислота.

При охлаждении к 30 мл уксусного ангидрида добавляют 10 мл конц. соляной кислоты. К указанному раствору добавляют 1,2-дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (10,5 г, 38 ммоль) и смесь нагревают при 80^oС 14 часов. Смесь охлаждают до комнатной температуры и образующийся кристаллический продукт отфильтровывают, промывают холодным метанолом и сушат, что дает названное соединение (7,2 г), выход 77%.

¹Н ЯМР (CDCl₃): δ 3,73 (3Н, с) 4.02 (3Н, с), 6.82 (1Н, д), 7.02 (1Н, д), 7.62 (1Н, т).

Пример 10.

5-Этилизатиновый ангидрид.

Смесь хлоральгидрата (59,3 г, 0,36 моль), воды (700 мл) и сульфата натрия (85,8 г, 0,60 моль) нагревают до 50^oС. Когда достигается температура 50^oС, постепенно вливают смесь 3-этиланилина (40,8 г, 0,33 моль), воды (700 мл) и конц. соляной кислоты (33,6 мл) и смесь хлоргидрата гидроксиламина (74,8 г, 1,04 моль) и воды (330 мл). Полученную смесь нагревают до 80^oС в течение 30 минут и выдерживают при этой температуре еще 10 минут, прежде чем смесь охлаждают на бане со льдом. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме над Р₂O₅, что приводит к образованию изонитрозоацетанилида (36,6 г), выход 58 %.

Изонитрозоацетанилид (10,0 г, 0,05 моль) добавляют порциями к смеси воды (9 мл) и конц. серной кислоты (60 мл), предварительно нагретой до 50^oС, поддерживая температуру в интервале 50-55^oС. Когда добавление завершают, смесь нагревают до 80^oС и выдерживают при этой температуре 10 минут. Затем реакционную массу охлаждают на бане со льдом и выливают на дробленый лед, объем которого в 10-12 раз превышает объем реакционной массы. Затем смесь оставляют стоять на время около часа. Водную суспензию экстрагируют с помощью дихлорметана, который был высушен, и упаривают, что приводит к смеси двух аналогов 4-этил- и 6-этилизатинов, приблизительно в соотношении 0,68:1 (7,6 г), выход 84%.

Смесь двух изомеров растворяют в водном растворе гидроксида натрия и раствор фильтруют через целит, затем подкисляют до рН 4. 4-Аналог экстрагируют при этом значении рН с помощью дихлорметана, который был высушен, и упаривают с образованием чистого 4-этилизатина (3,1 г), выход 34%.

4-Этилизатин (3,1 г, 0,018 моль) добавляют к смеси конц. серной кислоты (45 л) в уксусной кислоте (14 мл). Суспензию нагревают до 30^oС, добавляют пероксид водорода 35% (2,2 мл) и после этого температуру повышают до 65^oС. После 3-часового нагревания смесь охлаждают и отфильтровывают осадок, промывают его водой и высушивают, получив названное соединение (1,7 г) с выходом 48%.

¹Н ЯМР (ДМСО-d₆): δ 1.12 (3Н, т), 3.02 (2Н, кв), 6.98 (1Н, д), 7.05 (1Н, д), 7.58 (1Н, т), 11.6 (1H, уширенный).

Фармакологические исследования
Острый экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (аЕАЕ)
Для экспериментов использовали самок мышей SJL/N в возрасте 8 недель. Гомогенат мышиного спинного мозга (MSCH) получали из самок мышей С57В1/6 в возрасте от 8 до 12 недель. Ткань гомогенизировали во льду и разбавляли холодньм PBS. Неполный адъювант Фрейда, содержащий 1 мг/мл М. tuberculosis hominis H37Ra, эмульгировали с равным объемом MSCH с получением конечной концентрации MSCH, равной 10 мг/мл. Инокулят в объеме 0,1 мл инъецировали внутрикожно у основания хвоста. Токсин коклюша инъецировали внутрибрюшинно в 0 и на 3-й день после иммунизации. Лечение проводили перорально ежедневно с 3 по 12 день после иммунизации или с 3 по 7 и с 10 по 12 день. Контрольные животные получали физиологический раствор. Животных, по восемь в каждой дозовой группе, оценивали по клиническим признакам паралитического заболевания по шкале от 0 до 5 следующим образом: 0 - норма; 1 - слабый хвост; 2 - частичный паралич задних конечностей; 3 - паралич задних конечностей и хромота передних конечностей; 4 - двусторонний паралич задних и передних конечностей; 5 - смерть. Клинические показатели регистрировали на 7 день и ежедневно, начиная с 9 дня, до окончания эксперимента на 14 день. Лечебные эффекты рассчитывали как процент ингибирования клинических показателей по сравнению с контрольными животными, получавшими физиологический раствор.

Индуцированный коллагеном артрит
Для экспериментов использовали самцов мышей DBA/1 в возрасте между 8 и 10 неделями. В 0 день мышей иммунизировали внутрикожно у основания хвоста бычьим коллагеном типа II (100 мкг/мышь) в полном адъюванте Фрейда. Лечение проводили перорально ежедневно с 3 по 7, с 10 по 14, с 17 по 21, с 24 по 28 и с 31 по 35 день. Через пятнадцать дней после иммунизации мышей проверили на наличие признаков артрита. Животных проверяли три раза в неделю. Каждый второй или третий день отдельные лапы артритных животных оценивали по шкале от 0 до 4 (0 - нет артрита; 1 - артрит в одном из межфаланговых, плюснефаланговых или межзапястных суставов; 2 - два артритных сустава; 3 - три артритных сустава; 4 - как 3, но более сильное покраснение и опухание лапы). Показатели по каждой лапе складывали с получением максимально достижимого показателя для каждой мыши, равного 16.

Индуцированное овальбумином воспаление легких
Для экспериментов использовали самок мышей С57В1/6 в возрасте от 10 до 14 недель, 10 мышей на группу. Мышей сенсибилизировали овальбумином (ОА) в гидроксиде алюминия в объеме 0,2 мл, инокулированного внутрибрюшинно. Лечение проводили с 0 по 16 день. Контрольные мыши получали физиологический раствор. Через четырнадцать дней после ОА сенсибилизации мышей в течение 20 минут подвергали воздействию аэрозоля ОА в физиологическом растворе 1,5% мас. /об. при помощи распылителя. Контрольных животных с введением наполнителя подвергали воздействию физиологического раствора. Через семьдесят два часа после ведения ОА/наполнителя мышам давали наркоз и дважды проводили бронхоальвеолярное промывание путем закапывания 0,5 мл ледяного солевого фосфатного буфера (PBS) в легкие. Определяли общие количества клеток и дифференциальные расчеты проводили на основе идентификации эозинофилов, моноцитов/альвеолярных макрофагов, лимфоцитов и нейтрофилов. Инфильтрацию лимфоцитов в легочную ткань оценивали при помощи гистохимических методов на замороженных участках легких с использованием тетрагидрохлорида диаминобензидина (DAB).

Тератогенные эффекты у крыс
Соединения вводили самкам крыс подкожно в течение с 8 по 14 день беременности. Крысам делали кесарево сечение и проводили вскрытие трупа на 20 день после оплодотворения. Зародыши исследовали на наличие внешних и внутренних отклонений.

Болевой синдром гончих (BPS)
Соединения вводили гончим собакам внутривенно. Дозы вводили последовательно в течение 5 дней. Оценивали наличие у собак клинических и лабораторных признаков болевого синдрома, например лихорадки, увеличения скорости оседания эритроцитов (ESR), щелочного фосфата (АР), индукции белков острой фазы и васкулита.

Предпочтительными соединениями являются N-этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид, N-этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-метокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид, N-этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-бром-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид и N-этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5,6-метилендиокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид, называемые далее соединениями В, С, D и Е соответственно. Рохинимекс и N-этил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид, N-метил-N-фенил-1,2-дигидро-4-гидрокси-5-хлор-1-метил-2-оксо-хинолин-3-карбоксамид, называемые далее соединениями F и G соответственно, включены в качестве эталонных соединений (см. табл.1-3).

Эффективные количества соединений формулы (I) предпочтительно вводят пациенту, нуждающемуся в таком лечении, при помощи известных путей введения в составе обычных фармацевтических композиций, включающих эффективное количество активного ингредиента и подходящий фармацевтически приемлемый носитель. Такие композиции могут находиться в разнообразных формах, например в форме растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, капсул и порошков, предназначенных для перорального введения, стерильных растворов для парентерального введения, суппозиториев для ректального введения или подходящих составов для местного нанесения. Общепринятые методы выбора и приготовления подходящих фармацевтических составов описаны, например, в "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Design", M.B.Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

Предполагается, что подходящая ежедневная доза для использования для лечения MS варьируется от 0,0005 мг/кг до около 10 мг/кг веса тела, в частности от 0,005 до около 1 мг/кг веса тела, в зависимости от специфических условий лечения, возраста и веса конкретного пациента и реакции конкретного пациента на лечение. Точные индивидуальные дозировки, также как и ежедневные дозировки, будут определяться в соответствии со стандартными медицинскими принципами по назначению врача.

Для повышения стабильности или облегчения введения лекарственного средства вводят различные добавки, фармацевтические композиции могут также содержать дополнительные терапевтически пригодные вещества, отличные от соединения формулы (I).