Результат интеллектуальной деятельности: Способ оценки влияния лекарственных веществ на степень дестабилизации мембран эритроцитов

Изобретение относится к области медицины и фармации и может использоваться для оценки влияния лекарственных веществ на степень дестабилизации мембран эритроцитов.

Известен способ оценки влияния лекарственных веществ на дестабилизацию мембран эритроцитов путем определения степени везикуляции эритроцитов (Шереметьев Ю.А., Рогозин М.М., Левин Г.Я., Успенский А.Н. Способ оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов. Патент 2606042, РФ. 2016).

Однако этот способ достаточно сложен, требует специфических дорогих реактивов.

Задача предполагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - упрощение процесса определения влияния лекарственных веществ на степень дестабилизации мембран эритроцитов.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови и хранение отмытых эритроцитов при 4°С в течение 7 суток в присутствии лекарственных веществ и определение уровня гемолиза.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь от здоровых добровольцев забирают в вакуумные пробирки, содержащие 3.8% цитрат натрия (1:9). Эритроциты трижды промывают физиологическим раствором. К 10 мл забуференного физиологического раствора (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4) добавляют 0.05 мл промытых эритроцитов и лекарственные вещества. Суспензию эритроцитов с лекарственными веществами и без них хранят при 4°С в течение 7 суток. Затем для получения надосадочной жидкости суспензию эритроцитов центрифугируют 5 минут при 3000 об/мин. В надосадочной жидкости определяют уровень гемолиза эритроцитов в отсутствии и в присутствии лекарственных веществ. Уровень гемолиза эритроцитов в отсутствии лекарственных веществ принимается за 100%. Степень дестабилизации мембран эритроцитов рассчитывают по формуле:

А (%)=100-В,

где А - степень дестабилизации мембран эритроцитов (%);

100 - уровень гемолиза эритроцитов в отсутствии лекарственных препаратов, принятый за 100%;

В - уровень гемолиза эритроцитов в присутствии лекарственных веществ (%).

Известно, что глюкоза (Lang F et al. Cell Physiol. Biochem. - 2008. - V. 22. - P. 373-380) и аденозин (Niemoeller O.M. et al. Pflugers Arch- Eur. J. Physiol. 2007. - V. 454. P. 427-439) подавляют апоптоз эритроцитов.

Пример 1. Промытые эритроциты хранили в забуференном физиологическом растворе при 4°С в течение 7 суток как в присутствии глюкозы (5 мМ), так и без нее. Эритроциты центрифугировали 5 минут при 3000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли уровень гемолиза. Уровень гемолиза эритроцитов в присутствии глюкозы составил в среднем 49%. Глюкоза снижает степень дестабилизации мембран эритроцитов в среднем на 51%.

Пример 2. Промытые эритроциты хранили в забуференном физиологическом растворе при 4°С в течение 7 суток как в присутствии аденозина (1 мМ), так и без него. Эритроциты центрифугировали 5 минут при 3000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли уровень гемолиза. Уровень гемолиза в присутствии аденозина составил в среднем 58%. Аденозин снижает степень дестабилизации мембран эритроцитов в среднем на 42%.