4-(4-Метоксифенил)-2-{ 2-[2-оксо-(3-хлорадамантан-1-ил)-этилиден]гидразинил} -4-оксобут-2-еноат натрия, обладающий гемостатической активностью

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса 2-гидразинопроизводных 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот, а именно к 4-(4-метоксифенил)-2-{2-[2-оксо-(3-хлорадамантан-1-ил)-этилиден]гидразинил}-4-оксобут-2-еноату натрия (1) формулы:

,

обладающему гемостатической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве гемостатического средства.

Ближайшим аналогом по структуре к заявляемому соединению является 4-(4-метилфенил)-4-оксо-2-{2-2-(3-хлорадамантан-1-ил)этилиден]гидразин-ил}бут-2-еновая кислота (2) [Химия иминофуранов IX. Синтез и циклизация (2Z)-2-{(2Z)-2-[2-(3-R-адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразинил}-4-(гет)-арил-4-оксобут-2-еновых кислот / Н.А. Пулина, А.С. Кузнецов, А.Е. Рубцов // Ж-л. Орган. химии. - 2015. - Т. 51, вып. 7. - С. 986-990] формулы:

Данные по гемостатической активности структурного аналога 2 в литературе отсутствуют.

Эталоном сравнения выбран этамзилат [диэтиламмония 2,5-диоксибензолсульфонат] (3), широко применяемый в лечебной практике и являющийся аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна: Издатель Умеренков, 2010. - С. 453-454].

Задачей изобретения является поиск в ряду гидразинопроизводных 4-арил-4-оксобут-2-еновых кислот веществ с выраженной гемостатической активностью и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 4-(4-метоксифенил)-2-{2-[2-оксо-2-(3-хлорадамантан-1-ил)этилиден]гидразинил}-4-оксобут-2-еноата натрия (1), обладающего гемостатической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют первоначальным взаимодействием 4-(4-метоксифенил)-2,4-диоксобутановой кислоты (4) с 1-(3-хлорадамантан-1-ил)-2-(трифенилфосфоранилиденгидразоно)этаноном (5) при эквимолекулярном соотношении реагентов в среде безводного толуола при 20-25°С с выделением 4-(4-метоксифенил)-2-{2-[2-оксо-2-(3-хлорадамантан-1-ил)этилиден]гидразинил}-4-оксобут-2-еновой кислоты (6). Далее кислоту 6 растворяют в этаноле и, прибавляя насыщенный раствор гидрокарбоната натрия при перемешивании, выделяют целевой продукт известными методами по схеме:

Пример получения соединения 1. К суспензии 2,22 г (0,01 моль) кислоты 4 в 25 мл безводного толуола прибавляли раствор 5,01 г (0,01 моль) 1-(3-хлорадамантан-1-ил)-2-(трифенилфосфоранилиденгидразоно)этанона (5) в 35 мл безводного толуола и перемешивали 3 ч до полного растворения реагента. Реакционную смесь охлаждали до температуры -5-0°С, выпавший осадок соединения 6 отфильтровывали, перекристаллизовывали из ацетонитрила и высушивали. Далее 4,44 г (0,01 моль) соединения 6 растворяли в 40 мл этанола, прикапывали насыщенный раствор гидрокарбоната натрия при перемешивании до выпадения осадка красного цвета, выпавший осадок соединения 1 отфильтровывали и перекристаллизовывали из изопропилового спирта. Выход 3,78 г (81%). Т.пл. 232-233°С. Вычислено, %: С 59.17; Н 5.18; N 6.00; C₂₃H₂₄ClN₂O₅Na. Найдено, %: С 59.08; Н 5.26; N 6.12. ИК-спектр (ФСМ-1201, вазелиновое масло, v, см^-1): 3318 уш. (NH, СОО^-), 1683 (AdC=O), 1631, 1587 (С=С, C=N, С⁴=O). Спектр ЯМР ¹H (Bruker 400 МГц, ДМСО-d₆, ГМДС, δ, м.д.): 1.83-2.54 м (14Н, адамантил), 3.91 с (3Н, ОСН₃), 6.99 с (1Н, С³Н), 7.04-7.73 м (4Н, С₆Н₄,), 8.12 с (1Н, N=CH), 13.96 с (1Н, NH).

Заявляемое соединение 1 представляет собой оранжевое кристаллическое вещество, легко растворимое в воде, растворимое в хлороформе, труднорастворимое в этиловом спирте, нерастворимое в бензоле, толуоле.

Острая токсичность (ЛД₅₀) заявляемого соединения 1 изучена на белых нелинейных мышах обоего пола массой 18-25 г при однократном пероральном введении по методу Першина Г.Н. [Прозоровский В.Б. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований / В.Б. Прозоровский // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - №7. - С. 2090-2120]. За животными вели наблюдение в течение 14 дней, регулярно фиксируя общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координации движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние шерстного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи, потребление корма и воды, изменение массы тела. Эксперименты проводились в соответствии с международными этическими и научными стандартами проведения исследований на животных [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 13-50].

Гемостатическая активность соединения 1 изучалась in vitro путем определения времени свертывания крови с помощью коагулометра «АПГ4-02-П». Использовали цитратную (3,8%) кровь беспородных кроликов в соотношении 9:1 [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 453-477]. Для определения активности в кювету помещали 50 мкл цитратной крови и 50 мкл 0,2% водного раствора соединения 1, для контроля использовали 50 мкл изотонического раствора хлорида натрия. В качестве препарата сравнения служил этамзилат, 50 мкл которого добавляли в виде 0,2% водного раствора. Затем пробы инкубировали в течение 60 сек. Вносили 50 мкл 1% раствора хлорида кальция и приступали к измерению. Результаты исследования обработаны статистически с помощью программы MS Excel, 2003 и приведены в таблице 1.

Установлено, что ЛД₅₀ соединения 1 составляет 4830 мг/кг. Согласно классификации токсичности препаратов соединение 1 относится к 5 классу веществ [Юрасова А.А. Внедрение в Российской Федерации современной модели классификации опасности химической продукции / А.А. Юрасова, А.С. Макарова, Д.О. Скобелев // Токсикологический вестник. - 2011. - №1. - С. 2-10].

В ходе проведенных исследований (см. табл. 1) установлено, что соединение 1 проявляет выраженное гемостатическое действие. В процессе эксперимента оно достоверно уменьшает время свертываемости цитратной крови и превышает по активности этамзилат в 2,5 раза. С учетом значений острой токсичности, соединение 1 имеет определенные преимущества перед препаратом сравнения в плане его безопасности и эффективности.

Таким образом, 4-(4-метоксифенил)-2-{2-[2-оксо-2-(адамантан-1-ил)-этилиден]гидразинил}-4-оксобут-2-еноат натрия проявляет более высокую гемостатическую активность по сравнению с эталонным препаратом, а также является нетоксичным соединением, что делает возможным его использование в медицине для создания новых гемостатических средств.

Литература

1. Химия иминофуранов IX. Синтез и циклизация (2Z)-2-{(2Z)-2-[2-(3-R-адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразинил}-4-(гет)-арил-4-оксобут-2-еновых кислот / Н.А. Пулина, А.С. Кузнецов, А.Е. Рубцов // Журн. Орган. химии. - 2015. - Т. 51, вып. 7. - С. 986-990.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна: Издатель Умеренков, 2010. - С. 453-454.

3. Прозоровский В.Б. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований / В.Б. Прозоровский // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - №7. - С. 2090-2120.

4. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 13-50, 453-477.

5. Юрасова А.А. Внедрение в Российской Федерации современной модели классификации опасности химической продукции / А.А. Юрасова, А.С. Макарова, Д.О. Скобелев // Токсикологический вестник. - 2011. - №1. - С. 2-10.