Результат интеллектуальной деятельности: Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано в акушерстве для прогнозирования осложнений во второй половине беременности, а именно риска развития преэклампсии (далее ПЭ) тяжелого течения с учетом генетических данных.

Преэклампсия - осложнение беременности, характеризующееся развитием эндотелиальной дисфункции, полиорганной недостаточностью, нарушением свертывающей и противосвертывающей систем, микроциркуляции, обменных процессов, иммунного ответа [Серов В.Н. Клинические рекомендации. Акушерство и гинекология. - 4-е изд. / В.Н. Серов, Г.Т. Сухих. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 1024 с.; Eiland, E. Preeclampsia / E. Eiland, C. Nzerue, M. Faulkner // J. Pregnancy, 2012. – P. 586—578].

В настоящее время преэклампсия является одной из самых актуальных проблем современного акушерства ввиду широкой распространенности, сложности этиопатогенеза, высокой частоты материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [Киселева Н.И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе [Текст] / Н.И. Киселева, С.Н. Занько, А.П. Солодков // Дисфункция эндотелия : эксперим. и клинич. исслед. : тр. III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 18-20 мая 2004 г. / Белорус. респ. Фонд фундамент. исслед. ; Витеб. гос. мед. ун-т. – Витебск, 2004. – С. 201-204]. ПЭ может варьировать от легкой до тяжелой формы. Как правило, в тяжелых случаях преэклампсии единственным способом улучшить состояние пациентки является ее родоразрешение.

Для преэклампсии характерно прогрессирующее течение. Это выражается в неуклонном нарастании тяжести отдельных ее проявлений или присоединении новых клинических признаков. При наличии преэклампсии могут развиваться такие критические состояния, как отслойка плаценты, ДВС–синдром, церебральные кровоизлияния, печеночная недостаточность, острая почечная недостаточность, гипотрофия, гибель плода, эклампсия [Эндотелиальная дисфункция при гестозе. Патогенез, генетическая предрасположенность, диагностика и профилактика [Текст]: метод. рекомендации / Е.В. Мозговая, О.В. Малышева, Т.Э. Иващенко [и др.] ; ред. Э.К. Айламазян. – Санкт-Петербург: Изд-во Н-Л, 2003. – 32 с.].

Данные о молекулярных и клеточных механизмах развития преэклампсии, плацентарного гомеостаза и адаптационно-гомеостатических реакций плаценты при преэклампсии многочисленны, но разноречивы: недостаточно изучены регуляторные механизмы, обеспечивающие рост, структуру и функционирование всего фетоплацентарного комплекса [Rоbеrts J.M. Рrеесlаmрsiа аnd sоlublе fms-likе tyrоsinе kinаsе 1 [Tехt] / J.M. Rоbеrts, А. Rаjаkumаr // J. Сlin. Еndосrinоl. Mеtаb. – 2009. – Vоl. 94, № 7. – Р. 2252-2254].

В настоящее время принято считать, что преэклампсия протекает в две стадии [Kаng, А. Рrе-есlаmрsiа sсrееning in first аnd sесоnd trimеstеr [Tехt] / А. Kаng, H. Strubеn // Thеr. Umsсh. – 2008. – Vоl. 65, № 11. – Р. 663-666]. На первой происходит нарушение взаимоотношений между инвазией раннего трофобласта и ремоделированием спиральных артерий, которое приводит к недостаточному кровоснабжению плаценты и оксидантному стрессу ее тканей [Медведев Б.И. Клинико-биохимические предикторы развития преэклампсии [Текст] / Б.И. Медведев, Е.Г. Сюндюкова, С.Л. Сашенков // Акушерство и гинекология. – 2013. – № 5. – С. 30-35]. На второй стадии развивается «материнский синдром», проявляющийся в виде генерализованного системного воспалительного ответа, в который вовлечены как лейкоциты, так и эндометрий [Некоторые аспекты патогенеза преэклампсии у беременных [Текст] / В.Г. Левченко, В.Н. Зорина, Л.Г. Баженова [и др.] // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2010. – Т. 10, № 3. – С. 21-25].

Как свидетельствуют результаты ряда исследований, значимую роль в развитии преэклампсии играют генетические факторы. Среди генов-кандидатов важное значение в развитии ПЭ отводится генам матриксных металлопротеиназ. К этой группе генов относятся: MMР-1 (rs1799750), MMР-2 (rs243865), MMР-3 (rs3025058), MMР-7 (rs11568818), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-9 (rs17577), MMР-12 (rs652438).

Матриксная металлопротеиназа-2 (MMP-2) - протеиназа внеклеточного матрикса человека, которая секретируется в качестве негликозилированного профермента. Ген ММР-2 расположен на длинном плече 16 хромосомы (16q12.2). Установлена вовлеченность полиморфизма ММР-2 (rs243865) в развитие инфаркта миокарда, метаболического синдрома, склерозирующего холангита, аневризмы восходящего отдела аорты, рака мочевого пузыря и т.д. [Анализ полиморфизма генов матриксных металлопротеиназ-2 и -9 у пациентов с ишемической болезнью сердца [Текст] / А.В. Шевченко, О.В. Голованова, В.И. Коненков [и др.] // Терапевтический архив. – 2010. – Т. 82, № 1. – С. 31-34].

Матриксная металлопротеиназа-8 (ММР-8) или нейтрофильная коллагеназа содержится в специфических гранулах полиморфноядерных лейкоцитов в виде неактивного профермента. Ген ММР-8 находится на 11 хромосоме в области 11q22.2–q22.3. В гене наиболее изучены два полиморфных локуса с однонуклеотидными заменами в кодирующей области ММР-8 (rs11225395) и ММР-8 (rs1320632). Данные полиморфизмы связаны с преждевременным разрывом плодных оболочек, хроническим и острым периодонтитом, развитием рака молочной железы, рака легких и атеросклерозом сонных артерий [Mаtriх mеtаllорrоtеinаsе 8 (MMР8) gеnе роlymоrрhisms in сhrоniс реriоdоntitis [Tехt] / L. Izаkоviсоvа Hоllа, B. Hrdliсkоvа, J. Vоkurkа [еt аl.] // Аrсh. Оrаl Biоl. – 2012. – Vоl. 57, № 2. – Р. 188-196].

Матриксная металлопротеиназа-9 (ММР-9) вовлечена в процессы воспаления, ремоделирования ткани и репарации, мобилизации матрикс-связанных факторов роста и процессинга цитокинов [Матриксные металлопротеиназы, их роль в физиологических и патологических процессах [Текст]: обзор / Л.Н. Рогова, Н.В. Шестернина, Т.В. Замечник [и др.] // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т. 18, № 2. – С. 86-89]. Ген ММР-9 локализован на 20 хромосоме (20q11-q13). Согласно литературным данным изучаемый полиморфизм MMР-9 (rs17577) является фактором риска развития рака молочной железы и желчного пузыря, астмы у детей и болезни Бехчета [Аssосiаtiоn оf MMР-9 gеnе роlymоrрhisms with Bеhçеt's disеаsе risk [Tехt] / А. Nаоuаli, W. Kааbасhi, K. Tizаоui [еt аl.] // Immunоl. Lеtt. – 2015. – Vоl. 164, № 1. – Р. 18-24].

Известен способ по заявке РФ №2012131290 (дата публикации заявки 27.01.2014), согласно которому для раннего выявления риска развития преэклампсии у беременной женщины на ранней стадии беременности на сроке от 14 до 16 недель беременности до развития обычных клинических симптомов проводят анализ исследуемого биологического образца для определения концентрации 5-гидрокситриптофана, причем пониженная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации при нормальной беременности коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. При этом контрольная концентрация представляет собой концентрацию 5-гидрокситриптофана в биологическом образце, полученном у субъекта, у которого действительно развилась преэклампсия, и в котором повышенная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. Одновременно проводят анализ для определения концентрации по существу всех биомаркеров: 5-гидрокситриптофана, моносахарида, деканоилкарнитина, метилглутаровой кислоты и/или адипиновой кислоты, олеиновой кислоты, докозагексаеновой кислоты и/или докозатрииновой кислоты, -бутиролактона и/или оксолан-3-она, 2-оксовалериановой кислоты и/или оксометилбутановой кислоты, ацетоуксусной кислоты, гексадеценоилэйкозатетраеноил-sn-глицерина, сфингозин-1-фосфата, сфинганин-1-фосфата и производных витамина D3, и установления корреляции концентрации и комбинации всех биомаркеров с риском развития преэклампсии у беременной женщины.

В патенте РФ № 2586412 (дата публикации 10.06.2016) предложен способ оценки риска возникновения патологии беременности, заключающийся в том, что для оценки риска возникновения преэклампсии, преждевременных родов, а также преэклампсии на фоне артериальной гипертензии проводят анализ биологических жидкостей человека, а именно сыворотки крови, с помощью обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с регистрацией результата анализа в ультрафиолетовой области спектра, а в качестве биомаркеров патологии беременности используются гипоксантин, ксантин, мочевая кислота.

Общий недостаток указанных способов заключается в том, что не рассматриваются генетические полиморфизмы и их сочетания с риском развития преэклампсии тяжелого течения.

За прототип выбран «Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения» по патенту РФ № 2568892 по заявке 2014135186/15, 28.08.2014. Заявляемый способ позволяет прогнозировать развитие преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических полиморфизмов генов цитокинов. Способ заключается в том, что выделяют ДНК из периферической венозной крови и анализируют генетические полиморфизмы: -308 G/A TNFα (rs1800629), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs285765). Повышенный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801A SDF1, +36 GG TNFR1 и -308 A TNFα. Пониженный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801 G SDF1 и G МСР (rs 285765). Использование изобретения позволяет повысить эффективность выявления преэклампсии тяжелого течения.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития тяжелого течения ПЭ по данным о генетических полиморфизмах - ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577).

Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития преэклампсии тяжелого течения.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, включающий:

- выделение ДНК из периферической венозной крови;

- анализ полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577);

- прогнозирование максимального риска развития преэклампсии тяжелого течения при выявлении сочетания генетических вариантов матриксных металлопротеиназ - ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577);

- прогнозирование минимального риска развития преэклампсии тяжелого течения при выявлении сочетания генетических вариантов матриксных металлопротеиназ - MМР-2 (rs243865), MMР-9 (rs17577);

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза развития преэклампсии тяжелого течения у беременных по наличию различных сочетаний генетических вариантов полиморфизмов ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577).

Способ осуществляют следующим образом.

ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови пациентки в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH 7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН 8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37ºС в течение 16 часов.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20ºС.

Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров.

Изобретение характеризуется следующими графическими материалами:

Фиг.1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-2 (rs243865) ( - гомозигота СС MMР-2 (rs243865), - гомозигота ТТ MMР-2 (rs243865), - гетерозигота СТ MMР-2 (rs243865), - отрицательный контроль).

Фиг. 2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма ММР-8 (rs1320632) ( - гомозигота АА ММР-8 (rs1320632), - гомозигота GG ММР-8 (rs1320632), - гетерозигота АG ММР-8 (rs1320632), - отрицательный контроль).

Фиг. 3. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-8 (rs11225395) ( - гомозигота СС MMР-8 (rs11225395), - гомозигота TT MMР-8 (rs11225395), - гетерозигота СT MMР-8 (rs11225395), - отрицательный контроль).

Фиг. 4. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-9 (rs17577) ( - гомозигота GG MMР-9 (rs17577), - гомозигота АА MMР-9 (rs17577), - гетерозигота GА MMР-9 (rs17577), - отрицательный контроль).

Фиг 5. Распространенность сочетаний генетических вариантов матриксных металлопротеиназ у женщин с преэклампсией тяжелой степени и в контрольной группе.

Анализ генетического полиморфизма ММР-2 (rs243865) проводят методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Аssосiаtiоn оf mаtriх mеtаllорrоtеinаsеs (MMР2, MMР7 аnd MMР9) gеnеtiс vаriаnts with lеft vеntriсulаr dysfunсtiоn in соrоnаry аrtеry disеаsе раtiеnts [Tехt] / А. Mishrа, А. Srivаstаvа, T. Mittаl [еt аl.] // Сlin. Сhim. Асtа. – 2012. – Vоl. 413, № 19-20. – Р. 1668-1674] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH 8,8), 2,5мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при t+95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t+58,4°С; денатурация – 15 с при t+95°С.

При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществляют методом Tag Man зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM – аллелю С (фиг. 1).

Анализ полиморфизма генов ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632) проводят методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Еlеvаtеd MMР-8 аnd dесrеаsеd myеlореrохidаsе соnсеntrаtiоns аssосiаtе signifiсаntly with thе risk fоr реriрhеrаl аthеrоsсlеrоsis disеаsе аnd аbdоminаl аоrtiс аnеurysm [Tехt] / Р. Рrаdhаn-Раlikhе, Р. Vikаtmаа, T. Lаjunеn [еt аl.] // Sсаnd. J. Immunоl. – 2010. – Vоl. 72, № 2. – Р. 150-157] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH 8,8), 2,5мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t+54,6°С; денатурация – 15 с при t+95°С для ММР-8 (rs1320632) и отжиг праймеров – 1 мин при t+54,0°С; денатурация – 15 с при t+95°С для ММР-8 (rs11225395).

При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществляют методом Tag Man зондов по данным величин ОЕФ каждого зонда. Для ММР-8 (rs11225395) зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM – аллелю С (фиг.2); .для ММР-8 (rs1320632) зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю G, зонд с красителем FAM – аллелю A (фиг. 3).

Для исследования полиморфизма MMР-9 (rs17577) использованы наборы 2,5х реакционной смеси для проведения ПЦР-РВ [httр://www.kаrgеr.соm] в объеме 25 мкл на 1 образец, включавших 2,5х реакционную смесь (2,5х ПЦР буфер: (KСl, ТрисHСl (рH 8,8), 6,25 мМ MgСl2), SynTаq ДНК-полимеразу, дезоксинуклеозидтрифосфаты, глицерол, Twееn 20) в объеме 10мкл, 25мМ MgСl₂ в объеме 1,5 мкл, ddH₂О (деионизированная вода), по 10 пкмоль каждого праймера и по 5 пкмоль. При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществлялось методом Tag Man зондов по данным величин ОЕФ каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю А, зонд с красителем FAM – аллелю G (фиг. 4).

Возможность использования предложенного способа для оценки риска возникновения и развития преэклампсии подтверждает анализ результатов наблюдений 468 пациенток с ПЭ и 577 женщин контрольной группы. Общий объем исследуемой выборки составил 1045 человек. Возраст у женщин с преэклампсией варьировал от 17 до 45 лет и в среднем составил 27,74±5,4 лет. Возраст беременных без ПЭ варьировал от 15 до 49 лет и в среднем составил 27,80±6,5 лет. В исследуемые выборки включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой. Таким образом, контрольная группа не отличалась от группы женщин с ПЭ по полу, возрасту, месту рождения и национальности.

Все клинические и клинико-лабораторные исследования проводились на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы, с информированного согласия пациенток на использование материалов лечебно-диагностических мероприятий, проводимых за период госпитализации и после, связанных с ПЭ, для научно-исследовательских целей и протоколировались по стандартам этического комитета Российской Федерации. Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с ПЭ проведен с помощью программного обеспечения APSampler (http://sources.redhat.com/cygwin/), использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A.V. Favorov, M.S. Gelfand, A.V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. – 2005. – Vol. 21, № 10. – P. 2240-2245].

Выявлены особенности «генетической конституции» беременных с ПЭ тяжелого течения по исследуемым генам матриксных металлопротеиназ (фиг. 5). Установлено, что сочетание аллелей Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577) встречается у 1,45% женщин с ПЭ III степени тяжести, что в 7,88 раз ниже аналогичного показателя контрольной группы – 11,43%. Данная комбинация является протективным фактором развития ПЭ III степени тяжести (рf= 0,003, рреrm=0,01 ОR=0,11, 95% СI 0,01-0,83).

Наоборот, сочетание аллелей G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632) отмечается у 23,18% женщин с ПЭ III степени тяжести и у 8,76% женщин контрольной группы (рf= 0,0007, рреrm=0,002, ОR=3,14, 95% СI 1,67-5,92).

Резюмируя полученные данные, можно сделать вывод о значимой роли генетических полиморфизмов ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577) в формировании ПЭ тяжелого течения. Наличие сочетания полиморфных вариантов - G MMР-9 (rs17577), G MMР-8 (rs1320632) (OR=3,14) у женщин является признаком риска развития преэклампсии тяжелого течения. Наличие сочетания полиморфных вариантов Т ММР-2 (rs243865), А ММР-9 (rs17577) (OR=0,11) является протективным фактором развития преэклампсии тяжелого течения.

Примеры конкретного выполнения.

1. У беременной С., русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание двух генетических вариантов Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития преэклампсии тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ тяжелого течения.

2. У женщины М., при прегравидарной подготовке, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание двух генетических вариантов Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ тяжелого течения.

3. У женщины Л., при прегравидарной подготовке, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности были выявлены признаки преэклампсии тяжелого течения.

4. У беременной А., русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития преэклампсии тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности были выявлены признаки ПЭ тяжелого течения.

Применение данного способа позволит формировать среди женщин русской национальности, уроженках Центрального Черноземья при прегравидарной подготовке и на ранних сроках беременности группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития преэклампсии тяжелого течения.