Результат интеллектуальной деятельности: Способ моделирования эмпиемы плевры в эксперименте

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патологической физиологии, пульмонологии, торакальной хирургии, фармакологии и может быть использовано для моделирования III стадии эмпиемы плевры в эксперименте и доклинической апробации лекарственных средств и новых методов для лечения эмпиемы плевры.

Прототипом является кальций-пирофосфатдигидратная модель, при которой раздражающее вещество (кальций-пирофосфатдигидрат) вводится в плевральную полость с помощью иглы в небольшом объеме (0,1 мл), что приводит к формированию у экспериментальных животных эмпиемы плевры; результаты оценивают через 4 и 24 ч (Руководство по иммунофармакологии: Пер. с англ. / Под ред. М.М. Дейла, Дж. К. Формена. - М.: Медицина, 1998, 332 с. Часть 4. Влияние лекарственных препаратов на воспаление и иммунный ответ. Экспериментальные модели для отбора лекарственных препаратов, влияющих на реакции воспаления и гиперсенситивности. А.Д. Седжвик, Д.А. Виллоубай: A.D. Sedgwick, D.А. Willoughby).

Однако данный способ моделирования не приводит к развитию склеротических изменений плевры, то есть к развитию III стадии эмпиемы плевры, вследствие короткой продолжительности эксперимента и преобладания экссудативных изменений.

Технический результат: получение III стадии эмпиемы плевры в эксперименте.

Указанная задача достигается путем внутриплеврального введения нелинейным белым крысам (самцам и самкам) блеомицина - препарата, предназначенного для лечения плоскоклеточных форм рака головы и шеи, пищевода, легких, шейки матки, полового члена, герминогенных опухолей, рака почки, болезни Ходжкина и нехожкинских лимфом, включая лимфосаркому и ретикулосаркому, злокачественных опухолей яичка, злокачественных плевритов (в качестве склерозирующего средства), в дозе 15,0 мг/кг массы тела животного однократно; результат оценивают на 10-е сутки эксперимента.

Блеомицин (bleomycin), международное непатентованное название - блеомицин (bleomycinum), брутто-формула C₅₀H₇₃N₁₇O₂₁S₂, торговое название препарата - блеоцин (bleocin), лекарственная форма: лиофилизат для приготовления раствора для инъекций, флаконы 15 мг блеомицина гидрохлорида; производитель: «Ниппон Кайяку Ко., Лтд.», Япония (Энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента: http://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_254.htm; Vidal, Справочник лекарственных средств: http://www.vidal.ru/drugs/molecule/130).

Блеомицин для моделирования в эксперименте эмпиемы плевры ранее не использовался. Он применялся для моделирования идиопатического фиброза легких путем эндотрахеального введения (Способ лечения фиброза легких (RU 2494470). Скурихин Е.Г., Мадонов П.Г., Киншт Д.Н., Першина О.В., Бекарев А.А., Ермакова Н.Н., Артамонов А.В., Дыгай A.M. http://www.findpatent.ru/patent/249/2494470.html © FindPatent.ru - патентный поиск, 2012-2016).

Способ осуществляют следующим образом. Лабораторному животному (нелинейной белой крысе) под ингаляционным наркозом надрезают кожу над третьим и четвертым ребрами, с помощью иглы вводят блеомицин в дозе 15,0 мг/кг массы тела в объеме 1,0 мл физиологического раствора. Получают модель III стадии эмпиемы плевры на 10-е сутки эксперимента.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Нелинейная белая крыса, самка, масса 291 г. Животному однократно под ингаляционным наркозом севофлораном по вышеописанной методике введено 15,0 мг/кг блеомицина (всего 4,4 мг) в 1,0 мл физиологического раствора. На 10-е сутки животное выведено из эксперимента под ингаляционным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Проведен забор аутопсийного материала (образцы париетальной плевры - в месте введения блеомицина, висцеральной плевры с субплевральной легочной паренхимой - всего 2 образца) для гистологического исследования. Гистологическое исследование выполнено по стандартным протоколам, с применением методов окрашивания препаратов гематоксилином и эозином и пикрофуксином по ван Гизон. Проведено морфометрическое исследование препаратов, заключающееся в измерении толщины париетальной и висцеральной плевр у каждого животного на препаратах, окрашенных пикрофуксином, с помощью окуляр-микрометра. В каждом препарате проводили до 10 измерений, после чего вычисляли средние величины.

Результаты гистологического исследования: при микроскопии препаратов в месте введения блеомицина выявлено: коллагенизация висцеральной плевры (17,85±5,19 мкм), скудная воспалительная инфильтрация плевры и субплевральной паренхимы легкого, преимущественно лимфоцитарная и плазмоцитарная. Париетальная плевра также с коллагенизацией (19,8±1,4 мкм) и слабо выраженной лимфоплазмоцитарной инфильтрацией.

Таким образом, у экспериментального животного, которому однократно внутриплеврально ввели препарат блеомицин в дозе 15,0 мг/кг, экспозиция - 10 суток, отмечался умеренно выраженный фиброз и скудная воспалительная реакция со стороны париетальной и висцеральной плевр, то есть изменения, морфологически соответствующие III стадии эмпиемы плевры.

Пример 2. Нелинейная белая крыса, самец, масса 272 г. Животному однократно под ингаляционным наркозом по вышеописанной методике введено 15,0 мг/кг блеомицина (всего 4,1 мг) в 1,0 мл физиологического раствора. На 10-е сутки животное выведено из эксперимента под ингаляционным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Проведен забор аутопсийного материала (образцы париетальной плевры - в месте введения блеомицина, висцеральной плевры с субплевральной легочной паренхимой - всего 2 образца) для гистологического исследования. Гистологическое исследование выполнено по стандартным протоколам, с применением методов окрашивания препаратов гематоксилином и эозином и пикрофуксином по ван Гизон. Проведено морфометрическое исследование препаратов, заключающееся в измерении толщины париетальной и висцеральной плевр у каждого животного на препаратах, окрашенных пикрофуксином, с помощью окуляр-микрометра. В каждом препарате проводили до 10 измерений, после чего вычисляли средние величины.

Результаты гистологического исследования: при микроскопии препаратов в месте введения блеомицина выявлено: умеренная коллагенизация висцеральной плевры (53,55±18,61 мкм), скудная воспалительная инфильтрация плевры и субплевральной паренхимы легкого, преимущественно лимфоцитарная и плазмоцитарная. Париетальная плевра также с коллагенизацией (43,6±23,77 мкм) и умеренно выраженной лимфоплазмоцитарной инфильтрацией.

Таким образом, у экспериментального животного, которому однократно внутриплеврально ввели препарат блеомицин в дозе 15,0 мг/кг, экспозиция - 10 суток, отмечался выраженный фиброз и скудное воспаление париетальной и висцеральной плевр, то есть изменения, морфологически соответствующие III стадии эмпиемы плевры.

Пример 3. Нелинейная белая крыса, самка, масса 228 г. Животному однократно под ингаляционным наркозом по вышеописанной методике введено 15,0 мг/кг блеомицина (всего 3,4 мг) в 1,0 мл физиологического раствора. На 10-е сутки животное выведено из эксперимента под ингаляционным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Проведен забор аутопсийного материала (образцы париетальной плевры - в месте введения блеомицина, висцеральной плевры с субплевральной легочной паренхимой - всего 2 образца) для гистологического исследования. Гистологическое исследование выполнено по стандартным протоколам, с применением методов окрашивания препаратов гематоксилином и эозином и пикрофуксином по ван Гизон. Проведено морфометрическое исследование препаратов, заключающееся в измерении толщины париетальной и висцеральной плевр у каждого животного на препаратах, окрашенных пикрофуксином, с помощью окуляр-микрометра. В каждом препарате проводили до 10 измерений, после чего вычисляли средние величины.

Результаты гистологического исследования: при микроскопии препаратов в месте введения блеомицина выявлено: умеренная коллагенизация висцеральной плевры (25,9±4,72 мкм), скудная воспалительная инфильтрация плевры и субплевральной паренхимы легкого, преимущественно лимфоцитарная и плазмоцитарная. Париетальная плевра также с коллагенизацией (31,5±1,38 мкм) и умеренно выраженной лимфоплазмоцитарной инфильтрацией.

Таким образом, у экспериментального животного, которому однократно внутриплеврально ввели препарат блеомицин в дозе 15,0 мг/кг, экспозиция - 10 суток, отмечался умеренно выраженный фиброз и скудное воспаление париетальной и висцеральной плевр, то есть изменения, морфологически соответствующие III стадии эмпиемы плевры.