Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ОСТРОГО ИНФЕКЦИОННОГО МОНОНУКЛЕОЗА, ВЫЗВАННОГО ВИРУСОМ ЭПШТЕЙНА - БАРР У ДЕТЕЙ

Изобретение относится к области медицины, а именно к детским инфекционным болезням, и может быть использовано для определения степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр у детей.

В последние годы повсеместно регистрируется повышение заболеваемости инфекционным мононуклеозом. По данным Управления Роспотребнадзора по Астраханской области показатель заболеваемости инфекционным мононуклеозом в 2000 г. составил 4,63, а в 2015 г. - уже 21,47 на 100 тысяч детского населения (федеральное статистическое наблюдение - форма 2 «Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях»).

Инфекционный мононуклеоз - инфекционное вирусное заболевание, характеризующееся системным лимфопролиферативным процессом доброкачественного характера и сопровождающееся лихорадкой, генерализованной лимфоаденопатией, тонзиллитом, гепатолиенальным синдромом и специфическими изменениями гемограммы. Наиболее патогномоничным этиологическим агентом данного заболевания является вирус Эпштейна-Барр (Хмилевская С.А. Эпштейна-Барр вирусный мононуклеоз: клинико-динамические особенности различных вариантов инфекции. Инфекционные болезни, Т. 6, 3, 2010, с. 570-574).

По степени тяжести выделяют легкую, среднетяжелую и тяжелую формы инфекционного мононуклеоза (Инфекционные болезни у детей: учебник / Учайкин В.Ф. и др. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2011. - 688 с). В научно-медицинской литературе описывается немало наблюдений среднетяжелых и тяжелых форм Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза, которые чаще всего обусловливают переход в хроническое течение, имеются сведения о летальных исходах вследствие разрыва селезенки, поражения нервной системы, сердца, дыхательной системы (Инфекционные болезни у детей: учебник / Учайкин В.Ф. и др. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2011. - 688 с; Инфекционные болезни у детей: учебник для педиатрических факультетов медицинских вузов / Под ред. проф. В.Н. Тимченко. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2008. - 228 с).

Весьма важно своевременно диагностировать среднетяжелую и тяжелую формы тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр для назначения адекватной терапии и предупреждения неблагоприятных последствий.

Известен способ определения формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза на основании анализа клинических критериев (Инфекционные болезни у детей: учебник для педиатрических факультетов медицинских вузов / Под ред. проф. В.Н. Тимченко. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2008. - 228 с.). При условии, что температура тела больного выше 38,5°С, имеют место головная боль, снижение аппетита, недомогание, значительное затруднение носового дыхания, отечность лица, значительное увеличение размеров лимфатических узлов шеи, печени и селезенки, лакунарный тонзиллит, гипертрофия небных миндалин 2-3 степени, жалобы на боль в горле при глотании, диагностируют среднетяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

При условии, что температура тела больного 39,6°С и более, имеют место вялость, адинамия, рвота, головная боль, анорексия, одутловатость и пастозность лица, отсутствие носового дыхания, значительное увеличение лимфатических узлов шеи, тяжелый лакунарный тонзиллит, выраженная гепатоспленомегалия, диагностируют тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Недостатком этого способа является его низкая достоверность, обусловленная отсутствием четких клинических, дифференциально-диагностических критериев, отражающих патогенетические механизмы заболевания, что не позволяет достоверно диагностировать формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Известен способ диагностики тяжелых форм инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр у детей (Аксенов О.А., Букина А.А., Родионова О.В., патент на изобретение №2172956, 27.08.2001), который предусматривает определение в сыворотке крови специфических иммунных комплексов с данным ДНК-содержащим вирусом по увеличению активности экзогенного комплемента при одновременном внесении его в реакцию со специфическими антителами (СИК-1) или вирусом Эпштейна-Барр (СИК-2) с дальнейшим расчетом по формуле активности иммунных комплексов и дифференцировку тяжелых форм от легких по наличию в крови специфических иммунных комплексов СИК-1 более 0,10 относительных единиц или СИК-2 более 0,20 относительных единиц.

Недостатком способа является недостаточная его достоверность, так как невозможно с его помощью дифференцированно диагностировать легкую и среднетяжелую формы заболевания.

Известен способ прогнозирования тяжести инфекционного мононуклеоза различной этиологии у детей (патент РФ 2360255, 2009, БИПМ 18). Здесь описан способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей, предусматривающий исследование цитокинов в сыворотке крови больного. Способ осуществляют следующим образом. С помощью метода сэндвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем производства ООО «Цитокин» (г. СПб) в сыворотке крови больного исследуют цитокины: ИЛ-2, ИЛ-6 и ИЛ-8 и определяют их концентрацию. При получении следующих показателей: при первом обследовании (с 1 по 3 день болезни) при ИЛ-6 ниже 160 пг/мл, ИЛ-8 ниже 200 пг/мл, ИЛ-2 ниже 20 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр инфекционного мононуклеоза; при уровне сывороточных цитокинов в начале заболевания (с 1 по 3 день болезни) ИЛ-6 выше 1075 пг/мл, ИЛ-8 выше 910 пг/мл, ИЛ-2 выше 70 пг/мл диагностируют тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр инфекционного мононуклеоза.

Недостатком данного способа является недостаточная достоверность и ограниченные функциональные возможности способа, обусловленные возможностью диагностики только в первые 3 дня болезни; его сложность, обусловленная необходимостью специально обученного персонала; высокая стоимость проведения исследования, а следовательно его малодоступность.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей (Способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей. Симованьян Э.М., Харсеева Г.Г., Ким М.А., Лабушкина А.В., Алутина Э.Л., патент на изобретение №2471196, 02.11.2011), предусматривающий исследование концентрации сывороточных цитокинов: ИЛ-1 и рецепторного антагониста ИЛ-1 (РА ИЛ-1) и при выполнении условия ИЛ-1≥20 пг/мл и РА ИЛ-1≤1197 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму, при выполнении условия ИЛ-1<20 пг/мл и РА ИЛ-1>1197 пг/мл - тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Недостатком этого способа является недостаточная достоверность, так как ИЛ-1 обладает плейотропизмом (выполняет как провоспалительные, так и противовоспалительные функции, инициирует острофазовый ответ) и является неспецифическим показателем, что затрудняет интерпретацию результатов. Кроме того, значения ИЛ-1 и РА ИЛ-1 в сыворотке крови очень вариабельны, поэтому для повышения степени достоверности, необходимо исследовать с другими острофазовыми белками (А.Ю. Громова, А.С. Симбирцев. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека. Цитокины и воспаление, т. 4, 2, 2005, с. 3-12).

Заявляемый способ определения степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр является новым и в литературе не описан.

Изобретение направлено на повышение достоверности и расширение функциональных возможностей определения степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр.

Технический результат достигается тем, что у больных инфекционным мононуклеозом дополнительно определяют в сыворотке крови содержание малонового диальдегида и при содержании малонового диальдегида в сыворотке крови в пределах от 1,10 до 6,10 ммоль/л оценивают тяжесть состояния как легкую, при содержании малонового диальдегида в пределах от 6,11 до 10,15 ммоль/л оценивают тяжесть состояния как среднетяжелую, а при содержании малонового диальдегида не менее 10,16 ммоль/л оценивают тяжесть состояния как тяжелую.

Установлено, что содержание малонового диальдегида в сыворотке крови, отражая активность процессов перекисного окисления липидов и степень выраженности эндогенной интоксикации в организме больного, является маркером тяжести состояния больного острым инфекционным мононуклеозом и может быть использовано для оценки эффективности лечения.

Подробное описание способа и примеры его практического выполнения.

Предлагаемый способ прошел успешную апробацию на базе БГУЗ АО «Областная инфекционная клиническая больница им. Ничоги А.М.» г. Астрахани в течение 2012-2014 годов.

Содержание малонового диальдегида было изучено у 32 пациентов в возрасте от 1 до 15 лет с диагнозом инфекционный мононуклеоз.

В качестве контрольной группы использовали образцы сыворотки крови условно-здоровых детей (n=30).

Биологическим материалом служила кровь, взятая из локтевой вены больных при поступлении в стационар. Пробирка с направлением транспортировалась в лабораторию, где венозная кровь отстаивалась до полного свертывания. После образования фибринового сгустка пробирку центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин.

Содержание малонового диальдегида в сыворотке крови определяли на фотометре «КФК-3-01» (Россия) при длине волны 535 нм по методике Jagi К. (1968) в модификации Д.И. Кузьменко и Б.И. Лаптева (1999) (Кузьменко Д.И., Лаптева Б.И. Оценка резерва липидов сыворотки крови для перекисного окисления в динамике окислительного стресса у крыс. Вопросы медицинской химии, 1, 1999, с. 12-18). Согласно методике для определения уровня малонового диальдегида к 0,15 мл сыворотки добавляли 1,5 мл 1% раствора фосфорной кислоты и 0,5 мл 0,6% раствора 2-ТБК. Полученную смесь помещали в кипящую водяную баню на 45 мин. После охлаждения проб цветной комплекс в течение 2 мин экстрагировали в 2,0 мл н-бутанола. Оптическую плотность окрашенного бутанолового экстракта определяли при 535 нм против контроля, где сыворотка была заменена 0,15 мл 0,9% раствора NaCl. Результат определяется в ммоль/л.

Все данные, полученные в ходе исследования, обработали методами параметрической статистики с помощью программы Microsoft Excel с опцией «Анализ данных». Вычисляли M (среднее арифметическое), m (ошибку средней), SD (стандартное отклонение). Для оценки различий средних тенденций между группами использовали критерий Манна-Уитни (U). Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Различия значений считали достоверными при уровне вероятности более 95% (р<0,05).

Результаты содержания малонового диальдегида в сыворотке крови у больных инфекционным мононуклеозом представлены в таблице 1.

Ниже приводятся результаты апробации:

Клинический пример 1

Больной Α., 3 года 5 мес, поступил в ГБУЗ АО ОИКБ им. Ничоги A.M. на 3-й день болезни с жалобами на повышение температуры до фебрильных цифр, опухолевидное образование в области шеи, затрудненное носовое дыхание.

Объективно при поступлении: общее состояние неудовлетворительное. В сознании. Активный. Аппетит и сон не нарушены. Кожные покровы бледные без патологических элементов. Пальпировались подчелюстные лимфоузлы до 1 размера, передне- и заднешейные до 2 размера, эластичной консистенции, безболезненные, не спаянные между собой и окружающими тканями. В зеве умеренная гиперемия. Миндалины до 1 размера, рыхлые, умеренно гипертрофированные без налета. Печень пальпировалась на 1 см из-под правого края реберной дуги, селезенка - не увеличена.

В крови больного были выявлены маркеры ВЭБ инфекции: anti-VEB-VCA IgM, ДНК ВЭБ, что в совокупности с клинической картиной свидетельствовало о наличии вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Больному, согласно заявляемому способу было проведено исследование сыворотки крови для определения степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр. Содержание малонового диальдегида в сыворотке крови составило 5,40 ммоль/л.

При выполнении условия МДА=5,40 ммоль/л ребенку был поставлен окончательный диагноз: острый инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр, легкая форма.

Больному было назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагностики степени тяжести заболевания.

Клинический пример 2

Больная К., 4 года 5 мес, поступила в ГБУЗ АО ОИКБ им. Ничоги A.M. на 3-й день болезни с жалобами на повышение температуры тела до фебрильных цифр, увеличение лимфоузлов, боль при глотании, затруднение носового дыхания, «храп» во сне, снижение аппетита.

Объективно при поступлении: общее состояние средней степени. Температура тела 38,4°С. В сознании. Вяловата, адинамична. Кожные покровы бледные без патологических элементов. Пальпировались периферические лимфоузлы: передне- и заднешейные до 2 см плотновато-эластичной консистенции в виде «цепочки», безболезненные, кожа над ними не изменена, подчелюстные до 1-2 см, паховые до 1 см, безболезненные. Печень пальпировалась на 2,5-3 см ниже правого края реберной дуги, селезенка - на 1 см.

В крови больного были выявлены маркеры ВЭБ инфекции: anti-VEB-VCA IgM, ДНК ВЭБ, что в совокупности с клинической картиной свидетельствовало о наличии вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Больному согласно заявляемому способу было проведено исследование сыворотки крови для определения степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр. Содержание малонового диальдегида в сыворотке крови составило 8,27 ммоль/л.

При выполнении условия МДА=8,27 ммоль/л ребенку был поставлен окончательный диагноз: острый инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр, среднетяжелая форма.

Больному было назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагностики степени тяжести заболевания.

Клинический пример 3

Больной М., 6 лет, поступил в ГБУЗ АО ОИКБ им. Ничоги A.M. на 5-й день болезни с жалобами на повышение температуры до фебрильных цифр, увеличение лимфоузлов, боль при глотании, выраженное затруднение носового дыхания, «храп» во сне, снижение аппетита, вялость, адинамичность, нарушение сна.

Объективно при поступлении: общее состояние тяжелое. Температура тела 40,1°С. Отмечались вялость, адинамичность, «храпящее» дыхание с открытым ртом. Кожные покровы бледные без патологических элементов, отмечалась пастозность лица. Отмечалась генерализованная лимфаденопатия. Печень пальпировалась на 5 см ниже правого края реберной дуги, селезенка - на 2 см.

В крови больного были выявлены маркеры ВЭБ инфекции: anti-VEB-VCA IgM, ДНК ВЭБ, что в совокупности с клинической картиной свидетельствовало о наличии вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Больному, согласно заявляемому способу было проведено исследование сыворотки крови для определения степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр. Содержание малонового диальдегида в сыворотке крови составило 17,40 ммоль/л.

При выполнении условия МДА=17,40 ммоль/л ребенку был поставлен окончательный диагноз: острый инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр, тяжелая форма.

Больному было назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагностики степени тяжести заболевания.

Заявляемым способом достигается повышение достоверности и расширение функциональных возможностей диагностики степени тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр.