Результат интеллектуальной деятельности: Метод определения формирования угрозы выкидыша эмбриона на первом триместре гестации при действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на фактор, индуцируемый гипоксией

1. Цель изобретения - разработать метод формирования интенсивности кровоснабжения плаценты на первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, повышающей фактор, индуцируемый гипоксией.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке метода прогнозирования выкидыша эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции, повышающей на первом триместре гестации фактора, индуцируемого гипоксией.

3. Раскрытие изобретения

Для организма необходимы условия поддержания внутриклеточного парциального давления кислорода на адекватном уровне, так как избыток или недостаток кислорода крайне опасны для тканевого метаболического гомеостаза. При гипоксии нарушается энергетический обмен, а избыток его является причиной генерировать реактивные вещества, поражающие белки и нуклеиновые кислоты [1, 2]. Гомеостаз кислорода поддерживается фактором, индуцируемым гипоксией (hypoxia inductor factor - Hif's) [3]. Hif-1α и Hif-2β контролируют передачу кислорода тканям путем передачи регуляции экспрессии генных продуктов, включающихся в клеточный энергетический метаболизм Hif-1 связывается с белком гена von Hippel-Lindau (VHL), который обладает способностью к деградации Hif-1α. При низком уровне кислорода Hif-1α образует активный комплекс с β-субъединицей, в результате чего становится стабильным [4, 5]. Установлено, что повышение Hif-1α, Hif-β во время эмбриогенеза свидетельствует о недостаточности кровоснабжения, что приводит к гибели эмбриона внутриутробного или в перинатальном периоде [6].

4. Новая техническая задача

Разработать метод, позволяющий оценивать интенсивность формирования кровоснабжения плаценты в случае обострения на первом триместре гестации цитомегаловирусной инфекции.

5. В доступной литературе описывается метод определения Hif-1α с использованием иммуноферментного анализа у 79 взрослых пациентов с гемолитической анемией, наследственным гемохроматозом и апластической анемией [1]. Однако авторы ограничились лишь определением количества Hif-1α у перечисленных больных. В отличие от вышеуказанных исследований в настоящей работе предпринята попытка изучить метод регуляции кровоснабжения жизненно важного органа плаценты на первом триместре гестации, когда при нарушении регуляции кровоснабжения органа происходит задержка развития эмбриона или его гибель. Было установлено, что обострение цитомегаловирусной инфекции на первом триместре гестации повышает активность Hif-1α, что свидетельствует о задержке кровоснабжения через кровеносные сосуды ворсинок плаценты развивающегося эмбриона, создавая условия его преждевременной гибели.

6. Осуществление изобретения

6.1 Обследовано 30 беременных на 10-12 неделях гестации с активизацией ХЦМВИ с титром антител к ЦМВ 1:1600 и 20 беременных, не содержавших в периферической крови антител к ЦМВ. Диагноз: обострение ХЦМВИ устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM к ЦМВ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней до 1:1600, индекса авидности более 65%, а также наличия ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекс авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.2. Фактор, индуцируемый гипоксией (hypoxia inductor factor - Hif-1α), определяли в гомогенате плаценты с помощью иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Stat Fax 2100» (США) с помощью наборов «ВСМ Diagnostics».

6.3. Статистический анализ и обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений M±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n₁+n₂-2. Для определения достоверности различий использовался непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимались во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений – непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.

7. Полученные данные

Разработанный метод позволяет у беременных на первом триместре гестации определять при обострении ХЦМВИ на 10-12 неделях гестации при титре антител IgG к ЦМВ 1:1600 интенсивность кровоснабжения плаценты снижается, поскольку при обострении ЦМВИ повышается активность Hif-1α до 4,2±0,09 нг/мл (контроль - 3,2±0,02 нг/мл). Повышенные показатели Hif-1α свидетельствуют о недостаточности парциального давления кислорода в клетках плаценты, что создает угрозу гибели эмбриона.

Литература

1. Левина А.А., Макешова А.Б., Мамукова Ю.И., Романова Е.А., Сергеева А.И., Казюкова Т.В. Регуляция гомеостаза кислорода, фактор, индуцированный гипоксией (HIF), и его значение в гомеостазе кислорода // Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова. Чебоксары РФ. ГУ Гематологический научный центр РАМН, Москва. 2008. С. 92-97.

2. Maxwell P. HIF-1: An oxygen response system with special relevance to the kidney // J. Amer. Soc. Nephrol. 2003. Vol. 14. P. 2712-2722.

3. Smith T.G., Roblins P.A., Ratelife P. The human side of hypoxia inductor factor // J. Brit. Haemotol. 2008. Vol. 141. P. 325-334.

4. Hirota K., Semenza G.L. Regulation of angiogenesis by hypoxia inductor factor 1 // Critical Reviews in oncology / hematology. 2006. Vol. 59. P. 15-26.

5. Haase V.H. The VHL tumor supressior in development and disease: functional studies in mise by conditional gene targeting // Semin. Cell. Dev. Biol. 2005. Vol. 16. P. 564-574.

6. Haase V.H. Hypoxia inductor factor in the kidney // J. Amer. Pysiol. Renal. Physiol. 2006. Vol. 291. P. 271-281.