×
25.08.2017
217.015.ac27

Результат интеллектуальной деятельности: Способ определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к биохимии и касается способов определения пероксидазной активности нейтрофилов в мазках крови. Способ предусматривает подготовку биологического субстрата. Подготовленный биологический субстрат обрабатывают буферно-инкубационной смесью на основе 4-метилпарааминофенол сульфата. Осуществляют инкубацию в темноте с последующим инкубированием, промыванием дистиллированной водой, сушкой и микроскопированием. Изобретение позволяет повысить точность способа.

Изобретение относится к биохимической диагностике и касается способа определения пероксидазной активности нейтрофилов в мазках крови, что может быть использовано в прогнозировании развития заболеваний и выборе стратегии их лечения.

Установлено, что в клетках крови у клинически здоровых животных определяется высокая активность миелопероксидазы, а у больных - снижена. Активность миелопероксидазы снижена в нейтрофилах при инфекционных лейкоцитозах и некоторых метастазирующих опухолях. Определение активности миелопероксидазы клеток крови является одним из тестов иммунного статуса организма животных.

В цитологических исследованиях определение миелопероксидазы осуществляется с помощью бензидиновой пробы. Общепринятые методики основаны на окислении бензидина пероксидпероксидной системой до нестабильного бензидинового синего, который самопроизвольно превращается в стабильный бензидиновый коричневый.

Известны методы определения миелопероксидазы, описанные в научных и патентных публикациях.

Определение пероксидазы в мазках периферической крови и костного мозга человека [Graham (1966) З. Лойда, Р. Госсрай, Т. Шиблер. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. Пер. с англ. к.б.н. И.Б. Бухвалова, к.м.н. О.В. Копьева, под ред. проф. Н.Т. Райхлина. М.: изд. "Мир", 1982, с. 206]; Определение миелопероксидазы в крови [Справочник. Медицинские лабораторные технологии. / Под редакцией А.И. Карпищенко, издательство Санкт-Петербурга "Интермедика", 1999. Т. 2, с. 298]; «Способ выявления пероксидазы в иммунокомпетентных органах животных» [патент РФ №2198403, МПК7 G01N 33/50, C12Q 1/28, опубликован 10.02.2003, авторы Гугушвили Н.Н., Радуль Н.П., Шевкопляс В.Н.]; «Способ определения пероксидазной активности гемоглобина в плазме крови» [патент РФ №2458992, публ. 20.08.2012, авторы Горудко И.В., Панасенко О.М., Григорьева Д. В., Соколов А. В., Черенкевич С.Н., Сергиенко В.И.]; «Способ определения активности пероксидаз и субстратная смесь для определения активности пероксидаз» [патент РФ №2525137, опубликован 10.08.2014, авторы Сахаров И.Ю., Вдовенко М.М., Демьянова А.С.] и др.

Одним из недостатков перечисленных способов выявления миелопероксидазной активности является использование бензидина, который обладает канцерогенным действием.

Наиболее близким к заявляемому техническому решению по совокупности существенных признаков является способ определения миелопероксидазы в крови, включающий подготовку биологического субстрата, обработку его буферно-инкубационной смесью, инкубацию биологического субстрата с последующим высушиванием и микроскопированием, выбранный нами в качестве прототипа [Справочник. Медицинские лабораторные технологии. / Под редакцией А.И. Карпищенко, издательство Санкт-Петербурга "Интермедика", 1999. Т. 2, с. 298], включающий подготовку биологического субстрата, обработку его буферно-инкубационной смесью, инкубацию биологического субстрата с последующим высушиванием и микроскопированием.

Недостатками данного метода являются затруднительное получение растворения бензидина в органических растворителях и нагревание раствора, что влечет за собой разложение бензидина, а также отсутствие окраски ядер нейтрофилов.

Техническим результатом изобретения является снижение вредности используемых веществ, в том числе канцерогенности, т.е. изыскание безвредного вещества, не уступающего по чувствительности бензидину, а также снижение себестоимости методики.

Поставленная задача достигается тем, что в способе цитологического определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных используется реакция с метолом, которая основана на окислении метола пероксидпероксидной системой.

Для решения поставленной задачи проводят подготовку биологического субстрата, обработку его буферно-инкубационной смесью, инкубацию биологического субстрата с последующим высушиванием и микроскопированием. Для приготовления буферно-инкубационной смеси используют 4-метилпарааминофенол сульфат (коммерческое название - метол) - вещество, не являющееся дефицитным, используется в сочетании с гидрохиноном для проявления фото- и кинопленки, он значительно дешевле бензидина, и что наиболее важно - безвреден для организма человека. Метол представляет собой белый порошок либо бесцветные кристаллы (крупноразмерный вариант). Достаточно неплохо растворяется в воде (растворимость составляет 5 г на 100 мл), но при этом не растворяется в органических растворителях. Метол легко окисляется под действием атомарного кислорода, который образуется при разрушении перекиси водорода. Это свойство метола используется нами в заявленном способе определения миелопероксидазы.

Подготовку биологического субстрата осуществляют, фиксируя мазки крови животных 96 об.% этиловым спиртом или в парах 40% формалина.

Для получения буферно-инкубационной смеси готовят 0,1 М трис-HCl буфер (рН 7,2-7,5). В день исследования 10 мг метола растворяют в 10 мл дистиллированной воды, к полученному раствору добавляют 13,5-14 мл 0,1 М трис-HCl буфера и 2-3 капли 1% раствора перекиси водорода и осуществляют инкубацию мазков крови в темноте в течение 5 мин. После окончания инкубации мазков крови их промывают дистиллированной водой, высушивают и дополнительно окрашивают ядра клеток 0,5%-водным раствором сафранина или нейтрального красного, что позволяет определить нейтрофилы крови по форме ядер. Окрашенные мазки крови промывают дистиллированной водой, сушат и микроскопируют, используя иммерсионный объектив светового микроскопа. Относительный процент пероксидазопозитивных нейтрофилов периферической крови животных определяют после подсчета 100 нейтрофилов. Об активности исследуемого фермента судят по количеству специфически окрашенных в коричневый цвет гранул в цитоплазме пероксидазопозитивных нейтрофилов крови животных.

Новизна обусловлена тем, что в предложенном способе используется метол, не обладающий способностью ингибировать активность миелопероксидазы гранулоцитов крови животных и не обладающий канцерогенным действием. Для сопоставления результатов и сравнения с известными методами и способами выявления миелопероксидазы с помощью бензидинового реактива проводилась микроскопия мазков крови с использованием иммерсионной системы при увеличении (90×10). Активность определяемого фермента устанавливали по интенсивности окрашивания и количеству гранул коричневого цвета в цитоплазме нейтрофилов.

При визуальной оценке цитохимической реакции учитывали различную степень активности фермента:

0-я степень - окрашено только ядро нейтрофилов, цитоплазма не окрашена, не видно контуров гранул;

1-я степень - вся цитоплазма диффузно окрашена в светло-коричневый цвет или окрашено не более 1/4 цитоплазмы;

2-я степень - в цитоплазме видны хорошо окрашенные в коричневый цвет

гранулы;

3-я степень - всю цитоплазму занимают гранулы, но ядро свободно от гранул;

4-я степень - гранулы занимают всю цитоплазму и наслаиваются на ядро.

Средний цитохимический индекс (СЦИ) выводили по следующей формуле, предварительно подсчитывая 100 нейтрофилов,

где а, б, в, г, д - количество клеток соответственно 0, 1, 2, 3, 4-й степени.

Заявляемый способ является экспресс-методом для проведения цитохимического анализа активности миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах в мазках крови животных. Способ позволяет определять как относительный процент пероксидазопозитивных нейтрофилов крови, так и внутриклеточную активность исследуемого фермента, что дает возможность оценить состояние клеточных микробицидных систем крови, принимающих участие в формировании неспецифической резистентности организма животных.

Заявляемый способ является более экономичным, т.к. метол не относится, по сравнению с бензидином, к дорогостоящим химическим реактивам.

Способ определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных, включающий подготовку биологического субстрата, обработку его буферно-инкубационной смесью, инкубацию биологического субстрата с последующим высушиванием и микроскопированием, отличающийся тем, что используют буферно-инкубационную смесь на основе 4-метилпарааминофенол сульфата.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 65.
20.04.2016
№216.015.3717

Способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов

Изобретение относится к области защиты растений. Предложен способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов. Способ включает заражение насекомых вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц I-III возрастов кормят питательной средой, содержащей 10-10 полиэдров на 1 мг...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002581794
Дата охранного документа: 20.04.2016
12.01.2017
№217.015.6118

Способ синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты

Изобретение относится к способу синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты. Способ включает добавление в раствор гидразида иминодиуксусной кислоты в метаноле салицилового альдегида, выдержку полученного осадка в течение не менее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002591197
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.8354

Способ стимуляции всхожести семян пшеницы

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к растениеводству и нанобиотехнологиям. Способ стимуляции всхожести семян пшеницы включает обработку семян раствором биологически активного вещества, при этом в качестве биологически активного вещества используют водорастворимую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601578
Дата охранного документа: 10.11.2016
13.01.2017
№217.015.85e3

Способ коррекции мышечно-тонической асимметрии паравертебральной зоны человека

Изобретение относится к спортивной медицине, физической реабилитации и может быть использовано для коррекции функциональных нарушений позвоночника, связанных с мышечным дисбалансом, например сколиозов, остеохондроза, нарушений осанки, для профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002603619
Дата охранного документа: 27.11.2016
25.08.2017
№217.015.a265

Способ определения состояния структурно-функциональной незавершённости печени у новорожденных ягнят

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения состояния структурно-функциональной незавершенности печени у новорожденных ягнят. Способ характеризуется тем, что определяют топографию печени, гистологически устанавливают структуру паренхимы и стромы печени, биохимически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606972
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.ae65

Способ повышения продолжительности жизни моллюсков abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток

Техническое решение относится к области прикладной физиологии и морфологии гидробионтов, малакологии, экспериментальной медицины и физиологии и касается способа повышения продолжительности жизни моллюсков Abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток. Представленный способ в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612913
Дата охранного документа: 13.03.2017
25.08.2017
№217.015.b86d

Способ изготовления наливки "писсардовка"

Плоды декоративной сливы Писсарда (Prunus cerasifera var. pissardii) накалывают деревянной палочкой, помещают в прозрачные стеклянные емкости, при этом слои ягод в пропорции 4:1 по массе чередуют со слоями сахара, делают водяной затвор, помещают емкость в теплое солнечное место и сбраживают,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002615451
Дата охранного документа: 04.04.2017
25.08.2017
№217.015.c068

Способ выращивания монокристаллической пленки febo на диамагнитной подложке

Изобретение относится к области получения монокристаллических пленок на подложках для магнитных, оптических, магнитооптических и резонансных исследований. Шихту наплавляют в платиновый тигель, компоненты берут в соотношении, мас.%: FeO - 5,37, ВО - 51,23, PbO - 29,31, PbF - 13,73. После этого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616668
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.c1fd

Способ определения состояния структурной незавершённости почек у новорожденных ягнят

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной неонатологии, клинической диагностике и терапии животных. Для определения состояния структурной незавершенности почек у новорожденных ягнят визуально при вскрытии определяют топографию и морфометрию почек, гистологически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002617663
Дата охранного документа: 25.04.2017
26.08.2017
№217.015.e888

Платформенный сборно-монолитный стык

Изобретение относится к области строительства и предназначено для устройства сборно-монолитных стыков панелей стен с проемами и перекрытий в панельных и панельно-рамных жилых, гражданских, производственных и других зданиях и сооружениях. Платформенный сборно-монолитный стык включает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002627524
Дата охранного документа: 08.08.2017
Показаны записи 1-10 из 26.
20.04.2016
№216.015.3717

Способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов

Изобретение относится к области защиты растений. Предложен способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов. Способ включает заражение насекомых вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц I-III возрастов кормят питательной средой, содержащей 10-10 полиэдров на 1 мг...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002581794
Дата охранного документа: 20.04.2016
12.01.2017
№217.015.6118

Способ синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты

Изобретение относится к способу синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты. Способ включает добавление в раствор гидразида иминодиуксусной кислоты в метаноле салицилового альдегида, выдержку полученного осадка в течение не менее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002591197
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.8354

Способ стимуляции всхожести семян пшеницы

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к растениеводству и нанобиотехнологиям. Способ стимуляции всхожести семян пшеницы включает обработку семян раствором биологически активного вещества, при этом в качестве биологически активного вещества используют водорастворимую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601578
Дата охранного документа: 10.11.2016
13.01.2017
№217.015.85e3

Способ коррекции мышечно-тонической асимметрии паравертебральной зоны человека

Изобретение относится к спортивной медицине, физической реабилитации и может быть использовано для коррекции функциональных нарушений позвоночника, связанных с мышечным дисбалансом, например сколиозов, остеохондроза, нарушений осанки, для профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002603619
Дата охранного документа: 27.11.2016
25.08.2017
№217.015.a265

Способ определения состояния структурно-функциональной незавершённости печени у новорожденных ягнят

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения состояния структурно-функциональной незавершенности печени у новорожденных ягнят. Способ характеризуется тем, что определяют топографию печени, гистологически устанавливают структуру паренхимы и стромы печени, биохимически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606972
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.ae65

Способ повышения продолжительности жизни моллюсков abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток

Техническое решение относится к области прикладной физиологии и морфологии гидробионтов, малакологии, экспериментальной медицины и физиологии и касается способа повышения продолжительности жизни моллюсков Abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток. Представленный способ в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612913
Дата охранного документа: 13.03.2017
25.08.2017
№217.015.b86d

Способ изготовления наливки "писсардовка"

Плоды декоративной сливы Писсарда (Prunus cerasifera var. pissardii) накалывают деревянной палочкой, помещают в прозрачные стеклянные емкости, при этом слои ягод в пропорции 4:1 по массе чередуют со слоями сахара, делают водяной затвор, помещают емкость в теплое солнечное место и сбраживают,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002615451
Дата охранного документа: 04.04.2017
25.08.2017
№217.015.c068

Способ выращивания монокристаллической пленки febo на диамагнитной подложке

Изобретение относится к области получения монокристаллических пленок на подложках для магнитных, оптических, магнитооптических и резонансных исследований. Шихту наплавляют в платиновый тигель, компоненты берут в соотношении, мас.%: FeO - 5,37, ВО - 51,23, PbO - 29,31, PbF - 13,73. После этого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616668
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.c1fd

Способ определения состояния структурной незавершённости почек у новорожденных ягнят

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной неонатологии, клинической диагностике и терапии животных. Для определения состояния структурной незавершенности почек у новорожденных ягнят визуально при вскрытии определяют топографию и морфометрию почек, гистологически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002617663
Дата охранного документа: 25.04.2017
26.08.2017
№217.015.e888

Платформенный сборно-монолитный стык

Изобретение относится к области строительства и предназначено для устройства сборно-монолитных стыков панелей стен с проемами и перекрытий в панельных и панельно-рамных жилых, гражданских, производственных и других зданиях и сооружениях. Платформенный сборно-монолитный стык включает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002627524
Дата охранного документа: 08.08.2017
+ добавить свой РИД