×
20.04.2016
216.015.3717

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ БАКУЛОВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Вид РИД

Изобретение

№ охранного документа
0002581794
Дата охранного документа
20.04.2016
Аннотация: Изобретение относится к области защиты растений. Предложен способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов. Способ включает заражение насекомых вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц I-III возрастов кормят питательной средой, содержащей 10-10 полиэдров на 1 мг среды. Через 2-5 дней после заражения пульверизатором осуществляют наружную обработку насекомого водным раствором консервативного короткого 18 нуклеотидов длиной антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда с последовательностью 5′-CGACGTGGTGGCACGGCG-3′ в концентрации 10 пмоль/мкл. Изобретение обеспечивает увеличение скорости действия бакуловирусных препаратов.
Основные результаты: Способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов, включающий использование полиэдров вируса ядерного полиэдроза, избирательно действующих на гусениц непарного шелкопряда, отличающийся тем, что предварительно проводят заражение насекомых вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц I-III возрастов кормят питательной средой, содержащей 10-10 полиэдров на 1 мг среды, через 2-5 дней после этого пульверизатором осуществляют наружную обработку насекомого водным раствором консервативного короткого 18 нуклеотидов длиной антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда с последовательностью 5′-CGACGTGGTGGCACGGCG-3′ в концентрации 10 пмоль/мкл.

Изобретение относится к области защиты растений, и может быть использовано в технологиях применения инсектицидных препаратов на основе бакуловирусов, повышая их эффективность.

На сегодняшний день большинство бакуловирусных препаратов не находят широкого применения из-за медленного действия на целевых насекомых, а также дорогой технологии производства таких препаратов. Между тем именно бакуловирусы обладают высокой избирательностью в действии и являются природным регулятором численности многих серьезных насекомых-вредителей, таких как непарный шелкопряд, хлопковая совка, американская белая бабочка и др. Много исследований направлено на увеличение скорости действия бакуловирусных препаратов путем генетической модификации вирусов. Благодаря системе своих антиапоптозных генов бакуловирусы эффективно сдерживают апоптоз клеток хозяина, что дает им возможность выиграть время для репликации, и этот же факт снижает скорость действия бакуловирусных препаратов.

Известен способ повышения эффективности действия бакуловирусных препаратов [Gramkow A.W., Perecmanis S., Sousa R.L.B., Noronha E.F., Felix C. R., Nagata Т., Ribeiro B.M. (2010). Insecticidal activity of two proteases against Spodoptera frugiperda larvae infected with recombinant baculoviruses. Virol. J. 29(7):143], в котором используются рекомбинантные бакуловирусы, получаемые путем биотехнологических приемов, таких как амплификация необходимого гена и его встраивание в целевой бакуловирус.

Недостатками этого метода являются дороговизна предлагаемого подхода и возможные экологические риски, связанные с применением генетически модифицированных бакуловирусов.

Техническим результатом изобретения является увеличение скорости действия бакуловирусных препаратов. За счет изменения технологических приемов обеспечивается быстрая смертность целевого насекомого-вредителя - непарного шелкопряда.

Поставленная задача решается таким образом, что способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов включает предварительное заражение непарного шелкопряда вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц кормят питательной средой, содержащей 103-104 полиэдров на 1 мг среды, через 2-5 дней после этого пульверизатором осуществляют наружную обработку насекомого водным раствором короткого 18 нуклеотидов длиной консервативного антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда с последовательностью 5′-CGACGTGGTGGCACGGCG-3′ в концентрации 10 пмоль/мкл таким образом, чтобы на гусеницу I-III возрастов попало не менее 0,1-0,3 мкл раствора.

Причинно-следственная связь между отличительными признаками изобретения и достигаемым техническим результатом заключается в том, что антисмысловой фрагмент антиапоптозного гена бакуловируса смещает биохимические реакции зараженных клеток насекомого (в наших экспериментах - непарного шелкопряда) в сторону апоптоза, однако детали механизма смещения этих реакций в науке на данный момент окончательно не выяснены.

Автором заявляемого технического решения впервые выявлено достоверное инсектицидное влияние короткого антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза на зараженных этим вирусом гусениц его хозяина - непарного шелкопряда. И поскольку влияние этого фрагмента на зараженных гусениц непарного шелкопряда выявлено впервые, это доказывает существенность отличий.

Пример конкретного осуществления способа

Для эксперимента на Южном берегу Крыма была собрана яйцекладка непарного шелкопряда Lymantria dispar (Lepidoptera: Erebidae). Гусеницы до обработки фрагментами ДНК были заражены вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц кормили питательной средой, содержащей 104 полиэдров на 1 мг среды. В среднем, для каждого варианта группы эксперимента было использовано 20-25 гусениц 1-го личиночного возраста. Через 2 дня на насекомых с помощью пульверизатора был нанесен водный раствор фрагментов ДНК в концентрации 10 пмоль/мкл в количестве не менее 0,1-0,3 мкл на гусеницу. Последовательность примененного антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 (Inhibitor of Apoptosis, ингибитор апоптоза) вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда была следующей: 5′-CGA CGT GGT GGC ACG GCG-3′. Гусеницы из контрольных групп были обработаны водой или олигонуклеотидами со следующими последовательностями: 5′-CG CG CG CG CG CG CG CG CG-3′, 5′-GCT GCA CCA CCG TGC CGC-3′. Фрагменты были синтезированы компанией Metabion international AG (Германия) с очисткой HPLC. Все насекомые выращивались на стандартной питательной среде, основанной на проростках пшеницы при температуре 25°С. Для заражения насекомых был использован бакуловирусный препарат "ВИРИН-НШ" (Россия). Для обнаружения эффективности заражения вирусом ядерного полиэдроза непарного шелкопряда была применена полимеразная цепная реакция и пара специфических праймеров: 5′-ACG ТТС TCG TTG AAC GTG CTG-3′ и 5′-CTG GTG AAC САС AAA АСС CTG-3′. Был использован χ2-критерий Пирсона с поправкой Йетса для оценивания инсектицидного действия фрагментов ДНК. Эксперимент повторили трижды.

Эксперимент впервые выявил достоверное инсектицидное влияние антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза на зараженных этим бакуловирусом гусениц непарного шелкопряда по сравнению с контрольной группой, содержащей зараженных вирусом гусениц, обработанных водой. Наоборот, два контрольных олигонуклеотида не обнаружили достоверного инсектицидного действия на зараженных бакуловирусом гусениц непарного шелкопряда по сравнению с контролем в течение 14 дней исследования. Впервые достоверность в смертности по сравнению с контролем возникла на 7 день в группе зараженных бакуловирусом гусениц непарного шелкопряда и обработанных антисмысловым фрагментом антиапоптозного гена IAP-3 вируса и составила 74,1% против 53,3% в контроле (χ2=5,51; N=138; Р<0,05); в течение следующих 7 дней разница в смертности повысилась и составила 87,9% против 63,3% в контроле (χ2=9,62; N=138; Р<0,01). Таким образом, на фоне бакуловирусной инфекции антисмысловой фрагмент антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда проявил достоверное инсектицидное действие на гусениц непарного шелкопряда.

По сравнению с прототипом заявленный способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов отличается большей доступностью и представляется экологически более безопасным.

Полученные результаты показывают возможность совместного применения бакуловирусных препаратов и антисмысловых фрагментов антиапоптозных генов бакуловирусов в практике сельского и лесного хозяйства с целью защиты растений.

Способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов, включающий использование полиэдров вируса ядерного полиэдроза, избирательно действующих на гусениц непарного шелкопряда, отличающийся тем, что предварительно проводят заражение насекомых вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц I-III возрастов кормят питательной средой, содержащей 10-10 полиэдров на 1 мг среды, через 2-5 дней после этого пульверизатором осуществляют наружную обработку насекомого водным раствором консервативного короткого 18 нуклеотидов длиной антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда с последовательностью 5′-CGACGTGGTGGCACGGCG-3′ в концентрации 10 пмоль/мкл.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 66.
12.01.2017
№217.015.6118

Способ синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты

Изобретение относится к способу синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты. Способ включает добавление в раствор гидразида иминодиуксусной кислоты в метаноле салицилового альдегида, выдержку полученного осадка в течение не менее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002591197
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.8354

Способ стимуляции всхожести семян пшеницы

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к растениеводству и нанобиотехнологиям. Способ стимуляции всхожести семян пшеницы включает обработку семян раствором биологически активного вещества, при этом в качестве биологически активного вещества используют водорастворимую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601578
Дата охранного документа: 10.11.2016
13.01.2017
№217.015.85e3

Способ коррекции мышечно-тонической асимметрии паравертебральной зоны человека

Изобретение относится к спортивной медицине, физической реабилитации и может быть использовано для коррекции функциональных нарушений позвоночника, связанных с мышечным дисбалансом, например сколиозов, остеохондроза, нарушений осанки, для профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002603619
Дата охранного документа: 27.11.2016
25.08.2017
№217.015.a265

Способ определения состояния структурно-функциональной незавершённости печени у новорожденных ягнят

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения состояния структурно-функциональной незавершенности печени у новорожденных ягнят. Способ характеризуется тем, что определяют топографию печени, гистологически устанавливают структуру паренхимы и стромы печени, биохимически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606972
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.ac27

Способ определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных

Изобретение относится к биохимии и касается способов определения пероксидазной активности нейтрофилов в мазках крови. Способ предусматривает подготовку биологического субстрата. Подготовленный биологический субстрат обрабатывают буферно-инкубационной смесью на основе 4-метилпарааминофенол...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612149
Дата охранного документа: 02.03.2017
25.08.2017
№217.015.ae65

Способ повышения продолжительности жизни моллюсков abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток

Техническое решение относится к области прикладной физиологии и морфологии гидробионтов, малакологии, экспериментальной медицины и физиологии и касается способа повышения продолжительности жизни моллюсков Abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток. Представленный способ в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612913
Дата охранного документа: 13.03.2017
25.08.2017
№217.015.b86d

Способ изготовления наливки "писсардовка"

Плоды декоративной сливы Писсарда (Prunus cerasifera var. pissardii) накалывают деревянной палочкой, помещают в прозрачные стеклянные емкости, при этом слои ягод в пропорции 4:1 по массе чередуют со слоями сахара, делают водяной затвор, помещают емкость в теплое солнечное место и сбраживают,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002615451
Дата охранного документа: 04.04.2017
25.08.2017
№217.015.c068

Способ выращивания монокристаллической пленки febo на диамагнитной подложке

Изобретение относится к области получения монокристаллических пленок на подложках для магнитных, оптических, магнитооптических и резонансных исследований. Шихту наплавляют в платиновый тигель, компоненты берут в соотношении, мас.%: FeO - 5,37, ВО - 51,23, PbO - 29,31, PbF - 13,73. После этого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616668
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.c1fd

Способ определения состояния структурной незавершённости почек у новорожденных ягнят

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной неонатологии, клинической диагностике и терапии животных. Для определения состояния структурной незавершенности почек у новорожденных ягнят визуально при вскрытии определяют топографию и морфометрию почек, гистологически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002617663
Дата охранного документа: 25.04.2017
26.08.2017
№217.015.e888

Платформенный сборно-монолитный стык

Изобретение относится к области строительства и предназначено для устройства сборно-монолитных стыков панелей стен с проемами и перекрытий в панельных и панельно-рамных жилых, гражданских, производственных и других зданиях и сооружениях. Платформенный сборно-монолитный стык включает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002627524
Дата охранного документа: 08.08.2017
Показаны записи 1-10 из 29.
12.01.2017
№217.015.6118

Способ синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты

Изобретение относится к способу синтеза гетеротриядерного координационного соединения на основе салицилиденгидразона иминодиуксусной кислоты. Способ включает добавление в раствор гидразида иминодиуксусной кислоты в метаноле салицилового альдегида, выдержку полученного осадка в течение не менее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002591197
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.8354

Способ стимуляции всхожести семян пшеницы

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к растениеводству и нанобиотехнологиям. Способ стимуляции всхожести семян пшеницы включает обработку семян раствором биологически активного вещества, при этом в качестве биологически активного вещества используют водорастворимую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601578
Дата охранного документа: 10.11.2016
13.01.2017
№217.015.85e3

Способ коррекции мышечно-тонической асимметрии паравертебральной зоны человека

Изобретение относится к спортивной медицине, физической реабилитации и может быть использовано для коррекции функциональных нарушений позвоночника, связанных с мышечным дисбалансом, например сколиозов, остеохондроза, нарушений осанки, для профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002603619
Дата охранного документа: 27.11.2016
25.08.2017
№217.015.a265

Способ определения состояния структурно-функциональной незавершённости печени у новорожденных ягнят

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения состояния структурно-функциональной незавершенности печени у новорожденных ягнят. Способ характеризуется тем, что определяют топографию печени, гистологически устанавливают структуру паренхимы и стромы печени, биохимически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606972
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.ac27

Способ определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных

Изобретение относится к биохимии и касается способов определения пероксидазной активности нейтрофилов в мазках крови. Способ предусматривает подготовку биологического субстрата. Подготовленный биологический субстрат обрабатывают буферно-инкубационной смесью на основе 4-метилпарааминофенол...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612149
Дата охранного документа: 02.03.2017
25.08.2017
№217.015.ae65

Способ повышения продолжительности жизни моллюсков abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток

Техническое решение относится к области прикладной физиологии и морфологии гидробионтов, малакологии, экспериментальной медицины и физиологии и касается способа повышения продолжительности жизни моллюсков Abra segmentum в условиях гипоксии на период от 4 до 14 суток. Представленный способ в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612913
Дата охранного документа: 13.03.2017
25.08.2017
№217.015.b86d

Способ изготовления наливки "писсардовка"

Плоды декоративной сливы Писсарда (Prunus cerasifera var. pissardii) накалывают деревянной палочкой, помещают в прозрачные стеклянные емкости, при этом слои ягод в пропорции 4:1 по массе чередуют со слоями сахара, делают водяной затвор, помещают емкость в теплое солнечное место и сбраживают,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002615451
Дата охранного документа: 04.04.2017
25.08.2017
№217.015.c068

Способ выращивания монокристаллической пленки febo на диамагнитной подложке

Изобретение относится к области получения монокристаллических пленок на подложках для магнитных, оптических, магнитооптических и резонансных исследований. Шихту наплавляют в платиновый тигель, компоненты берут в соотношении, мас.%: FeO - 5,37, ВО - 51,23, PbO - 29,31, PbF - 13,73. После этого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616668
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.c1fd

Способ определения состояния структурной незавершённости почек у новорожденных ягнят

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной неонатологии, клинической диагностике и терапии животных. Для определения состояния структурной незавершенности почек у новорожденных ягнят визуально при вскрытии определяют топографию и морфометрию почек, гистологически...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002617663
Дата охранного документа: 25.04.2017
26.08.2017
№217.015.e888

Платформенный сборно-монолитный стык

Изобретение относится к области строительства и предназначено для устройства сборно-монолитных стыков панелей стен с проемами и перекрытий в панельных и панельно-рамных жилых, гражданских, производственных и других зданиях и сооружениях. Платформенный сборно-монолитный стык включает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002627524
Дата охранного документа: 08.08.2017
+ добавить свой РИД