Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБЫ ДИАГНОСТИРОВАНИЯ ДЕГЕНЕРАТИВНОГО ПОРАЖЕНИЯ СУСТАВА

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится, главным образом, к способам диагностики заболевания и конкретно к способам диагностики дегенеративного поражения сустава.

Уровень техники

Способы диагностирования состояний, относящихся к суставам, известны из уровня техники. В заявке WO 28049225 A1 раскрыты методы прогнозирования остеоартрита путем определения клеточной локализации транскрипционного фактора 1 гипофизарного гомеобокса (pitx-1) репрессорного белка или комплекса, например, прохибитина или прохибитона в пробе, например пробе суставных хондроцитов. В заявке US 20070248986 A1 раскрыты методы прогнозирования вероятности развития ревматоидного артрита для пациентов с недавним проявлением недифференцированного артрита путем определения ряда значений клинических параметров и предсказанного риска развития ревматоидного артрита путем корреляции значений параметров с заданными значениями рисков, которые связаны с диапазоном значений параметров, например уровнем в сыворотке С-реактивного белка, ревматоидных факторов, анти-ССР антител, возраста, пола, локализации заболевания суставов, длительности утренней ригидности, и числа болезненных и/или опухших суставов. В заявке US 7005274 описаны способы диагностики для раннего обнаружения риска развития артритного расстройства у людей и скрининг-анализ терапевтических агентов, применяемых при лечении артритных расстройств путем сопоставления содержания одного или нескольких индикаторов измененной митохондриальной функции, например ферментов, таких как митохондриальные ферменты, факторы биосинтеза АТФ, митохондриальная масса, число митохондрий, содержание митохондриальной ДНК, клеточные реакции на повышенное содержание внутриклеточного кальция и апоптогенов, и образование свободных радикалов. В заявке US 20040242987 A1 описаны способы прогнозирования заболевания костей или суставов, влияющего на костно-мышечную систему (например, остеопороз) путем применения микро- и макроструктурных или биомеханических параметров, полученных из изображений сустава, и анализа двух указанных параметров, например макро-морфологических параметров и биомеханических параметров. Другие известные способы включают объективное обследование, бесконтрастную пленочную радиографию, сканограммы аксиальной компьютерной томографии (CAT), сканограммы магнитной резонансной визуализации (MRI), контрастную радиографию и артроскопию.

Диагностика состояний суставов, таких как дегенеративные поражения суставов у животных, с использованием объективного обследования и бесконтрастной пленочной радиографии, является обычным. В частности, указанные способы представляют собой базовый инструмент для диагностики остеоартрита у различных животных, таких как собаки. Однако у пораженных животных часто не проявляются очевидная хромота или другие симптомы, указывающие на дегенеративное поражение сустава. К сожалению, это означает, что наблюдаемые клинические признаки являются недостаточными для обоснования предположительного диагноза дегенеративного поражения сустава, например остеоартрита. Кроме того, бесконтрастная пленочная радиография, хотя и представляет собой наиболее часто применяемую технологию обследования, регистрирует костные изменения, но часто не обнаруживает изменения в мягких тканях, таких как суставная капсула, и, таким образом, затрудняется стандартный диагноз. Аналогично, CAT и MRI сканограммы являются дорогостоящими и часто имеют ограниченную доступность. Контрастная радиография и артроскопия увеличивают степень инвазивности. Для некоторых животных, например собак, в указанных дополнительных способах воздействия всегда требуется некоторая форма ограничения, например обезболивание, что увеличивает затраты, сложность и риски. С учетом указанных ограничений известных способов дегенеративное поражение сустава часто остается нераспознанным. Следовательно, существует потребность в новых способах диагностики дегенеративного поражения сустава у животных.

Раскрытие изобретения

Таким образом, целью настоящего изобретения является разработка способов диагностики дегенеративного поражения сустава у животных.

Эта и другие цели достигнуты с использованием способов диагностики дегенеративного поражения сустава у животных, которые включают отбор проб слюны у животного; определение количества одного диагностического агента, выбранного из группы, состоящей из интерферона IFNγ, IP-10, IL-2 и TSP в пробе слюны; сопоставление количества диагностического агента, найденного в пробе слюны, с соответствующим количеством такого же диагностического агента, найденным в пробе слюны от одного или нескольких сопоставимых контрольных животных, которые не страдают от дегенеративного поражения сустава; и диагностирование, что животное восприимчиво или страдает от дегенеративного поражения сустава, если количество диагностического агента в пробе слюны от животного больше, чем количество такого же диагностического агента, найденное в пробе слюны от одного или нескольких сопоставимых контрольных животных.

Другие и дополнительные цели, признаки и преимущества настоящего изобретения будут вполне очевидны специалистам в этой области техники.

Осуществление изобретения

Определения

Термин "животное" означает любое животное, которое восприимчиво или страдает от дегенеративного поражения сустава, включая человека, птицу, корову, собаку, лошадь, кошку, козу, волка, мышь, овцу или свинью.

Термин "сопоставимое контрольное животное" означает животное того же вида и типа или индивидуальное животное, оцениваемые в два различных момента времени.

Термин "сустав" означает соединение между двумя или несколькими соседними частями костной системы животного, или кости, или хряща.

Термин "дегенеративное поражение сустава" означает заболевание или другое состояние, вызванное воспалением, разрушением с возможной потерей хряща сустава. Дегенеративное поражение сустава также называется остеоартритом или дегенеративным артритом.

Термин "домашнее животное" означает одомашненное животное, такое как собаки, кошки, птицы, кролики, морские свинки, хорьки, хомяки, мыши, песчанки, прогулочные лошади, коровы, козы, овцы, ослы, свиньи, и более экзотические виды, которые люди содержат для компании, развлечения, психологической поддержки, экстравертной демонстрации, и всех других функций, которые люди хотят разделить с животными других видов.

Используемые в изобретении диапазоны применяются здесь условно, для того чтобы избежать наличия перечня и описания всякого и любого значения в указанном диапазоне. Может быть выбрано любое подходящее значение внутри диапазона, где это необходимо, как верхнее значение, нижнее значение или конечное значение ряда.

Используемая в изобретении форма единственного числа включает в себя и множественное число, и наоборот, если из контекста ясно не следует иное. Например, ссылка на "сустав" или "способ" включает в себя множественное число "суставы" или "способ." Аналогично, слова "содержат", "содержит" и "содержащий" следует истолковывать скорее как включающие в себя, чем исключающие. Подобным образом, все слова "включают", "включающий" и "или" следует истолковывать включительно, если из контекста ясно не запрещается такая конструкция.

Раскрытые в изобретении способы, композиции и другие достижения не ограничиваются конкретной методологией, протоколами и описанными реагентами, поскольку эти приемы могут изменяться, как могут признать специалисты в этой области техники. Кроме того, используемая в изобретении терминология предназначается только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначается для ограничения объема описания или притязаний.

Если не обусловлено другое, все технические и научные термины, специальные термины и сокращения, использованные в изобретении, имеют общепринятые значения, понятные специалистам в области техники настоящего изобретения, или в отраслях, где указанный термин используется. Хотя любые композиции, способы, промышленные изделия, или другие средства или материалы, аналогичные или эквивалентные тем, что описаны в изобретении, могут быть использованы при осуществлении настоящего изобретения, предпочтительные композиции, способы, промышленные изделия, или другие средства или материалы, описаны в изобретении.

Все патенты, заявки на патенты, публикации, технические и/или научные статьи и другие ссылки, цитированные или рассматриваемые в изобретении, полностью включены в изобретение как ссылки, в степени, разрешенной законом. Рассмотрение указанных ссылок имеет целью простое обобщение уровня техники, достигнутого в этой области. Отсутствует признание факта, что любые такие патенты, заявки на патенты, публикации, или ссылки, или любые их части, представляют собой релевантные материалы или прототип. Авторы оставляют за собой право оспаривать точность и применимость любого утверждения в таких патентах, заявках на патенты, публикациях и других ссылках в качестве релевантных материалов или прототипа.

В одном аспекте, в настоящем изобретении разработаны способы диагностирования дегенеративного поражения сустава у животных. Указанные способы включают в себя: отбор проб слюны животного; определение количества одного диагностического агента, выбранного из группы, состоящей из гамма-интерферона (IFNγ), индуцируемого интерфероном протеина-10 (IP-10), интерлейкина-2 (IL-2) и совокупного протеина слюны (TSP) в пробе слюны; сопоставление количества диагностического агента, обнаруженного в пробе слюны, с соответствующим количеством такого же диагностического агента, обнаруженного в пробе слюны от одного или нескольких сопоставимых контрольных животных, которые не страдают от дегенеративного поражения сустава; и диагностирование факта, что животное восприимчиво или страдает от дегенеративного поражения сустава, если количество диагностического агента в пробе слюны от этого животного больше, чем количество такого же диагностического агента, обнаруженного в пробе слюны от одного или нескольких сопоставимых контрольных животных.

Настоящее изобретение основано на открытии, что диагностические агенты изобретения присутствуют в слюне животного и что количество диагностического агента в слюне служит биохимическим индикатором для диагностики дегенеративного поражения сустава путем демонстрации или прогнозирования порога дегенеративного поражения сустава. Изобретение позволяет ветеринару и другим практикующим врачам проводить тестирование на указанные "биомаркеры" в слюне и определять, является ли животное восприимчивым или страдающим от дегенеративного поражения сустава и существует ли потребность в дополнительном диагностировании или лечении. Когда установлена потребность в дополнительном диагностировании или лечении, затраты и риски указанного дополнительного диагностирования или лечения являются обоснованными.

В различных вариантах осуществления, у одного или нескольких сопоставимых контрольных животных, которые не являются животными, обследуемыми на дегенеративное поражение сустава, и которые определенно не страдают от дегенеративного поражения сустава, оценивается содержание одного или нескольких диагностических агентов, и результаты указанных оценок используются в качестве эталонного значения при сопоставлении с результатами для животных, обследуемыми на наличие одного или нескольких диагностических агентов. В предпочтительных вариантах осуществления, эталонное содержание диагностического агента определяется путем оценки многочисленных сопоставимых контрольных животных.

В другом аспекте, количество одного диагностического агента определяется у животного в различные моменты в течение жизни животного, причем результаты используются для определения, является ли животное восприимчивым или страдающим от дегенеративного поражения сустава, например, если количество одного диагностического агента возрастает по мере старения животного, это животное может быть диагностировано как восприимчивое или страдающее от дегенеративного поражения сустава. В предпочтительных вариантах осуществления, животное обследуется периодически, с регистрацией результатов для диагностических агентов. Тогда, если следующая оценка демонстрирует, что количество одного или нескольких диагностических агентов увеличивается с момента последнего обследования (обследований), животное диагностируется как восприимчивое или страдающее от дегенеративного поражения сустава.

В одном варианте осуществления, определяют, что животное является восприимчивым или страдающим от дегенеративного поражения сустава, если количество IFNγ в слюне обследуемого животного является в 1,2 раза больше количества IFNγ, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных. В различных вариантах осуществления, количество IFNγ у обследуемого животного составляет приблизительно от 1,2 до 20 раз больше количества IFNγ, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных.

В другом варианте осуществления, определяют, что животное является восприимчивым или страдающим от дегенеративного поражения сустава, если количество IP-10 в слюне обследуемого животного является в 1,4 раза больше количества IP-10, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных. В различных вариантах осуществления, количество IP-10 у обследуемого животного составляет приблизительно от 1,4 до 20 раз больше количества IP-10, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных.

В дополнительном варианте осуществления, определяют, что животное является восприимчивым или страдающим от дегенеративного поражения сустава, если количество IL-2 в слюне обследуемого животного является в 1,6 раза больше количества IL-2, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных. В различных вариантах осуществления, количество IL-2 у обследуемого животного составляет приблизительно от 1,6 до 20 раз больше количества IL-2, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных.

В другом варианте осуществления, определяют, что животное является восприимчивым или страдающим от дегенеративного поражения сустава, если количество TSP в слюне обследуемого животного является в 1,8 раза больше количества TSP, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных. В различных вариантах осуществления, количество TSP у обследуемого животного составляет приблизительно от 1,8 до 20 раз больше количества TSP, обнаруженного в слюне одного или нескольких сопоставимых контрольных животных.

Хотя использование одного из диагностических средств является достаточным для диагностирования дегенеративного поражения сустава, применение двух или более указанных диагностических агентов в изобретении является целесообразным и может быть предпочтительным во многих случаях. В одном варианте осуществления, диагноз основывается на двух диагностических агентах, в другом - используют три диагностических агента, в еще одном - все четыре диагностических агента. Диагностические агенты можно оценивать и использовать для диагноза в любых сочетаниях. В одном предпочтительном варианте осуществления, диагноз основывается на двух диагностических агентах, а именно на IFNγ и IP-10. В другом предпочтительном варианте осуществления, диагноз основывается на всех четырех диагностических агентах.

С использованием способов настоящего изобретения можно диагностировать любую поврежденную часть сустава. Типичные суставы включают (но не ограничиваются) скользящие суставы (Arthrodia), шарнирные суставы (Ginglymus), мыщелковые суставы (Condylarthrosis), седловидные суставы (Articulus sellaris), шаро-шарнирные суставы (Enarthrosis) и поворотные суставы (Trochoides). Конкретные суставы включают в себя (но не ограничиваются) коленный, локтевой, межфаланговый, пястно-фаланговый, запястный, запястно-фаланговый, сустав большого пальца руки, плечевой, тазобедренный, височно-нижнечелюстной и лучелоктевой суставы. Плечевой и тазобедренный суставы особенно восприимчивы к дегенеративному поражению сустава.

В различных вариантах осуществления, животное представляет собой человека или домашнее животное. Предпочтительно, домашнее животное означает собаку или кошку.

Способы сбора (отбора) слюны от животного известны специалистам в этой области техники, например с использованием игрушки или аналогичного устройства, с которым животное взаимодействует орально в виде шутливой игры, или просто используют тампон на стержне или аналогичное устройство для сбора пробы слюны. Одно такое устройство описано в предварительной заявке на патент США №61/455152, имеющей название «Оральный контактный комплект».

Способы определения количества диагностического агента в слюне хорошо известны из уровня техники. Для специалистов в этой области техники в продаже имеются различные химические анализаторы, ручные или автоматизированные, для измерения концентрации в слюне диагностических средств согласно изобретению, например, методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Примеры указанных способов приведены в разделе Примеры изобретения.

Примеры

Изобретение может быть дополнительно проиллюстрировано с помощью следующих примеров, хотя следует понимать, что указанные примеры включены просто с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения объема изобретения, если конкретно не указано другое.

Пример 1

Сбор слюны: Для сбора слюны у собак используют товарное устройство сбора слюны Salivette® (SARSTEDT, Germany). Собакам открывают пасть и вставляют туда тампон на стержне Salivette® таким образом, чтобы животное жевало тампон приблизительно от 30 до 45 секунд. Затем тампон Salivette® удаляют и переносят его в пробирку для сбора Salivette®. Слюну сразу отделяют путем вращения пробирки для сбора с ускорением 1000 g в течение 2 минут. Окончательно пробу слюны, собранную в нижней части пробирки для сбора, переносят в чистый микроконтейнер и сразу замораживают контейнер при -80°C для последующего анализа.

Анализ собачьего цитокина: определяют 14 цитокинов с помощью собачьего цитокина Luminex, произведенного на фирме Millipore, № по каталогу CCYTO-90K. Используется стандартная методика от изготовителя. Все пробы слюны подвергают центрифугированию с ускорением 14000 g в течение 2 мин, непосредственно перед использованием. Затем жидкость над осадком осторожно переносят в чистый микроконтейнер, разбавляют буферным раствором Luminex Assay Buffer (Millipore, № по каталогу L-AB) 1-3 раза. Индивидуальные пробы помещают на предварительно смоченный фильтровальный планшет с 96 лунками (поставляется изготовителем) с Контролем качества собачьего цитокина 1 и 2 (Millipore, № по каталогу LCC-6090) и стандартами (Millipore, № по каталогу LCC-8090). Планшеты обрабатывают в соответствии с инструкцией изготовителя. Пробы слюны смешивают с микробусинами с фиксированными антителами против 14 цитокин/хемокинов (GM-CSF, IFNγ, KC, IP-10, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-18, MCP-1 и TNFα) и культивируют в течение ночи с интенсивным встряхиванием с использованием лабораторного аппарата для встряхивания планшетов (фирма Lab-Line Instruments, № модели 4625) при 4°C. На следующий день в планшет добавляют Антитела, регистрирующие собачий цитокин (№ по каталогу LCC-1090), после промывки планшета буферным раствором Luminex Wash Buffer (№ по каталогу L-WB). Затем планшет герметизируют и культивируют 1 час при комнатной температуре с интенсивным встряхиванием в аппарате для встряхивания планшетов. Впоследствии к планшету добавляют Streptavidin-Phycoerythrin (№ по каталогу L-SAPE3), и планшет закрывают крышкой (поставляется изготовителем), чтобы исключить воздействие света. Затем закрытый планшет культивируют еще в течение 30 мин с интенсивным перемешиванием. После указанного культивирования планшет промывают буфером Luminex Wash Buffer, и микробусины в лунках повторно суспендируют в покрывающем флюиде Luminex и считывают на анализаторе Luminex 100 IS. Концентрацию цитокина в пробах слюны рассчитывают с использованием программного обеспечения Luminex xPONENT (версия 3.1.871.0).

Анализ вещества Р ELISA: Собачью слюну анализируют с использованием промышленного набора ELISA - Анализ параметрического вещества Р (фирма R&D Systems, № по каталогу KGE 007). В этом анализе пробу собачьей слюны разбавляют в 20 раз Калибрующим разбавителем RD5-45 (в составе набора). Стандарты и регистрирующие антитела (в составе набора) готовят в тех же разбавителях, которые указаны в наборе. Это конкурентный анализ ELISA. В течение 3 часового культивирования вещество Р (SP) в пробах или стандартах будет конкурировать с фиксированным количеством меченного пероксидазой хрена вещества Р (HRP-SP) за места связывания на мышиных антителах анти-вещества Р (SP). Через 3 часа культивирования смывают несвязанное/избыточное вещество SP-HRP; только связанные SP и SP-HRP могут образовать связь с антителом в предварительно покрытом 96-луночном планшете (в составе набора), за счет взаимодействия между антителом, покрывающим планшет, и мышиными антителами анти-вещества SP. Окончательно раствор хромогена (тетраметилбензидин) добавляют в 96-луночный планшет. В отличие от связанного SP вещество SP-HRP может взаимодействовать с этим хромогеновым субстратом с образованием синего окрашивания. После прекращения реакции добавлением 2N серной кислоты измеряют оптическую плотность (OD) при длине волны 450 нм с использованием планшет-ридера (Bio-TEK PowerWave X). Концентрация SP в пробе обратно пропорциональна оптической плотности и рассчитывается по стандартной кривой, построенной с помощью последовательно разбавленного стандартного раствора SP с использованием программного обеспечения, именуемого КС Junior (версия 1.41).

Определение иммуноглобулина A (IgA) ELISA: IgA в слюне собаки анализируют с использованием промышленного набора ELISA (фирма Bethyl Laboratories, Inc., № по каталогу Е40-104), в котором имеются все антитела и стандарты. Обычные буферы ELISA были приготовлены на месте с использованием реактивов, поставленных фирмой Sigma-Aldrich (Сент-Люис, шт. Миссури) или непосредственно от других поставщиков, как указано ниже:

(1) Покрывающий буфер, 0,05 М Carbonate-Bicarbonate, pH 9,6;

(2) Промывающий раствор, 50 mM Трис, 0,14 М NaCl, 0,05% Твин 20, pH 8,0;

(3) Блокирующий раствор, 50 mM Трис, 0,14 М NaCl, 1% Бычий сывороточный альбумин (BSA), pH 8,0;

4) Разбавитель пробы/конъюгата, 50 мМ Трис, 0,14 М NaCl, 1% BSA, 0,05% Твин 20;

(4) Ферментный субстрат ТМВ, заранее приготовленный раствор SureBlue™ (KPL, № по каталогу 52-00-03); и

(5) Стоп-раствор, 4N раствор серной кислоты.

Следуют стандартной методике сэндвич-ELISA. Покрывают 96-луночный планшет ELISA свежеприготовленным раствором анти-собачьего IgA антитела в покрывающем буфере в течение часа, затем планшет промывают Промывающим раствором, добавляют Блокирующий раствор и культивируют в течение 30 минут. После промывки в лунки планшета добавляют предварительно разбавленные пробы или стандартные растворы. Большую часть проб слюны разбавляют с использованием Разбавителя пробы/конъюгата в соотношении 1 к 5000, регулировку проводят, когда измеренные концентрации IgA выходят за пределы динамического диапазона стандартной кривой. Через 1 час культивирования с другой стадией промывки в этот планшет добавляют раствор HRP-конъюгированного детектирующего антитела (разбавленного Разбавителем пробы/конъюгата) и культивируют в течение часа. После промывки инициируют колориметрическое проявление указанного планшета, добавляя Ферментный субстрат ТМВ. После 10-15 минут проявления (до появления соответствующего темно-синего окрашивания) цветную реакцию прекращают путем добавления Стоп-раствора. В конце измеряют оптическую плотность планшета при длине волны 450 нм с использованием планшет-ридера (Bio-TEK PowerWave X). Концентрацию IgA в пробах рассчитывают с использованием программного обеспечения KC Junior (версия 1.41).

Измерения совокупного протеина слюны проводят, используя промышленный аналитический набор бицинхониновой кислоты (ВСА) протеина (Thermo Scientific, № по каталогу 23225), как указано в инструкции. Получают последовательно разбавленные стандартные растворы Бычьего сывороточного альбумина (в диапазоне от 0 до 2 мг/мл) в дистиллированной и деионизированной воде из стандартного исходного раствора BSA, предусмотренного в наборе. Затем пробы слюны разбавляют в надлежащей кратности, чтобы соответствовать концентрации протеина на стандартной кривой BSA. Может потребоваться некоторое время для нахождения правильного разбавления индивидуальных проб. После этого хорошо смешивают аналитический реагент-А ВСА протеина (Thermo Scientific, № по каталогу 23221) и реагент-В (Thermo Scientific, № по каталогу 23224) в соотношении 50:1 (по объему) в чистой пластиковой пробирке в приборе для встряхивания. После этого разбавленные пробы или BSA стандарты добавляют в лунки пластикового 96-луночного планшета с прозрачным дном, затем в эти лунки добавляют смесь реагентов А и В, и культивируют планшет при комнатной температуре в течение 30 мин. В ходе культивирования содержащийся в реагенте В пентагидрат сульфата меди реагирует с протеином в пробах, Cu²⁺ восстанавливается до Cu¹⁺, и затем бицинхониновая кислота в реагенте А взаимодействует с восстановленным катионом одновалентной меди, образуя раствор пурпурного цвета, для которого наблюдается строго линейная зависимость поглощения при 562 нм с увеличением концентрации протеина. Данные планшета с пробами и стандарты можно считывать с помощью планшет-ридера (Bio-TEK PowerWave X) при длине волны 562 нм. Концентрацию совокупного протеина слюны в пробах рассчитывают с помощью программного обеспечения KC Junior (версия 1.41).

Статистический анализ: Расчеты критерия Стьюдента осуществляли с пакетом "R" программного обеспечения для анализа (www.r-project.org) для всех данных, полученных в этом исследовании. Статистическую значимость различий между двумя группами исследовали для индивидуальных биомаркеров слюны. Результаты представлены в таблице 1 и таблице 2. При рассмотрении данных таблицы 1 и таблицы 2 видно, что концентрации IFNγ, IP-10, IL-2 и совокупного протеина слюны значительно отличаются для здоровых животных и животных, имеющих дегенеративное поражение сустава. Следовательно, указанные вещества служат биомаркерами для дегенеративного поражения сустава у животных

В описании раскрыты типичные предпочтительные варианты осуществления изобретения. Хотя используются специальные термины, они применяются только в общем и описательном значениях и не с целью ограничения. Объем изобретения изложен в формуле изобретения. Очевидно, что в свете вышеуказанных рекомендаций возможны многие модификации и вариации изобретения. Поэтому следует понимать, что в объеме прилагаемой формулы изобретения изобретение может быть осуществлено иным образом, чем это конкретно описано.